ceai verde in radioterapia cancerului de san

Abstract

Scopul acestui studiu a fost de a testa ipoteza că administrarea de epigalocatechin-3-galat (EGCG), un polifenol prezent din abundență în ceaiul consumat pe scară largă, inhibă proliferarea celulară, invazia și angiogeneza la pacienții cu cancer mamar.

EGCG în capsule de 400 mg a fost administrat oral de trei ori pe zi la pacienții cu cancer de sân care urmează tratament cu radioterapie. Parametrii legați de proliferarea celulară, invazie și angiogeneză au fost analizați în timp ce probele de sânge au fost colectate în diferite momente de timp pentru a determina eficacitatea tratamentului EGCG. În comparație cu pacienții cărora li s-a administrat radioterapie singură, cei cărora li s-a administrat radioterapie plus EGCG pentru o perioadă prelungită de timp (două până la opt săptămâni) au prezentat niveluri serice semnificativ mai mici de factor de creștere endotelial vascular (VEGF), factor de creștere a hepatocitelor (HGF),și activarea redusă a metaloproteinazei-9 și a metaloproteinazei-2 (MMP9 / MMP2). Adăugarea de seruri obținute de la pacienții tratați cu combinație de radioterapie și hrănire EGCG timp de 2-8 săptămâni până laculturile in vitro de celule MDA-MB-231 umane extrem de metastazate au dus la următoarele modificări semnificative: (1) suprimarea proliferării și invaziei celulare; (2) oprirea ciclurilor celulare în faza G0 / G1; (3) reducerea activării MMP9 / MMP2, expresiilor Bcl-2 / Bax, receptorului c-Met, NF-κB și fosforilării Akt. Celulele MDA-MB-231 expuse la EGCG de 5-10 µM au arătat, de asemenea, o creștere semnificativă a efectelor radiației γ care induc apoptoza, concomitent cu un nivel redus de proteine ​​NF-κB și fosforilare AKT. Aceste rezultate oferă dovezi nedeclarate până acum că EGCG a potențat eficacitatea radioterapiei la pacienții cu cancer de sân și ridică posibilitatea ca acest polifenol de ceai să fie un adjuvant terapeutic împotriva cancerului de sân metastatic uman.

Curr Mol Med. Manuscris de autor; disponibil în PMC 2012 15 martie.Publicat în forma finală editată ca:Curr Mol Med. 2012 februarie; 12 (2): 163–176.

PMCID: PMC3305796

NIHMSID: NIHMS355759

PMID: 22280355

Activități anti-cancer ale extractului ceai verde Epigallocatechin-3-Gallate la pacienții cu cancer mamar sub radioterapie

G. Zhang , 1, * Y. Wang , 2, # Y. Zhang , 3, # X. Wan , 4, # J. Li , 5, # K. Liu , 1, # F. Wang , 6, # K Liu , 1, # Q. Liu , C. Yang , P. Yu , Y. HuangS. Wang , P. Jiang , Z. Qu , J. Luan , H. Duan , L. Zhang , A. Hou , S. Jin , T-C Hsieh , 9 și E. Wu 6, *

Informații despre autor

 Informații privind drepturile de autor și licență 

Renunțare

INTRODUCERE

Cancerul de sân este a doua cauză principală de decese cauzate de cancer la femeile din Statele Unite [ 1 ]. Investigațiile bazate pe populație au sugerat că factorii dietetici pot afecta incidența cancerului de sân [ 2 , 3 ]. De exemplu, studiile epidemiologice au raportat o asociere inversă între consumul de ceai verde și riscul de cancer mamar la femeile asiatice americane [ 4 ] și chinezești [ 5 ].

Ceaiul este cea mai populară băutură din lume, lângă apă. Dintre polifenolii prezenți în ceaiul verde (aproximativ 30% din greutatea totală a frunzelor de ceai), un polifenol major, epigalocatechin-3-galatul (EGCG), a arătat efecte inhibitoare asupra diferitelor etape ale tumorigenezei pe baza experimentelor in vitro și in vivo. studii folosind modele animale de carcinogeneză [ 6 – 21 ]. Activitățile antitumorigene atribuite expunerii la EGCG includ inhibarea proliferării celulare și creșterea tumorii [ 6 , 10 – 14 , 21 ], inducerea apoptozei și stoparea ciclului celular [ 7 , 11 , 12 ,17 , 21 ], inhibarea invaziei și metastazelor [ 8 , 12 , 15 , 16 , 18 , 21 ] și suprimarea angiogenezei [ 20 , 21 ]. La nivel molecular, EGCG inhibă semnificativ legarea factorului de creștere endotelial vascular (VEGF) cu receptorul său [ 22 ]. Mai mult, extractul de ceai verde (GTE) sau EGCG scad, de asemenea, semnificativ secreția de VEGF în mediul de cultură și reduc expresia mRNA VEGF în celulele MDA-MB-231 [ 23 , 24 ]. Mai mult, EGCG inhibă semnalizarea HGF / Met în celulele epiteliale mamare imortalizate și tumorigenice [25 ]. În cele din urmă, EGCG inhibă sinteza și activarea MMP2 și MMP9 specifice invaziei tumorale în celulele DU-145 ale carcinomului de prostată uman [ 26 ]. Cu toate acestea, concentrațiile eficiente de EGCG utilizate în majoritatea experimentelor, inclusiv studiile noastre anterioare, au depășit cu mult concentrațiile plasmatice de EGCG observate la oameni și animale (În general, vârful concentrației plasmatice de EGCG uman este în intervalul micromolar mic după doză orală unică de EGCG, Polifenon E (un preparat standardizat de polifenol de ceai verde) sau ceai verde) [ 27 – 29 ]. Această problemă persistentă de biodisponibilitate și diferențele metabolice dintre animale și oameni o fac dificilă în extrapolarea rezultatelor experimentelor in vitro la situații.in vivo și de la animale la om, în ciuda faptului că au existat mai mult de nouă sute de lucrări care raportează efectele EGCG împotriva cancerului până în prezent (combinând „EGCG” ȘI „cancer” în PubMed).

Pentru a explora utilizarea EGCG ca terapie adjuvantă pentru carcinogeneză și pentru a obține informații suplimentare despre mecanismul său de acțiune, a fost efectuat un studiu clinic pilot, în special, pentru a testa ipoteza că EGCG ar putea spori eficacitatea radioterapiei la pacienții diagnosticați cu cancer de sân . Ca dovadă de principiu, ne-am concentrat asupra parametrilor legați de inhibarea proliferării celulare, invaziei și angiogenezei.Mergi la:

MATERIALE ȘI METODE

Pacienți

Un total de zece pacienți de sex feminin (vârstă mediană, 46 de ani; interval, 38-55 ani) cu stadii avansate local (T 3 , T 4 și / sau N 0- N 3) cancerul de sân neinflamator supus radioterapiei au fost înscriși pentru acest studiu. Femeile gravide nu erau eligibile. Criteriile de selecție ale pacienților au inclus, de asemenea: funcții de organe necompromise (măduva osoasă, ficat și rinichi), o speranță de viață de 12 săptămâni (w) și dovezi ale leziunilor măsurabile bidimensional, determinate de tomografie computerizată, imagistică prin rezonanță magnetică sau palpare. Comitetul de evaluare a eticii instituționale (IERB) al spitalului chinez PLA 107 a aprobat protocolul (număr: 03B006), iar studiul pilot a fost realizat în conformitate cu liniile directoare pentru buna practică clinică și Declarația de la Helsinki. Toți pacienții au fost obligați să completeze un consimțământ informat aprobat de IERB înainte de inițierea tratamentului. Cei zece pacienți (sânii tuturor pacienților au fost excizați prin intervenție chirurgicală înainte de acest studiu) au fost repartizați aleatoriu în două grupuri:grupul 1 cinci pacienți (3 metastaze și 2 recidivate cu metastaze) au primit tratament EGCG și radioterapie, în timp ce grupul 2 cinci pacienți (3 metastaze și 2 recidivate cu metastază) au primit un placebo (radioterapie) în loc de EGCG. Mai exact, pacienților cu cancer de sân li s-a administrat EGCG pe cale orală (400 mg în 2 capsule, cu 100 ml de apă) de 3 ori pe zi sau un placebo (capsulă goală) în timpul ciclurilor de radioterapie de 5 w (5 săptămâni, la fel în continuare) și 3 -w ciclu post radioterapie. EGCG (> 95%, Lot 710291) izolat din ceai verde a fost obținut de la Taiyo Green Power Co., Ltd., Wuxi, China, iar capsulele au fost preparate în Școala de Farmacie de la Universitatea Yantai. Cu excepția radioterapiei sau EGCG plus radioterapia, pacienții au fost de acord să se abțină de la autoadministrarea altor medicamente în timpul experimentului de 8 w.

