Un studiu clinic randomizat de fază II și studii mecanice care utilizează probiotice îmbunătățite pentru a preveni mucozitele bucale induse de radioterapie și chimioterapie concomitentă în carcinomul nazofaringian

Abstract

Dovezile anterioare au demonstrat că suplimentele probiotice pot reduce mucozitele orale (OM) induse de chimioradioterapie (CCRT) în cancerul nazofaringian (NPC). Incidența OM severă (gradul 3 sau mai mare) a fost obiectivul principal în acest studiu. Am înrolat mai întâi 85 de pacienți cu NPC local avansat, care au fost supuși CCRT. Dintre aceștia, 77 de pacienți au fost în cele din urmă selectați și randomizați (1:1) pentru a primi fie un cocktail probiotic, fie placebo. Pentru a investiga efectele protectoare și mecanismul tratamentului cu cocktail probiotic asupra OM indus de radioterapie și chimioterapie, am împărțit aleatoriu sobolanii în grupul de control (C), grupul model (M) și grupul probiotic (P). După tratament, mostre din limbă, sânge și țesuturi fecale și proximale ale colonului în diferite zile (a 7-a, a 14-a, și zilele 21) au fost colectate și testate pentru răspunsul inflamator, apoptoza celulară, permeabilitatea intestinală și modificările microbiene intestinale. Am descoperit că pacienții care au luat cocktailul probiotic au prezentat OM semnificativ mai scăzute. Valorile incidenței gradelor 0, 1, 2, 3 și 4 de OM în grupul placebo și în grupul cu cocktail probiotic au fost raportate a fi 0, 14,7, 38,2, 32,4 și 14,7% și 13,9, 36,1, 25. , 22,2 și, respectiv, 2,8%. În plus, pacienții din grupul de cocktail probiotic au prezentat o scădere a ratei de reducere a CD3 și 4 grade de OM în grupul placebo și în grupul cu cocktail probiotic au prezentat o scădere a ratei de reducere a CD3+ celule T (75,5% față de 81%, p < 0,01), celule T CD4 + (64,53% față de 79,53%, p < 0,01) și celule T CD8 + (75,59 față de 62,36%, p < 0,01) comparativ la grupul placebo. În modelul de șobolan, cocktailul probiotic ar putea ameliora severitatea OM, scădea răspunsul inflamator, poate provoca apoptoza celulară și permeabilitatea intestinală și poate restabili structura microbiotei intestinale la normal. În concluzie, cocktailul probiotic modificat reduce semnificativ severitatea OM prin îmbunătățirea răspunsului imun al pacienților cu NPC și modificarea structurii microbiotei intestinale.

Înregistrarea studiilor clinice: Înregistrarea studiilor clinice ar trebui să fie NCT03112837 .

Front Immunol. 2021; 12: 618150.

Publicat online 24 mar 2021. doi:  10.3389/fimmu.2021.618150

PMCID: PMC8024544PMID:  33841399

Chaofei Xia , 

1, † Chunling Jiang , 

2, 3, † Wenyu Li , 

Jing Wei , 

Hu Hong , 

Jingao Li , 

2, Liu Feng , 

2, Hong Wei , 

4, Hongbo Xin , 

1, * și 

Tingtao Chen 1, *

 Informații despre autor Note despre articol Informații privind 

drepturile de autor și licență Declinare a răspunderii

Date asociate

Materiale suplimentare Declarație de disponibilitate a datelor

Introducere

Carcinomul nazofaringian (NPC) este un neoplasm malign predominant în sudul Chinei, iar chimioradioterapia concomitentă (CCRT) este tratamentul standard pentru NPC local avansat la nivel mondial ( 1 ). Efectele secundare toxice cauzate de CCRT apar în timpul și după tratament, iar mucozita orală (OM) este probabil cea mai frecventă complicație la pacienții cu cancer de cap și gât (reprezentând ~80%) ( 2 ). OM nu numai că interferează cu calitatea vieții pacientului, dar dă naștere și la o rată de întrerupere de 19% în radioterapie sau CCRT ( 3). Deși agenți topici, cum ar fi palifermina, clorhexidina, actovegin, kangfuxin, lăptișor de matcă, supliment de zinc, benzidamină, crioterapia, terapia cu laser și igiena orală profesională, sunt utilizați pentru OM indusă de CCRT, încă nu există o terapie standard acceptată pentru prevenire. și tratamentul OM ( 4 ). Prin urmare, este necesară urgent o metodă fezabilă și eficientă de prevenire a OM în timpul tratamentului cancerului.

Microbiota intestinală a devenit un regulator important al imunității gazdei și poate afecta rezultatul imunoterapiei împotriva cancerului ( 5 – 7 ). Tratamentele pentru cancer, cum ar fi radioterapia și chimioterapia, ar putea determina o scădere a imunității pacienților cu cancer, agravând în cele din urmă toxicitatea mucoasei indusă de imunoterapie ( 8 ). Dovezile din studiile pe oameni și animale de experiment au sugerat că microbiota intestinală, cum ar fi probioticele, ar putea modula răspunsul imunitar anti-cancer și ar putea atenua efectele secundare toxice legate de tratamentul cancerului ( 9-11 ) Suplimentarea orală de Bifidobacterium , singur sau cu moartea celulară anti-programată a ligandului 1 al proteinei 1 (PDL1), la șoareci a promovat CD8+ Imunitatea antitumorală indusă de celulele T ( 12 ). În conformitate cu acest studiu, Vetizou et al. ( 10 ) a mai descoperit că Bacteroidales a jucat un rol important în efectele imunostimulatoare ale blocării antigenului 4 asociat limfocitelor T citotoxice (CTLA-4) prin promovarea maturării celulelor dendritice intratumorale și cu un răspuns TH 1 detectat în ganglionii limfatici din tumora de drenare.

Într-un studiu anterior, medicamentele probiotice, cum ar fi Bifidobacterium longum, Lactobacillus lactis și Enterococcus faecium , au exercitat un efect terapeutic și ar putea reduce severitatea OM la pacienții cu NPC, care au fost supuși CCRT și au crescut foarte mult numărul de celule imunitare ( 13 ). ). Cu toate acestea, toate medicamentele probiotice din China au fost aprobate cu 10-20 de ani în urmă, iar unele probleme, cum ar fi bacteriile identificate greșit pe etichetă sau utilizarea potențialilor agenți patogeni, cum ar fi E. faecium și Bacillus cereus , în medicamente, le-au împiedicat. dezvoltare ulterioară. De exemplu, E. faeciuma fost considerat un probiotic și este utilizat în mai mult de 75% dintre medicamentele probiotice, în timp ce ultima tulpină este considerată un agent patogen oportunist, altul decât un probiotic, datorită rezistenței sale la mai multe medicamente și a factorilor virulenți ( 14 ).

Prin urmare, în studiul de față, am izolat mai întâi Lactobacillus plantarum din fecalele unei mulțimi sănătoase care trăiesc într-un sat fără cancer prin analiză de secvențiere de mare performanță. Apoi, L. plantarum și Bifidobacterium animalis de mai sus , care au fost izolate din satul Bama Changshou acum 30 de ani, au fost amestecate cu Lactobacillus rhamnosus și Lactobacillus acidophilus pentru a forma un cocktail probiotic. Apoi, eficacitatea cocktailului probiotic asupra OM la pacienții cu NPC a fost investigată prin intermediul unui studiu randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo. În cele din urmă, posibilul mecanism de protecție al cocktail-ului probiotic asupra OM a fost investigat în continuare prin modelul de șobolan OM.

Mergi la:

Materiale și metode

Screeningul bacteriilor de la locuitorii satelor fără cancer

Probe de fecale de la oameni sănătoși (HP) ( n = 5, angajați sănătoși de la Spitalul de Cancer Jiangxi), pacienți cu tumori (TP) ( n = 5, pacienți cu tumori de la Spitalul de Cancer Jiangxi) și persoane fără cancer (NT) ( n = 5, rezidenți sănătoși din satul fără cancer, Wuyuan, Jiangxi, Nanchang, PR, China) au fost colectați în iunie 2016 și a fost utilizată analiza de secvențiere de mare performanță pentru a compara diversitatea microbiană dintre aceste probe. O metodă de numărare viabilă a fost utilizată pentru a izola bacteriile cu mediul de Man-Rogosa-Sharpe (MRS) prin screening-ul în principal pentru Lactobacillus spp. din fecalele locuitorilor satelor fără cancer, iar izolatele au fost identificate folosind o tehnologie de secvențiere a genelor ( 15 ).

Evaluarea caracteristicilor probiotice ale probioticelor selectate in vitro

L. plantarum MH-301 a fost izolat de la locuitorii satelor fără cancer, iar B. animalis subsp. Lactis LPL-RH (Harbin Meihua Biotechnology Co., Ltd., Harbin, Heilongjiang, PR China și izolat din satul Changshou, orașul Bama din provincia Guangxi, China), L. rhamnosus LGG-18 (Harbin Meihua Biotechnology Co., Ltd. , Harbin, Heilongjiang, PR China) și L. acidophilus (Harbin Meihua Biotechnology Co., Ltd., Harbin, Heilongjiang, PR China) au fost selectați pentru a face un cocktail probiotic, iar testul de toleranță la acid ( 16 ), anti- testul oxidativ ( 17 ), testul antimicrobian ( 18 ), testul testului de aderență ( 19), și testul de testare a aderenței ( 19 ) au fost efectuate pentru a evalua caracteristicile probiotice ale tulpinilor selectate.

Evaluarea cocktail-ului de probiotice privind reducerea efectelor secundare induse de CCRT la pacienții cu NPC

Pacienții de sex masculin și feminin (18-70 de ani) diagnosticați cu NPC avansat local au fost înrolați pentru studiul randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, la Spitalul de Cancer Jiangxi din China. Stadiul clinic al pacientului a fost determinat conform celei de-a 8-a ediții a sistemului de stadializare TNM al Uniunii Internaționale Împotriva Cancerului/American Joint Committee on Cancer și au fost înrolați pacienți diagnosticați cu NPC fără metastaze la distanță și care au avut scor Karnofsky. Pacienți cu antecedente de cancer sau tumori coexistente, care nu au putut să ia medicamente pe cale orală și/sau să absoarbă medicamente în tractul digestiv, care au avut un risc crescut de agenți antimicrobieni, care au avut OM sau OM recurentă înainte de CCRT și care au avut infecții grave și/sau incontrolabile sau au fost excluse alte boli.

