Profilul expresiei genice se corelează cu infiltrarea celulelor T și supraviețuirea relativă la pacienții cu glioblastom vaccinați cu imunoterapie cu celule dendritice

Abstract

Scop

Pentru a evalua fezabilitatea, siguranța și toxicitatea vaccinării cu celule dendritice (DC) pulsate cu lizate tumorale autologe și agoniștilor receptorilor de tip toll (TLR) la pacienții cu glioblastom nou diagnosticat și recurent. Răspunsurile clinice și imune au fost monitorizate și corelate cu profilurile de expresie a genelor tumorale.

Design experimental

Douăzeci și trei de pacienți cu glioblastom (gradul IV OMS) au fost înrolați în acest studiu de creștere a dozei și au primit trei injecții bisăptămânale de DC pulsate cu lizat de gliom, urmate de vaccinări de rapel fie cu imiquimod, fie cu adjuvant poli-ICLC la fiecare trei luni până la progresia tumorii. Profilul expresiei genice, IHC, FACS și matricele de bile de citokine au fost efectuate pe tumorile pacientului și PBMC.

Rezultate

Vaccinările DC sunt sigure și nu sunt asociate cu nicio toxicitate care limitează doza. Supraviețuirea globală mediană de la momentul diagnosticului chirurgical inițial al glioblastomului a fost de 31,4 luni, cu o rată de supraviețuire la un, doi și trei ani de 91%, 55% și, respectiv, 47%. Pacienții ale căror tumori aveau semnături de expresie a genei mezenchimale au prezentat o supraviețuire crescută după vaccinarea DC, comparativ cu controalele istorice ale aceluiași subtip genetic. Probele de tumoră cu semnătură de expresie genică mezenchimală au avut un număr mai mare de limfocite infiltrate tumorale CD3 + și CD8 + (TIL) în comparație cu glioblastoamele altor semnături de expresie genică (p = 0,006).

Concluzie

Vaccinarea DC impulsată de lizat tumoral autolog în combinație cu agoniştii TLR este sigură ca terapie adjuvantă la pacienții cu glioblastom nou diagnosticați și recurenți. Rezultatele noastre sugerează că profilul de expresie a genei mezenchimale poate identifica un subgrup imunogen de glioblastom care poate răspunde mai mult la terapiile bazate pe imunitate.

Clin Cancer Res. Manuscris de autor; disponibil în PMC 2012 pe 15 martie.

Publicat în forma finală editată ca:

Clin Cancer Res. 15 martie 2011; 17(6): 1603–1615.

Publicat online 2010 Dec 6. doi:  10.1158/1078-0432.CCR-10-2563

PMCID: PMC3071163 NIHMSID: NIHMS257161 PMID:  21135147

Robert M. Prins , 1, 4, 5, * Horacio Soto , Vera Konkankit , Sylvia K. Odesa ,Ascia Eskin ,

William H. Yong , Stanley F. Nelson ,2, 4, 5 și Linda M. Liau 1, 4, 5

Informații despre autor Informații privind drepturile de autor și licență Declinare a răspunderii

Clin Cancer Res

Date asociate

Materiale suplimentare

Glioblastomul este o tumoră cerebrală malignă letală, cu rate de supraviețuire globală mai mici de 3,3% la 5 ani ( 1 ). Glioblastomul rămâne una dintre bolile pentru care nu există terapie curativă. În ciuda progreselor în identificarea țintelor potențiale pentru terapia cu gliom și a studiilor clinice recente care utilizează terapii biologice și agenți citotoxici mai noi ( 2-4 , prognosticul pacienților cu tumori cerebrale maligne primare rămâne sumbru. Acest fapt serios subliniază nevoia de a regândi abordările convenționale pentru tratamentul tumorilor cerebrale maligne și de a baza strategiile terapeutice pe progresele continue în cunoștințele noastre despre biologia și imunologia tumorii.

Potențialul beneficiu terapeutic al declanșării unui răspuns imun anti-tumoral la pacienții cu cancer a fost sugerat pentru prima dată cu zeci de ani în urmă. Imunoterapia este teoretic atrăgătoare, deoarece oferă potențialul pentru un grad ridicat de specificitate tumorală, scutând în același timp structurile normale ale creierului ( 5 ). O astfel de abordare folosește celule profesionale prezentatoare de antigen, cunoscute ca celule dendritice (DC), co-cultivate cu lizat tumoral autolog pentru a ținti imunologic antigenele tumorale endogene. Studiile inițiale ale terapiei cu vaccin pe bază de DC pentru glioamele maligne au arătat profiluri acceptabile de siguranță și toxicitate ( 6 – 14 ), iar studii de fază II și III randomizate multicentre sunt în curs de desfășurare.

Studiile preclinice anterioare ( 15 , 16 ) au sugerat cu tărie că agoniştii receptorilor de tip toll (TLR) (de exemplu, imiquimod, poli ICLC), ar putea spori activarea şi migrarea celulelor dendritice, precum şi stimularea imunităţii antitumorale mediate de celulele T. răspunsuri în modelele de gliom murin. Pentru a traduce aceste constatări, a fost inițiat un studiu clinic de fază I pentru a evalua utilizarea adjuvantă a vaccinării DC cu agoniști TLR pentru fezabilitatea, siguranța și toxicitatea acesteia la pacienții cu glioblastom nou diagnosticat și recurent. Aici, raportăm rezultatele acestui studiu clinic de fază I, împreună cu date de monitorizare imună și noi studii corelative care asociază supraviețuirea globală cu semnăturile expresiei genelor și creșterea limfocitelor infiltrante tumorale pentru pacienții cu glioblastom.