Seră umană

Probele de sânge au fost colectate de la pacienți după un post peste noapte, cu excepția apei potabile. Zece probe de sânge ml au fost colectate înainte de 0 oră (0 ore) și 2 ore (2 ore) după administrarea EGCG sau placebo. Probele de ser au fost alicotate și depozitate la -80 ° C până la analiza probei.

Determinarea nivelurilor serice VEGF și HGF de către ELISA

Probele de ser (0-h și 2-h) de la pacienții cărora li s-a administrat placebo sau EGCG au fost analizate pentru modificări în VEGF și HGF folosind kituri ELISA achiziționate de la R&D Systems (Minneapolis, MN), conform instrucțiunilor furnizate de producător. Toate probele au fost analizate în trei exemplare și a fost calculată media valorilor. In prezentul studiu, am folosit pg / 10 6 trombocite si pg / ml pentru a reprezenta nivelurile de VEGF și HGF în seruri de brevete, respectiv. Se raportează că trombocitele și celulele tumorale, precum și neutrofilele, contribuie la nivelul serului VEGF [ 30 – 32 ], care ar putea fi afectat de radioterapie. Având în vedere modificările trombocitelor la pacienții individuali în timpul radioterapiei, am utilizat nivelurile serice relative de VEGF în pg / 10 6 trombocite la pacienți pentru a analiza modificările VEGF.

Cultura celulară și teste de proliferare / viabilitate Ex Vivo

Celulele extrem de metastazate ale cancerului de sân MDA-MB-231 uman au fost obținute din colecția American Type Culture Collection (Manassas, VA). Celulele au fost cultivate în DMEM (Sigma, Co., MO) suplimentat cu 10% ser de la pacienții cu cancer mamar sau 10% ser fetal bovin (FBS). Proliferarea a fost testată la 48- și 72-h folosind kitul MTT (3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) 2,5-difeniltetrazolium bromură) (Invitrogen, Carlsbad, CA) urmând instrucțiunile producătorului. Viabilitatea relativă a celulei a fost determinată utilizând testul de excludere a colorantului albastru trypan după ce celulele au fost tratate timp de 36 de ore cu EGCG, radiație γ și EGCG plus radiație γ. Pentru a determina efectele EGCG asupra viabilității celulare tratate cu radiații γ și a expresiilor proteice din celule, celulele la confluență de 80% au fost placate în placa cu șase godeuri. Douăzeci și patru de ore mai târziu,celulele au fost tratate cu radiații γ la o doză de 8 Grey (Gy). Treizeci și șase de ore mai târziu, celulele tratate cu radiația y au fost utilizate pentru analize ale viabilității celulare sau ale expresiilor proteice. Radiația a fost livrată folosind unSursă de 60 Co cu o distanță sursă-balon de 40 cm și o rată a dozei de 1,36 Gy / min. Fiecare experiment a fost repetat de trei ori.

Analiza tranziției fazei ciclului celular și inducerea apoptozei prin citometrie în flux

Celulele au fost detașate în PBS / 2 mM EDTA, centrifugate la 1.000 rpm timp de 5 minute și apoi resuspendate ușor în 250 uL de soluție hipotonică de fluorocrom (PBS, 50 ug iodură de propidiu, 0,1% citrat de sodiu și 0,1% Triton X-100) cu RNaza A (100 unități / ml). Conținutul ADN a fost analizat prin citometrie în flux (Becton Dickinson FACS Vantage SE, San Jose, CA). Distribuția ciclului celular și apoptoza au fost determinate pe baza conținutului de ADN și , respectiv, a populației de celule sub-G 1 .

Analiza invaziei Ex Vivo

Pentru determinarea invaziei celulare, s-au folosit camere transwell modificate care conțin filtre de policarbonat acoperite cu fibronectină și matrigel (Costar, Corning, Inc., NY). Celule (2,5 × 10 4) au fost pretratate timp de 1 oră cu 10% ser de la pacienți și însămânțate pe camera superioară conținând 0,2 ml mediu fără ser; camera inferioară a fost umplută cu 0,66 ml DMEM suplimentat cu 10% din probele de ser autolog (pentru a servi ca chimioatractor). După incubare timp de 16 ore la 37 ° C, celulele care au invadat la suprafața inferioară a filtrului au fost fixate și colorate folosind iodură de propidiu. Celulele de pe partea superioară a filtrului au fost îndepărtate folosind un răzuitor de cauciuc. Celulele invadate de pe partea inferioară a filtrului au fost numărate și înregistrate pentru imagini prin microscopie cu fluorescență (obiectiv 10 ×; Nikon, TE2000-U, Japonia). Fiecare experiment a fost repetat de trei ori.

Zimografie cu gelatină

Probele de ser de la pacienți sau supernatantele (fără ser) din camera superioară a camerei transwell în testul de invazie au fost analizate pentru activarea MMP9 / MMP2. Sera pacienților sau mediul condiționat au fost supuși 10% SDS-PAGE conținând 0,1% gelatină în condiții nereducătoare. După electroforeză, gelurile au fost spălate cu 2,5% Triton X-100 pentru a elimina SDS și apoi incubate într-un tampon în curs de dezvoltare (50 mM tampon Tris-HCI [pH 7,4], 10 mM CaCI 2 ) peste noapte la 37 ° C. Gelurile au fost colorate cu 0,25% Coomassie Brilliant Blue R-250 și decolorate în aceeași soluție fără colorant. Activarea gelatinazei a fost vizualizată ca benzi clare pe fundalul de gelatină colorată în albastru. Fiecare experiment a fost repetat de trei ori.

Analiza Western Blot

Celulele MDA-MB-231 au fost tratate cu ser de la pacienții cu radioterapie care au luat EGCG sau au luat placebo și au fost colectate la 48 de ore. Pentru detectarea p-Akt, celulele au fost tratate timp de 30 de minute cu aceste seruri. Pentru analiza efectelor in vitro ale EGCG asupra nivelului proteinelor de NF-γB și fosforilarea Akt în celulele cancerului de sân uman tratate cu radiații γ, celulele MDA-MB-231 au fost tratate cu radiații γ la o doză de 8 Gy de γ raze în absența sau prezența EGCG 5-10 µM sau a inhibitorului NF-κB (Bay = Bay 11-7082) și PI3K / Akt (Ly = Ly294002). Cantități egale de extracte de celule tratate (60 µg) au fost rezolvate prin SDS-PAGE, transferate în membranele nitrocelulozice și testate cu anticorpi primari (de la Cell Signaling Technology, MA) împotriva factorului nuclear Bcl-2, Bax, c-Met uman. (NF-κB p-65), Akt, p-Akt (Ser473 ), respectiv β-actină și apoi anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean. β-actina a fost utilizată ca control al încărcării. Detectarea a fost făcută folosind un sistem de chemiluminescență îmbunătățit (Amersham Life Science, Arlington Heights, IL).