Am înrolat mai întâi 85 de pacienți cu NPC local avansat, care au fost supuși CCRT. Aproximativ 77 de pacienți au fost selectați și randomizați (1:1) pentru a primi fie un amestec de probiotice, fie un placebo. Procesul de alocare aleatorie este următorul: secvența de alocare aleatorie a fost efectuată într-un raport de 1:1 utilizând software-ul nQueryAdvisor®v7.0, care utilizează un generator de numere pseudo-aleatoare. Secvența de randomizare a fost produsă înainte de prima înscriere. Executorul a efectuat includerea urmând criteriile de includere și excludere. Apoi, pacienții cu NPC au fost repartizați în grupul de cocktail probiotic sau grupul de control de către tehnicianul de cercetare clinică care a fost și el orb. Conform metodei dublu-orb, cei care au participat la acest studiu nu cunoșteau tipul de tratament pe care l-a primit fiecare pacient cu NPC.

Conform ghidurilor National Comprehensive Cancer Network (NCCN), toți pacienții au fost supuși chimioterapiei cu cisplatină [32 de fracții de radioterapie de 70 Gy (2,19 Gy/zi, 5 d/săptămână) cu un volum total al tumorii și un volum clinic țintă de 60 Gy. ] și radioterapie cu intensitate modulată (IMRT) [32 de fracții timp de 45 de zile (6-7 săptămâni în total) și perfuzată intravenos cu cisplatină (100 mg/m 2 ) în zilele 1, 22 și 43].

Cocktail probiotic oral (conținând L. plantarum MH-30110 9 CFU, B. animalis subsp. Lactis LPL-RH10 9 CFU, L. rhamnosus LGG-1810 9 CFU și L. acidophilus 10 9CFU), sau placebo au fost furnizate pacienților timp de 7 săptămâni (o capsulă, de 2 ori pe zi) din prima zi de chimioradioterapie până la sfârșit. Severitatea, aparițiile și simptomele OM au fost evaluate de cel puțin doi oncologi avansați în radiații [terminologia comună a Institutului Național al Cancerului pentru evenimente adverse (versiunea 4.0)]. Ratele de răspuns ale eficacității pe termen scurt (criteriile de evaluare a răspunsului în tumorile solide bazate pe RMN) au fost evaluate pentru pacienții cu răspunsuri complete și parțiale la radioterapie după finalizarea CCRT ( 20 ). Greutățile pacienților au fost înregistrate săptămânal; au fost măsurate analiza parametrilor biochimici ai acestora, determinarea imunității limfocitelor și analiza de rutină a sângelui.

Acest studiu a fost aprobat de Comitetul de etică local al cercetării clinice și a fost realizat conform Declarației de la Helsinki (numărul de studii clinice, NCT03112837 ). Toți pacienții și-au dat consimțământul informat înainte de studiu.

Extracția totală a ADN-ului genomic bacterian și secvențierea cu randament ridicat a bacteriilor fecale umane

ADN-ul microbian a fost obținut din probele fecale ale grupului HP (de la angajații Spitalului de Cancer Jiangxi, n = 10), înainte de tratamentul cu radioterapie plus chimioterapie plus un grup placebo (BRCP) ( n = 10), înainte de tratamentul de grupul radioterapie plus chimioterapie plus combinația de probiotice (BRCPM) ( n = 10), după tratament cu grupul radioterapie plus chimioterapie plus un grup placebo (ARCP) ( n = 10) și după tratamentul cu radioterapie plus chimioterapie plus grupul ARCPM cu combinație de probiotice ( n= 10). Probele au fost păstrate la -80°C până la extragerea ADN-ului. ADN-ul genomic bacterian a fost extras din probe de fecale folosind kit-ul de extractie și magnetism ADN (Tiangen Biotech, Beijing, China), conform instrucțiunilor producătorului. ADN-ul genomic total a fost amplificat cu un primer înainte, F341 5′-ACT CCT ACG GGR SGC AGC AG-3′, și un primer invers, R806 5′- GGA CTA CVV GGG TAT CTA ATC-3′ care a amplificat regiunile din V3 la V4 a genei ADN ribozomal 16S pentru analiza de secvențiere cu randament ridicat (PRJNA579226) ( 21 ).

Dezvoltarea modelului de șobolan OM și a tratamentului

Șobolani masculi Sprague-Dawley, în vârstă de 8-10 săptămâni, au fost achiziționați de la Hunan Si Lake King of Experimental Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan, China). Șobolanii au fost obișnuiți cu instalația pentru animale timp de 2 săptămâni înainte de a începe experimentul și ținuți sub un ciclu lumină/întuneric de 12 ore, cu o temperatură de 21 ± 1°C și umiditate de 55 ± 10%. Mâncarea și apa au fost date ad libitum . Îngrijirea și procedurile animalelor au fost urmate în conformitate cu liniile directoare ale Institutului Național de Sănătate și îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator. Toate experimentele au fost aprobate de Comitetul de etică al Universității Nanchang.

Pentru modelul de mucozită, atât radiația, cât și chimioterapia au fost utilizate pentru inducerea OM cu busulfan (Sigma-Aldrich, MO, SUA) în doză de 6 mg/kg timp de 4 zile de chimioterapie ( 22 ). Șobolanii au fost anesteziați cu o injecție intraperitoneală de ketamina (Rotex, Trittau, Germania) înainte de iradiere. Apoi, șobolanii au fost iradiați unul câte unul în regiunea capului cu 20 Gy, folosind Clinac 600C, un accelerator liniar terapeutic de 4-MV (Varian Medical Systems Inc., Palo Alto, CA, SUA) la o rată de doză de 2 Gy. /min, pentru a expune mucoasa bucală la radiații, unde a fost utilizat un bolus de 1,5 cm pentru acumularea dozei de radiații ( 23 ). Șobolanii au fost împărțiți în trei grupuri: grupul martor (C) ( n= 13) au primit un volum identic de ser fiziologic de gelatină (ig) timp de 21 de zile fără radioterapie și chimioterapie; grupul model (M) ( n = 13) a fost tratat cu un volum identic de ig timp de 21 de zile cu radioterapie și chimioterapie; iar grupul probiotic (T) ( n = 13) a fost pretratat cu o combinație de probiotice care conține L. plantarum MH-30110 9 CFU, B. animalis subsp. Lactis LPL-RH10 9 CFU, L. rhamnosus LGG-1810 9 CFU și L. acidophilus 10 9CFU, timp de 7 zile (1 ml, 1 dată pe zi) înainte de radioterapie și chimioterapie. Toate animalele au fost monitorizate zilnic pentru a examina starea cavității bucale, cantitatea de aport oral, greutatea și supraviețuirea.

Examen histopatologic

Pentru a evalua modificările histopatologice ale limbii, cinci șobolani din fiecare grup au fost sacrificați în a 7-a și a 14-a zi, iar trei șobolani din fiecare grup au fost sacrificați în a 21-a zi. Mucoasa din limbă a fost colectată la sfârșitul experimentului. Limba a fost expusă și fotografiată, probele de limbă (colectate în zilele a 7-a, 14-a și a 21-a) au fost împărțite în două părți separat, iar o parte a fost fixată în formol tamponat 10% timp de 48 de ore și încorporată în parafină. Apoi, secțiuni multiple (4 μm grosime) au fost deparafinate cu xilen și colorate cu H&E. Partea rămasă a probelor de limbă a fost utilizată pentru PCR cantitativă în timp real (qRT-PCR) și Western blot. S-au obținut probe de sânge și fecale pentru teste biochimice și, respectiv, secvențiere cu randament ridicat (PRJNA579226).

Extracția ARN și analiza qRT-PCR

ARN-ul total a fost extras din țesutul limbii folosind Tri Reagent Kit (Sigma Aldrich, MO, SUA) conform instrucțiunilor producătorului. Au fost utilizate cantități egale de ARN pentru a sintetiza ADN complementar (ADNc) folosind Kit-ul Fast Quant RT (Tiangen, Beijing, China). ADNc-ul a fost utilizat pentru qRT-PCR cu KAPA SYBR FAST Universal 2× qPCR Master Mix (Kapa Biosystems, MA, SUA). Expresia IL-1p, IL-6, factorul de necroză tumorală α (TNF-α) și gena de menaj, cum ar fi gliceraldehida 3-fosfat dehidrogenaza (GAPDH), a fost evaluată prin qRT-PCR. Cantitatea relativă de transcripte pentru genele țintă a fost determinată pentru fiecare probă de ADNc după normalizarea față de GAPDH. Datele au fost analizate folosind 2- ΔΔCTmetodă. Au fost utilizați următorii primeri: GAPDH, 5′-AGC CAA AAG GGT CAT CAT CT-3′ (înainte) și 5′-GGG GCC ATC CAC AGT CTT CT-3′ (invers); IL-6, 5′-GAA ATC GTG GAA ATG AG-3′ (înainte) și 5′-GCT TAG GCA TAA CGC ACT-3′ (invers); IL-1p, 5′-GTG TCT TTC CCG TGG ACC TTC-3′ (înainte) şi 5′-TCA TCT CGG AGC CTG TAG TGC-3′ (invers); TNF-α, 5′-GTG GAA CTG GCA GAA GAG GCA-3′ (înainte) și 5′-AGA GGG AGG CCA TTT GGG AAC-3′ (invers).

Analiza Western Blot

Proteina din limbă și țesuturile colonului a fost preparată cu tampon de liză RIPA care conține inhibitori de protează și fosfatază. Proteina (25-30 μg) a fost încărcată pe electroforeză pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă 12% (SDS-PAGE) și transferată pe o membrană de fluorură de poliviniliden (PVDF). După blocarea cu 5% albumină serică bovină (BSA) (în tampon TBS-T), membrana a fost incubată cu un anticorp primar, urmată de incubare cu IgG conjugată cu peroxidază de hrean (HRP) (1:5000, CST, SUA) . Benzile de proteine ​​au fost detectate de un reactiv de luminiscență electrochimică (ECL) și analizate de sistemul Flurochem (FluorChemE, Cell Biosciences Inc., CA, SUA). Anticorpul primar include iepure anti-GAPDH (1:5000, CST, Cat#5174), iepure anti-NF-kB (1:1000, CST, Cat# 8242S), iepure anti-fosforilat-NF-kB (p-NF) -κB; 1:1000, Abcam,

Extracția totală a ADN-ului genomic bacterian și secvențierea cu randament ridicat a bacteriilor fecale animale

Extracția acidului dezoxiribonucleic și secvențierea cu randament mare a bacteriilor fecale animale au fost în concordanță cu experimentele umane de mai sus. Probele de fecale din grupul C, grupul M și grupul T au fost colectate înainte de sacrificiu și păstrate la -80 ° C până la extracția ADN-ului. Kitul de magnetice și extracte ADN (Tiangen, Biotech, Beijing, China) a fost folosit pentru extragerea ADN-ului genomic bacterian fecal, conform instrucțiunilor producătorului. ADN-ul genomic total a fost amplificat cu primerul direct, F341 5′-ACT CCT ACG GGR SGC AGC AG-3′, și primerul invers, R806 5′-GGA CTA CVV GGG TAT CTA ATC-3′ care a amplificat regiunile din V3 până la V4 ale genei ADN-ului ribozomal 16S pentru analiza de secvențiere cu randament ridicat (PRJNA579226).