Mergi la:

PACIENȚI ȘI METODE

Eligibilitatea pacientului

Acest studiu clinic de fază I a fost aprobat de UCLA IRB și înregistrat la NCI ca NCT00068510. Consimțământul informat scris a fost obținut de la toți pacienții. Criteriile de includere au fost: glioblastom nou diagnosticat sau recurent (gradul IV OMS) care a fost susceptibil de rezecție chirurgicală, un scor de performanță Karnofsky (KPS) ≥ 60%, dovezi ale funcției normale a măduvei osoase (de exemplu, hemoglobină ≥ 9 g/dL, granulocite absolute). număr ≥ 1500/µl și număr de trombocite ≥ 100 000 K), funcție hepatică adecvată (SGPT, SGOT și fosfatază alcalină ≤ 2,5 ori limita superioară a normalului și bilirubină ≤ 1,5 mg/dL) și funcție renală adecvată BUN sau creatina ≤ 15 ≤. ori normalul instituțional) înainte de începerea terapiei. Criteriile de excludere au inclus alergii la orice componente ale vaccinului DC, utilizarea concomitentă sau anterioară de corticosteroizi în decurs de 10 zile de la vaccinarea inițială, prezența infecției acute care necesită tratament activ,

Prepararea lizatului tumoral autolog

Probe tumorale proaspete de la rezecția chirurgicală au fost transportate în condiții sterile la unitatea GMP UCLA-Jonsson Cancer Center și utilizate pentru a genera lizat tumoral autolog, așa cum s-a descris anterior ( 8 , 17 ). Țesutul tumoral a fost tocat, digerat în colagenază (Advanced Biofactures, Lynbrook, NY) și Dnase-1 (Dornase-α, Genentech, San Francisco, CA) timp de 8-12 ore la temperatura camerei. Pentru a genera lizate, suspensiile de celule tumorale au fost supuse la cinci cicluri de îngheț-dezgheț, centrifugate timp de 10 minute la 800 x g și au fost obținuți supernatanții fără celule. Concentrațiile de proteine ​​ale fiecărui lizat tumoral au fost determinate utilizând un test de proteine ​​Bio-Rad DC (Bio-Rad Corp., Hercules, CA), iar lizatele cu 100 ug de proteină măsurată au fost utilizate pentru a pulsa DC pentru fiecare injecție.

Prepararea celulelor dendritice autologe și pulsarea cu lizat de gliom

DC-urile derivate din monocite au fost stabilite din celule mononucleare aderente din sângele periferic (PBMC) obținute prin leucafereză efectuată la Unitatea de hemafereză UCLA. Sângele a fost extras suplimentar ca sursă de ser autolog pentru culturile DC. Toate preparatele DC ex vivo au fost efectuate în instalația GMP UCLA-Jonsson Cancer Center în condiții sterile și monitorizate. Celulele dendritice au fost preparate prin cultivarea celulelor aderente din sângele periferic în RPMI-1640 (Gibco) și suplimentate cu ser autolog 10%, 500 U/mL GM-CSF (Leukine®, Amgen, Thousand Oaks, CA) și 500 U/mL de IL-4 (CellGenix), folosind tehnici descrise anterior 8). După cultură, DC au fost colectate prin clătire puternică și spălate cu soluție sterilă de NaCI 0,9%. Puritatea și fenotipul fiecărui lot DC a fost, de asemenea, determinate prin citometrie în flux (citometru în flux FACScan; BD Biosciences, San Jose, CA). Celulele au fost colorate cu CD83 conjugat cu FITC, CD86 conjugat cu PE și mAb HLA-DR conjugați cu PerCP (BD Biosciences). Criteriile de eliberare au fost >70% viabile prin excluderea albastrului tripan și >30% din poarta celulelor mari fiind CD86 + și HLA-DR + . Cu o zi înainte de fiecare vaccinare, DC au fost pulsate (co-cultivate) cu 100 pg de lizat tumoral peste noapte, spălate, iar produsul final a fost testat pentru sterilitate prin colorație Gram, micoplasmă și testarea endotoxinei înainte de injectare.

Schema de tratament

Pacienții cu glioblastom nou diagnosticați au suferit o intervenție chirurgicală și un curs standard de radioterapie cu fascicul extern cu chimioterapie concomitentă cu temozolomidă înainte de vaccinarea DC ( 4 ). Acești pacienți au primit 3 vaccinări DC bisăptămânale după chimioradiere standard și înainte de tratamentul adjuvant cu temozolomidă. Pacienții cu glioblastom recurent au avut anterioară radioterapie și chimioterapie înainte de a prezenta recidiva tumorală, așa că au suferit rezecție chirurgicală a tumorilor, urmată de imunoterapie DC după ce și-au revenit după intervenție chirurgicală și au renunțat la steroizi perioperatori. Aceasta a variat între 7 și 30 de săptămâni după operație.

Administrarea vaccinurilor

În ziua fiecărei vaccinări DC, o doză de vaccin de 1 ml a fost extrasă într-o seringă sterilă cu tuberculină și administrată sub formă de injecție intradermică (id) (folosind un ac de calibrul 25) în regiunea brațului sub axilă, cu partea de administrare. rotite pentru fiecare vaccinare. Subiecții au fost monitorizați timp de două ore după imunizare în Centrul General de Cercetare Clinică (GCRC) UCLA. Pacienții eligibili au primit inițial trei ( 3) injecții intradermice la intervale de două săptămâni. Dacă pacienții nu au dezvoltat efecte secundare toxice în urma tratamentului experimental și au avut o boală stabilă timp de peste trei luni, aceștia au primit injecții de rapel în aceeași doză de DC pulsat cu lizat tumoral, concomitent cu cremă imiquimod 5% (Aldara™, un TLR- 7) sau poli-ICLC (Hiltonol™, un agonist TLR-3). Din cauza preocupărilor inițiale privind siguranța/toxicitatea encefalomielitei alergice experimentale (EAE) ( 18) care rezultă din utilizarea combinată a vaccinării DC și a agoniștilor TLR, acești modificatori ai răspunsului imun au fost utilizați numai în faza de rapel a protocolului, după ce pacienții au arătat profiluri de toxicitate acceptabile numai la vaccinările cu lizat DC. Vaccinările de rapel au fost administrate la intervale de 3 luni între cicluri de 28 de zile (5 zile activ/23 zile libere) de temozolomidă pentru până la 10 rapeluri sau până la progresia tumorii. Pentru cei cărora li s-a administrat imiquimod ca adjuvant, pacienții au aplicat topic 5% cremă imiquimod pe locul de vaccinare DC cu o zi înainte de fiecare ciclu de vaccinare, imediat după vaccinarea DC și apoi zilnic timp de încă trei zile după vaccinare. Pentru pacienții din cohorta poli-ICLC, injecții intramusculare (im) de 20 pg/kg de poli-ICLC au fost administrate imediat înainte de fiecare injecție DC la locul de injectare a vaccinului.

