Studiu de fază II a sucului de rodie pentru bărbați cu PSA în creștere după operație sau radioterapie pentru cancerul de prostată

Abstract

Scop: Phytochemicale din plante pot avea avantaje preventive împotriva cancerului prin antioxidare și prin interacțiuni gene-nutrient. Am încercat să determinăm efectele consumului de suc de rodie (o sursă majoră de antioxidanți) asupra progresiei antigenului specific prostatic (PSA) la bărbații cu un PSA în creștere după terapia alopata primară.

Design experimental: A fost efectuat un studiu clinic de fază II, Simon în două etape pentru bărbații cu PSA în creștere după o intervenție chirurgicală sau radioterapie. Pacienții eligibili au avut un PSA detectabil> 0,2 și <5 ng / ml și un scor Gleason ≤7. Pacienții au fost tratați zilnic cu 8 uncii de suc de rodie (varietate minunată, echivalenți 570 mg total de acid polifenol galic) până la progresia bolii. Punctele finale clinice au inclus siguranța și efectul asupra PSA seric, proliferarea indusă de ser și apoptoza celulelor LNCaP, peroxidarea serică a lipidelor și nivelele de oxid nitric din ser.

Rezultate: Studiul a fost acumulat pe deplin după îndeplinirea criteriilor de eficacitate. Nu au fost raportate evenimente adverse grave și tratamentul a fost bine tolerat. Valoarea medie a timpului de dublare a PSA a crescut semnificativ odată cu tratamentul de la o medie de 15 luni la momentul inițial până la 54 de luni după tratament ( P <0,001). Testele in vitro care au comparat tratamentul prealabil cu pacientul după tratamentul cu LNCaP au arătat o scădere cu 12% a proliferării celulare și o creștere cu 17% a apoptozei ( P= 0,0048 și respectiv 0,0004), o creștere de 23% a oxidului nitric în ser ( P = 0,0085) și reduceri semnificative ( P <0,02) în starea oxidativă și sensibilitate la oxidarea lipidelor serice după consumul de suc de rodii înainte de consumul de rodie.

Concluzii: Raportăm primul studiu clinic privind sucul de rodie la pacienții cu cancer de prostată.Prelungirea statistic semnificativă a timpului de dublare a PSA, cuplată cu efectele de laborator corespunzătoare asupra cancerului de prostată în proliferarea celulelor in vitro și apoptozei, precum și a stresului oxidativ, justifică teste suplimentare într-un studiu controlat cu placebo.

Adenocarcinomul prostatic este în prezent cea mai frecventă malignitate la bărbați din Statele Unite, care cuprinde 29% din toate cazurile de cancer. În acest an, aproximativ 232.090 de bărbați vor fi nou diagnosticați cu cancer de prostată ( 1 ). A existat o tendință spre îmbunătățirea supraviețuirii în cancerul de prostată în ultimii ani. Cancerul de prostată Ratele de supraviețuire pe 5 ani au crescut de la 67% în perioada 1974-1976 la 92% în perioada 1989-1995 ( 2 ). Cu toate acestea, cancerul de prostată rămâne a doua cauză cea mai comună a deceselor provocate de cancer la bărbații din Statele Unite, reprezentând 11% din totalul deceselor provocate de cancer. În acest an, aproximativ 30,350 de bărbați vor muri de cancer de prostată ( 1 ).

Gestionarea primară a cancerului de prostată pentru majoritatea pacienților constă fie în chirurgie radicală, fie în radioterapie. Deși acest lucru este adecvat pentru controlul permanent al bolii la mulți pacienți, un număr semnificativ de pacienți recidivează și dezvoltă în cele din urmă boala metastatică. Prostatectomia radicală este în prezent cea mai frecvent folosită terapie pentru intenția curativă ( 3 ). Cu toate acestea, aproximativ o treime din pacienții cu cancer de prostată cu cancer clinic limitat care sunt tratați cu prostatectomie radicală vor dezvolta o recurență biochimică ( 4 , 5 ). Pound și colab. 6 ) a revizuit 1.997 de pacienți care au suferit prostatectomie radicală pentru cancerul de prostată localizat clinic și a stabilit că 15% dintre pacienți au prezentat recurențe biochimice. Treizeci și patru la sută dintre pacienții cu recidivă biochimică au dezvoltat metastaze îndepărtate, cu doar 15 ani de urmărire totală, timpul median până la dezvoltarea metastazelor a fost de 8 ani de la creșterea inițială a antigenului specific prostatic (PSA) și timpul median până la deces din dezvoltarea metastazelor a fost de 5 ani ( 6 ).

Există opțiuni limitate de tratament pentru pacienții care au suferit terapie primară cu intenție curativă și care au o creștere progresivă a PSA lor fără dovezi documentate de boală metastatică. Inițializarea inițială a ablației hormonale este asociată cu o morbiditate semnificativă și un efect asupra calității vieții, incluzând oboseala, bufeurile, pierderea libidoului, scăderea masei musculare și osteoporoza cu utilizare pe termen lung. Strategiile de întârziere a progresului clinic al cancerului de prostată și prelungirea intervalului de la eșecul tratamentului până la ablația hormonală ar fi de o importanță capitală. O combinație de dovezi științifice epidemiologice și fundamentale sugerează că dieta și substanțele fitochimice derivate din plante pot juca un rol important în prevenirea sau tratamentul cancerului de prostată.

Multi factori genetici și epigenetici au fost implicați în oncogeneza cancerului de prostată. Cu toate acestea, mecanismul molecular care stă la baza bolii nu este bine înțeles. Oamenii afro-americani au cea mai mare rată de cancer de prostată din lume, în timp ce țările japoneze și chinezești din țările lor care consumă o dietă cu conținut scăzut de grăsimi și fibre bogate, cu un consum ridicat de substanțe fitochimice care includ produsele din soia și ceaiul verde, 7 ). Studiile epidemiologice sugerează că un risc redus de cancer este asociat cu consumul unei diete bogate în fitochimie, care include fructe și legume [aspectele dietetice ale prevenirii și tratării cancerului de prostată sunt bine analizate de Chan et al. 8 )]. Fructele și produsele alimentare proaspete și prelucrate conțin niveluri ridicate dintr-o gamă diversă de substanțe fitochimice, dintre care polifenolii, inclusiv taninurile hidrolizabile (ellagitanine și galotanine) și taninurile condensate (proantocianidine), și antocianinele și alte flavonoide reprezintă o proporție importantă ( 9 ). Mai multe substanțe fitochimice au fost propuse ca agenți potenți de chemoprevenție pe baza dovezilor animale și de laborator ale efectelor antitumorale. Mecanismele sugerate ale efectelor anticanceroase ale polifenolilor includ inhibarea creșterii celulelor canceroase prin interferarea cu semnalizarea receptorului factorului de creștere și progresia ciclului celular, promovarea diferențierii celulare, modularea căilor fosfodiesterazei / ciclooxigenazei, inhibarea kinazelor implicate în semnalizarea celulară și inhibarea inflamației ( 10-12 ).