Analiza datelor

Incidența raportată a OM severă după administrarea chimioradioterapiei în NPC este de 70-80% ( 24 ). Presupunând că o incidență medie a OM în grupurile placebo și probiotice a fost de 74% și, respectiv, 34%, 70 de pacienți au fost înrolați pentru a asigura semnificația statistică (α pe două părți = 0,05, 1–β = 0,9 și raport 1:1) . Am analizat datele de la toți pacienții randomizați care au primit cel puțin o doză de medicament. Cele mai recente observații au fost utilizate pentru a estima valorile lipsă ale punctului primar de eficacitate, în timp ce analiza comparabilă primară, punctele secundare de eficacitate și valorile lipsă pentru siguranță nu au fost reținute, iar acele valori au fost analizate pentru a obține datele reale.

Citirile de la capătul pereche din fragmentele originale de ADN au fost unite folosind software-ul FLASH ( 25 ). Perechile unite au fost filtrate de calitate cu pachetul software UPARSE, iar conducta UPARSE a fost utilizată pentru a grupa secvențele rămase în unități taxonomice operaționale (OTU) la o identitate minimă de perechi de 97% ( 26 ). Informațiile taxonomice adnotate pentru fiecare secvență reprezentativă, selectată din fiecare OTU, au fost determinate utilizând clasificatorul de proiect al bazei de date ribozomale (RDP) ( 27 ). Datele de la OTU au fost apoi utilizate pentru a calcula valorile alfa-diversitate (α-diversitate) folosind QIIME ( 28 ). Distanțele dintre comunitățile microbiene obținute din diferite probe au fost calculate cu metrica UniFrac beta-diversitate ponderatăprin QIIME ( 29 ). Analiza de scalare multidimensională nemetrică (NMDS) și analiza coordonatelor principale (PCoA) au fost utilizate pentru a vizualiza distanțele UniFrac pe perechi dintre probe.

Toate datele au fost raportate ca medii și SD, iar rezultatele au fost analizate cu software-ul SPSS 23.0 (SPSS, Inc., Chicago, Illinois) prin testul t Student și ANOVA unidirecțional. P < 0,05 a fost considerat semnificativ statistic.

Mergi la:

Rezultate

Screening de probiotice de la locuitorii satelor fără cancer

În primul rând, a fost utilizată o analiză de secvențiere cu randament ridicat pentru a compara diversitatea microbiană intestinală în rândul HP, pacienții cu cancer și locuitorii satului fără cancer. Analiza NMDS a arătat că probele din grupurile HP și NT s-au grupat împreună, în timp ce au deviat de la probele de pacienți cu tumoră (grupul TP) (Figura 1A). Diagrama Venn a indicat că au fost observate 375 de OTU comune din grupurile HP, TP și NT (Figura 1B), iar abundența relativă scăzută de probiotice, cum ar fi Lactobacillus (HP: TP: NT = 8: 2: 13%), Bifidobacterium și Akkermansia , a fost obținută la nivel de gen (Figura 1C). Rezultatele qRT-PCR au confirmat în continuare că abundența de probiotice, cum ar fi Lactobacillus și Bifidobacterium , în grupul NT a fost mai mare decât cea din grupurile HP și TP ( p < 0,001), în timp ce abundența bacteriilor dăunătoare, cum ar fi Clostridium , Enterococcus și Enterobacter , în grupul NT a fost redusă, comparativ cu grupurile HP și TP ( p < 0,001;Figura 1D).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este fimmu-12-618150-g0001.jpg

figura 1

Selectarea tulpinilor probiotice. (A) Analiza de scalare multidimensională nemetrică (NMDS) a persoanelor sănătoase (HP) de la angajații Spitalului de Cancer Jiangxi, pacienților cu tumori (TP) de la Spitalul de Cancer din Jiangxi și persoanelor fără cancer (NT) (rezidenți sănătoși la satul fără cancer). (B) Diagrama Venn a microbiotei intestinale între HP, TP și NT. (C) Abundența relativă a bacteriilor între grupurile HP, TP și NT. (D) Abundența relativă a bacteriilor dintre grupurile HP, TP și NT cu PCR cantitativă în timp real (qRT-PCR). Datele sunt prezentate ca medii ± SD, unde *** p < 0,001 și **** p < 0,0001.

Apoi, mediul selectiv MRS pentru Lactobacillus a fost utilizat pentru a izola selectiv Lactobacili și 10 tulpini, și anume Clostridium tertium MH282454.1 , Weissellacibaria KU555931.1 , L. curvatus LC129556.1 , W. confusa , K. confusa , K. , L. reuteri KX881777.1 , L. paracasei MG822869.1 , Enterococcus faecium KX267939.1 , L. mucosae FJ751778.1 și Pediococcuspentosaceus KJ806297.1 , au fost identificate din fecalele locuitorilor din satele fără cancer ( Tabelul suplimentar 1 ). În cele din urmă, L. plantarum KJ779102.1 a fost ales pentru studii ulterioare conform standardului China Food and Drug Administration. Această tulpină a fost depozitată ca bacterie patentată la Institutul de Microbiologie, Academia Chineză de Științe ( L. plantarum MH-301).

Pentru a pregăti cocktailul probiotic în studiul clinic, L. plantarum MH-301, B. animalis subsp. Lactis LPL-RH, L. rhamnosusnosus LGG-18 și L. acidophilus au fost alese în cele din urmă pentru rezistența la acid, rezistența ridicată la sărurile biliare, rezistența puternică la oxidare, spectrul larg de capacitate antibacteriană și aderența celulară ridicată ( Figura 1 suplimentară ).

Cocktailul probiotic a eliminat în mod eficient severitatea OM prin îmbunătățirea imunității pacienților cu NPC care primesc CCRT

Un total de 85 de pacienți au fost evaluați pentru evaluarea eligibilității, iar opt pacienți au fost excluși din cauza neîndeplinirii criteriilor de includere. Restul de 77 de pacienți au fost repartizați aleatoriu în grupul cu probiotice (39 de pacienți) sau în grupul placebo (38 de pacienți) în raport de 1:1 pacienți, trei pacienți din grupul cu probiotice au fost excluși în continuare din cauza complicațiilor și patru pacienți din grupul placebo grupul a fost exclus pentru complicație (doi pacienți) sau retragerea consimțământului (doi pacienți). În cele din urmă, 34 de pacienți au fost în cele din urmă desemnați ca grup placebo și 36 de pacienți au fost desemnați în cele din urmă ca grup cu probiotice (Figura 2). Nu a existat o diferență marcată a caracteristicilor inițiale la pacienți între grupul placebo și grupul probiotic, iar detaliile despre sex, vârstă, stadiul tumorii și stadiul nodul pacienților care au finalizat tratamentul au fost rezumate în Tabelul suplimentar 2 .

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este fimmu-12-618150-g0002.jpg

Figura 2

Pacienții incluși în studiu.

Așa cum se arată înFigura 3A, cocktailul probiotic a redus semnificativ severitatea OM la pacienții cu NPC care au suferit CCRT. Rata de incidență a gradelor 0, 1, 2, 3 și 4 a OM a fost de 0, 14,7, 38,2, 32,4 și, respectiv, 14,7% în grupul ARCP, în timp ce acestea au fost 13,9, 36,1, 25, 22,2 și 2,8%, respectiv, în grupul ARCPM ( p < 0,01). Mai mult, cocktailul probiotic a atenuat semnificativ impactul negativ al CCRT asupra imunității. Administrarea orală de cocktail probiotic a îmbunătățit considerabil rata de reducere a celulelor T CD3 + (75,5 față de 81%, p < 0,01), a celulelor T CD4 + (64,53% față de 79,53%, p < 0,01) și a celulelor T CD8 + ( 75,59 față de 62,36%, p< 0,01) comparativ cu pacienții din grupul ARCP (Figurile 3B–D). Nu au fost observate diferențe semnificative ale ratei de reducere a limfocitelor (80,81 vs. 84,44%, p > 0,05), hemoglobinei (10,94 vs. 12%, p > 0,05) și greutatea corporală (6,53 vs. 6,7%, p > 0,05) între grupurile ARCPM și ARCP (Figurile 3E–G).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este fimmu-12-618150-g0003.jpg

Figura 3

Combinația de probiotice a redus mucozita orală (OM) prin îmbunătățirea imunității pacienților cu cancer nazofaringian (NPC). (A) Indicele mucoasei. (B) Rata de reducere a celulelor T CD3 + . (C) Rata de reducere a celulelor T CD4 + . (D) Rata de reducere a celulelor T CD8 + . (E) Rata de reducere a limfocitelor. (F) Rata de reducere a hemoglobinei. (G) Pierdere în greutate. Datele sunt prezentate ca medii ± SD, unde ** p < 0,01.