Evaluarea pacientului

Toxicitatea a fost monitorizată și clasificată conform criteriilor comune de toxicitate ale Institutului Național al Cancerului (NCI). Incidența globală a evenimentelor adverse a fost înregistrată. Examenele neurologice au fost efectuate înainte și la 30 de minute după fiecare vaccinare, precum și la toate vizitele de urmărire. Timpul până la progresia tumorii (TTP) a fost definit ca intervalul de la rezecția chirurgicală până la prima observare a progresiei tumorii, evidențiată de imagistica prin rezonanță magnetică (RMN) sau deteriorarea clinică. Progresia tumorală a fost, de asemenea, considerată a fi o progresie neurologică nereversibilă, un necesar crescut permanent de steroizi (se aplică numai bolii stabile) sau întreruperea precoce a tratamentului. Timpul de supraviețuire globală (SG) a fost determinat de la data intervenției chirurgicale la momentul diagnosticului inițial al glioblastomului până la data decesului.

Citometrie în flux și matrice de mărgele citometrice

PBMC de la pacienții înscriși în acest studiu clinic (pre și post-vaccinare) și PBMC de la voluntari normali au fost dezghețate în RPMI încălzit + 2% FBS, spălate și colorate pentru exprimarea CD3, CD4 și CD25 (toate de la BD Biosciences; San Diego, CA), urmată de etichetarea intracelulară a Foxp3 (eBioscience; San Diego, CA). Celulele colorate au fost achiziționate pe un citometru de flux BD FacsCalibur și analizate folosind software-ul FloJo. Frecvențele CD3 + CD4 + Foxp3 + și CD3 + CD4 + CD25 + Foxp3 +PBMC au fost comparate. Pentru analiza citokinelor, serul de la pacienții înscriși în acest studiu clinic a fost dezghețat și incubat cu Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2 Capture Beads (BD Biosciences), spălat și supus analizei pe un citometru de flux BD FacsCalibur împreună cu standardele de citokine . Evaluarea cantitativă a nivelurilor de citokine a fost realizată cu un program software CBA bazat pe Microsoft Excel.

Colorare imunohistochimică (IHC).

Secțiuni în serie de parafină ale specimenelor tumorale pre-tratament au fost tăiate la 3 um grosime și colorate cu anticorpi anti-umani împotriva CD3 (DakoCytomation; Carpinteria, CA) și CD8 (DAKO Corp.; Carpinteria, CA). Secțiunile au fost coapte timp de 1 oră la 60° C , deparafinate și activitatea peroxidazei endogene a fost stinsă prin tratare cu 0,5% H2O2în alcool metilic timp de 10 minute. Recuperarea epitopului indusă de căldură a fost efectuată pe lame folosind tampon citrat 0,01 M, pH=6,0 (pentru CD3, CD8) într-un cuptor cu abur de legume (Black & Decker); lamele au fost încălzite timp de 25 minute, răcite şi spălate în soluţie salină tamponată cu fosfat 0,01 M. Toate lamele au fost apoi plasate pe un DAKO Autostainer (DAKO Corp.) și apoi incubate secvenţial în anticorp primar timp de 30-60 de minute, apoi imunoglobuline secundare de iepure anti-șoarece (DAKO Corp.) timp de 30 de minute. Diaminobenzidina și peroxidul de hidrogen au fost folosite ca substraturi pentru enzima peroxidază. Pentru controalele negative, au fost utilizate izotipul de șoarece sau imunoglobulinele de iepure (DAKO Corp.) în locul anticorpilor primari. Etichetarea pozitivă a fost evaluată și punctată de un neuro-patolog certificat de consiliu (DE CE) într-un mod orb.

Studii de microarray

Din cei douăzeci și trei de pacienți cu glioblastom, șaisprezece pacienți au avut suficient țesut tumoral rezidual pentru analiza moleculară cu microarray la sfârșitul studiului. ARN-ul total a fost purificat din probe de tumoră congelate, pre-tratament, utilizând kitul RNeasy mini (Qiagen) și colectat ca parte a protocolului de cercetare aprobat de IRB. cARN a fost generat, cuantificat și hibridizat la matrice U133 Plus 2.0 la UCLA DNA Microarray Facility utilizând protocoale standard Affymetrix. Fișierele CEL au fost normalizate utilizând baza de date Celsius Microarray ( 19 ), cu o medie robustă multicip (RMA) de la Bioconductor (versiunea 2.10) în raport cu 50 de mostre ale aceleiași platforme. Clasificarea de grupare ierarhică (HC) pentru fiecare gliom a fost determinată printr-o strategie de votare a genelor așa cum a fost descris anterior ( 20 ,21 ). Pe scurt, valoarea medie a fiecărui set de sonde a fost evaluată din toate probele din cadrul platformei U133 Plus 2.0 folosind lista de probe de gene 377 și a fost atribuită unui grup HC ( 21 ). Tumorile au fost atribuite unui grup HC atunci când numărul de sonde peste media normalizată a fost mai mare de 30% dintr-un set de sonde dat. Supraviețuirea globală a tumorilor pacienților din acest studiu clinic de fază I a fost comparată cu supraviețuirea globală a pacienților dintr-o colecție de probe atribuite anterior grupelor HC ( 21 ).

Analize statistice

Timpul până la progresia tumorii (TTP) și curbele de supraviețuire globală (OS) au fost determinate folosind metoda Kaplan-Meier. Testul Log-rank (Mantel-Cox) a fost utilizat pentru a compara curbele între grupurile de studiu și cele de control. Toate valorile P sunt cu două cozi, iar p < 0,05 a fost considerat semnificativ statistic. Statisticile au fost analizate folosind software-ul GraphPad Prism.