Fructul de rodie ( Punica granatum L.) a fost folosit timp de secole în culturile antice pentru scopuri medicinale ( 13 ). Rodurile de fructe de rodii sunt consumate pe scară largă în stare proaspătă și sub formă de băuturi sub formă de sucuri și vinuri ( 14 ). Sucul de rodii comercial prezintă proprietăți puternice antioxidante ( 15 ) și antiatherosclerotice ( 16 ) atribuite conținutului său ridicat de polifenoli, incluzând acidul ellagic în forma sa liberă și legată (ca ellagitanine și glicozidele acidului ellagic), galotaninele și antocianinele (cianidina, delfinidina, și glicozidele de pelergonidină) și alte flavonoide (quercetin, kaempferol și luteolin glicozide, ref 14 ). Cel mai abundent dintre aceste polifenoli este punicalagin, un ellagitanin implicat ca constituent bioactiv responsabil pentru> 50% din activitatea antioxidantă puternică a sucului ( 14 ). Punicalagin este abundent în coji de fructe și, în timpul procesării, este extras în suc de rodie în cantități semnificative ajungând la niveluri de> 2 g / L suc ( 14 ). Acidul elagic și taninurile au prezentat anterior proprietăți anticarcinogene in vitro și in vivo , cum ar fi inducerea stopării ciclului celular și apoptozei, precum și inhibarea formării și creșterii tumorilor la animale ( 17 ). Recent, au existat câteva rapoarte privind activitatea antiproliferativă, apoptotică, angiogenică și inhibarea activității factorului nuclear-kB (NF-κB) și creșterea xenogrefei prin polifenoli de rodie ( 18-22 ). Deși aceste date privind polifenolii de rodie și NF-κB sunt destul de preliminare și multe întrebări mecanice rămân să fie elucidate, este în concordanță cu un corp mult mai amplu de literatură care susține conceptul că polifenolii din plante, inclusiv resveratrolul de vin roșu ( 23 ) catechinele ( 24 ) și isoflavonele din soia ( 25 ), sunt capabile să scadă proliferarea și să stimuleze apoptoza prin inhibarea activității NF-kB. În cele din urmă, produsele fitochimice de rodie au inhibat proliferarea in vitro a trei linii celulare de cancer de prostată, LNCaP, PC3 și DU145, și au prezentat inhibarea in vivo a creșterii xenogrefei la șoarecii atimici ( 20 ).

Pentru a studia posibilele efecte terapeutice ale sucului de rodie asupra cancerului de prostată, a fost efectuat un studiu clinic cu fază II, unică, deschisă, de fază II.

Materiale si metode

Proiectare clinică. Un studiu clinic deschis cu un singur braț a fost efectuat la Centrul Urologic Clark, la Scoala de Medicină David Geffen, la Universitatea din California, Los Angeles. A fost proiectat și realizat un studiu clinic de fază II, de doi ani, mono-centru, de fază II, în două etape, pentru bărbații cu PSA în creștere după operație sau radioterapie. Pacienții eligibili au avut un PSA detectabil> 0,2 și <5 ng / ml care a fost documentat ca fiind în creștere, timp suficient de timp pentru PSA înainte de tratament pentru a calcula un timp de dublare al PSA (PSADT), fără terapie hormonală înainte de a intra în studiu, și scorul Gleason ≤7.

Seriile măsurătorilor PSA înainte de intrarea în studiu au determinat un PSADT de bază. Fiecare pacient a avut cel puțin trei valori ale PSA înainte de tratament măsurate timp de cel puțin 6 luni înainte de intrarea în studiu. Pacienții au fost tratați cu 8 uncii de suc de rodii pe cale orală zilnic (varietate minunată, echivalentă cu echivalenți de acid polifenol gallic total de 570 mg zilnic) până la atingerea obiectivelor de progresie a bolii. Pacienții au fost urmăriți în intervalul de 3 luni pentru PSA seric, iar sângele și urina au fost colectate pentru studii de laborator. Obiectivele clinice includ siguranța, efectul asupra PSA seric, efect asupra nivelurilor hormonului seric (testosteron, estradiol, globulină care leagă hormonul sexual, dehydroepiandrosteron, factor de creștere similar insulinei și androstendionă) și studii de laborator exploratorii. Aceste studii exploratorii au inclus markeri pentru complianța tratamentului (niveluri polifenol / acidul elagic din ser și polifenol urinar), markeri ai efectului antioxidant seric (niveluri serice de oxid de azot) și analize in vitro care măsoară efectul serului pacienților asupra creșterii și apoptozei LNCaP 26 ). Pentru aceste studii de laborator, fiecare pacient în timpul tratamentului a fost comparat cu valoarea inițială.Probele au fost colectate, procesate, alicotate, etichetate cu numere de identificare anonime ale studiului și lotul a fost păstrat la -80 ° C. Pentru fiecare analiză, probele alicote au fost dezghețate și executate simultan pentru a asigura standardizarea condițiilor din eșantioane. Pentru fiecare analiză, probele de pretratament și posttratare au fost analizate aleatoriu de către tehnicienii de laborator care au fost orbiți cu datele clinice corespunzătoare. Punctul primar pentru acest studiu a fost efectul asupra variabilelor PSA, cum ar fi schimbarea timpului de dublare, iar punctele secundare de referință au inclus siguranța și modularea biomarkerilor. PSADT înainte de tratament a fost comparat cu panta acestei curbe după tratament, deoarece o schimbare semnificativă în această pantă poate să se coreleze cu întârzierea progresiei bolii. Un răspuns obiectiv a fost definit ca o scădere cu ≥50% în cea mai mare valoare a PSA serică măsurată. Boala progresivă a fost definită fie ca o creștere> 100% a PSA (cu o valoare minimă de 1,0 ng / ml), comparativ cu cel mai bun răspuns observat (nadir) sau orice documentare a bolii metastatice sau recurente. Pacienții cu boală stabilă nu s-au calificat drept răspuns obiectiv sau boală progresivă.

Studiul a fost realizat în conformitate cu Declarația de la Helsinki și amendamentele sale. Protocolul de studiu a fost aprobat de către Universitatea din California, la Los Angeles Medical Institutional Review Board și Comitetul științific instituțional peer review al Jonsson Comprehensive Cancer Center. Toți pacienții au dat consimțământul scris în scris înainte de participare.