Cocktailul probiotic a modificat compoziția microbiomului intestinal la pacienții cu NPC

În total, s-au obținut 2.936.897 de etichete curate și 9.941 de OTU, cu o medie de 196,4 OTU în fiecare grup ( Tabelul suplimentar 3 ). Diagrama Venn a reflectat diferența de OTU în toate grupurile. În total, 325 de OTU comune au fost identificate în toate grupurile și 47 de OTU au fost identificate în mod specific în grupul HP. În special, opt OTU-uri aparțineau numai grupurilor RCP (grupurile BRCP și ARCP), iar 16 OTU-uri au fost identificate exclusiv în grupurile RCPM (grupurile BRCPM și ARCPM) (Figura 4A).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este fimmu-12-618150-g0004.jpg

Figura 4

Efectele combinației de probiotice asupra compoziției comunităților bacteriene la pacienții cu NPC. (A) Abundența relativă de bacterii în rândul HP de la angajații Spitalului de Cancer Jiangxi, înainte de tratamentul cu radioterapie plus chimioterapie plus un placebo (BRCP), după tratamentul cu radioterapie plus chimioterapie plus un placebo (ARCP), înainte de tratamentul de radioterapie plus chimioterapie plus combinația de probiotice (BRCPM) și după tratament cu radioterapie plus chimioterapie plus combinația de probiotice (ARCPM). (B) Diagrama Venn a microbiotei intestinale între grupurile HP, BRCP, ARCP, BRCPM și ARCPM. (C) Analiza NMDS a grupurilor HP, BRCP, ARCP, BRCPM și ARCPM.

La nivel de filum au fost analizate datele primelor 10 populații de microorganisme. Firmicute, Bacteroidetes, Proteobacterii și Actinobacteria au fost predominate în grupurile HP, ARCP, BRCP, ARCPM și BRCPM ( Firmicutes : 66,03, 52,10, 69,41, 63,30 și, respectiv, 63,10%; Bacteroidetes :, 2,2, 2,1, 2,1, 2, 2, 2, 2, 2, 2, 2 , 2 25,30%, respectiv; Proteobacterii: 4,45, 11,89, 8,942, 11,13 și, respectiv, 9,45%; și Actinobacterii : 1,49, 8,18, 2,20, 3,00 și, respectiv, 1,72%). Abundența de Bacteroidetes și Actinobacteria a fost crescută și abundența de Firmicutesa fost scăzută în grupul ARCP, dar cocktailul probiotic a îmbogățit abundența Firmicutes și a redus abundența Bacteroidetes și Actinobacteria la nivelul normal (Figura 4B).

Analiza NMDS a constatat că grupurile BRCPM, ARCPM, BRCP și HP au fost grupate împreună, în timp ce grupul ARCP s-a separat de alte grupuri și a arătat o distribuție împrăștiată, indicând că cocktailul probiotic a restabilit disbioza intestinală la pacienții cu NPC care au suferit CCRT (Figura 4C).

Cocktail cu probiotice Inflamație atenuată a țesutului limbii și leziuni patologice la șobolani cu OM cauzate de radioterapie și chimioterapie

Așa cum se arată înFigura 5A, indicele mucoasei a fost evaluat în zilele a 7-a, a 14-a și a 21-a. Incidența gradului 3 sau peste a fost semnificativ crescută în grupul M decât în ​​grupul C în zilele a 7-a, 14-a și 21 (76,9 vs. 0%, 100 vs. 0% și 66,7 vs. 0%; p < 0,01; respectiv). În caz contrar, incidența de gradul 3 sau peste a fost semnificativ scăzută în grupul T decât cei din grupul M în a 7-a, a 14-a și a 21-a zi (23,1 vs. 76,9%, 50 vs. 100% și 0 vs. 66,7% ; p < 0,01; respectiv). Este de menționat că severitatea OM a fost atenuată în ziua a 21-a atât în ​​loturile M și T, comparativ cu cea din a 7-a și a 14-a zi.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este fimmu-12-618150-g0005.jpg

Figura 5

Cocktailul probiotic a atenuat răspunsul inflamator al țesutului limbii la șobolanii cu OM cauzat de radioterapie și chimioterapie. (A) Indicele mucoasei. (B) Expresia IL-6 la nivelul ARNm. (C) Nivelul de expresie al TNF-α la nivelul ARNm. (D) Expresia IL-1p la nivelul ARNm. (E) Colorarea H&E a țesutului limbii printre grupurile C, M și T în zilele a 7-a, a 14-a și a 21-a. Datele sunt prezentate ca medii ± SD, unde * p < 0,05, ** p < 0,01 și ## p < 0,01.

Hemograma șobolanilor a fost măsurată în a 7-a, a 14-a și a 21-a zile. Așa cum se arată întabelul 1, concentrația de leucocite a fost mai mare în grupul M decât în ​​grupul C în zilele a 7, 14 și 21 (18,39 ± 4,06 vs. 12,38 ± 2,53, p < 0,01; 20,65 ± 3,35 vs. 15,06, ± 2,06 vs. 0,01; 16,63 ± 2,05 vs 13,70 ± 2,45; p < 0,05). Cu toate acestea, concentrația de leucocite a fost mai mică în grupul T decât în ​​grupul M (16,32 ± 2,57 vs. 18,39 ± 4,06, p < 0,05; 16,80 ± 3,02 vs. 20,65 ± 3,35, p < 0,01 ± 3,35, p < 0,01,90; ± 1,90; ± 2,05, p < 0,05). Acest rezultat a sugerat că cocktailul probiotic a suprimat răspunsul imun periferic prin reducerea nivelului de leucocite din sânge la șobolanii care au fost tratați cu radioterapie și chimioterapie.

tabelul 1

Test de sânge de rutină la șobolani.

TimpgrupWBC (×10 9 ·L −1 )RBC (×10 12 ·L −1 )HGB (g·L -1 )PCT (×10 9 ·L −1 )
7 zileC ( n = 5)12,38 ± 2,535,62 ± 1,49121,80 ± 13,47186,94 ± 16,97
M ( n = 5)18,39 ± 4,06**5,36 ± 1,40129,45 ± 11,84193,14 ± 16,91
T ( n = 5)16,32 ± 2,57 #6,35 ± 1,98122,18 ± 10,24194,30 ± 20,67
14 zileC ( n = 5)15,06 ± 2,005,55 ± 1,83128,08 ± 5,73194,20 ± 13,48
M ( n = 5)20,65 ± 3,35**5,33 ± 1,87127,30 ± 14,12192,09 ± 13,87
T ( n = 5)16,80 ± 3,02 ##5,80 ± 1,43132,15 ± 21,30199,06 ± 15,02
21 de zileC ( n = 3)13,70 ± 2,455,67 ± 1,79135,48 ± 26,65194,87 ± 24,53
M ( n = 3)16,63 ± 2,05*5,01 ± 2,54130,33 ± 15,04195,44 ± 23,62
T( n = 3)15,90 ± 1,90 #5,68 ± 2,89138,66 ± 34,19193,64 ± 17,79

Deschide într-o fereastră separată

Datele sunt prezentate ca medii ± SD, unde, *p < 0,05, **p < 0,01, # p < 0,05 și ## p < 0,01 .

Pentru a evalua inflamația mucoasei bucale, au fost măsurate expresiile IL-6, IL-1β și TNF-α în nivelul ARNm al țesutului limbii (Figurile 5B–D). Grupul M a demonstrat un nivel de expresie semnificativ mai mare decât grupul C în IL-6 (1,54 vs. 0,71, p < 0,01; 1,87 vs. 0,78, p < 0,01; 1,68 vs. 0,74, p < 0,01, respectiv), IL-1β (1,63 față de 0,73, p < 0,01; 2,14 față de 0,68, p < 0,001; 1,83 față de 0,76, p < 0,01, respectiv) și TNF-α (1,47 față de 0,84, p < 0,01 față de 0,84; 1,84; p < 0,01, 1,63 vs 0,86, p < 0,01, respectiv), în a 7-a, a 14-a și a 21-a zile. Grupul T a arătat un nivel de expresie remarcabil mai scăzut decât grupul M în IL-6 (1,27 vs. 1,54, p < 0,05; 1,52 vs. 1,87, p < 0,05; 1,32 vs. 1,68,p < 0,05, respectiv), IL-1β (1,30 vs. 1,63, p < 0,05; 1,48 vs. 2,14, p < 0,05; 1,38 vs. 1,83, p < 0,05, respectiv) și TNF-α (1,24 vs. 1,47) p < 0,05; 1,46 vs. 1,84, p < 0,05; 1,26 vs. 1,63, p < 0,05, respectiv) în zilele 7, 14 și 21. Rezultatul a indicat că cocktailul probiotic a atenuat remarcabil inflamația orală la șobolanii care au fost tratați cu radioterapie și chimioterapie.

Probele histologice ale țesutului limbii din fiecare grup au fost colectate în a 7-a, a 14-a și a 21-a zile. Colorația H&E a reflectat vizual severitatea limbii și îngroșarea mucoasei acesteia în grupurile C, M și T. Distrugerea severă a epiteliului limbii, eroziunea corneului și proliferarea celulelor bazale au fost găsite în grupul M în comparație cu grupul C. Cu toate acestea, deteriorarea țesutului limbii în grupul T a fost observată a fi mai ușoară decât grupul M, ceea ce a indicat că cocktailul probiotic ar putea ameliora răspunsul inflamator. Deteriorarea structurală a țesutului limbii a fost observată în a 7-a zi, s-a deteriorat în a 14-a zi și a fost parțial reparată în a 21-a zi atât în ​​grupul M, cât și în grupul T (Figura 5E).

Aceste rezultate au indicat că cocktailul probiotic a inhibat răspunsul imun periferic, inflamația și deteriorarea patologică, pentru a atenua în continuare severitatea OM la șobolani indusă de radioterapie și chimioterapie.

Cocktailul probiotic a ameliorat apoptoza țesutului limbii, a inversat reglarea în sus a TLR4/NF-kB și a îmbunătățit expresia joncțiunii strânse intestinale la șobolani cu OM

Proteinele legate de inflamație, apoptoza celulară și proteinele TJ intestinale au fost măsurate în limbă și, respectiv, în țesutul colonului (Figura 6). În comparație cu grupul C, s-a observat o expresie mai mare a TLR4 (a 7-a, a 14-a și a 21-a zile) și a P-NF-kB/NF-kB (a 7-a, a 14-a și a 21-a zi) în grupul M ( p < 0,001) . Cu toate acestea, cocktailul probiotic a redus semnificativ expresia TLR4 (a 7-a, a 14-a și a 21-a zile) și a P-NF-kB/NF-kB din a 7-a zi ( p < 0,001) la șobolanii cu OM. De asemenea, cocktailul probiotic a inhibat semnificativ apoptoza cauzată de radioterapie și chimioterapie prin reducerea raportului Bax/Bcl-2 (Figura 6B).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este fimmu-12-618150-g0006.jpg

Figura 6

Combinația de probiotice a ameliorat suprareglarea TLR4/NF-κB, apoptoza țesutului limbii și a îmbunătățit expresia joncțiunii intestinale strânse (TJ) la șobolanii cu OM cauzate de radioterapie și chimioterapie. (A) Nivelul de exprimare a proteinei TLR4, P-NF-kB și NF-kB. (B) Nivelul de exprimare a proteinei a factorilor asociați apoptozei, Bcl-2 și Bax. (C) Nivelul de expresie al proteinelor TJ intestinale, ZO-1 și claudin-1. Datele sunt prezentate ca medii ± SD, unde * p < 0,05, ** p < 0,01, p < 0,05 și ## P < 0,01.