Mergi la:

REZULTATE

Caracteristicile pacientului

Douăzeci și trei de pacienți cu gradul IV OMS (glioblastom) dovedit histologic au fost înrolați în acest protocol (tabelul 1). Cincisprezece aveau tumori nou diagnosticate, în timp ce opt aveau boală recurentă. Au fost șaisprezece bărbați și șapte femei, cu o vârstă cuprinsă între 26 și 74 de ani (vârsta medie de 51 de ani).

tabelul 1

Caracteristicile pacientului


ID pacient

Patologia tumorală
VârstăGenKPSOS
(lun.)
Tip HCDoza
106 )
AdjuvantPre-vacc. Tx.Post-vacc. Tx.Evenimente adverse conexe
GBM1-1GBM39M9033,83*1Imiquimodtemozolomidătemozolomidă, izoretinoină, celecoxib, reoperație, SRS *Oboseală, greață/vărsături, diaree
GBM1-2GBM39M90>88,87Mes1Imiquimodtemozolomidătemozolomidă, izoretinoină, CCNU, Gliadel™Oboseală, artralgie, febră scăzută
GBM1-3GBM34M90>91,3Mes1Imiquimodtemozolomidătemozolomidă, izoretinoinăLimfadenopatie, reacție la locul injectării, febră scăzută, mialgie
GBM1-4rec. GBM61M7018.57*1Nici unultemozolomidă, talidomidă, izoretinoină, virusul Newcastle
GBM1-5GBM58M7010.3Pro1Nici unultemozolomidăirinotecan, bevacizumab
GBM1-6GBM63F80>37,6Mes1ImiquimodtemozolomidătemozolomidăZoster
GBM1-7rec. GBM41F8010.93Mes1Nici unulirinotecan, bevacizumabirinotecan, bevacizumab
GBM1-8rec. GBM34M100>40,5PN1Poli ICLCerlotinib, temozolomidă, ANG, CCNU, celecoxib, tamoxifen,CCNU, celecoxib, tamoxifen,
GBM1-9GBM50M90>9.03*1Poli ICLCtemozolomidă
GBM5-1GBM40F8017.97*5Nici unultemozolomidă, izoretinoinăCCNU, gefitinib, rapamicina, carboplatinăReacție la locul injectării
GBM5-2rec. GBM54M8017.3*5Nici unultemozolomidă, izoretinoină, CCNUCarboplatinăRinită alergică, mâncărime la locul injectării, prurit
GBM5-3GBM26M9081.4PN5Imiquimodtemozolomidă, izoretinoină, CCNUcarboplatină, irinotecan, bevacizumab, dasatanib, simvastatină, rosiglitazonă, procarbazină, CCNU, ciclofosfamidăMâncărime la locul injectării, uscăciune și prurit, limfadenopatie, greață, diaree, vărsături, oboseală
GBM5-4GBM43M90>59,0Mes5Imiquimodtemozolomidătemozolomidă
GBM5-5GBM45F9034,97PN5Nici unultemozolomidăirinotecan, bevacizumab, CCNU, erlotinib
GBM5-6rec. GBM53M8022.33Mes5Poli ICLCtemozolomidă, Gliadel™irinotecan, bevacizumabGreață, arsuri la stomac, constipație
GBM10-1rec. GBM58F7028.93PN10Nici unultemozolomidă, irinotecan, paclitaxelDureri de cap, greață/vărsături
GBM10-2GBM70F10023.0*10Nici unultemozolomidăp-EGFR/p-ErbB2 inhib, everolimus, carboplatin, bevacizumab, CCNU
GBM10-3GBM50M9036.33*10Imiquimodtemozolomidăirinotecan, bevacizumabDermatită, erupție cutanată,
GBM10-4GBM59M8052.6Pro10Imiquimodtemozolomidă, izoretinoinăirinotecan, bevacizumab, carboplatină, CCNUAnorexie, dureri abdominale,
GBM10-5GBM64M9013.63Mes10Nici unultemozolomidăbevacizumab, CCNU
GBM10-6GBM66M9037,73Mes10Imiquimodtemozolomidăirinotecan, bevacizumab, CCNU, etoposid, procarbazină, tamoxifenOboseală, dureri de umăr stâng/artralgie
GBM10-7rec. GBM74F6017.07Mes10Nici unultemozolomidătemozolomidă
GBM10-8rec. GBM52M6016.23PN10Nici unultemozolomidăvezicule pe buza superioară, erupție cutanată

Deschide într-o fereastră separată

* SRS = radiochirurgie stereotactica

Prepararea DC și fenotip

DC au fost generate din PBMC aderente cultivate în prezența a 500 U/mL IL-4 de grad GMP și 500 UI/mL de GM-CSF timp de o săptămână înainte de recoltare, așa cum s-a raportat anterior ( 8 ). Toate preparatele de DC pulsate cu lizate tumorale autologe au conținut în mod constant un procent ridicat de celule granulare mari viabile și au fost lipsite de contaminare. Preparatele noastre DC au exprimat niveluri ridicate de MHC clasa I (HLA-A,B,C), MHC clasa II (HLA-DR), moleculă costimulatoare B7.2 (CD86) și CD40, dar expresie mai scăzută a CD14 și CD80 ( suplimentar tabelul 1). Aceste preparate DC au fost parțial mature, cu <45% din celulele mari exprimând HLA-DR și CD83, așa cum ar fi de așteptat pentru un protocol fără o etapă de maturare dedicată. Incubarea peste noapte cu lizate tumorale a indus o anumită maturare DC, așa cum este evidențiată de o creștere a intensității mediane a fluorescenței (MFI) a CD83 (datele nu sunt prezentate), similar cu constatările raportate anterior ( 22 ).