Sponsorii de studiu nu au jucat niciun rol în proiectarea, colectarea, analiza sau interpretarea datelor, sau în redactarea acestui raport.

Calculul PSADT. Metoda spline liniară cu un nod la t = 0 (valoarea inițială) a fost utilizată pentru a estima PSADT înainte și după valoarea inițială pentru fiecare subiect. Modelul este y = α + βt + λu ( t ), unde y = log (PSA) și u ( t ) = 0 dacă t <0; în caz contrar, u ( t ) = t . PSADT este estimat: înainte de tratament, DT1 = log 2 / β ; după valoarea inițială, DT2 = log 2 / ( β + λ ).

Dimensiunea eșantionului și considerente statistice. Studiul a fost conceput ca un proiect flexibil flexibil în două etape ( 27 ), studiu de fază II, cu următoarele ipoteze: întreruperea ineffectivității a fost aleasă egală cu 5%; rata de răspuns dorită a ratei de răspuns este egală cu 20%. Prin urmare, ipotezele de interes au fost H0: r 0,05 împotriva HA: r 0,20, unde r este rata de răspuns. Rata de eroare a (probabilitatea de acceptare a unui tratament ineficient, rezultat fals pozitiv) a fost stabilită la 5%. Rata de eroare β (probabilitatea de respingere a unui tratament eficient, un rezultat fals-negativ) a fost stabilită la 10%. Studiul a fost conceput pentru a măsura dacă HA-H0 = 0,15 cu următoarele proprietăți: dacă rata reală de răspuns este de 5%, tratamentul este respins cu o probabilitate foarte mare (> 1 – α ), în timp ce rata reală de răspuns este de 20 %, tratamentul este respins cu o probabilitate foarte scăzută (< β ). În prima etapă, sunt tratate 24 de pacienți evaluabili. Dacă> 1 pacient a obținut un răspuns obiectiv sau o boală stabilă, vor fi tratați încă 22 de pacienți, până la un total de 46. La sfârșitul celei de-a doua etape, dacă <4 pacienți au obținut un răspuns obiectiv, tratamentul ar fi declarat ineficient. În caz contrar, se consideră că studiul a atins rata de răspuns dorită (20%), iar tratamentul este considerat promițător pentru teste suplimentare într-un studiu randomizat de fază III.

Turnarea sucului de rodie. Sucul de rodii a fost furnizat de Pom Wonderful Company (Los Angeles, CA).Rodii au fost selectați manual, spălați, răciți la 4 ° C și depozitați în tancuri. Fructele au fost apoi zdrobite, stoarse și tratate enzimatic cu pectinază pentru a obține sucul și produsele secundare, care au inclus coaja interioară și exterioară și semințele. Flavonoidele reprezintă 40% (antociani, catechine și fenoli) din totalul polifenolilor din sucul de rodie ( 28 ). Sucul de rodie a fost filtrat, pasteurat, concentrat și depozitat la -20 ° C până la utilizare.

Doza de tratament. Dozarea clinică recomandată a sucului de rodie se bazează pe efectul antioxidant măsurat în studiile de răspuns la doză la bărbații sănătoși, la următorul conținut zilnic: 0 (valoarea inițială), 3, 6, 8, 12 și 15 uncii (egală cu 90, 180 , 240, 360 și, respectiv, 450 ml / zi). Rezultatele acestor studii (care nu au fost publicate) arată că consumul de suc de rodie de către subiecți sănătoși de sex masculin prezintă capacități antioxidante crescute treptat în utilizarea dozelor în creștere (0-15 uncii pe zi, timp de o săptămână). Pe baza acestor rezultate, a fost sugerată utilizarea zilnică recomandată de 6 până la 8 uncii (180-240 ml) suc de rodie zilnic ca doză optimă, cu un efect clinic semnificativ antioxidant și fără efect semnificativ asupra trigliceridelor și a glucozei serice.

Cultură de celule. Stările tumorale de prostată LNCaP dependente de androgen au fost obținute de la American Type Culture Collection (Manassas, VA). Celulele au fost crescute în flacoane de 75 cm2 (Falcon Primaria, Bedford, MA) în RPMI 1640 fără roșu fenol, suplimentat cu ser 10% fetal bovin, 200 UI penicilină, 200 mg / ml streptomicină și 4 nmol / glutamină (Omega Scientific, Inc., Tarzana, CA). Culturile au fost menținute la 37 ° C și suplimentate cu 5% C02 într-un incubator umidificat. Celulele au fost trecute în mod obișnuit la confluență de 80%, iar mediu proaspăt a fost înlocuit la fiecare a treia zi. Celulele utilizate în experimente nu au fost pasate> de 10 ori.

Testul de proliferare in vitro . Efectul asupra proliferării in vitro a LNCaP prin schimbarea mediului de cultură suplimentat cu ser 10% fetal bovin cu mediu suplimentat cu ser supus a fost determinat așa cum s-a descris anterior ( 26 ).

Testul de apoptoză in vitro . Au fost efectuate experimente în plăci de cultură de țesut cu 96 de godeuri la o densitate de 10 x 103 celule pe godeu. Celulele au fost preparate și placate timp de 24 ore după cum s-a menționat mai sus. Folosind ELISA Plus de detecție a deceselor celulare (Roche Applied Science, Indianapolis, IN), apoptoza a fost măsurată la sfârșitul a 2 zile de tratament cu 10% ser fetal bovin sau 10% seruri experimentale. Această analiză de apoptoză se bazează pe un principiu cantitativ de imunozăsire a enzimei sandwich utilizând anticorpi monoclonali de șoarece îndreptat împotriva ADN și histone și permite determinarea specifică a mononucleozomilor și a oligonucleozomilor în fracțiunea de citoplasme a lizatelor.Contextul folosind tampon de incubare și soluția ABTS a fost scăzut din măsurătorile de absorbție (405-490 nm). Rezultatele sunt exprimate în microunde de mononucleozomi și oligonucleozomi. Cultură de celule și testul de apoptoză au fost efectuate în triplicate.