Analize statistice

Analiza statistică a fost făcută folosind ANOVA unidirecțional sau bidirecțional urmat de testul post hoc adecvat (Bonferroni) și testul t Student, precum și regresia liniară simplă cu software-ul SPPS 13.0. Datele sunt reprezentate ca media ± SD, un asterisc P <0,05, un asterisc dublu P <0,01 și un asterisc triplu P <0,001. Pentru toate testele, valorile P mai mici de 0,05 au fost considerate semnificative statistic.Mergi la:

REZULTATE SI DISCUTII

Niveluri reduse de VEGF și HGF din sânge EGCG, precum și scăderea activării MMP9 / MMP2 atunci când sunt administrate pe cale orală la pacienții cu cancer mamar sub radioterapie

O diagramă de flux schematică care ilustrează proiectarea acestui studiu pilot este prezentată în Fig. ( 1 ). De remarcat, pacienții cu cancer mamar au început să primească doze orale de EGCG concomitent cu inițierea radioterapiei. În grupul căruia i s-a administrat EGCG (n = 5) pentru 8-w, o scădere semnificativă a nivelurilor de VEGF seric (Fig. 2A), HGF (Fig. 2B) și activitatea MMP9 / MMP2 (Fig. 3) a fost observată începând cu 2-w, care a fost menținută pe durata a 8-w a studiului. În comparație cu grupul care a primit doar radioterapie (n = 5), nivelurile serice de VEGF în grupul EGCG au scăzut cu o medie de 0,6 ± 0,1 pg / 10 6 trombocite (1-w), 1,0 ± 0,1 pg / 10 6 trombocite (2 -w), 1,3 ± 0,1 pg / 10 6 plachete (4-w), 1,2 ± 0,1 pg / 10 6 trombocite (6-w), și 0,9 ± 0,1 pg / 10 6 trombocite (8-w), respectiv, reprezentând inhibiție medie de 34%, 53%, 70%, 67% și 63% ( P <0,01, P <0,05, P <0,001, P <0,05 și P<0,001), respectiv. În mod corespunzător, nivelurile serice de HGF din grupul EGCG au scăzut cu o medie de 84,0 ± 22,0 pg / ml, 109,7 ± 23,5 pg / ml, 180,8 ± 32,2 pg / ml, 145,6 ± 17,5 pg / ml și 125,8 ± 19,8 pg / ml, respectiv, reprezentând inhibiție medie de 14%, 18%, 28%, 22% și 20% ( P <0,05, P <0,05, P <0,01 și P <0,05) la 1-w, 2-w, 4-w , 6-w și respectiv 8-w. Mai mult, nivelurile de ser activ MMP-9 (A-MMP9) din grupul EGCG (n = 5) au scăzut cu o medie de 0,3 ± 0,1 ori, 0,5 ± 0,1 ori, 0,5 ± 0,1 ori și 0,7 ± 0,1 ori, respectiv, reprezentând o inhibiție medie de 31%, 40%, 50% și 55% ( P <0,01, P <0,001 și P <0,001) la 2-w, 4-w, 6-w și respectiv 8-w (Fig. 3E), în timp ce nivelurile serice MMP-2 zimogeni (z-MMP2) din grupul EGCG (n = 5) au scăzut cu o medie de 0,2 ± 0,1 ori, 0,4 ± 0,1 ori, 0,43 ± 0,03 ori și 0,5 ± 0,1 ori , respectiv, reprezentând inhibiție medie de 22%, 33%, 43% și 51% ( P <0,01, P <0,01 și P <0,01) la 2-w, 4-w, 6-w și 8-w, respectiv (Fig. 3E).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms355759f1.jpg

Fig. (1)

Diagramă schematică a experimentelor.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms355759f2.jpg

Fig. (2)

Scăderea serului VEGF ( A ) și HGF ( B) niveluri de EGCG administrat oral la pacienții cu cancer mamar sub radioterapie. Pacienții cu cancer de sân (n = 5) au primit trei doze orale de EGCG (400 mg) zilnic timp de 8 săptămâni (w) în timpul ciclurilor de radioterapie de 5 w și 3 w după. Pacienții cu cancer de sân (n = 5) din grupul de control care au primit radioterapie singuri în timpul celor 8-w fără tratament EGCG. Probele de sânge au fost colectate la 0-h, la 0 w (imediat înainte de administrarea EGCG) și la 1-w, 2-w, 4-w, 6-w și 8-w, la 2 ore după doza de EGCG ( 2 ore de probe de sânge în post). Nivelurile serice de VEGF și HGF au fost determinate de ELISA. Valorile sunt afișate ca medie ± SD pentru fiecare grup de la 0-h (0-w) la 8-w. Toate probele au fost analizate în trei exemplare și a fost calculată media valorilor. Nivelurile de semnificație au fost determinate folosind testul ANOVA și Bonferroni sau t Student-Test. * P <0,05; ** P <0,01; și *** P <0,001.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms355759f3.jpg

Fig. (3)

Inhibarea activării serului MMP9 / MMP2 de către EGCG administrat oral la pacienții cu cancer mamar sub radioterapie. Probele de sânge au fost obținute conform descrierii dinFig. 2legendă. Activarea MMP9 / MMP2 în seruri a fost analizată folosind zimografie. În ( C ) și ( D ), pacienții cu cancer de sân Z și J au primit trei doze orale de EGCG (400 mg) zilnic timp de 8 w în timpul ciclurilor de radioterapie de 5 w și 3 w după aceea. În ( A ) și ( B ) Pacienții cu cancer de sân X și Y din grupul de control au primit radioterapie singură în timpul tratamentului cu 8 EG fără EGCG. Activarea zimogenilor MMP9 / MMP2 serici (z-MMP9 / z-MMP2; activități de gelatinază M r 72.000 și M r 92.000) și MMP9 activ (A-MMP9; Mr 88.000) a fost determinată prin analiza zimografiei cu gelatină. Valorile (activarea relativă a zimogenilor MMP9 și MMP2 activi serici) sunt prezentate ca medie ± SD (Bar) de 3 probe pentru fiecare probă, este afișat doar un set de geluri. În ( E ), activarea zimogenilor serici A-MMP9 / z-MMP2 în probele de sânge ale tuturor pacienților a fost analizată prin zimografie cu gelatină și analiză statistică. Așa cum s-a descris mai sus, toate probele de ser provin de la pacienții cu cancer de sân (n = 5) care au primit tratament EGCG pentru 8-w sub radioterapie și pacienții cu cancer de sân (n = 5) din grupul de control care au primit radioterapie singură în timpul celor 8 -w fără tratament EGCG. Analiza statistică a fost făcută folosind testul ANOVA și Bonferroni. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001 (n = 3).

Multe rezultate clinice au arătat că creșterea nivelului sanguin al VEGF și HGF, precum și activitatea MMP2 / MMP9 la pacienții cu cancer mamar sunt strâns asociate cu progresia și metastaza cancerului mamar. Un studiu pe 200 de femei a arătat că nivelurile serice de VEGF au fost semnificativ mai mari la pacienții cu cancer de sân comparativ cu martorii ( P <0,001). Nivelurile sistemice de VEGF au fost reduse semnificativ la pacienții cu cancer mamar după excizia tumorii ( P <0,05) [ 33 ]. Un alt studiu pe 44 de pacienți cu cancer de sân a indicat faptul că operația chirurgicală cu altă terapie poate reduce semnificativ nivelul serului VEGF la acești pacienți; a existat o strânsă corelație între nivelul seric al VEGF și prognosticul cancerului [ 34]. Un studiu pe 40 de pacienți cu cancer de sân cu metastaze a raportat, de asemenea, că, înainte de chimioterapie, nivelul mediu al VEGF la pacienții cu cancer de sân a fost de 496,6 pg / ml, de 4,7 ori mai mare decât cel al controalelor sănătoase ( P <0,001). Chimioterapia intensivă pentru cancerul de sân are ca rezultat o scădere semnificativă a nivelului seric de VEGF [ 35 ]. În plus, o investigație privind nivelurile serice de HGF la 124 de pacienți consecutivi cu cancer mamar invaziv a raportat că pacienții cu cancer mamar cu stadii mai avansate de stadiu tumoral-ganglion-metastază s-au dovedit a avea HGF solubil în ser mai mare [ 36]. Alte investigații individuale privind nivelurile serice de HGF la 134 și 200 de pacienți cu cancer de sân primar, precum și 51 de pacienți cu metastaze ale cancerului de sân au indicat, de asemenea, că nivelurile serice de HGF au fost semnificativ crescute la pacienții cu cancer de sân [ 37 – 39 ] și asociate cu evoluția clinică a pacienți cu cancer de sân metastatic, cum ar fi dimensiunea tumorii, starea nodală și dovezi histologice ale invaziei și metastazei venoase. Au existat rapoarte care arată că valorile medii ale nivelurilor de activitate MMP-2 și MMP-9 au fost semnificativ mai mari la cei 80 de pacienți cu cancer de sân investigați decât la serurile de control (22 de voluntari sănătoși) [ 40 ]; s-a constatat o scădere puternică a nivelurilor serice pro-MMP-9 la 88 de pacienți cu cancer mamar după 1 lună ( P<0,05) și după 6 luni ( P <0,01) după operație [ 41 ]. Evident, toate aceste dovezi clinice indică faptul că reducerea nivelurilor sanguine de VEGF, HGF, MMP-2 și MMP-9 sugerează un prognostic clinic bun pentru pacienții cu cancer mamar cu progresie și / sau metastază după chimioterapie, radioterapie și / sau chirurgical /Operație. În prezentul studiu, am demonstrat că administrarea orală de EGCG a redus semnificativ nivelul sanguin al VEGF (Fig. 2A) și HGF (Fig. 2B) la pacienții cu cancer mamar sub radioterapie comparativ cu pacienții fără tratament EGCG. Efectul a fost observat la 2-w sau 4-w și a rămas timp de 8-w după ce pacienții au luat EGCG. La pacienții de control, care nu au primit tratament EGCG sub radioterapie, nivelurile sanguine ale VEGF și HGF nu s-au modificat semnificativ. Se raportează că trombocitele și celulele tumorale, precum și neutrofilele, contribuie la nivelul serului VEGF [ 30 – 32 ], care ar putea fi afectat de radioterapie. In prezentul studiu, am folosit pg / 10 6 trombocite si pg / ml pentru a reprezenta nivelurile de VEGF și HGF în seruri de brevete, respectiv. Având în vedere modificările trombocitelor la pacienții individuali în timpul radioterapiei, am utilizat nivelurile serice relative de VEGF în pg / 10 6 trombocite la pacienți pentru a analiza modificările VEGF (Fig. 2A). În plus, am analizat neutrofilele probelor de sânge și nu am observat nicio modificare semnificativă a% neutrofilelor din probele de sânge între grupul martor și grupul EGCG în timpul experimentului. EGCG a redus secreția VEGF și expresia ARNm în celulele MDA-MB-231 in vitro și ex vivo, care au fost confirmate de testele noastre (datele nu sunt prezentate) și alte cercetări [ 23 , 24 ]. Credem că administrarea orală de EGCG ar putea reduce nivelul de VEGF din sânge asociat tumorii. De asemenea, am demonstrat că, comparativ cu pacienții cu cancer de sân fără tratament EGCG, activarea zimogenilor MMP9 și MMP2 activi serici a fost semnificativ redusă la pacienții cu cancer mamar după administrarea EGCG pentru 4-w, 6-w și 8-w (Fig. 3). Toate aceste rezultate clinice arată că pacienții cu cancer de sân care au luat EGCG sub radioterapie au primit terapie benefică în reducerea factorilor legați de progresia cancerului de sân.