Siguranță și toxicitate

Vaccinările DC au fost bine tolerate, fără evenimente adverse majore (criteriile comune de toxicitate NCI gradul 3 sau 4) observate la niciun subiect în timpul ciclurilor de vaccinare (tabelul 1). Nu au existat semne clinice sau radiologice de EAE sau alte reacții autoimune la niciun pacient. Au existat cazuri anecdotice de creștere tranzitorie a T2/FLAIR și leziuni de amplificare la RMN după vaccinarea DC, care ar fi putut sugera răspunsuri inflamatorii după vaccinarea DC, în special în cohorta de pacienți cu grupare de gene mezenchimale (Fig. 1). Cu toate acestea, aceste modificări IRM s-au rezolvat în timp util și nu au necesitat intervenție chirurgicală. Apariția și dispariția unor astfel de constatări RMN, presupuse a fi legate de vaccinare și neuroinflamație, a fost observată la trei dintre pacienții noștri (GBM 1-2, 1-3 și 5-4). Acești trei pacienți au fost în subgrupul mezenchimal și sunt încă în viață peste cinci ani de la diagnosticul inițial de glioblastom. Greața/vărsăturile, durerile de cap și oboseala, diareea, febra scăzută și durerea/mâncărimea la locul injectării au fost cele mai frecvente simptome asociate cu tratamentul (tabelul 1). Limfadenopatia locală a fost observată la un pacient, coincizând temporal cu extinderea expansiunii celulelor T specifice HCMV ( 23 ). La pacienții cărora li s-a administrat concomitent 5% cremă imiquimod sau poli-ICLC cu vaccinare DC în faza de rapel, nu au fost raportate noi toxicități suplimentare. Doi pacienți au raportat în mod constant febră tranzitorie (≥103° F) cu fiecare injecție DC + poli-ICLC. Cumulativ, aceste date sugerează un profil de toxicitate scăzut pentru DC pulsați cu lizate tumorale autolog plus agonişti TLR la toate nivelurile de doză de DC testate.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms257161f1.jpg

figura 1

IRM se modifică după vaccinarea DC. Creșterea tranzitorie a leziunilor IRM T2/FLAIR (A) și îmbunătățirea contrastului (B) observate la un pacient cu glioblastom primar, nou diagnosticat, după vaccinarea DC (pacient GBM5-4). Scanări RMN axiale T2/FLAIR (A) și T1/contrast (B) efectuate la 2 săptămâni înainte de vaccinare, la 2 săptămâni după vaccinare și la 4 luni mai târziu.

Răspunsurile sistemice ale citokinelor și populațiile de celule T reglatoare în urma vaccinării DC cu agonişti TLR

Alții au evaluat răspunsul imun sistemic de la vaccinarea DC pulsată cu lizat tumoral autolog fie prin testarea cutanată a hipersensibilității de tip întârziat (DTH) ( 6 , 12 ) sau prin restimularea PBMC cu DC pulsată cu lizat in vitro , urmată de evaluarea interferon-gamma (IFN). -y) ( 10 , 12 ). Cu toate acestea, corelațiile cu rezultatul clinic nu au fost consistente. În acest studiu, am ales să evaluăm răspunsurile sistemice globale ale citokinelor și modificările frecvenței de reglare a celulelor T (Treg) care pot fi induse de strategia noastră de vaccinare.

Modificările din sângele periferic ale frecvenței celulelor CD3 + CD4 + Foxp3 + T au fost comparate înainte și după vaccinarea DC pentru pacienții cu PBMC disponibile înainte și după tratament. Am observat că pacienții cu glioblastom din acest studiu clinic posedau frecvențe crescute ale limfocitelor din sângele periferic CD3 + CD4 + Foxp3 + sau CD3 + CD4 + CD25 + Foxp3 + în comparație cu voluntarii normali (Fig. 2A). Cu toate acestea, la momentele măsurate, nu au existat modificări relevante ale frecvenței acestei populații de limfocite după imunoterapie care s-au corelat statistic cu rezultatul clinic (datele nu sunt prezentate).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms257161f2.jpg

Figura 2

Date de monitorizare a imunității din sângele periferic. (A) PBMC-urile de la voluntari normali și punctele de timp înainte de vaccinare ale pacientului din studiu DC au fost dezghețate și colorate pentru expresia CD3, CD4 și CD25, urmată de etichetarea intracelulară a Foxp3. Celulele colorate au fost achiziționate pe un citometru de flux BD FacsCalibur și analizate folosind software-ul FloJo. Frecvențele CD3 + CD4 + Foxp3 + și CD3 + CD4 + CD25 + Foxp3 +Sunt comparate PBMC dintre voluntari normali si pacientii cu glioblastom inrolati in acest studiu. (*p=0,04; **p=0,01) (B,C) Răspunsuri ale citokinelor serice, măsurate înainte și în ziua 14 post-vaccinare, după cursul inițial de vaccinare DC (B) sau după vaccinări de rapel cu DC fie cu 5% imiquimod sau poli ICLC (C). Serul de la pacienții înscriși în acest studiu clinic a fost dezghețat, etichetat cu bile acoperite cu anticorpi cytometric bead array (CBA), spălat și supus analizei pe un citometru de flux BD FacsCalibur împreună cu standardele de citokine. Evaluarea cantitativă a nivelurilor de citokine a fost realizată cu un program software CBA bazat pe Microsoft Excel. (D) Raportul citokinelor Th1/Th2. Datele brute despre citokine pentru TNF-a și IL-10 seric la fiecare punct de timp au fost împărțite pentru a genera un raport Th1:Th2.

Pentru a evalua micromediul citokinelor după vaccinarea DC cu și fără adăugarea de agoniști TLR, am efectuat matrice de margele citometrice din serul pacientului în timpul studiului clinic pentru a evalua nivelurile de citokine de tip Th1 și Th2. Au fost observate creșteri detectabile ale TNF-α și IL-6 seric după vaccinarea DC (Fig. 2BSuppl. Fig. 1A ). Cu toate acestea, nivelurile serice de citokine au fost variabile între pacienți și amploarea modificărilor nu pare să se coreleze cu rezultatul clinic. Au fost observate creșteri log-fold ale TNF-α și IL-6 seric după vaccinări de rapel cu DC fie cu cremă imiquimod 5%, fie cu 20 µg/kg poli ICLC (Fig. 2CSuppl. Fig. 1B ). Pentru a evalua dacă echilibrul citokinelor Th1/Th2 ar putea fi relevant, am calculat rapoarte ale fiecărei citokine de tip Th1 cu citokine de tip Th2 pentru a genera un raport citokine efectoare/reglatoare (Fig. 2D). Cu toate acestea, astfel de informații nu au fost asociate în mod semnificativ cu rezultatul clinic (datele nu sunt afișate), deși numărul nostru de eșantion poate fi prea mic pentru a detecta semnificația statistică.