Peroxidarea lipidelor serice. Stresul oxidativ atât în ​​starea bazală, cât și într-un sistem indus de stres oxidativ [cu generatorul de radicali liberi 2,2-azobis (2-amidino-propan) diclorhidrat (AAPH)] a fost determinat prin măsurarea peroxidării lipidelor serice în serul pacientului la de bază și după consumul de suc de rodie. Probele de ser au fost diluate 1: 4 (v / v) cu PBS și incubate timp de 2 ore la 37 ° C fără (starea de bază oxidativă a stării bazale) sau cu AAPH (70 mmol / l; oxidarea indusă de AAPH). Extinderea peroxidării lipidice a fost măsurată utilizând 100 μL din soluțiile de mai sus prin testul peroxid de lipide, care analizează formarea peroxidului de lipide prin capacitatea de a transforma iodura în iod, măsurată spectrofotometric la 365 nm ( 29 ).

Cuantificarea peroxidelor lipidice, principalele produse de reacție inițiale ale peroxidării lipidice, servește ca un indice direct și valoros al stării oxidative a biosistemelor. AAPH este un azo-compus solubil în apă, utilizat în mod extensiv ca generator de radicali liberi în caracterizarea antioxidanților. Descompunerea AAPH produce azot molecular și doi radicali de carbon. Radicalii de carbon se pot combina pentru a produce produse stabile sau pentru a reacționa cu oxigen molecular pentru a da radicali peroxil.

Evaluarea oxidului de azot din plasmă. Concentrațiile de nitrit (NO 2  ) și nitrat (NO 3  ) au fost determinate ca o măsurare indirectă a producției de oxid de azot (NO). Azotatul și nitratul de azot reprezintă cele două produse stabile de oxidare a NO în soluție, iar determinarea ambelor anioni reprezintă o măsură cantitativă exactă a NO produs. A fost utilizată o procedură sensibilă de detectare a chemiluminescenței pentru a măsura nitritul și nitratul din plasmă. Pe scurt, nivelurile plasmatice de nitrit și nitrat (NO x ) au fost măsurate prin metoda clasică Griess. Nitritul total a fost măsurat la absorbția de 540 nm prin reacția cu reactivul Griess (sulfanilamidă și dihidroclorură de naftalen-etilendiamină). Cantitățile de nitrit de plasmă au fost estimate printr-o curbă standard obținută prin conversia enzimatică a NaN03 la nitrit.

Determinarea metaboliților acidului ellagic și acidului ellagic prin cromatografie lichidă – ionizare electrospray / spectrometrie de masă. Plasmă din centrifugarea sângelui integral colectat și urină alicotată [urină 1,3 ml cu soluție de acid ascorbic 30 uL / ​​EDTA (acid ascorbic 20%, EDTA 0,1%, pH 0,04 mmol / L (pH 3,6-final pH 2)] ] au fost colectate la fiecare punct al studiului și depozitate imediat la -80 ° C.Sistemul de cromatografie lichidă de înaltă performanță și condițiile pentru cromatografia lichidă – ionizarea prin electrospray / spectrometria de masă sunt descrise anterior ( 30 ).

Rezultate

Studiul a fost acumulat pe deplin la 48 de participanți pe o perioadă de 13 luni în două etape, după îndeplinirea criteriilor de eficacitate. Doi pacienți au retras participarea înainte de prima evaluare, lăsând 46 de pacienți evaluabili pentru răspunsul la tratament. Dintre pacienții înrolați, 68% au fost inițial tratați prin prostatectomie radicală, 10% prin radioterapie externă, 10% prin brahiterapie, 7% prin chirurgie și radioterapie și 5% prin crioterapie. Scorul inițial Gleason a fost citit ca intermediar ( 5-7 ) la 94% dintre pacienți, în timp ce 6% au prezentat cancere Gleason 4. Toți pacienții au prezentat N0 și M0 clinic sau patologic, iar 63% au fost punctate clinic sau patologic cu boală limită la organe, în timp ce 37% au prezentat cancere locale avansate care se extind în țesuturile periferice sau vezicale seminale. La intrarea în studiu, PSA median pentru cohorta a fost de 1,05 ng / ml (media, 2,23 ± 2,58 ng / ml).

În stadiul I, au fost tratați 24 de pacienți dintre care 2 pacienți au fost responsabili obiectiv, cu scăderea PSA de 85% și 50%. La primul răspuns, PSA a crescut la o valoare maximă la 6 luni la studiu, urmată de scăderea cu 85% a nivelului PSA, care nu a revenit la vârf până la 21 de luni. Cel de-al doilea respondent continuă să mențină o reducere de 57% a vârfului PSA la 33 de luni de studiu. În plus față de acești 2 subiecți, 6 dintre primii 24 de pacienți au progresat prin criteriile PSA. Dintre cei 46 de pacienți analizați din ambele etape, 16 (35%) au obținut o scădere a PSA în timpul tratamentului (median, 18%, mediu, 27%, interval 5-85%). Dintre cei 46 de pacienți, un total de 4 criterii de răspuns au fost îndeplinite și au atins un declin PSA> 50%, îndeplinind criteriile de eficacitate pentru a justifica testarea clinică viitoare. Panta medie a PSA a scăzut cu 35%, de la 0.066 ± 0.007 (media λ ± SE) la momentul inițial până la 0.043 ± 0.007 (media λ ± SE) la tratament ( P <0.001;

Figura 1.

Fiecare linie subțire individuală reprezintă PSA în funcție de timp pentru un subiect, pretratament și posttreatment (luna 0 = tratamentul de bază), cu panta medie a întregii cohorte reprezentată pe linie neagră groasă. Valorile PSA tind să crească, dar rata de creștere (panta) a scăzut. Panta medie a logaritmului PSA al întregii cohorte a scăzut cu 35%, de la 0.066 ± 0.007 (media λ ± SE) la valoarea inițială până la 0.043 (media λ ± SE) la tratament ( P <0.001).