Inhibarea ex-vivo a proliferării și invaziei în celulele canceroase ale sânului uman cu ser de la pacienții care au primit EGCG și supuși radioterapiei

În continuare am comparat efectele ex vivo ale serurilor de la pacienții cu cancer mamar care utilizează celule cu cancer mamar MDA-MB-231. Serurile au fost luate de la 0 h (0 w) la 8 w, de la grupul care a primit radioterapie singur și de la grupul care a primit EGCG și radioterapie (n = 5, pentru fiecare grup). Comparativ cu grupul de control (radioterapie singură), serurile de 2 ore la 8-w din grupul tratat cu EGCG (radioterapia EGCG +) au suprimat în mod semnificativ și în funcție de timp proliferarea MDA-MB-231 (Fig. 4A). În plus, serurile de 2 ore la 8-w din grupul tratat cu EGCG au suprimat semnificativ invazia celulelor MDA-MB-231 cu 49% ( P <0,05) comparativ cu grupul de control (Fig. 4B). În plus, am constatat, de asemenea, că serurile de la pacienții cu radioterapie care au primit EGCG au efecte inhibitoare similare asupra proliferării și invaziei în liniile celulare ale cancerului de sân uman celulele MDA-MB-435S și MDA-MB-468 (datele nu sunt prezentate) , indicând faptul că nu există o prejudecată a liniei celulare pentru efectele asupra cancerului de sân.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms355759f4.jpg

Fig. (4)

Inhibarea ex vivo a proliferării și invaziei celulelor cu cancer de sân uman foarte metastazate de seruri de la pacienții cu radioterapie cu cancer de sân care iau EGCG pentru 8-w. Pacienții cu cancer de sân (n = 5) au primit trei doze orale de EGCG (400 mg) zilnic timp de 8 w în timpul ciclurilor de radioterapie de 5 w și 3 w după aceea. Pacienții cu cancer de sân (n = 5) din grupul de control care au primit radioterapie singuri în timpul celor 8-w fără tratament EGCG. Probele de sânge au fost recoltate la 0-h, la 0 w (imediat înainte de administrarea EGCG) și la 2-w, 4-w, 6-w și 8-w, la 2 ore după doza de EGCG (2-h post mostre de sânge). Probele de ser de la pacienți au fost, de asemenea, utilizate pentru teste ex vivo pentru proliferare și invazie. ( A) Inhibarea proliferării celulelor MDA-MB-231 prin tratament pentru 48 de ore și 72 de ore cu serurile de 0-8 w. Valorile sunt prezentate ca medie ± SD (Bar) pentru fiecare grup (n = 5). ( B ) Inhibarea invaziei celulelor MDA-MB-231 prin tratament timp de 16 ore cu serurile de la pacienții cu radioterapie J, Q, Y, X și Z care iau EGCG pentru 8-w (n = 5) sau C, D , E, F și G nu iau EGCG (n = 5) (panoul din stânga). Panoul din dreapta arată celulele MDA-MB-231 colorate cu iodură de propidiu care invadează prin camera transwell acoperită cu matrigel. Celulele au fost tratate respectiv 16 ore cu serul la 8-w de la pacienții de control E care au primit radioterapie singură și pacientul cu radioterapie Z care a luat EGCG pentru 8-w. Analiza statistică a fost efectuată utilizând testul ANOVA și Bonferroni sau testul t Student . ( A, B). * P <0,05; ** P <0,01; și *** P <0,001.

Inducerea Ex Vivo a opririi și opoptozei ciclului celular, suprimarea activării MMP-9 / MMP-2, creșterea nivelului Bax și scăderea expresiilor Bcl-2, c-Met și NF-γB, precum și fosforilarea Akt în Celulele cancerului de sân uman de la Sera de la pacienții cu radioterapie care au primit EGCG

Studiile ulterioare au arătat că, comparativ cu serul de 2 ore la 8-w de la pacienții C, D, E și F din grupul de control, serul de 2 ore la 8-w de la pacienții cu radioterapie J, Q, Y și Z din grupul tratat cu EGCG a prezentat următoarele proprietăți: i) apoptoza indusă și oprirea ciclului celular în faza G0 / G1 în celulele MDA-MB-231 (Fig. 5A); (ii) activarea redusă a zimogenilor activi MMP9 și MMP2 în supernatanții celulelor MDA-MB-231 invadatoare (Fig. 5B). În plus, în comparație cu serul de 2 ore la 8-w de la pacientul de control reprezentativ C, serul de 2 ore la 8-w de la pacientul reprezentativ J în grupul tratat cu EGCG a redus expresia proteinei anti-apoptotice Bcl -2 și a îmbunătățit expresia proteinei pro-apoptotice Bax în celulele MDA-MB-231 (Fig. 6A), ducând la reducerea raportului dintre Bcl-2 și Bax. Același ser de 2 ore a redus, de asemenea, expresia proteinelor receptorului c-Met (Fig. 6B) și NF-κB (Fig. 6C) și a suprimat fosforilarea (Ser 473 ) a lui Akt (Fig. 6D) în celulele canceroase.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms355759f5.jpg

Fig. (5)

Inducerea opririi și apoptozei ciclului celular și inhibarea activării MMP9 / MMP2 la supernatanții celulelor MDA-MB-231 de către seruri de la pacienții cu radioterapie care iau EGCG pentru 8-w. Pacienții cu radioterapie cu cancer de sân J, Q, Z și Y au primit doze orale de EGCG pentru 8-w. Pacienții cu cancer de sân C, D, E și F din grupul de control au primit radioterapie singuri. Probele de sânge au fost colectate la 0-h la 0 w (imediat înainte de administrarea EGCG) și la 2-h după administrarea EGCG pe a 8-a w. ( A ) Celulele tratate timp de 48 de ore cu serurile au fost analizate pentru conținutul de ADN prin citometrie în flux. Probele de celule tratate cu seruri de 8 w de la pacienții J, Q, Z și Y (J8w, Q8w, Z8w și Y8w) au fost mai eficiente decât probele de control (C8w, D8w, E8w și F8w) în inducerea apoptozei (celule din sub-G 1fază) și oprirea fazei G 0 / G 1 . ( B ) Celulele MDA-MB-231 au fost cultivate timp de 16 ore în camera transwell acoperită cu fibronectină și matrigel (fără ser) după pretratare timp de 1 oră cu mediu DMEM conținând 10% din 0-h sau 8-w ser de la pacienții J, Q, Z și Y din grupul EGCG și, respectiv, pacienții C, D, E și F din grupul de control. Activarea zimogenilor activi MMP9 (A-MMP9) și MMP2 (z-MMP2) a fost analizată la supernatanții celulelor MDA-MB-231 invadante. Valorile (activarea relativă a zimogenilor activi MMP9 și MMP2) sunt prezentate ca medie ± SD (Bar) pentru 3 teste din fiecare probă și este prezentat un singur set de geluri. Analiza statistică a fost făcută folosind testul ANOVA și Student’s t- test. * P <0,05 (n = 4).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms355759f6.jpg