Integritatea barierei intestinale a fost măsurată cu proteine ​​​​TJ intestinale. Rezultatele au indicat că expresia ZO-1 (a 7-a, a 14-a și a 21-a zi) și a Claudin-1 (a 7-a, a 14-a și a 21-a zi) a fost mult redusă la șobolanii cu OM, iar cocktailul probiotic a restabilit semnificativ expresia ZO. -1 (a 7-a, a 14-a și a 21-a zi) și Claudin-1 (a 7-a, a 14-a și a 21-a zi) la niveluri normale (Figura 6C).

În rezumat, cocktailul probiotic atenuează severitatea OM, posibil prin reglarea în jos a căii de semnalizare TLR4/NF-κB, reducerea apoptozei celulare și reglarea în jos a proteinelor TJ intestinale.

Cocktailul cu probiotice a restabilit în mod eficient diversitatea microbiană perturbată la un nivel normal la șobolanii cu OM

Pentru a testa dacă cocktailul probiotic ar putea inversa disbioza intestinală indusă de radioterapie și chimioterapie la șobolani, am analizat compoziția și structura comunității bacteriilor din fecale prin secvențierea genei ARNr 16S. După cum este ilustrat înFigurile 7A,B, cocktailul probiotic a îmbunătățit diversitatea α microbiană, indicele Shannon și indicele Simpson, în zilele a 7-a și a 14-a, care au fost scăzute la șobolanii cu OM, deși nu a existat o diferență statistică semnificativă. Analiza PCoA a arătat că populațiile microbiene fecale ale animalelor din grupurile C și T s-au grupat și s-au separat de cele ale șobolanilor cu OM pe parcursul perioadei de studiu, ceea ce indică faptul că cocktailul probiotic a modelat parțial modificările comunității microbiene la șobolanii cu OM. prin radioterapie și chimioterapie (Figura 7C).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este fimmu-12-618150-g0007.jpg

Figura 7

Efectele cocktailului probiotic asupra compoziției comunităților bacteriene la șobolani cu OM cauzate de radioterapie și chimioterapie. (A) Indicele Shannon al comunităților bacteriene intestinale dintre grupurile C, M și T în zilele 7, 14 și 21. (B) Indicele Simpson al comunităților bacteriene intestinale dintre grupurile C, M și T în zilele de 7, 14 și Zilele 21. (C) Analiza coordonată de principiu (PCoA) a comunităților bacteriene intestinale dintre grupurile C, M și T în a 7-a, a 14-a și a 21-a zile. (D) Abundența relativă de Bacteroidetes ale comunităților bacteriene intestinale la nivel de filum între grupurile C, M și T în zilele a 7-a, 14-a și 21-a. (E) Abundența relativă a Firmicutesa comunităților bacteriene intestinale la nivel de phylum printre grupurile C, M și T în zilele a 7-a, a 14-a și a 21-a. (F) Abundența relativă de Bacteroidetes ale comunităților bacteriene intestinale la nivel de gen între grupurile C, M și T în zilele a 7-a, a 14-a și a 21-a. (G) Abundența relativă de Lachnospiraceae a comunităților bacteriene intestinale la nivel de gen printre grupurile C, M și T în zilele a 7-a, a 14-a și a 21-a. (H) Abundența relativă de Ruminococcus a comunităților bacteriene intestinale la nivel de gen printre grupurile C, M și T în zilele a 7-a, a 14-a și a 21-a.

Abundența Firmicutes a fost scăzută și abundența Bacteroidetes a arătat o tendință de creștere în grupul M în zilele a 7-a, 14-a și 21-a. Mai mult, bacteriile legate de antiinflamație, cum ar fi Lachnospiraceae și Ruminococcus , au fost reduse și bacteriile legate de inflamație, cum ar fi Bacteroides , au fost îmbogățite în grupul M în a 7-a, a 14-a și a 21-a zile. Cu toate acestea, abundența Firmicutes, Lachnospiraceae și Ruminococcus a crescut și abundența Bacteroidetes și Bacteroidesa fost mai scăzută în grupul T decât în ​​grupul M, deși nu a existat o diferență statistică semnificativă (Figurile 7D–H). Aceste rezultate au sugerat că cocktailul probiotic a modelat disbioza intestinală și a prevenit inflamația la șobolanii induși de radioterapie și chimioterapie.

Mergi la:

Discuţie

În acest studiu, am investigat impactul combinației de L. plantarum MH-301, B. animalis subsp. Lactis LPL-RH, L. rhamnosus LGG-18 și L. acidophiluspe OM pentru prima dată. După cum era de așteptat, rezultatele au arătat că 47,1% dintre pacienții din grupul ARCP au dezvoltat OM de grad ≥ 3, în timp ce OM a fost dezvoltat doar în 25% în grupul ARCPM, iar acest lucru a susținut efectul protector al cocktail-ului probiotic împotriva OM. În concordanță cu testul clinic, cocktailul probiotic a redus, de asemenea, severitatea OM de gradul 3 (23,1 vs. 76,9%, 50 vs. 100% și 0 vs. 66,7%) în zilele a 7-a, 14-a și 21 de radioterapie și chimioterapie -sobolani indusi. În plus, cocktailul probiotic a îmbunătățit și imunitatea pacienților cu NPC și a restabilit disbioza intestinală la normal atât la pacienții cu NPC, cât și la șobolanii cu OM indusă de radioterapie și chimioterapie.

Recent, o serie de studii au indicat că microbiota intestinală ar putea modula răspunsul la imunoterapie în tratamentul cancerului ( 30 , 31 ). S-a descoperit că tratarea șoarecilor cu probiotic L. plantarum ( KC836552.1 ) a redus semnificativ volumul tumorii și a activat răspunsurile imune, cum ar fi niveluri crescute de celule CD8 + T și NK la pacienții cu cancer ( 32 ). Recent, a devenit evident că capacitatea microbiotei intestinale de a regla imunitatea în terapia cancerului modulează susceptibilitatea la efectele secundare toxice ( 8 , 33 ). Bifidobacterium a ameliorat mucozita indusă de chimioterapie prinpromovarea expresiei imunității celulelor T CD4 + la șobolanii cu cancer ( 34 ). Mai mult, dovezile au sugerat că probioticele inițiază memoria în celulele T și B, declanșează imunitatea adaptivă și activează sistemul imunitar care poate stimula producția de glicoproteine ​​salivare și peptide antimicrobiene, protejând în cele din urmă mucoasa bucală de deteriorare ( 35 ). După cum sa raportat într-un studiu anterior ( 13 ), acest studiu a arătat, de asemenea, că RCPM a îmbunătățit semnificativ numărul de celule T (CD3 + T, CD8 + T și CD4 +celulele T) și a scăzut severitatea OM în comparație cu cele ale pacienților cu RCP, ceea ce a confirmat în continuare că probioticele modulează răspunsurile imune umane la tratamentul cancerului, reducând în cele din urmă efectele secundare asociate ( 36 ). În plus, se părea că efectul acestui cocktail probiotic asupra pacienților cu OM și NPC a fost mai bun decât combinația dintre probioticele anterioare ( B. longum, L. lactis și E. faecium) .

Am folosit un model animal pentru a verifica ipoteza că cocktailul probiotic ar putea avea efecte benefice asupra OM indusă de radioterapie și chimioterapie și pentru a face o explorare primară a mecanismelor. În studiul nostru, am observat severitatea leziunilor bucale cauzate de radioterapie și chimioterapie la șobolani. Patogenia inflamației bucale induse de chimioterapie și iradiere este complexă. S-a propus că radioterapia și chimioterapia provoacă leziuni ADN și non-ADN ale epiteliului celulelor, țesuturilor și vaselor de sânge ( 37 ).). Ar putea provoca, de asemenea, specii reactive de oxigen, urmate de activarea căii TLR4/NF-κB, care ar putea promova producerea de factori proinflamatori (TNF-α, IL-1β și IL-6) și ar putea accelera apoptoza (Bax /Bcl-2), și în cele din urmă a agravat leziuni tisulare și au condus la infecții bacteriene, virale și fungice ( 38 , 39 ). TNF-α, IL-6, IL-1p și apoptoza celulară au jucat un rol critic în dezvoltarea mucozitei ( 40 ). Mai mult, dovezile au indicat că nivelul IL-6 s-a corelat pozitiv cu severitatea mucozitei atât la șoarecii OM induși de radiații, cât și în capul și gâtul pacienților cu cancer care au fost supuși radioterapiei sau radiochimioterapia ( 41 , 42 ).). Rezultatele au demonstrat că administrarea de cocktail de probiotice a diminuat suprareglarea TLR4/NF-kB și a crescut nivelurile de citokine pro-inflamatorii și apoptoza celulară cauzată de chimioterapie și iradiere.

Bariera epitelială intestinală împiedică intrarea antigenelor exterioare din lumenul intestinal în gazdă, ceea ce poate exacerba răspunsurile imune locale și sistemice ( 43 ). Linia frontală a acestei bariere este compusă din celule epiteliale și complexe de joncțiune apicale care cuprind proteinele TJ între celulele epiteliale adiacente ( 44 ). Studiile anterioare au descoperit că tratamentul cu CCRT pentru cancer a agravat, de asemenea, disfuncția barierei intestinale și a provocat activarea imunității periferice și inflamația ( 45 – 47 ).). După cum era de așteptat, rezultatele au arătat, de asemenea, că proteinele TJ (ZO-1 și Claudin-1) au fost reduse și neutrofilele au fost crescute în grupul M. În plus, expresia proteinelor care formează TJ a fost influențată și de microbiota intestinală. S-a demonstrat că probioticele cresc expresia proteinei TJ și restabilesc permeabilitatea intestinală, în cele din urmă suprimând neutrofilele periferice ( 48 , 49 ). În conformitate cu acest studiu, s-a descoperit că ZO-1 și Claudin-1 cresc în grupul T, sugerând că probioticele au prevenit activarea și inflamația sistemului imunitar, inclusiv o creștere a TNF-α, IL-1β și IL-6 în cavitatea bucală, care în cele din urmă ar putea ameliora OM.