Comparațiile dintre PSADT de bază și post-tratament au fost calculate la mai multe puncte de timp. La 15 luni, au existat 28 de pacienți cu puncte de date suficiente pentru analize semnificative. La 15 luni, valoarea medie a PSADT de pre-tratament a fost estimată la 14,3 ± 10,8 luni, în timp ce PSADT post-tratament a fost de 25,5 ± 33,5 luni ( P = 0,048). La 24 luni, media PSADT pentru 39 de pacienți înainte de intervenție a fost de 15,0 ± 11,1 luni (mediană, 11,5 luni). La 24 de luni, 7 subiecți au avut pante negative (PSA a scăzut); prin urmare, nu a putut fi estimat PSADT la acești pacienți care au fost, prin urmare, excluși din analiză în acest moment. Rețineți că prin excluderea pacienților cu un PSA în scădere din calculul PSADT, PSADT real va fi subestimat. La pacienții rămași evaluați, PSADT a fost de 37,0 ± 53,0 luni (median, 19,9 luni). Prelungirea cu 22 de luni a PSADT a atins semnificația statistică (testul sumar semnat, P = 0,0001).Datorită numărului mare de pacienți care au continuat să aibă boală stabilă la 18 luni de tratament, protocolul a fost modificat pentru a permite pacienților să continue tratamentul până la îndeplinirea criteriilor de progresie a bolii. La 33 de luni, 3 pacienți suplimentari au putut fi incluși pentru analiză, deoarece valorile PSA ale acestora au crescut până la punctul în care au dezvoltat pante PSA pozitive, permițând evaluarea PSADT. La 33 de luni, estimarea PSADT medie înainte de intervenție a fost de 15,6 ± 10,8 luni (mediană, 11,5 luni), în timp ce media post-tratament PSADT a fost de 54,7 ± 102 luni (mediană, 28,7 luni, P <0,001). În timpul studiului, 83% dintre pacienți au realizat după intervenție o îmbunătățire a PSADT (adică, fie PSADT prelungit> 0 și PSADT după studiul PSADT, fie PSADT după PSUDT) după intervenție (testul sumei semnate P <0,0001). Stadiul T de bază a arătat o corelație cu schimbarea PSADT, dar acest lucru nu a atins semnificația statistică.

 Nu s-au raportat evenimente adverse grave și tratamentul a fost bine tolerat și niciun pacient nu a prezentat boală metastatică în studiu.

Efectele tratamentului sucului de rodie asupra creșterii celulelor canceroase in vitro față de serul pacientului inițial și posttreatment au fost comparate utilizând un sistem de testare a culturii celulare proiectat pentru a măsura efectele mediului suplimentat cu ser individual asupra creșterii celulelor canceroase umane de prostată. Acest test de culturi celulare, dezvoltat în laboratorul nostru (WA și RJB), testează într-o manieră experimentală dacă consumul de suc de rodii are ca rezultat modificări ale serului care reduc creșterea sau creșterea apoptozei în liniile celulare de cancer de prostată in vitro . Pentru a efectua acest test, serul bovin fetal în mediul de cultură de țesut LNCaP a fost înlocuit cu serul supus așa cum s-a descris anterior ( 26 ).În comparație cu valoarea inițială, la 9 luni, a fost înregistrată o reducere de 12% ( Fig.2 ) în creșterea LNCaP (testul sumei semnate, P = 0,0048), 84% dintre pacienți prezentând o valoare a lunii 9 mai mică decât valoarea inițială (scăderea medie în post-tratamentul proliferării, -0,024 ± 0,075). Interesant, serul postintervenție la 6 subiecți, dintre care 3 au fost clasificați ca având boală progresivă, a crescut proliferarea celulelor LNCaP. Rezultatele acestor bioteste reprezintă, teoretic, mediul total al factorului de creștere al pacienților care cuprinde toți factorii proapoptotici / antiapoptotici din serul de repaus subiecți, cu factori multipli ai serului care nu au legătură cu doza de rodie, afectând, de asemenea potențial, rezultatele acestora. Aceste modificări observate în proliferarea celulară au fost asociate cu o creștere corespunzătoare a apoptozei de 17,5% la 9 luni ( Figura 3 ) comparativ cu valoarea inițială (testul sumei semnate, P = 0,0004), 75% dintre pacienți testând o creștere a apoptozei creștere medie în post-tratamentul apoptozei, 0,010 ± 0,018). Apoptoza și proliferarea de bază nu au fost corelate în mod semnificativ cu nivelul inițial al PSA.

Fig. 2.

Procentul de modificare a creșterii celulelor cancerului de prostată umană (LNCaP) utilizând mediu de cultură suplimentat cu ser individual, comparând proliferarea observată utilizând posttreatment față de serul pacientului de bază. În comparație cu valoarea inițială, la 9 luni, sa înregistrat o reducere medie de 12% a creșterii LNCaP (testul sumar semnat, P = 0,0048).

Figura 3.

Procentul de schimbare în apoptoza celulelor canceroase de prostată umană (LNCaP) utilizând mediul de cultură suplimentat cu ser individual, comparând moartea celulară observată folosind posttreatment față de serul de bază al pacientului. În comparație cu valoarea inițială, la 9 luni, sa înregistrat o creștere de 17,5% a apoptozei la 9 luni comparativ cu valoarea inițială (testul sumei semnate, P = 0,0004).

Efectul antioxidant seric in vitro al consumului de suc de rodie a fost determinat prin evaluarea stării oxiacetice serice bazale și sensibilității la oxidarea indusă de AAPH a serului pacienților la momentul inițial și după 9 luni de consum de suc de rodie folosind metoda peroxidelor lipidice. În comparație cu valoarea inițială, serul pacienților a prezentat o reducere semnificativă de 40% a stării oxiacetice bazale și o reducere semnificativă de 15% a rezistenței probelor serice la peroxidarea lipidică indusă de AAPH după consumul de suc de rodie ( P <0,02 pentru ambele teste; 4 ).

Figura 4.

Starea oxidativă și sensibilitatea la oxidarea serului de la pacienții cu cancer de prostată înainte și după consumul de suc de rodie. A, starea oxidativă bazală a fost analizată în probele serice ale pacienților prin metoda peroxidului de lipide înainte și după consumul de suc de rodie ( PJ ). B, rezistența probelor serice la generatorul de radicali liberi, generată de formarea peroxidului lipidic indusă de AAPH, a fost analizată prin metoda peroxidelor lipidice. Coloane, medie; bare, SD. *, P <0,02.

În comparație cu valoarea inițială, sa observat o creștere de 23% a metabolitului seric NO măsurat la serul pacienților la 9 luni (media diferenței, 8,56 μmol / L, P = 0,0085), cu două treimi dintre pacienți analizați având o creștere comparativ cu valoarea inițială ( Fig. 5 ). A existat o corelație negativă semnificativă între valoarea inițială a PSA și nivelul de nitrit inițial (coeficientul de corelare Spearman = -0,40; P = 0,0281).

Figura 5.

Procentul de schimbare în metabolitul seric în circulație. În comparație cu valorile inițiale, sa observat o creștere de 23% a metabolitului seric NO măsurat la serul pacienților la 9 luni ( P = 0,0085).

Au fost detectate polifenoli de rodie (adică acidul ellagic) în urină pentru toți participanții prin spectrometrie de masă cu cromatografie în fază lichidă ( figura 6 ).

Figura 6.