Creșterea dozei

O schemă tipică de escaladare a dozei a fost efectuată cu vaccinarea DC impulsată de lizat tumoral autolog, utilizând 1, 5 și 10 milioane de DC administrate intradermic. O cantitate fixă ​​de lizat (100 pg) a fost adăugată la DC și incubată peste noapte înainte de injectare. Caracteristicile pacientului și datele de supraviețuire pentru fiecare cohortă de doze sunt prezentate în ( Tabelul suplimentar 2 ). În acest studiu de creștere a dozei, nu a existat nicio relație între creșterea dozei de DC și toxicitate sau evenimente adverse specifice de orice fel. De asemenea, nu au existat diferențe dependente de doză DC în răspunsurile imunologice testate. După cum se vede în tabelul suplimentar 2, supraviețuirea globală mediană a fost de fapt mai lungă în cohorta de 1 milion de doze DC în comparație cu cohortele cu doze mai mari. Cu toate acestea, aceste diferențe în OS nu au fost semnificative statistic, având în vedere dimensiunea mică a eșantionului în fiecare cohortă de doză și diferențele de vârstă între grupuri.

Analiza supraviețuirii

Deși acest studiu clinic de fază I nu a fost capabil să detecteze eficacitatea clinică, răspunsul tumorii a fost monitorizat prin evaluări clinice și RMN la momentul inițial (în decurs de o lună înainte de terapie) și ulterior la fiecare opt săptămâni ca markeri surogat pentru răspunsul clinic și starea tumorii. Datele clinice obiective sunt rezumate mai jos și sunt enumerate întabelul 1. Luând în considerare toți cei 23 de pacienți cu glioblastom înrolați în acest studiu clinic (pacienți nou diagnosticați și recurenți), timpul median până la progresia tumorii (TTP) a fost de 15,9 luni. Durata mediană de supraviețuire globală (SG), luată de la data diagnosticului chirurgical inițial al glioblastomului, a fost de 31,4 luni. Supraviețuirea globală de la momentul diagnosticului inițial la unu, doi și trei ani a fost de 91%, 55% și, respectiv, 47%. Dacă îi includem doar pe cei care au primit vaccinul DC în contextul nou diagnosticat (n=15), supraviețuirea globală mediană este de 35,9 luni, cu o perioadă medie de urmărire de peste patru ani și supraviețuire de unul, doi și trei ani. rate de 93%, 77% și, respectiv, 58%. Pentru pacienții recurenți care s-au înrolat în studiul nostru de vaccin (n=8), supraviețuirea globală mediană a fost de 17,9 luni de la momentul diagnosticului inițial de glioblastom.Suplimentar. Fig. 2 ).

Profilarea expresiei genelor microarray

Deoarece modelele de expresie a genelor s-au dovedit a fi foarte corelate cu supraviețuirea în diferite tipuri de cancer, am investigat dacă semnătura genetică a glioblastoamelor ( 20 ) a fost asociată cu rezultatul clinic în acest studiu de imunoterapie DC. La pacienții în care au fost disponibile probe de tumoră pre-tratament disponibile, am efectuat clasificarea expresiei genice pe bază de microarray, așa cum a fost publicată anterior ( 20 , 21 ). Așa cum se arată înFigura 3, profilarea expresiei genice a probelor noastre tumorale pre-tratament a produs clusterele ierarhice tipice proneurale (PN), proliferative (Pro) și mezenchimale (Mes), folosind seturi de sonde descrise anterior de grupul nostru ( 20 , 21 ). În plus, am validat aceste grupuri ierarhice folosind seturile de sonde UCSF-Genentech și TCGA ( 24 , 25 ), care au produs semnături similare de expresie a genelor pentru pacienții noștri cu lizat DC (date neprezentate).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms257161f3.jpg

Figura 3

Profilul de expresie bazat pe microarray a probelor de glioblastom pre-tratament de la pacienții cu vaccin DC. ARN-ul total a fost izolat din tumori congelate, rezecate chirurgical și supus clasificării globale a expresiei genelor folosind cipuri de microarray U133 Plus 2.0 umane Affymetrix. A fost disponibil suficient țesut proaspăt congelat pentru extracția de ARN de înaltă calitate (fără amplificare) în 17 dintre cazuri. Semnăturile de expresie a genelor proneurală (HC1, legendă galbenă), proliferativă (HC2A, legendă albastră) și mezenchimale (HC2B, legendă roșie) au fost identificate utilizând seturi de sonde publicate anterior ( 21 ). Hărțile termice au fost create folosind programul software dChip microarray.

Semnătura expresiei genei mezenchimale este definită de supraexprimarea multor gene asociate inflamatorii. Astfel, am emis ipoteza că ar putea exista o diferență în rezultatul clinic al pacienților din studiul nostru, care ar putea fi legată de micromediul local al tumorii originale. Pentru a controla orice prejudecată de selecție care ar fi putut fi introdusă de criteriile de eligibilitate necesare pentru pacienții care primesc vaccinul DC (adică subiecții care trebuie să fie în viață și fără steroizi suficient de mult timp pentru prepararea și administrarea vaccinului), am eliminat orice pacienți de control care a murit în aproximativ 250 de zile de la diagnosticul inițial în scopul analizei noastre comparative. De asemenea, am stratificat pentru pacienții care au primit radiații singure față de radiații plus chimioterapie concomitentă cu temozolomidă după rezecția chirurgicală inițială, și nu a găsit nicio diferență statistică în aceste două grupuri atunci când progresorii timpurii (OS<250 zile) au fost eliminați. Așa cum se arată înFigura 4, pacienții înscriși în studiul nostru cu semnătura expresiei genei proneurale au avut o supraviețuire globală care nu a fost distinsă de un set de 60 de tumori proneurale contemporane analizate de la UCLA și alte trei instituții ( 21 ) (p=0,664);Fig. 4A). Spre deosebire de aceasta, pacienții din studiul nostru de vaccin DC cu semnături de expresie genică mezenchimală au avut o supraviețuire semnificativ extinsă în comparație cu 82 de tumori colectate concomitent care s-au dovedit a avea aceleași semnături de expresie genică (p=0,0046;Fig. 4B). Deși aceste date nu sunt destinate să reprezinte eficacitatea, astfel de informații sunt demne de remarcat deoarece pacienții cu glioblastom cu modele de exprimare a genelor mezenchimale au de obicei cel mai prost prognostic și sunt cei mai refractari la terapiile curente ( 21 , 24 , 25 ).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms257161f4.jpg