Radioterapia și chimioterapia modifică, de asemenea, microbiota intestinală, ceea ce duce la alterarea homeostaziei celulelor epiteliale colonice, afectarea funcției de barieră și o susceptibilitate crescută la OM ( 46 , 50 , 51 ).). Analiza NMDS a fost efectuată, iar experimentele noastre clinice au sugerat că CCRT a perturbat în mod evident diversitatea microbiotei intestinale, iar eșantioanele din grupul ARCP au fost împrăștiate departe de probele din grupul HP, în timp ce administrarea amestecului de probiotice a restabilit semnificativ. diversitatea microbiană din grupul ARCP decât cea a grupurilor HP și ARCPM. Similar cu rezultatele studiului clinic, modelul nostru de șobolani a indicat, de asemenea, că comunitățile bacteriene și-au revenit la normal după ce au fost tratate cu cocktail probiotic timp de 21 de zile cu PCoA. Acest lucru a sugerat că cocktailul probiotic a redus semnificativ efectele secundare ale CCRT prin susținerea homeostaziei bacteriene a intestinelor.

Microbiomul intestinal al șobolanilor din grupul T a reflectat, de asemenea, bogăția îmbogățită în specii, precum și o schimbare semnificativă a diversității microbiene generale la nivel de phylum și gen în comparație cu grupul M. Studii recente au arătat, de asemenea, că unele dezavantaje ale tulpinilor bacteriene au fost crescute, în timp ce tulpinile bacteriene care au fost benefice pentru sănătate au fost reduse la pacienții cu cancer care au suferit CCRT ( 52 , 53 ). În consecință, în comparație cu martor, am observat o abundență relativă mai mică de Firmicutes și o abundență relativă mai mare de Bacteroidetes la nivel de filum atât la pacienții cu NPC, cât și la șoarecii cu OM. De asemenea, am constatat că o abundență mai mare de Actinobacillusa fost observat la pacienții cu NPC decât cei cu HP. În plus, la șoarecii cu OM au fost observate Bacteroides mai mari , Lachnospiraceae inferioare și Ruminococcus inferior la nivel de gen. Pe baza studiului anterior, Actinobacillus s-a dovedit de obicei a fi atât un simbiotic oral, cât și un patogen oportunist, care au fost asociate cu patogeneza meningitei, sinuzitei, empiemului pleural și bronhopneumoniei ( 54 , 55 ). În plus, Actinobacillus ar putea afecta grav homeostazia microorganismelor orofaringiene și a fost unul dintre factorii susceptibili pentru pacienții cu NPC care au avut mucozită severă ( 55 ). Bacteroidesau fost observate a fi o caracteristică proeminentă la pacienții cu boală inflamatorie intestinală ( 56 ) și sunt asociate cu degradarea mucusului și un fenotip proinflamator ( 57 ). Alte bacterii din filul Firmicutes , cum ar fi Lachnospiraceae și Ruminococcaceae , au demonstrat un proces antiinflamator prin reducerea citokinelor proinflamatorii (IL-12 și IFN-γ) și creșterea citokinelor antiinflamatorii (IL-10) ( 58 ). Pe lângă activitatea antiinflamatoare, Lachnospiraceae și Ruminococcaceae au fost, de asemenea, considerate a fi asociate cu procesul de producere a butiratului ( 59 ).). S-a sugerat că butiratul este important în ameliorarea inflamației mucoasei și menținerea barierei intestinale ( 60 ). Este important de subliniat faptul că ecosistemul intestinal este parțial important pentru menținerea sănătății umane. Modificările specifice, cum ar fi scăderea Firmicutes și creșterea Bacteroidetes în acest ecosistem, pot contribui la dezvoltarea bolilor legate de inflamație ( 61 ). Luate împreună, creșterea abundenței Bacteroidetes și Actinobacillus legate de inflamație și o scădere a abundenței Firmicutes legate de antiinflamațiela pacienții cu NPC care au fost tratați cu CCRT poate fi afectat într-o oarecare măsură severitatea OM.

Probioticele, cum ar fi L. lactis și B. longum , erau de așteptat să fie utile pentru inflamația intestinală și OM ( 62 , 63 ). Un studiu recent a demonstrat, de asemenea, că un amestec de Bacillus subtilis (2,9 × 10 8 CFU/g), B. bifidum (2,0 × 10 8 CFU/g), E. faecium (2,1 × 10 8 CFU/g) și L. acidophilus (1,0 × 108 UFC/g) a redus severitatea histologică a mucozitei intestinale și a OM la șobolanii tratați cu chimioterapie ( 64). Tratamentele pe bază de probiotice s-au dovedit a fi benefice pentru mucozitele induse de chimioterapie sau radioterapie, posibil prin reglarea microbiomului și inhibarea citokinelor proinflamatorii ( 65 , 66 ). În același mod, B. bifidum G9-1(BBG9-1) elimină mucozita indusă de 5-FU prin inhibarea inflamației secundare printr-o reducere a abundenței Bacteroidetes și creșterea corespunzătoare a abundenței Firmicute s ( 67 ). În plus, Lactobacillus a inversat semnificativ compoziția perturbată de chimioterapie sau radiații a Firmicutes și Bacteroidetes, reducând astfel reacțiile proinflamatorii și mucozitele ( 46 , 68 , 69 ). Astfel, abundența schimbată de Firmicute și Bacteroidetes induse de radioterapie și chimioterapie a fost asociată cu inflamația intestinală, pentru a induce sau crește în continuare incidența OM, iar cocktailul probiotic a scăzut severitatea OM prin reglarea homeostaziei bacteriilor intestinale.

Există câteva puncte forte în studiul nostru. În primul rând, am izolat L. plantarum de locuitorii satului liber. În al doilea rând, conform studiilor clinice la om și la șobolan, combinațiile de probiotice, și anume L. plantarum, B. animalis subsp. Lactis LPL-RH, L. rhamnosusnosus LGG-18 și L. acidophilus, ar putea reduce severitatea OM la pacienții cu NPC care au fost tratați cu radioterapie și chimioterapie. În cele din urmă, rezultatele noastre au indicat că cocktailul probiotic ar putea atenua severitatea OM la pacienții cu NPC care au fost tratați cu radioterapie și chimioterapie prin reglarea disbiozei microbiotei intestinale și creșterea imunității. Există unele limitări în acest studiu. Un dezavantaj este că numărul de pacienți cu NPC nu a fost suficient de mare și sunt necesari mai mulți pacienți cu NPC în viitor pentru a confirma rezultatele; o altă limitare este necesitatea transplantului de microbiotă fecală pentru a identifica în continuare rolul microbiotei intestinale asupra eficienței cocktailului probiotic asupra OM a pacienților cu NP.

Aceste rezultate au indicat că cocktailul probiotic ar putea reduce semnificativ severitatea OM la pacienții cu NPC, ceea ce ar putea fi legat de îmbunătățirea imunității pacienților cu NPC și de reglarea homeostaziei microbiotei intestinale. Rezultatele cocktailului probiotic pe șobolani cu OM indus de radioterapie și chimioterapie au confirmat în continuare că cocktailul probiotic ar putea ameliora severitatea OM prin modularea disbiozei intestinale legate de răspunsurile inflamatorii.

Mergi la:

Declarație de disponibilitate a datelor

Seturile de date prezentate în acest studiu pot fi găsite în arhivele online. Numele depozitului/arhivelor și numerelor de acces pot fi găsite în articol/ Material suplimentar .

Mergi la:

Declarație de etică

Acest studiu a fost aprobat de Comitetul de etică local al cercetării clinice și a fost realizat în urma declarației de la Helsinki (nr. 2017ky023). Toți pacienții și-au dat consimțământul informat înainte de traseu. Pacienții/participanții și-au furnizat consimțământul informat scris pentru a participa la acest studiu. Studiul pe animale a fost revizuit și aprobat de Îngrijirea animalelor și procedurile au fost în conformitate cu Ghidurile Institutului Național de Sănătate pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator, iar toate experimentele au fost aprobate de Comitetul de etică al Universității Nanchang.

Mergi la:

Contribuții ale autorului

TC, HX și HW au conceput și proiectat studiul. CX, TC și CJ au făcut prelucrarea datelor și au scris prima schiță a lucrării. TC, CX, CJ, JW, WL, HH, JL, LF, HW și HX au verificat și revizuit prima schiță a lucrării. Toți autorii au contribuit la articol și au aprobat versiunea trimisă.

Mergi la:

Conflict de interese

Autorii declară că cercetarea a fost efectuată în absența oricăror relații comerciale sau financiare care ar putea fi interpretate ca un potențial conflict de interese.

Mergi la:

Note de subsol

Finanțarea. Acest studiu a fost susținut de Fundația Națională de Științe Naturale din China (grant nr. 82060638), lideri academici și tehnici ai disciplinelor majore din provincia Jiangxi (grant nr. 20194BCJ22032) și planul Double mie al provinciei Jiangxi (proiectul de talente științifice de înaltă calitate). și inovație tehnologică).

Mergi la:

Material suplimentar

Materialul suplimentar pentru acest articol poate fi găsit online la: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2021.618150/full#supplementary-material

Faceți clic aici pentru un fișier de date suplimentar. (17K, docx)

Faceți clic aici pentru un fișier de date suplimentar. (18K, docx)

Faceți clic aici pentru un fișier de date suplimentar. (21K, docx)

Faceți clic aici pentru un fișier de date suplimentar. (141K, pdf)

Faceți clic aici pentru un fișier de date suplimentar. (68K, pdf)

Mergi la:

Referințe

1. 

Chua MLK, Wee JTS, Hui EP, Chan ATC. Carcinom nazofaringian . Lancet. (2016) 387 :1012–24. 10.1016/S0140-6736(15)00055-0 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]2. 

Nishimura N, Nakano K, Ueda K, Kodaira M, Yamada S, Mishima Y și colab.. Evaluarea prospectivă a incidenței și severității mucozitei orale induse de chimioterapia convențională în tumorile solide și limfoamele maligne . Suport Care Cancer. (2012) 20 :2053–9. 10.1007/s00520-011-1314-6 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]3. 

Villa S, Sonis T. Mucozită: patobiologie și management . Curr Opin Oncol. (2015) 27 :159–64. 10.1097/CCO.0000000000000180 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]4. 