Cromatografie în cromatografie – spectroscopie de ionizare prin electrospray și spectrometrie de masă a urinei de pacient posttreatment care prezintă cromatograma de ioni extrasă din acidul ellagic, MH m / z 301. Spectrele s-au obținut prin ionizarea electrospray în ioni de absorbție în mod negativ între 120 și 1500 amu

Nu a existat o diferență semnificativă între valorile hormonului pacientului pre-tratat și posttratament (testosteron, estradiol, globulină care leagă hormonul sexual, dehidroepiandrosteron, factor de creștere similar insulinei și androstendionă) măsurate (datele nu sunt prezentate).

Discuţie

În acest studiu efectuat la 46 de bărbați cu cancer de prostată recurent, tratamentul cu suc de rodie a fost asociat cu prelungirea statistic semnificativă a PSADT (deși cu puține răspunsuri PSA obiective relativ puține), prelungirea durabilă a stabilizării bolii și efecte semnificative asupra testelor de laborator experimentale ca statutul de antioxidant seric al pacienților și asupra cancerului de prostată in vitro acreșterii celulare și a apoptozei. Modelul de realizare a unei încetiniri a progresiei PSA fără scăderi semnificative ale PSA este în concordanță cu un efect citostatic, mai degrabă decât cu un tratament citotoxic.

A existat un mare interes în ceea ce privește rolul potențial al dietei în modificarea incidenței, progresiei sau mortalității cancerului de prostată. O mare parte din cercetările care au arătat o relație inversă între dietă și aceste puncte finale ale cancerului de prostată a fost epidemiologică, în principal, prin cohorta observațională și studiile de caz-control ( 8 ). Cel mai mare studiu prospectiv de acest tip, Investigarea prospectivă europeană în domeniul cancerului și al nutriției, este în curs de desfășurare. Investigarea prospectivă europeană în domeniul cancerului și al nutriției este cel mai amplu studiu al relației dintre dietă, starea nutrițională, factorii de mediu și incidența cancerului, după ce au recrutat> 500.000 de participanți în 10 țări europene începând din 1992. Rezultate preliminare, în studiul privind Cancerul și Nutriția nu au arătat o legătură între cantitatea de fructe și legume raportate de sine, pe care bărbații o consumă și riscul de apariție a cancerului de prostată la 4,8 ani ( 31 ). Mai multe studii experimentale mari, prospective, randomizate, controlate cu placebo pentru studierea prevenirii dietetice a cancerului de prostata sunt in desfasurare, inclusiv seleniul si vitamina E chelopeterapie sponsorizat de NIH si un studiu de seleniu la barbati cu neoplazie prostatica intraepiteliala de grad inalt organizata de către grupul de oncologie din sud-vest. Deși s-a acordat o mare atenție identificării agenților chimici primari care ar putea întârzia sau preveni dezvoltarea cancerului de novo , nu există nici un motiv a priori de a presupune că un astfel de agent ar fi la fel de eficient în tratamentul cancerului stabilit sau invers. Din păcate, deocamdată, nu au existat studii de intervenție clinică de dimensiuni comparabile privind tratamentele dietetice pentru cancerul de prostată stabilit, deși au fost raportate mai multe studii de fază II, bazate pe PSA. Aceste studii includ alimente, cum ar fi proteina din soia ( 32 , 33 ), extract de ciuperci ( 34 ) și suplimente nutritive antioxidante ( 35 , 36 ) cu mai multe ingrediente. Cu toate că, cu câteva excepții ( 33 , 36 ), cinetica PSA nu a fost afectată de tratamentul dietetic studiat, aceste studii au avut tendința de a prezenta cohorte mici de pacienți, tratați pentru perioade scurte de timp și fără comparație cu placebo.

În studiul actual, în plus față de prelungirea semnificativă a PSADT, consumul de suc de rodie a fost asociat cu efecte antiproliferative și proapoptotice în biotestele noastre exploratorii. Ar trebui recunoscut faptul că relevanța clinică a acestor teste nevalide este încă neclară. Cu toate acestea, deși factorii specifici care mediază aceste efecte vor fi subiectul unor studii viitoare într-un studiu prospectiv randomizat care compară sucul de rodii cu placebo, este interesant să se speculeze asupra potențialelor mecanisme de acțiune ale polifenolilor de rodie asupra dinamicii de creștere observată in vivo teste de cancer de prostată. Lipsa oricărui efect observat asupra nivelelor serice de androgen sugerează că efectul nu este în primul rând hormonal în natură. Mai mult, nu există niciun motiv să se creadă că polifenolii afectează artifactual măsurarea PSA serică circulantă. Acest lucru este susținut de un studiu farmacocinetic separat (date care nu sunt prezentate), în care nu a existat nicio relație între acidul ellagic circulant și PSA atunci când ambele au fost măsurate în mod serios și simultan după consumul de suc de rodie. Chief, cu toate acestea, printre ipotezele potențial explicative este rolul inflamației în cancer și efectele antioxidante și antiinflamatorii ale polifenolilor de rodie. Inflamația cronică a fost legată de incidența multor tipuri de cancer, inclusiv a cancerului de prostată ( 37 ). Studiile care investighează eșantioane de țesuturi umane au arătat că proliferarea celulelor epiteliale este crescută prin inflamație ( 38 ). Un risc crescut de cancer este asociat cu mecanisme inflamatorii, deoarece aproximativ 15% din toate cazurile de cancer pot fi legate de inflamația cronică ( 38 ). Studiile epidemiologice au descoperit un risc crescut pentru cancerul de prostată la bărbații cu antecedente de boală cu transmitere sexuală sau prostatită ( 39 ). Inflamația în micromediul celulei cancerului de prostată poate stimula procesul multistrat de carcinogeneză prin up-regularea producerii citokinelor proinflamatorii și a căilor lor de semnalizare. De fapt, atrofia inflamatorie proliferativă a fost recent propusă ca un precursor al neoplaziei prostatice intraepiteliale și a cancerului de prostată ( 40 ).

Inflamația poate determina stres oxidativ persistent în celulele canceroase, iar speciile reactive de oxigen pot conferi celulelor canceroase un avantaj de supraviețuire ( 41-43 ). Nivelurile ușoare de stres oxidativ stimulează proliferarea celulelor canceroase ( 42 ) și măresc ratele de mutație prin leziuni ADN și / sau schimbări epigenetice ( 44 ). De Marzo și colab. 40 ) au arătat pierderea de glutathion S- transferază P1 ca un eveniment timpuriu în tumorile de prostată care stabilește stadiul pentru stimularea creșterii prin radicalii de oxigen. Stresul oxidativ a demonstrat, de asemenea, creșterea proliferării celulelor canceroase prin creșterea sensibilității receptorilor factorului de creștere și prin modificarea activității factorului de transcripție. Celulele inflamatorii, cum ar fi macrofagele și celulele mastocite, eliberează factori angiogenici și citokine cum ar fi factorul de necroză tumorală-a, interleukina-1 și factorul de creștere endotelial vascular, care semnalizează creșterea și proliferarea celulelor. În plus, citokinele reglează căile de semnalizare care controlează proliferarea, apoptoza, diferențierea și metastazarea.