Deschideți într-o fereastră separatăFig. (6)

Reducerea ex vivo a expresiilor proteice ale Bcl-2 / Bax, c-Met și NF-κB p-65, precum și fosforilarea (Ser 473 ) a Akt în celulele cancerului de sân uman prin ser de la pacientul cu radioterapie J care ia EGCG pentru 8- w. Pacientul cu radioterapie cu cancer de sân J a primit doză orală de EGCG pentru 8-w, în timp ce pacientul cu radioterapie C din grupul de control nu a primit EGCG. Probele de sânge au fost colectate la 0-h la 0 w (imediat înainte de administrarea EGCG) și la 2-h după administrarea EGCG la 8-a w. După ce celulele MDA-MB-231 au fost tratate cu 0 h ser (C0h, J0h) la 0 w și 2 h ser (C8w, J8w) la 8 w de la pacienți, respectiv, cantități egale de proteine ​​din celula totală lizatele au fost separate prin SDS-PAGE și analiza Western blot a Bcl-2 / Bax (A) , c-Met ( B), NF-κB p-65 (C) și p-Akt (D) au fost realizate. Pentru analiza p-Akt, celulele MDA-MB-231 au fost tratate cu fiecare 0 h ser (C0h, J0h) la 0-w sau 2-h ser la 8-w (C8w, J8w) de la pacienți, respectiv. În ( A, B și C ), densitatea benzii (normalizată la β-actină) prezentată ca medie ± SD este relativă cu cea a controlului C0h (desemnat ca 1.00). În (D) , densitatea benzii (normalizată la Akt) prezentată ca medie ± SD este relativă cu cea a controlului C0h (desemnat ca 1.00). Pentru un experiment, au fost efectuate 3 teste și este prezentat un singur set de geluri. În ( A, B și C), comparativ cu celulele tratate cu serul 0 h și 8-w de la pacientul C la control (C0h și C8w), expresia Bax a fost semnificativ îmbunătățită și expresiile Bcl-2, c-Met și NF-κB au fost reduse semnificativ în celulele MDA-MB-231 de serul de 8 w de la pacientul tratat cu EGCG J (J8w). În (D) , comparativ cu celulele tratate cu serurile C0h și C8w de la pacientul C din grupul de control, fosforilarea (Ser 473 ) a Akt în celulele MDA-MB-231 a fost semnificativ redusă de serul J8w din EGCG- pacientul tratat J. Analiza statistică a fost efectuată folosind testul ANOVA și Bonferroni. * P <0,05 (n = 3).

Una dintre etapele principale de reglare a morții celulelor apoptotice este controlată de raportul dintre membrii anti-apoptotici și pro-apoptotici ai familiei de proteine ​​Bcl-2, care determină susceptibilitatea la apoptoză. Bcl-2 și inhibitorul său dominant Bax sunt regulatori cheie ai creșterii celulare și apoptozei. Supraexprimarea Bcl-2 îmbunătățește supraviețuirea celulară prin suprimarea apoptozei, dar supraexprimarea Bax accelerează moartea celulară. NF-κB este un regulator de transcripție nucleară cu un motiv specific pentru transcrierea Bcl-2 [ 42 – 44]. Calea PI3K / Akt acționează ca un semnal de supraviețuire (anti-apoptotic) și joacă un rol cheie în reglarea schimbării apoptotice a celulelor cancerului de sân. Akt își poate exercita efectele anti-apoptotice în mai multe moduri diferite, cum ar fi reglarea negativă a factorilor proapoptotici și stimularea căii de supraviețuire a NF-κB [ 45 – 48 ]. Activarea Akt și a căii NF-κB / Bcl-2 duce la inhibarea apoptozei induse de chimioterapie / radioterapie, care are ca rezultat rezistența la tratament [ 47 ]. Bax, Bcl-2, p-Akt și NF-κB au devenit țintele importante de acțiune ale agenților anticancer [ 44 , 47 , 49 – 52]. Aici, rezultatele noastre au arătat că serurile de la pacienții care au luat EGCG au îmbunătățit raportul de apoptoză, au reglat nivelul Bax și au reglementat în jos nivelurile de Bcl-2, p-Akt și NF-κB în cancerul de sân celule. Rezultatele noastre sugerează că suprimarea căii p-Akt și a căii NF-κB / Bcl-2 prin reducerea fosforilării expresiei Akt și NF-κB în celulele cancerului mamar ar contribui în mare măsură la creșterea apoptozei celulelor cancerului mamar și poate fi unul dintre mecanismele de acțiune importante pentru serurile pacienților tratați cu EGCG împotriva proliferării și invaziei celulelor cancerului de sân.

Efectele in vitro ale EGCG asupra viabilității celulare și expresiei NF-κB și fosforilării Akt în celulele cancerului de sân uman tratate cu radiații ³

Testul in vitro a indicat că viabilitatea relativă a celulelor în celulele MDA-MB-231 a fost redusă după ce celulele au fost tratate fie cu radiație γ la o doză de 8 Gy sau EGCG la concentrații de 5 pM până la 10 pM. Astfel de concentrații de EGCG au reglat semnificativ reducerea viabilității celulare în doza de celule MDA-MB-231 tratate cu radiații γ (Fig. 7A). Mai mult, EGCG la 5 µM și 10 µM a reglat dramatic nivelul proteinei NF-κB p65 și fosforilarea (Ser 473 ) a Akt în celulele MDA-MB-231 tratate cu radiații γ, deși tratamentul cu EGCG singur a redus NF- Nivelul proteinei κB p65 (Fig. 7B) și fosforilarea (Ser 473 ) a Akt în celulele canceroase (Fig. 7C).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms355759f7.jpg

Deschideți într-o fereastră separatăFig. (7)

Efectele in vitro ale EGCG asupra viabilității celulare și a nivelului de proteine ​​ale NF-κB p65, precum și fosforilarea (Ser 473 ) a Akt în celulele cancerului de sân uman tratate cu radiații γ. Celulele MDA-MB-231 au fost tratate cu radiații γ la o doză de 8 Gy (Rad8) în absența sau prezența EGCG la concentrații de 5 uM (E5) sau 10 uM (E10). După ce celulele tratate au fost cultivate timp de 36 de ore, viabilitatea relativă a celulei a fost determinată utilizând un test de excludere a colorantului albastru trypan (A) ; cantitățile egale de proteine ​​din lizatele celulare totale au fost separate prin SDS-PAGE și analiza Western blot a NF-κ B p-65 (B) și p-Akt (C)au fost efectuate. Bay 11-7082 (BAY), inhibitorul NF-κB și Ly294002 (LY), inhibitorul PI3K / Akt, au fost utilizate ca control pozitiv, respectiv. Densitatea benzii (normalizată la β-actină pentru NF-κB sau la Akt pentru p-Akt) prezentată ca medie ± SD este relativă cu cea a controlului (desemnată ca 100%). Analiza statistică a fost efectuată utilizând ANOVA bidirecțională urmată de testul post hoc Bonferroni pentru a stabili dacă au existat diferențe semnificative între grupuri. Valorile cu litere diferite (a – d) diferă semnificativ ( P <0,05). c / s și d / s reprezintă efecte radiații γ semnificativ îmbunătățite prin tratamentul EGCG comparativ cu tratamentul fie cu radiație γ, fie cu EGCG singur (c / s, P <0,001, ANOVA bidirecțional; d / s, P <0,0001 , ANOVA cu două căi).