Daugelaite G, Uzkuraityte K, Jagelaviciene E, Filipauskas A. Prevenirea și tratamentul mucozitei orale induse de chimioterapie și radioterapie . Medicina. (2019) 55:25 . 10.3390/medicina55020025 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]5. 

Honda K, Littman DR. Microbiota în homeostazia imună adaptivă și boli . Natură. (2016) 535 :75–84. 10.1038/nature18848 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]6. 

Rooks MG, Garrett WS. Microbiota intestinală, metaboliți și imunitatea gazdei . Nat Rev Immunol. (2016) 16 :341–52. 10.1038/nri.2016.42 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]7. 

Cui M, Xiao H, Li Y, Zhou L, Zhao S, Luo D și colab.. Transplantul de microbiotă fecală protejează împotriva toxicității induse de radiații . EMBO Mol Med. (2017) 9 :448–61. 10.15252/emmm.201606932 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]8. 

Roy S, Trinchieri G. Microbiota: a key orchestrator of cancer therapy . Nat Rev Cancer. (2017) 17 :271–85. 10.1038/nrc.2017.13 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]9. 

Lakritz JR, Poutahidis T, Levkovich T, Varian BJ, Ibrahim YM, Chatzigiagkos A și colab.. Bacteriile benefice stimulează celulele imune ale gazdei pentru a contracara predispoziția alimentară și genetică la cancerul mamar la șoareci . Int J Cancer. (2014) 135 :529–40. 10.1002/ijc.28702 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]10. 

Vetizou M, Pitt JM, Daillere R, Lepage P, Waldschmitt N, Flament C și colab.. Imunoterapia anticancer prin blocarea CTLA-4 se bazează pe microbiota intestinală . Ştiinţă. (2015) 350 :1079–84. 10.1126/science.aad1329 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]11. 

Daillere R, Vetizou M, Waldschmitt N, Yamazaki T, Isnard C, Poirier-Colame V și colab.. Enterococcus hirae și barnesiella intestinihominis facilitează efectele imunomodulante terapeutice induse de ciclofosfamidă . Imunitate. (2016) 45 :931–43. 10.1016/j.immuni.2016.09.009 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]12. 

Sivan, Corrales L, Hubert N, Williams JB, Aquino-Michaels K, Earley ZM și colab.. Commensal Bifidobacterium promovează imunitatea antitumorală și facilitează eficacitatea anti-PD-L1 . Ştiinţă. (2015) 350 :1084–9. 10.1126/science.aac4255 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]13. 

Jiang C, Wang H, Xia C, Dong Q, Chen E, Qiu Y și colab.. Un studiu randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo de probiotice pentru a reduce severitatea mucozitei orale induse de chimioradioterapie pentru pacienții cu carcinom nazofaringian . Cancer. (2019) 125 :1081–90. 10.1002/cncr.31907 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]14. 

Gao W, Howden BP, Stinear TP. Evoluția virulenței la Enterococcus faecium , un agent patogen oportunist adaptat la spital . Curr Opin Microbiol. (2018) 41 :76–82. 10.1016/j.mib.2017.11.030 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]15. 

Liu Y, Gibson GR, Walton GE. O abordare in vitro pentru a studia efectele prebioticelor și probioticelor asupra microbiotei fecale și a parametrilor imunitari selectați relevanți pentru vârstnici . Plus unu. (2016) 11 :e0162604. 10.1371/journal.pone.0162604 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]16. 

Munoz-Quezada S, Chenoll E, Vieites JM, Genoves S, Maldonado J, Bermudez-Brito M, et al.. Izolarea, identificarea și caracterizarea a trei tulpini probiotice noi ( Lactobacillus paracasei CNCM I-4034, Bifidobacterium breve CNCM I -4035 și Lactobacillus rhamnosus CNCM I-4036) din fecalele sugarilor alăptați exclusiv la sân . Br J Nutr. (2013) 109 ( Suppl. 2 ):S51–62. 10.1017/S0007114512005211 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]17. 

Jiang M, Deng K, Jiang C, Fu M, Guo C, Wang X și colab.. Evaluarea efectelor antioxidante, antibacteriene și antiinflamatorii ale supernatantului de fermentare al aloelui care conține Lactobacillus plantarum HM218749.1 . Mediatori Inflamm. (2016) 2016 :2945650. 10.1155/2016/2945650 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]18. 

Charteris WP, Kelly PM, Morelli L, Collins JK. Sensibilitatea la antibiotice a speciilor de Lactobacillus potențial probiotice . J Food Prot. (1998) 61 :1636–43. 10.4315/0362-028X-61.12.1636 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]19. 

do Carmo MS, Noronha FM, Arruda MO, Costa EP, Bomfim MR, Monteiro AS, et al.. Lactobacillus fermentum ATCC 23271 prezintă activități inhibitoare in vitro împotriva Candida spp . Microbiol frontal. (2016) 7 :1722. 10.3389/fmicb.2016.01722 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]20. 

Nishino M, Jagannathan JP, Ramaiya NH, Van den Abbeele AD. Versiunea 1.1 a ghidului RECIST revizuit: ce vor să știe oncologii și ce trebuie să știe radiologii . AJR Am J Roentgenol. (2010) 195 :281–9. 10.2214/AJR.09.4110 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]21. 

Velasquez-Mejia EP, de la Cuesta-Zuluaga J, Escobar JS. Impactul extracției ADN-ului, diluării probei și contaminării cu reactiv asupra secvențierii genei ARNr 16S a fecalelor umane . Appl Microbiol Biotechnol. (2018) 102 :403–11. 10.1007/s00253-017-8583-z [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]22. 

Patel A, Biswas S, Shoja MH, Ramalingayya GV, Nandakumar K. Protective effects of aqueous extract of Solanum nigrum Linn. frunze la modelele de șobolan de mucozită bucală . Jurnalul Scientific World. (2014) 2014 :345939. 10.1155/2014/345939 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]23. 

Lee SW, Jung KI, Kim YW, Jung HD, Kim HS, Hong JP. Efectul factorului de creștere epidermică împotriva mucozitei bucale induse de radioterapie la șobolani . Int J Radiat Oncol Biol Phys. (2007) 67 :1172–8. 10.1016/j.ijrobp.2006.10.038 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]24. 

Zheng B, Zhu X, Liu M, Yang Z, Yang L, Lang J și colab.. Studiu randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo de comprimate shuanghua baihe pentru prevenirea mucozitei orale la pacienții cu cancer nazofaringian supuși terapiei de chimioradiere . Int J Radiat Oncol Biol Phys. (2018) 100 :418–26. 10.1016/j.ijrobp.2017.10.013 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]25. 

Magoc T, Salzberg SL. FLASH: ajustare rapidă a lungimii citirilor scurte pentru a îmbunătăți ansamblurile genomului . Bioinformatica. (2011) 27 :2957–63. 10.1093/bioinformatics/btr507 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]26. 

Edgar RC. UPARSE: secvențe OTU foarte precise din citirile ampliconilor microbieni . Metode Nat. (2013) 10 :996–8. 10.1038/nmeth.2604 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]27. 

Wang Q, Garrity GM, Tiedje JM, Cole JR. Clasificator bayesian naiv pentru atribuirea rapidă a secvențelor de ARNr în noua taxonomie bacteriană . Appl Environ Microbiol. (2007) 73 :5261–7. 10.1128/AEM.00062-07 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]28. 

Caporaso JG, Kuczynski J, Stombaugh J, Bittinger K, Bushman FD, Costello EK și colab.. QIIME permite analiza datelor de secvențiere a comunității cu randament ridicat . Metode Nat. (2010) 7 :335–6. 10.1038/nmeth.f.303 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]29. 

Lozupone C, Lladser ME, Knights D, Stombaugh J, Knight R. UniFrac: o metrică de distanță eficientă pentru compararea comunității microbiene . Isme J. (2011) 5 :169–72. 10.1038/ismej.2010.133 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]30. 

Iida N, Dzutsev A, Stewart CA, Smith L, Bouladoux N, Weingarten RA și colab.. Bacteriile comensale controlează răspunsul cancerului la terapie prin modularea micromediului tumoral . Ştiinţă. (2013) 342 :967–70. 10.1126/science.1240527 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]31. 

Couzin-Frankel J. Breakthrough of the year 2013. Cancer immunotherapy . Ştiinţă. (2013) 342 :1432–3. 10.1126/science.342.6165.1432 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]32. 

Hu J, Wang C, Ye L, Yang W, Huang H, Meng F și colab.. Efectul imunitar antitumoral al administrării orale de Lactobacillus plantarum la șoarecii purtători de tumoră CT26 . J Biosci. (2015) 40 :269–279. 10.1007/s12038-015-9518-4 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]33. 

Perez-Chanona E, Trinchieri G. Rolul microbiotei în terapia cancerului . Curr Opin Immunol. (2016) 39 :75–81. 10.1016/j.coi.2016.01.003 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]34. 

Mi H, Dong Y, Zhang B, Wang H, Peter CCK, Gao P și colab.. Bifidobacterium infantis ameliorează mucozita intestinală indusă de chimioterapie prin reglarea imunității celulelor T la șobolanii cu cancer colorectal . Cell Physiol Biochim. (2017) 42 :2330–41. 10.1159/000480005 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]35. 

Thomas S, Izard J, Walsh E, Batich K, Chongsathidkiet P, Clarke G și colab.. Microbiomul gazdă reglează și menține sănătatea umană: un primer și o perspectivă pentru non-microbiologi . Cancer Res. (2017) 77 :1783–812. 10.1158/0008-5472.CAN-16-2929 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]36. 

Zitvogel L, Ayyoub M, Routy B, Kroemer G. Microbiome and anticancer immunosurveillance . Celulă. (2016) 165 :276–87. 10.1016/j.cell.2016.03.001 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]37. 

Clemente M, Rizzetto L, Castronovo G, Perissi E, Tanturli M, Cozzolino F și colab.. Efectele radiației laser în infraroșu apropiat asupra supraviețuirii și potențialului inflamator al Candida spp. implicat în patogeneza mucozitei bucale induse de chimioterapie . Eur J Clin Microbiol Infect Dis. (2015) 34 :1999–2007. 10.1007/s10096-015-2443-5 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]38. 

Tancharoen S, Shakya P, Narkpinit S, Dararat P, Kikuchi K. Antocianine extrase din Oryza sativa L. Preveniți activarea factorului nuclear indus de fluorouracil-kappab în mucozita orală: studii in vitro și in vivo . Int J Mol Sci. (2018) 19 :2981. 10.3390/ijms19102981 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]39. 