Stresul oxidativ este considerat a fi un factor asociat cu multe boli umane, fie ca cauză sau ca efect. Bolile diverse, incluzând cancerul, afecțiunile cardiovasculare și diabetul zaharat, sunt asociate cu leziuni oxidative mediate probabil de specii reactive de oxigen și de azot (specii reactive de oxigen și azot). Principalele componente celulare susceptibile de a fi afectate de radicalii liberi sunt lipidele (peroxidarea acizilor grași în membrane), proteine ​​(denaturare) și acizi nucleici. Rolul antioxidanților derivați din dietă în protecția împotriva stresului oxidativ și dezvoltarea sau progresia cancerului rămâne un subiect de controversă semnificativă. Se crede că proprietățile antioxidante ale polifenolilor din plante rezultă din reactivitatea lor ca donatori de hidrogen sau electroni, din capacitatea lor de a stabiliza electronii nepărați și din capacitatea lor de a termina reacțiile Fenton ( 45 ). Deși mulți antioxidanți alimentari s-au dovedit a funcționa ca antioxidanți in vitro , capacitatea acestor substanțe de a diminua deteriorarea oxidativă a biomoleculelor in vivo la om a fost studiată mai puțin frecvent, iar studiile de intervenție pe termen lung, utilizând manipularea antioxidanților alimentari, s-au făcut chiar mai puțin frecvent cu rezultate dezamăgitoare ( 46 , 47 ).

Anumite activități antioxidante și inhibitoare de prostaglandine au fost sugerate anterior pentru polifenoli extrași din suc de rodie și ulei de semințe, deși literatura de specialitate pe această temă rămâne relativ mică ( 48 ). De asemenea, sa demonstrat că polifenolii promovează apoptoza, inhibă proliferarea și invazia și inhibă carcinogeneza inițiată de 7,12-dimetilbenz ( a ) antracen în modele in vitro și in vivo ale cancerului de sân uman și murin ( 22 ). În modelele de cancer de piele, uleiul din semințe de rodie a redus semnificativ incidența și multiplicitatea tumorilor la șoarecii CD 1 și a fost asociat cu o inhibare a activității decarboxilazei ornitin induse de 12- O -tetradecanoilphorbol-13-acetat ( 49 ), precum și a modului de activare a mitogenului proteina kinază și căile NF-kB ( 18 ). Suprimarea NF-kB este notabilă și sa observat că rodia poate suprima activarea NF-kB în alte modele, cum ar fi celulele endoteliale vasculare ( 50 ). Activarea factorului de transcripție NF-κB are ca rezultat reglarea în sus a genelor antiapoptotice și se consideră că NF-κB este un factor-cheie asociat cu controlul proliferării celulare, inhibării apoptozei și oncogenezei în multe cancere, incluzând cancerul de prostată ( 51 ). S-a arătat că inhibă proliferarea in vitro a trei linii celulare de cancer de prostată, LNCaP, PC3 și DU145, mediate de schimbări atât în ​​distribuția ciclului celular, cât și în inducerea apoptozei și au demonstrat inhibarea in vivo a creșterii xenogrefei la șoarecii atimici ( 20). De asemenea, în PC3, Malik și colab. 52 ) a demonstrat inhibarea creșterii celulare prin analiza bromurii de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazoliu și inducerea apoptozei determinată prin fragmentarea ADN, inducerea Bax și Bak și reglarea în jos de Bcl-XL și Bcl-2. De asemenea, am prezentat studii in vitro preclinice 6 care au demonstrat inhibarea creșterii de 59% până la 75%, progresia întârziată în faza S și generarea de nivele scăzute de apoptoză în linia celulară de cancer de prostată PC3, în timp ce studiile sc și ortotopice in vivo Tumorile LAPC-9 la șoarecii cu imunodeficiență combinată severă au arătat 52% din tumorile de inhibare a creșterii cu 70% reducere a PSA. 7

Deși există o mulțime de teste disponibile pentru măsurarea stresului oxidativ și a stării antioxidante ( 53 , 54 ), în prezent nu sunt disponibile metode standard pentru estimarea stresului oxidativ, făcând alegerea testului oarecum arbitrară. Până în prezent, majoritatea covârșitoare a acestor analize nu au fost supuse unor controale riguroase de validare și niciunul nu poate fi clasificat în prezent ca o măsură reală de eficacitate clinică sau ca punct de final surogat validat. Acest lucru este valabil chiar și pentru probabil cele mai frecvent utilizate și populare teste de deteriorare oxidativă, 8-oxo-7,8-dihidroguanina, care măsoară extinderea oxidării bazei ADN. Deși Comitetul pentru standarde europene privind daunele oxidante de ADN a fost înființat pentru a rezolva problemele asociate cu măsurarea nivelurilor de fond ale leziunilor ADN oxidative, există încă mari surse de incertitudine în estimarea concentrațiilor de 8-oxo-7,8-dihidroguanină.

În studiul actual, au fost utilizate două teste pentru a estima stresul oxidativ, unul direct printr-un test convențional (peroxidarea lipidelor), iar celălalt indirect printr-o estimare a NO care are proprietăți antiinflamatorii bine definite ( 55 ). S-a demonstrat anterior că intervenția cu antioxidanți poate crește expresia endoteliului NOS atât în ​​celulele endoteliale de cultură, cât și la șoarecii hipercolesterolemici ( 56 ).Mai recent, s-a raportat că flavonoidele polifenolice conținute în sucul de rodie sunt capabile să provoace efecte similare, sporind acțiunile biologice ale NO în virtutea capacității lor de stabilizare a NO. Protejând împotriva distrugerii oxidative a NO prin specii reactive de oxigen și alți radicali, sucul de rodie a produs concentrații NO crescute și mai prelungite ale NO și acțiuni biologice ( 57 ). Rolul NO ca potențial agent chimiopreventiv rămâne controversat, cu efecte inhibitorii și promotori asupra neoplaziei raportate secundar sistemului NO / inductibil NOS ( 58 ). În studiile in vitro , sa demonstrat că aspirina donatoare de NO, compusă din fragmentul de aspirină plus -ONO (2) legată printr-un separator molecular, inhibă creșterea colonului, a pancreasului, a plămânului, a pielii, a leucemiei, a sânului și a cancerului de prostată ( 59 ), datorată atât inhibării proliferării celulare prin blocarea tranziției ciclului celular G1-S, cât și prin inducerea apoptozei cel puțin parțial prin inhibarea NF-kB. În acest studiu curent, a existat o corelație negativă semnificativă între nivelul PSA inițial și nivelul nitritului seric inițial (coeficientul de corelație Spearman = -0,40; P = 0,0281).