Figura 4

Supraviețuire extinsă la pacienții vaccinați cu DC cu semnături de expresie a genei mezenchimale , dar nu și la pacienții cu semnătură proneurală . Timpul de supraviețuire global al pacienților vaccinați cu DC care exprimă o semnătură a genei (A) Proneurală (PN) (n=5) sau (B) semnătura genei mezenchimale (Mes) (n=9) a fost comparat cu supraviețuirea generată dintr-un control, multiplu. -set de date instituționale de PN (n=60) sau glioblastoame Mes (n=82; linii continue) publicate anterior de grupul nostru ( 21). Pentru a lua în considerare cu exactitate potențiala părtinire asociată cu întârzierea necesară pentru a genera vaccinul DC, am omis pacienții de control care au prezentat progresie timpurie (<250 de zile). Comparație PN: p=0,664 (nu este diferit statistic, ns); Comparația cu mese (p=0,0046) prin testul Log-rank (Mantel-Cox) calculat în software-ul GraphPad.

Semnătura expresiei genice și limfocitele care infiltează tumorile

Densitatea și localizarea acumulării de limfocite T în anumite tumori solide au fost asociate cu supraviețuirea extinsă ( 26 , 27 ), iar dovezile recente sugerează că o astfel de corelație poate exista în gliomul malign ( 28 ). Cu toate acestea, o asociere cu subtipul de tumoră sau modalitatea de tratament nu a fost abordată.

Deoarece semnătura expresiei mezenchimale include numeroase gene asociate cu inflamația și se știe că celulele T specifice tumorii sunt atrase de semnale proinflamatorii, am evaluat dacă pacienții din studiul nostru DC cu semnături de expresie a genei mezenchimale au avut și limfocite infiltrante tumorale crescute (TIL). ). Așa cum se arată înFigura 5, tumorile cu semnătură de expresie a genei mezenchimale au crescut semnificativ CD3 + și CD8 + TIL în comparație cu tumorile PN (p=0,006). Deși dimensiunea eșantionului nostru este mică, am găsit, de asemenea, o densitate TIL CD3 + și CD8 + crescută calitativ după vaccinarea DC în tumorile rezecate la recidivă (Fig. 5B). În tumorile vaccinate post-DC rezecate/biopsiate în momentul recurenței, creșterile TIL-urilor CD3+ și CD8+ au fost asociate cu profilul de expresie a genei mezenchimale, dar nu neapărat cu doza de DC administrată. Astfel de descoperiri indică un mecanism potențial prin care subtipuri distincte de tumori de glioblastom ar putea răspunde în mod diferențial la terapiile bazate pe imun.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este nihms257161f5.jpg

Figura 5

Densitatea crescută a limfocitelor CD3 + și CD8 + în grupurile de expresie a genei Mes în comparație cu secțiunile tumorale PN. (A) Secțiuni de țesut adiacente încorporate în parafină de 3 um de la pacienții vaccinați cu DC au fost colorate separat cu anticorpi CD3 și CD8 și au fost marcate în mod orb de către un neuropatolog (DE CE). Scorurile IHC au fost comparate între probele cunoscute a fi PN (n=5) vs. probele tumorale Mes (n=9). *p=0,006 prin testul t cu două cozi calculat în software-ul GraphPad. (B) Colorare reprezentativă cu hematoxilină și eozină și colorare cu CD8 IHC (vaccinarea pre și post-DC) a unui glioblastom PN și Mes care arată TIL-uri CD8 + crescute în glioblastomul Mes. Mărire originală: × 400.

Mergi la:

DISCUŢIE

În acest studiu de fază I, raportăm siguranța, fezabilitatea și bioactivitatea unui vaccin compus din DC autologe pulsate cu lizat tumoral autolog ca adjuvant după rezecția chirurgicală cu chimio-radioterapie standard. Spre deosebire de strategia noastră de vaccinare DC raportată anterior ( 8 ) și de cele raportate de alte grupuri ( 6 , 9 – 13 , 29 ), am inclus vaccinări „de rapel” cu modificatori ai răspunsului imun înnăscut, imiquimod 5% (Aldara™) sau poli-ICLC (Hiltonol™) pe baza studiilor noastre preclinice care sugerează că semnalele imune înnăscute proinflamatorii ar putea îmbunătăți activarea DC, traficul către ganglionii limfatici și amorsarea limfocitelor T anti-tumorale specifice ( 15 ).). Nu au existat toxicități care limitează doza și nu au existat diferențe detectabile în ceea ce privește siguranța sau eficacitatea între cele trei niveluri de doză DC testate. De remarcat, a existat o diferență semnificativă în ceea ce privește vârsta medie a pacienților din cohorta de 10 milioane DC în comparație cu celelalte cohorte de doze, ceea ce ar putea influența diferența de supraviețuire globală. Cu toate acestea, o altă ipoteză posibilă este că această tendință a datelor a fost o reflectare a unei scăderi diluționale a antigenelor disponibile pentru prezentare de către DC la cohorta cu cea mai mare doză de DC (10×106 celule ), având în vedere că cantitatea de lizat a fost fixată (la 100 pg per doză) în ciuda dozei crescute de celule DC.