Luo J, Bian L, Blevins MA, Wang D, Liang C, Du D și colab.. Smad7 promovează vindecarea mucozitei orale induse de radioterapie fără a compromite terapia cancerului oral într-un model de șoarece xenogrefă . Clin Cancer Res. (2019) 25 :808–18. 10.1158/1078-0432.CCR-18-1081 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]40. 

Viet CT, Corby PM, Akinwande A, Schmidt BL. Revizuirea studiilor preclinice privind tratamentul mucozitei și durerii asociate . J Dent Res. (2014) 93 :868–75. 10.1177/0022034514540174 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]41. 

Meirovitz A, Kuten M, Billan S, Abdah-Bortnyak R, Sharon A, Peretz T, et al.. Nivelurile de citokine, severitatea mucozitei acute și necesitatea instalării tubului PEG în timpul chimioradierii pentru cancerul capului și gâtului – un studiu pilot prospectiv . Radiat Oncol. (2010) 5:16 . 10.1186/1748-717X-5-16 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]42. 

Mangoni M, Sottili M, Gerini C, Desideri I, Bastida C, Pallotta S și colab.. Un agonist gama PPAR protejează împotriva mucozitei bucale induse de iradiere într-un model murin . Oncol oral. (2017) 64 :52–8. 10.1016/j.oraloncology.2016.11.018 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]43. 

Mu Q, Kirby J, Reilly CM, Luo XM. Intestinul permeabil ca semnal de pericol pentru bolile autoimune . Front Immunol. (2017) 8 :598. 10.3389/fimmu.2017.00598 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]44. 

Suzuki T. Reglarea permeabilității epiteliale intestinale prin joncțiuni strânse . Cell Mol Life Sci. (2013) 70 :631–59. 10.1007/s00018-012-1070-x [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]45. 

van Vliet MJ, Harmsen HJ, de Bont ES, Tissing WJ. Rolul microbiotei intestinale în dezvoltarea și severitatea mucozitei induse de chimioterapie . PLoS Pathog. (2010) 6 :e1000879. 10.1371/journal.ppat.1000879 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]46. 

​​Touchefeu Y, Montassier E, Nieman K, Gastinne T, Potel G, Bruley des Varannes S, et al.. Revizuire sistematică: rolul microbiotei intestinale în mucozita gastrointestinală indusă de chimioterapie sau radiații – dovezi actuale și potențiale clinice aplicatii . Aliment Pharmacol Ther. (2014) 40 :409–21. 10.1111/apt.12878 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]47. 

Li Y, Dong J, Xiao H, Zhang S, Wang B, Cui M și colab.. Acidul valeric derivat din comensal intestinal protejează împotriva leziunilor cauzate de radiații . Microbii intestinali. (2020) 11 :789–806. 10.1080/19490976.2019.1709387 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]48. 

Laval L, Martin R, Natividad JN, Chain F, Miquel S, Desclee de Maredsous C, et al.. Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690 și bacteria comensală Faecalibacterium prausnitzii A2-165 prezintă efecte protectoare similare cu hiper-bariera indusă. permeabilitatea la șoareci . Microbii intestinali. (2015) 6 :1–9. 10.4161/19490976.2014.990784 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]49. 

Celiberto LS, Pinto RA, Rossi EA, Vallance BA, Cavallini DCU. Izolarea și caracterizarea tulpinilor bacteriene potențial probiotice de la șoareci: dovada conceptului pentru probiotice personalizate . Nutrienți. (2018) 10 :1684. 10.3390/nu10111684 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]50. 

Hong BY, Sobue T, Choquette L, Dupuy AK, Thompson A, Burleson JA și colab.. Mucozita orală indusă de chimioterapie este asociată cu disbioza bacteriană dăunătoare . Microbiomul. (2019) 7:66 . 10.1186/s40168-019-0679-5 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]51. 

Al-Qadami G, Van Sebille Y, Le H, Bowen J. Microbiota intestinală: implicații pentru răspunsul la radioterapie și mucozita indusă de radioterapie . Expert Rev Gastroenterol Hepatol. (2019) 13 :485–96. 10.1080/17474124.2019.1595586 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]52. 

Okubo R, Kinoshita T, Katsumata N, Uezono Y, Xiao J, Matsuoka YJ. Impactul chimioterapiei asupra asocierii dintre frica de reapariție a cancerului și microbiota intestinală la supraviețuitorii cancerului de sân . Comportamentul creierului Imun. (2019) 85 :186–91. 10.1016/j.bbi.2019.02.025 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]53. 

Montassier E, Gastinne T, Vangay P, Al-Ghalith GA, Bruley des Varannes S, Massart S și colab.. Disbioza condusă de chimioterapie în microbiomul intestinal . Aliment Pharmacol Ther. (2015) 42 :515–28. 10.1111/apt.13302 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]54. 

Simon-Soro A, Tomas I, Cabrera-Rubio R, Catalan MD, Nyvad B, Mira A. Microbial geography of the oral cavity . J Dent Res. (2013) 92 :616–21. 10.1177/0022034513488119 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]55. 

Zhu XX, Yang XJ, Chao YL, Zheng HM, Sheng HF, Liu HY și colab.. Efectul potențial al microbiotei orale în predicția mucozitei în timpul radioterapiei pentru carcinomul nazofaringian . EBioMedicine. (2017) 18 :23–31. 10.1016/j.ebiom.2017.02.002 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]56. 

Swidsinski A, Weber J, Loening-Baucke V, Hale LP, Lochs H. Organizarea spațială și compoziția florei mucoase la pacienții cu boală inflamatorie intestinală . J Clin Microbiol. (2005) 43 :3380–9. 10.1128/JCM.43.7.3380-3389.2005 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]57. 

Le Chatelier E, Nielsen T, Qin J, Prifti E, Hildebrand F, Falony G și colab.. Bogăția microbiomului intestinal uman se corelează cu markerii metabolici . Natură. (2013) 500 :541–6. 10.1038/nature12506 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]58. 

Sokol H, Pigneur B, Watterlot L, Lakhdari O, Bermudez-Humaran LG, Gratadoux JJ, et al.. Faecalibacterium prausnitzii este o bacterie comensală antiinflamatoare identificată prin analiza microbiotei intestinale la pacienții cu boala Crohn . Proc Natl Acad Sci USA. (2008) 105 :16731–6. 10.1073/pnas.0804812105 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]59. 

Chakraborti CK. Legătura nouă între microbiotă și obezitate . World J Gastrointest Patofiziol. (2015) 6 :110–9. 10.4291/wjgp.v6.i4.110 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]60. 

Canani RB, Costanzo MD, Leone L, Pedata M, Meli R, Calignano A. Potențiale efecte benefice ale butiratului în bolile intestinale și extraintestinale . World J Gastroenterol. (2011) 17 :1519–28. 10.3748/wjg.v17.i12.1519 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]61. 

Uchiyama K, Naito Y, Takagi T. Microbiomul intestinal ca o nouă țintă terapeutică pentru inflamația locală și sistemică . Pharmacol Ther. (2019) 199 :164–72. 10.1016/j.pharmthera.2019.03.006 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]62. 

Joossens M, De Preter V, Ballet V, Verbeke K, Rutgeerts P, Vermeire S. Efectul inulinei îmbogățite cu oligofructoză (OF-IN) asupra compoziției bacteriene și a activității bolii la pacienții cu boala Crohn: rezultate dintr-un dublu-orb. studiu randomizat controlat . Intestin. (2012) 61 :958. 10.1136/gutjnl-2011-300413 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]63. 

Braat H, Rottiers P, Hommes DW, Huyghebaert N, Remaut E, Remon JP și colab.. Un studiu de fază I cu bacterii transgenice care exprimă interleukina-10 în boala Crohn . Clin Gastroenterol Hepatol. (2006) 4 :754–9. 10.1016/j.cgh.2006.03.028 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]64. 

Gerhard D, Sousa F, Andraus RAC, Pardo PE, Nai GA, Neto HB, et al.. Terapia cu probiotice reduce inflamația și îmbunătățește morfologia intestinală la șobolanii cu mucozită orală indusă . Braz Oral Res. (2017) 31 :e71. 10.1590/1807-3107bor-2017.vol31.0071 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]65. 

Prisciandaro LD, Geier MS, Butler RN, Cummins AG, Howarth GS. Dovezi care susțin utilizarea probioticelor pentru prevenirea și tratamentul mucozitei intestinale induse de chimioterapie . Crit Rev Food Sci Nutr. (2011) 51 :239–47. 10.1080/10408390903551747 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]66. 

Pico-Monllor JA, Mingot-Ascencao JM. Căutarea și selecția probioticelor care îmbunătățesc simptomele mucozitei la pacienții oncologici. O revizuire sistematică . Nutrienți. (2019) 11 :2322. 10.3390/nu11102322 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]67. 

Kato S, Hamouda N, Kano Y, Oikawa Y, Tanaka Y, Matsumoto K și colab.. Probiotic Bifidobacterium bifidum G9-1 atenuează mucozita intestinală indusă de 5-fluorouracil la șoareci prin suprimarea răspunsurilor inflamatorii secundare legate de disbioză . Clin Exp Pharmacol Physiol. (2017) 44 :1017–25. 10.1111/1440-1681.12792 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]68. 

Chang CW, Liu CY, Lee HC, Huang YH, Li LH, Chiau JC și colab.. Probioticul soiului Lactobacillus casei rhamnosus atenuează preventiv leziunile intestinale induse de 5-fluorouracil/oxaliplatin într-un model de cancer colorectal singeneic . Microbiol frontal. (2018) 9 :983. 10.3389/fmicb.2018.00983 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]69. 

Cereda E, Caraccia M, Caccialanza R. Probiotice și mucozită . Curr Opin Clin Nutr Metab Care. (2018) 21 :399–404. 10.1097/MCO.0000000000000487 [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]

Exprimati-va pararea!

Completează mai jos detaliile tale sau dă clic pe un icon pentru a te autentifica:

Logo WordPress.com

Comentezi folosind contul tău WordPress.com. Dezautentificare /  Schimbă )

Poză Twitter

Comentezi folosind contul tău Twitter. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Facebook

Comentezi folosind contul tău Facebook. Dezautentificare /  Schimbă )

Conectare la %s

Acest site folosește Akismet pentru a reduce spamul. Află cum sunt procesate datele comentariilor tale.