Din punct de vedere practic, prevenirea progresiei bolii într-o stare metastatică, în care crește riscul de mortalitate asociată cancerului, este de asemenea un rezultat dorit. Acest obiectiv poate fi obținut prin eliminarea bolii, dar și prin încetinirea creșterii tumorii. Rămâne controversat dacă modularea nivelurilor PSA reprezintă un punct final clinic la fel de valabil. Deși Administrația pentru Alimentație și Medicamente nu a acceptat încă un punct final PSA pentru a sprijini aprobarea medicamentelor, evaluarea datelor suplimentare și discuțiile ulterioare privind punctele finale PSA sunt planificate în atelierele viitoare și în reuniunile Comitetului consultativ pentru medicamente oncologice. Cu toate acestea, PSADT este din ce în ce mai văzut de unii ca un biomarker surogat important pentru mortalitatea la cancerul de prostată. Recent, s-a arătat că un PSADT post-tratament de ❤ luni pare a fi un punct final de referință pentru mortalitatea specifică cancerului de prostată ( 60 ). Freedland și colab. a publicat recent rezultatele a 379 de pacienți cu cancer de prostată care au dezvoltat un nivel sporit de PSA după prostatectomia radicală, constatând că în acest context PSADT este factorul clinic cel mai consistent corelat cu moartea din cauza cancerului de prostată ( 61 ). Deoarece bărbații cu un PSADT mai mare se pot aștepta la o supraviețuire mai lungă, punerea în aplicare a strategiilor care ar putea prelungi PSADT, întârziind astfel timpul până la tratamentul cu terapie hormonală și la moarte, ar aduce un mare beneficiu pacienților. Anterior, mai multe studii cu fază II, cu un singur braț, cu agoniști cu cancer de prostată au arătat stabilizarea variabilelor PSA ( 62-64 ), dar cel puțin un astfel de studiu nu a demonstrat un efect statistic semnificativ asupra PSADT comparativ cu placebo studiu ( 65 ). Interesant, în studiul randomizat al rosiglitazonei cu receptorul-pro inhibitor al proliferării peroxizomilor la bărbați cu carcinom de prostată și a unui nivel PSA seric în creștere, 38% dintre bărbații din brațul cu placebo au avut un rezultat favorabil, definit ca o PSADT post-tratament> 150% din PSADT de bază. Deși această incidență a prelungirii PSADT a fost mai mică decât cea observată în acest studiu, aceste studii evidențiază limitările potențiale ale variabilelor PSA în monitorizarea pacienților și necesitatea unor studii prospective de confirmare utilizând un braț de control orbit.

concluzii

Prezentăm primul studiu clinic privind sucul de rodie la pacienții cu cancer de prostată recurent. Acest studiu prezintă efecte semnificative statistic asupra PSADT asociate cu efectele corespondente asupra cancerului de prostată în creșterea celulelor in vitro și apoptozei. Aceste avantaje propuse sunt, totuși, în teste care sunt încă nevalidate și sunt necesare cercetări suplimentare pentru a dovedi validitatea acestor teste și pentru a determina dacă îmbunătățirile unor astfel de biomarkeri (inclusiv PSADT) pot servi ca surogate pentru beneficii clinice. Rezultatele prezente sunt, prin urmare, testate în continuare într-un studiu randomizat, dublu-orb, cu trei brațe, controlat cu placebo, în care capacitatea a două doze de rodie de rodii pentru a produce o modificare predeterminată a cineticii PSA este comparată cu schimbarea observată într-un grup de control. Acest studiu viitor, care a început în aprilie 2006, abordează mai multe limitări ale studiului actual, cu includerea a două brațe de tratament într-un design de răspuns la doză, precum și utilizarea unui control placebo. Mai mult, studiul planificat va fi utilizat pentru evaluarea prospectivă a performanțelor biomarkerilor exploratori utilizați în protocolul actual și pentru a permite studierea în continuare a factorilor serici potențiali care mediază efectele antiproliferative și proapoptotice observate în prezentul studiu. În cele din urmă, dacă un astfel de studiu ar fi pozitiv, ar exista o rațiune puternică pentru cercetarea altor polifenoli din plante (resveratrol de vin roșu, etc.) care ar putea media efecte similare.

Recunoasteri

Îi mulțumim lui Jeffrey Gornbein (Departamentul de Biomatematică, Universitatea din California, Los Angeles) pentru asistență statistică suplimentară și Randy Caliliw pentru administrarea tuturor probelor de țesut și coordonarea testelor de laborator.

Note de subsol

  •  6 Date nepublicate.

  •  7 AJ Pantuck și AS Belldegrun. Cancerul de prostată Fundația științifică Retreat, Lake Tahoe, NV, 2004.

  • Sprijin pentru finanțare: Lynda și Stewart Resnick Revocable Trust și acordă P50CA92131 și 1R01CA100938 (W. Aronson și RJ Barnard). Lynda și Stewart Resnick dețin POM Wonderful Co., care a furnizat sucul pentru studiu.

  • Costurile de publicare a acestui articol au fost suportate parțial de plata taxelor de pagină. Prin urmare, acest articol trebuie să fie marcat ca publicitate în conformitate cu secțiunea 1734 din USC 1734 numai pentru a indica acest fapt.

    • Acceptat în 2 mai 2006.
    • A primit 21 octombrie 2005.
    • Revizuirea a fost primită pe 29 martie 2006.

Referințe

Vizualizați Rezumatul

Allan J. Pantuck , John T. Leppert , Nazy Zomorodian , William Aronson , Jenny Hong , James Barnard , Navindra Seeram , Harley Liker , Heying Wang , Robert Elashoff , David Heber , Michael Aviram , LouisIgnarro și Arie Belldegrun

Exprimati-va pararea!

Completează mai jos detaliile tale sau dă clic pe un icon pentru a te autentifica:

Logo WordPress.com

Comentezi folosind contul tău WordPress.com. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Google

Comentezi folosind contul tău Google. Dezautentificare /  Schimbă )

Poză Twitter

Comentezi folosind contul tău Twitter. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Facebook

Comentezi folosind contul tău Facebook. Dezautentificare /  Schimbă )

Conectare la %s

Acest site folosește Akismet pentru a reduce spamul. Află cum sunt procesate datele comentariilor tale.