Nivelurile crescute de VEGF și HGF, precum și activitățile MMP9 / MMP2 sunt asociate cu proliferarea celulelor canceroase, invazie și metastază, precum și cu angiogeneză [ 53 – 59 ]. Rezultatele noastre prezente arată că nivelurile de VEGF și HGF din sânge și activarea MMP9 / MMP2 la pacienții cu cancer mamar sub radioterapie au fost semnificativ reduse sau inhibate prin administrarea orală de EGCG. Efectele inhibitoare asupra acestor factori pot rezulta din acțiunile directe și indirecte ale EGCG. S-a raportat că HGF, acționând prin receptorul său c-Met, joacă un rol important în majoritatea tumorilor solide umane [ 60 ]. HGF induce expresia VEGF în celulele canceroase și este un comutator cheie pentru activarea angiogenezei [ 61]. S-a raportat că inhibarea mediată de adenovirus a MMP-9 (Ad-MMP-9) cu radioterapie a scăzut nivelurile de NF-κB și proteina activatoare 1, ambele contribuind la radiorezistența celulelor MDA-MB-231 in vitro și in vivo ; tratamentul cu Ad-MMP-9 plus radiații a regresat complet creșterea tumorii în modelul de cancer de sân ortotopic [ 62]. Rezultatele noastre actuale ale reducerii MMP-9 la pacienții cu radioterapie care au primit EGCG pot contribui la scăderea nivelului de NF-κB și inhibarea proliferării în celulele cancerului de sân. În lucrarea noastră, am demonstrat că serurile de la pacienții care au luat EGCG au redus expresiile Bcl-2 / Bax și NF-κB și au suprimat fosforilarea Akt, precum și au inhibat activarea zimogenilor activi MMP9 și MMP2 în invadarea MDA- Celule MB-231. Aceste efecte antitumorale ale serurilor de la pacienții tratați cu EGCG ar putea fi cauzate de EGCG și de reducerea in vivo a VEGF, HGF și MMP9 / MMP2 indusă de metaboliții săi . Într-adevăr, Yang și colab. [ 27 , 63 ] și Chow și colab. [ 28 , 29] au raportat farmacocinetica EGCG și a metaboliților săi în serurile umane, deși pot exista câțiva metaboliți necunoscuți în serurile umane și efectele lor antitumorale de sondat. Chow și colab . a raportat, de asemenea, că concentrația plasmatică maximă medie (Cmax) la oamenii tratați cu EGCG (n = 8) a fost de aproximativ 3,4 µg / ml (egală cu 7,4 µM) după administrarea orală de EGCG 29]. Aici, am confirmat că EGCG la 5 µM reduce semnificativ viabilitatea celulară, expresia proteinei NF-κB și fosforilarea Akt în celulele cancerului mamar; o astfel de concentrație de EGCG sporește semnificativ efectele radiației γ asupra celulelor cancerului de sân. Aceste activități ar putea juca un rol important în efectele antitumorale ale serurilor de la pacienții tratați cu EGCG, așa cum am observat în prezentul studiu. Descoperirile noastre sugerează că EGCG poate avea efecte terapeutice adjuvante extinse împotriva cancerului de sân metastatic uman, care poate fi implicat în calea de transducție a semnalului VEGF / HGF-c-Met-PI3K / Akt-NF-κB.Mergi la:

MULȚUMIRI

Această lucrare este susținută de subvenții de la Ministerul Educației din Republica Populară Chineză către GZ, de la Ministerul Resurselor Umane și Securității Sociale din Republica Populară Chineză către GZ, de la Departamentul de Știință și Tehnologie din provincia Shandong la GZ (Y2008C71; 2009GG10002087), Proiecte de la Universitatea Yantai către GZ, un grant de la Fundația Națională de Științe Naturale din China către GZ (Nr. 30973553), un grant de la PLA și Fondul de cercetare pentru medicină și sănătate către YW (06G034), NDSU Fondurile de cercetare ale facultății (NDSU și ND EPSCoR) (EW) și Grantul pentru proiectul pilot (EW) de la Centrele de Excelență în Cercetare Biomedică (COBRE) acordă NIH P20 RR020151 de la Centrul Național pentru Resurse de Cercetare (NCRR). NCRR este o componentă a Institutelor Naționale de Sănătate (NIH).Conținutul acestui raport este exclusiv responsabilitatea autorilor și nu reflectă neapărat opiniile oficiale ale NIH sau NCRR. Finanțatorii nu au avut nici un rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. Autorii ar dori să își exprime mulțumirile Dr. Arthur Pardee (Institutul de cancer Dana-Farber) și Dr. CS Yang (Universitatea de Stat din New Jersey) pentru mare ajutor în scris, Dr. Eric T. Wong (Beth Israel Deaconess Medical Center), Dr. Mehdi A. Fini (Universitatea din Colorado), Ronald E. Vincent (BIOCON Scientific) și Enrico Sassi (North Dakota State University) pentru lectură atentă.sau pregătirea manuscrisului. Autorii ar dori să își exprime mulțumirile Dr. Arthur Pardee (Institutul de cancer Dana-Farber) și Dr. CS Yang (Universitatea de Stat din New Jersey) pentru mare ajutor în scris, Dr. Eric T. Wong (Beth Israel Deaconess Medical Center), Dr. Mehdi A. Fini (Universitatea din Colorado), Ronald E. Vincent (BIOCON Scientific) și Enrico Sassi (North Dakota State University) pentru lectură atentă.sau pregătirea manuscrisului. Autorii ar dori să își exprime mulțumirile Dr. Arthur Pardee (Institutul de cancer Dana-Farber) și Dr. CS Yang (Universitatea de Stat din New Jersey) pentru mare ajutor în scris, Dr. Eric T. Wong (Beth Israel Deaconess Medical Center), Dr. Mehdi A. Fini (Universitatea din Colorado), Ronald E. Vincent (BIOCON Scientific) și Enrico Sassi (North Dakota State University) pentru lectură atentă.Mergi la:

Note de subsol

CONFLICT DE INTERES

Autorii nu declară niciun conflict de interese.Mergi la:

REFERINȚE

1. Siegel R, Ward E, Brawley O, Jemal A. Statisticile despre cancer, 2011: impactul eliminării disparităților socioeconomice și rasiale asupra deceselor premature cauzate de cancer. CA Cancer J Clin. 2011; 61 (4): 212–236. [ PubMed ] [ Google Scholar ]2. Haenszel W, Kurihara M. Studii ale migranților japonezi. I. Mortalitatea prin cancer și alte boli în rândul japonezilor din Statele Unite. J Natl Cancer Inst. 1968; 40 (1): 43-68. [ PubMed ] [ Google Scholar ]3. Ziegler RG, Hoover RN, Pike MC și colab. Modele de migrație și riscul de cancer mamar la femeile asiatico-americane. J Natl Cancer Inst. 1993; 85 (22): 1819-1827. [ PubMed ] [ Google Scholar ]4. Wu AH, Yu MC, Tseng CC, Hankin J, Pike MC. Ceaiul verde și riscul de cancer mamar la americanii asiatici. Int J Rac. 2003; 106 (4): 574-579. [ PubMed ] [ Google Scholar ]5. Zhang M, Holman CD, Huang JP, Xie X. Ceaiul verde și prevenirea cancerului de sân: un studiu de caz-control în sud-estul Chinei. Carcinogeneză. 2007; 28 (5): 1074-1078. [ PubMed ] [ Google Scholar ]6. Zhang G, Miura Y, Yagasaki K. Efectele ceaiurilor verzi, oolong și negre și ale componentelor conexe asupra proliferării și invaziei celulelor hepatomului în cultură. Citotehnologie. 1999; 31 (1-2): 37-44. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]7. Zhang G, Miura Y, Yagasaki K. Inducerea apoptozei și stoparea ciclului celular în celulele canceroase de către metaboliții in vivo ai ceaiurilor. Cancerul Nutr. 2000; 38 (2): 265-273. [ PubMed ] [ Google Scholar ]8. Zhang G, Miura Y, Yagasaki K. Suprimarea aderenței și invaziei celulelor hepatomului în cultură de către compușii de ceai prin activitate antioxidativă. Rac Lett. 2000; 159 (2): 169–173. [ PubMed ] [ Google Scholar ]9. Yang CS. Inhibarea carcinogenezei prin ceai. Natură. 1997; 389 (6647): 134–135. [ PubMed ] [ Google Scholar ]10. Lu G, Liao J, Yang G, Reuhl KR, Hao X, Yang CS. Inhibarea progresiei adenomului către adenocarcinom într-un model de tumorigeneză pulmonară indusă de 4- (metilnitrosamino) -1- (3-piridil) -1-butanonă la șoareci A / J de către polifenoli de ceai și cofeină. Cancer Res. 2006; 66 (23): 11494–11501. [ PubMed ] [ Google Scholar ]11. Lu YP, Lou YR, Xie JG și colab. Aplicațiile topice ale cofeinei sau (-) – epigallocatechin gallate (EGCG) inhibă carcinogeneza și cresc selectiv apoptoza în tumorile cutanate induse de UVB la șoareci. Proc Natl Acad Sci SUA. 2002; 99 (19): 12455–12460. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]12. Thangapazham RL, Singh AK, Sharma A, Warren J, Gaddipati JP, Maheshwari RK. Polifenolii de ceai verde și galatul său de epigalocatechină constitutivă inhibă proliferarea celulelor cancerului de sân uman in vitro și in vivo . Rac Lett. 2007; 245 (1-2): 232-241. [ PubMed ] [ Google Scholar ]13. Adhami VM, Siddiqui IA, Ahmad N, Gupta S, Mukhtar H. Consumul oral de polifenoli de ceai verde inhibă semnalizarea indusă de factorul de creștere asemănător insulinei într-un model autohton de șoarece de cancer de prostată. Cancer Res. 2004; 64 (23): 8715-8722. [ PubMed ] [ Google Scholar ]14. Wang ZY, Huang MT, Ho CT și colab. Efect inhibitor al ceaiului verde asupra creșterii papiloamelor cutanate stabilite la șoareci. Cancer Res. 1992; 52 (23): 6657-6665. [ PubMed ] [ Google Scholar ]15. Garbisa S, Biggin S, Cavallarin N, Sartor L, Benelli R, Albini A. Invazie tumorală: foarfece moleculare tocite de ceai verde. Nat Med. 1999; 5 (11): 1216. [ PubMed ] [ Google Scholar ]16. Garbisa S, Sartor L, Biggin S, Salvato B, Benelli R, Albini A. Gelatinaze tumorale și invazie inhibată de ceaiul verde flavanol epigalocatechin-3-galat. Cancer. 2001; 91 (4): 822-832. [ PubMed ] [ Google Scholar ]17. Ahmad N, Feyes DK, Nieminen AL, Agarwal R, Mukhtar H. Epigalocatechin-3-galat constituent al ceaiului verde și inducerea apoptozei și stoparea ciclului celular în celulele carcinomului uman. J Natl Cancer Inst. 1997; 89 (24): 1881–1886. [ PubMed ] [ Google Scholar ]18. Sazuka M, Murakami S, Isemura M, Satoh K, Nukiwa T. Efecte inhibitoare ale infuziei de ceai verde asupra invaziei in vitro și metastazelor in vivo ale celulelor carcinomului pulmonar de șoarece. Rac Lett. 1995; 98 (1): 27-31. [ PubMed ] [ Google Scholar ]19. Taniguchi S, Fujiki H, Kobayashi H și colab. Efectul galatului de (-) – epigalocatechină, principalul constituent al ceaiului verde, asupra metastazelor pulmonare cu linii celulare de melanom B16 de șoarece. Rac Lett. 1992; 65 (1): 51-54. [ PubMed ] [ Google Scholar ]20. Cao Y, Cao R. Angiogeneza inhibată de consumul de ceai. Natură. 1999; 398 (6726): 381. [ PubMed ] [ Google Scholar ]21. Yang CS, Wang X, Lu G, Picinich SC. Prevenirea cancerului prin ceai: studii pe animale, mecanisme moleculare și relevanță umană. Nature Rev. 2009; 9 (6): 429–439. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]22. Rodriguez SK, Guo W, Liu L, Band MA, Paulson EK, Meydani M. Cateina ceaiului verde, epigalocatechina-3-galat, inhibă semnalizarea angiogenă a factorului de creștere endotelial vascular prin perturbarea formării unui complex receptor. Int J Rac. 2006; 118 (7): 1635–1644. [ PubMed ] [ Google Scholar ]23. Masuda M, Suzui M, Lim JT, Deguchi A, Soh JW, Weinstein IB. Epigalocatechin-3-galatul scade producția de VEGF în celulele carcinomului capului și gâtului și sânului prin inhibarea căilor de transducție a semnalului legate de EGFR. J Exp Ther Oncol. 2002; 2 (6): 350–359. [ PubMed ] [ Google Scholar ]24. Sartippour MR, Shao ZM, Heber D și colab. Ceaiul verde inhibă inducerea factorului de creștere endotelial vascular (VEGF) în celulele cancerului de sân uman. J Nutr. 2002; 132 (8): 2307–2311. [ PubMed ] [ Google Scholar ]25. Bigelow RL, Cardelli JA. Catechinele de ceai verde, (-) – Epigalocatechin-3-galat (EGCG) și (-) – Epicatechin-3-galat (ECG), inhibă semnalizarea HGF / Met în celulele epiteliale mamare imortalizate și tumorigenice. Oncogen. 2006; 25 (13): 1922–1930. [ PubMed ] [ Google Scholar ]26. Vayalil PK, Katiyar SK. Tratamentul epigalocatechinei-3-galat inhibă matricea metaloproteinazelor-2 și-9 prin inhibarea activării protein kinazelor mitogene, c-jun și NF-kappaB în celulele DU-145 ale carcinomului prostatic uman. Prostata. 2004; 59 (1): 33–42. [ PubMed ] [ Google Scholar ]27. Yang CS, Chen L, Lee MJ, Balentine D, Kuo MC, Schantz SP. Nivelurile de sânge și urină de catehine de ceai după ingestia de diferite cantități de ceai verde de către voluntari umani. Biomarkeri de epidemiol pentru cancer Prev. 1998; 7 (4): 351-354. [ PubMed ] [ Google Scholar ]28. Chow HH, Cai Y, Hakim IA și colab. Farmacocinetica și siguranța polifenolilor de ceai verde după administrarea în doze multiple de epigalocatechină galat și polifenon E la persoanele sănătoase. Clin Cancer Res. 2003; 9 (9): 3312–3319. [ PubMed ] [ Google Scholar ]29. Chow HH, Hakim IA, Vining DR și colab. Efectele condiției de dozare asupra biodisponibilității orale a catekinelor de ceai verde după administrarea în doză unică de polifenon E la persoanele sănătoase. Clin Cancer Res. 2005; 11 (12): 4627–4633. [ PubMed ] [ Google Scholar ]30. Senger DR, Van de Water L, Brown LF și colab. Factorul de permeabilitate vasculară (VPF, VEGF) în biologia tumorii. Cancer Metastasis Rev. 1993; 12 (34): 303-324. [ PubMed ] [ Google Scholar ]31. Taichman NS, Young S, Cruchley AT, Taylor P, Paleolog E. Neutrofilele umane secretă factor de creștere endotelial vascular. J leucocit Biol. 1997; 62 (3): 397–400. [ PubMed ] [ Google Scholar ]32. Verheul HM, Hoekman K, Luykx-de Bakker S, și colab. Trombocit: transportor al factorului de creștere endotelial vascular. Clin Cancer Res. 1997; 3 (12 Pt 1): 2187-2190. [ PubMed ] [ Google Scholar ]33. Lowery AJ, Sweeney KJ, Molloy AP, Hennessy E, Curran C, Kerin MJ. Efectul menopauzei și histerectomiei asupra factorului de creștere endotelial vascular sistemic la femeile supuse unei intervenții chirurgicale pentru cancerul de sân. Cancer BMC. 2008; 8 : 279. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]34. Jing J, Zhao YB, Li HJ, Lu Q. Schimbarea și semnificația clinică a nivelului seric VEGF înainte și după pacienții tratați cu cancer de sân. Sichuan da xue xue bao Yi xue ban. 2006; 37 (6): 889-892. [ PubMed ] [ Google Scholar ]35. Tang JH, Zhao JH, Gong JP, Qin JW, Pan LQ, Xu ZY. Efectele chimioterapiei asupra nivelurilor de factor angiogen circulant la pacienții cu cancer de sân. Zhonghua Zhong Liu Za Zhi. 2007; 29 (3): 210–214. [ PubMed ] [ Google Scholar ]36. Sheen-Chen SM, Liu YW, Eng HL, Chou FF. Nivelurile serice ale factorului de creștere a hepatocitelor la pacienții cu cancer de sân. Biomarkeri de epidemiol pentru cancer Prev. 2005; 14 (3): 715–717. [ PubMed ] [ Google Scholar ]37. Taniguchi T, Toi M, Inada K, Imazawa T, Yamamoto Y, Tominaga T. Concentrațiile serice ale factorului de creștere a hepatocitelor la pacienții cu cancer mamar. Clin Cancer Res. 1995; 1 (9): 1031-1034. [ PubMed ] [ Google Scholar ]38. Toi M, Taniguchi T, Ueno T și colab. Semnificația nivelului circulant al factorului de creștere a hepatocitelor ca indicator prognostic în cancerul de sân primar. Clin Cancer Res. 1998; 4 (3): 659–664. [ PubMed ] [ Google Scholar ]39. Eichbaum MH, de Rossi TM, Kaul S, Bruckner T, Schneeweiss A, Sohn C. Nivelurile serice ale factorului de creștere a hepatocitelor / factorului de dispersie la pacienții cu metastaze hepatice din cancerul de sân. Tumora Biol. 2007; 28 (1): 36-44. [ PubMed ] [ Google Scholar ]40. La Rocca G, Pucci-Minafra I, Marrazzo A, Taormina P, Minafra S. Detecție zimografică și corelații clinice ale MMP-2 și MMP-9 în serurile de cancer mamar. Br J Rac. 2004; 90 (7): 1414-1421. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]41. Quaranta M, Daniele A, Coviello M, și colab. MMP-2, MMP-9, VEGF și CA 15.3 în cancerul de sân. Anticancer Res. 2007; 27 (5B): 3593–3600. [ PubMed ] [ Google Scholar ]42. Viatour P, Bentires-Alj M, Chariot A și colab. NF-kappa B2 / p100 induce expresia Bcl-2. Leucemie. 2003; 17 (7): 1349–1356. [ PubMed ] [ Google Scholar ]43. Wei MC, Zong WX, Cheng EH și colab. Proapoptotic BAX și BAK: o poartă de acces necesară către disfuncția mitocondrială și moarte. Ştiinţă. 2001; 292 (5517): 727-730. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]44. Marsden VS, O’Connor L, O’Reilly LA și colab. Apoptoza inițiată prin activarea caspazei reglată de Bcl-2 independent de apoptozomul citocromului c / Apaf-1 / caspazei-9. Natură. 2002; 419 (6907): 634–637. [ PubMed ] [ Google Scholar ]45. Sizemore N, Leung S, Stark GR. Activarea fosfatidilinozitolului 3-kinază ca răspuns la interleukina-1 duce la fosforilarea și activarea subunității NF-kappaB p65 / RelA. Mol Cell Biol. 1999; 19 (7): 4798–4805. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]46. Ozes ON, Mayo LD, Gustin JA, Pfeffer SR, Pfeffer LM, Donner DB. Activarea NF-kappaB prin factor de necroză tumorală necesită Akt serin-treonin kinaza. Natură. 1999; 401 (6748): 82-85. [ PubMed ] [ Google Scholar ]47. Wang CY, Mayo MW, Baldwin AS., Jr TNF și apoptoza indusă de terapia cancerului: potențare prin inhibarea NF-kappaB. Ştiinţă. 1996; 274 (5288): 784–787. [ PubMed ] [ Google Scholar ]48. Mayo LD, Donner DB. Rețeaua supresor tumoral-oncoproteină PTEN, Mdm2, p53. Trends Biochem Sci. 2002; 27 (9): 462–467. [ PubMed ] [ Google Scholar ]49. Patel JB, Mehta J, Belosay A și colab. Agenții noi de blocare a metabolismului acidului retinoic au activități inhibitoare puternice asupra celulelor cancerului de sân uman și a creșterii tumorii. Br J Rac. 2007; 96 (8): 1204–1215. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]50. Gupta S, Afaq F, Mukhtar H. Implicarea factorului nuclear-kappa B, Bax și Bcl-2 în inducerea opririi ciclului celular și apoptoza de către apigenină în celulele carcinomului de prostată uman. Oncogene. 2002; 21 (23): 3727–3738. [ PubMed ] [ Google Scholar ]51. Emi M, Kim R, Tanabe K, Uchida Y, Toge T. Terapia țintită împotriva proteinelor asociate cu Bcl-2 în celulele cancerului de sân. Cancerul de sân Res. 2005; 7 (6): R940 – R952. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]52. Aggarwal BB. Factor nuclear-kappaB: inamicul din interior. Celula cancerului. 2004; 6 (3): 203-208. [ PubMed ] [ Google Scholar ]53. Parr C, Watkins G, Mansel RE, Jiang WG. Factorii de reglare a factorului de creștere a hepatocitelor în cancerul de sân la om. Clin Cancer Res. 2004; 10 (1 Pt 1): 202–211. [ PubMed ] [ Google Scholar ]54. Weis SM, Cheresh DA. Consecințele fiziopatologice ale permeabilității vasculare induse de VEGF. Natură. 2005; 437 (7058): 497-504. [ PubMed ] [ Google Scholar ]55. Rodriguez-Manzaneque JC, Lane TF, Ortega MA, Hynes RO, Lawler J, Iruela-Arispe ML. Trombospondina-1 suprimă creșterea spontană a tumorii și inhibă activarea matricei metaloproteinazei-9 și mobilizarea factorului de creștere endotelial vascular. Proc Natl Acad Sci SUA. 2001; 98 (22): 12485–12490. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]56. Gupta VK, Jaskowiak NT, Beckett MA și colab. Factorul de creștere endotelial vascular îmbunătățește supraviețuirea celulelor endoteliale și radiorezistența tumorii. Jurnalul cancerului. 2002; 8 (1): 47-54. [ PubMed ] [ Google Scholar ]57. Chakraborty G, Jain S, Kundu GC. Osteopontina promovează creșterea tumorii mamare și angiogeneza dependente de factorul de creștere vascular endotelial. prin mecanisme autocrine și paracrine. Cancer Res. 2008; 68 (1): 152-161. [ PubMed ] [ Google Scholar ]58. Tuck AB, Elliott BE, Hota C, Tremblay E, Chambers AF. Migrarea indusă de osteopontină, integrin-dependentă a celulelor epiteliale mamare umane implică activarea receptorului factorului de creștere a hepatocitelor (Met) Cell Cell J Biochem. 2000; 78 (3): 465–475. [ PubMed ] [ Google Scholar ]59. Suzuki M, Mose E, Galloy C, Tarin D. Expresia genei osteopontinei determină performanța metastatică spontană a xenogrefelor ortotopice de cancer de sân uman. Sunt J Pathol. 2007; 171 (2): 682-692. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]60. Trusolino L, Comoglio PM. Receptorul factorului de dispersie și al semaforinei: semnalizarea celulară pentru creșterea invazivă. Nature Rev Cancer. 2002; 2 (4): 289–300. [ PubMed ] [ Google Scholar ]61. Zhang YW, Su Y, Volpert OV, Vande Woude GF. Factorul de creștere a hepatocitelor / factorul de dispersie mediază angiogeneza prin VEGF pozitiv și reglarea negativă a trombospondinei 1. Proc Natl Acad Sci SUA. 2003; 100 (22): 12718–12723. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]62. Kunigal S, Lakka SS, Joseph P, Estes N, Rao JS. Inhibarea matricei metaloproteinazei-9 reglează în jos activitatea factorului nuclear indus de radiații-kappa B care duce la apoptoză în tumorile mamare. Clin Cancer Res. 2008; 14 (11): 3617–3626. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]63. Chen D, Wang CY, Lambert JD, Ai N, Welsh WJ, Yang CS. Inhibarea catechol-O-metiltransferazei hepatice umane de către catechinele de ceai și metaboliții acestora: relația structură-activitate și studii de modelare moleculară. Biochem Pharmacol. 2005; 69 (10): 1523-1531. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

Exprimati-va pararea!

Completează mai jos detaliile tale sau dă clic pe un icon pentru a te autentifica:

Logo WordPress.com

Comentezi folosind contul tău WordPress.com. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Google

Comentezi folosind contul tău Google. Dezautentificare /  Schimbă )

Poză Twitter

Comentezi folosind contul tău Twitter. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Facebook

Comentezi folosind contul tău Facebook. Dezautentificare /  Schimbă )

Conectare la %s

Acest site folosește Akismet pentru a reduce spamul. Află cum sunt procesate datele comentariilor tale.