Administrarea concomitentă de imiquimod 5% sau poli ICLC cu vaccinarea DC s-a dovedit, de asemenea, sigură și nu a dus la nicio toxicitate suplimentară sau evenimente adverse. Din cunoștințele noastre, acesta este primul raport al utilizării agoniștilor TLR împreună cu strategiile de vaccinare DC la pacienții cu tumori cerebrale. Deoarece agoniştii TLR au fost utilizaţi numai la pacienţii aflaţi în faza de rapel, nu este clar dacă sau în ce măsură adăugarea agoniştilor TLR a contribuit la eficacitatea potenţială şi supravieţuirea globală a acestor pacienţi. În plus, imiquimod și poli-ICLC sunt doi agenți biologici diferiți, care vizează TLR diferiți. Imiquimod activează TLR-7, în timp ce poli-ICLC activează TLR-3, dar ambele induc secreția de citokine proinflamatorii. Aceste complexități fac oarecum dificilă determinarea modului în care acești modificatori imuni înnăscuți au contribuit de fapt la obiectivele studiului nostru. Cu toate acestea, acest studiu actual stabilește siguranța acestor agoniști TLR împreună cu DC încărcate cu lizat de gliom, iar studii suplimentare de fază II care compară direct acești agoniști TLR în momentul vaccinării inițiale (nu numai în faza de rapel) sunt în curs de desfășurare.

În timp ce numărul de pacienți cu glioblastom înscriși în acest studiu clinic de fază I nu a fost capabil să măsoare eficacitatea, rezultatele clinice ale acestui studiu sunt încă demne de remarcat. OS mediană de la momentul diagnosticului chirurgical inițial a fost de 31,4 luni pentru toți pacienții cu glioblastom (n=23) tratați în acest studiu, incluzând atât cei înrolați ca pacienți nou diagnosticați, cât și pacienți cu tumori recurente. Pentru cei tratați în contextul nou diagnosticat, OS a fost de 35,9 luni; iar OS a fost de 17,9 luni pentru cei care au primit vaccinare la recidivă. În plus, am avut trei pacienți care au supraviețuit peste șase ani până în prezent. Astfel de statistici sunt convingătoare în fața supraviețuirii mediane așteptate pentru această boală, care este în prezent raportată ca fiind de aproximativ 14 luni pentru pacienții nou diagnosticați care primesc intervenții chirurgicale standard, radiații și chimioterapie cu temozolomidă (4 , 30 , 31 ). Acest lucru se compară favorabil chiar și în comparație cu datele publicate pentru cel mai bine definit grup de pacienți cu prognostic clinic definit de pacienți cu glioblastom (Analiza de partiționare recursiva, clasa III RPA: vârstă < 50 de ani și KPS ≥ 90), ale căror supraviețuiri la 2 ani au fost de 40% și 29% pentru Pacienții cu RPA III și, respectiv, IV, după tratament cu radiații standard și temozolomidă ( 31 ). Astfel de date sunt, de asemenea, favorabile în comparație cu alte studii recente de vaccin pe bază de DC cu tumori cerebrale fără injecții de rapel și adjuvanți TLR, în care OS a fost raportat ca fiind de 21,4 luni (medie, 11 pacienți nou diagnosticați și 23 de pacienți cu glioblastom recurent) ( 10 ) și 9,6 luni ( mediană) într-o populație de glioblastom recurent6 ).

Glioblastoamele sunt identificate în primul rând prin caracteristicile histologice atribuite tumorilor maligne citologic, mitotic active, predispuse la necroză, stabilite de Organizația Mondială a Sănătății (OMS) ( 32 ). Astfel de caracteristici histologice sunt în general asociate cu supraviețuirea pacientului, împreună cu starea de performanță, gradul de rezecție chirurgicală și vârsta. Cu toate acestea, tumorile identice histologic se pot comporta în moduri diferite; o situaţie care poate sta la baza biologiei acestei boli eterogene. Mai recent, profilarea genetică extinsă a acestor tumori a fost capabilă să identifice subgrupuri clasificabile molecular de glioblastom (adică subtipuri proneurale, proliferative și mezenchimale)( 20 , 21 , 24 , 33 – 38 ).) care poate prezice mai bine supraviețuirea decât analiza histopatologică convențională. Astfel de noi tehnici de clasificare sunt de interes pentru ca pacienții să poată fi stratificați mai adecvat pentru noile strategii de tratament ( 20 ).

Subgrupul mezenchimatos al glioblastoamelor are de obicei un prognostic mai prost decât subgrupul proneural mai frecvent ( 21 , 24 ). Cu toate acestea, în studiul nostru, pacienții cu semnăturile expresiei genei mezenchimale au avut o supraviețuire semnificativ extinsă în comparație cu o cohortă mare, multi-instituțională (n=82) de mostre de glioblastom din același subgrup molecular tratate cu diferite alte terapii. Nu a fost observată o astfel de diferență de supraviețuire la pacienții din acest studiu clinic cu proneurale semnături, comparativ cu alți subiecți de control cu ​​glioblastom din subgrupul proneural (n=60). Desigur, astfel de comparații cu controale concomitente și istorice nu sunt menite să implice eficacitate, deoarece acest studiu de fază I nu a avut un braț de potrivire prospectiv, controlat cu placebo. Deși unii factori de prognostic, cum ar fi vârsta și starea de performanță Karnofsky, au fost relativ comparați în grupurile noastre de comparație, amploarea rezecției chirurgicale nu a fost comparată direct între pacienții din acest studiu și controalele noastre concurente/istorice. Deoarece avem nevoie de cantități adecvate de tumoră (>2 grame) pentru a genera vaccinurile autologe, rezecabilitatea tumorii a fost luată în considerare în criteriile de eligibilitate. Prin urmare, este posibil ca amploarea rezecției chirurgicale să fi fost mai mare la pacienții noștri vaccinați cu DC în comparație cu controalele concomitente/istorice, ceea ce ar fi putut influența rezultatele noastre de supraviețuire. Cu toate acestea, OS median (31,4 luni) a pacienților noștri vaccinați cu DC este încă de remarcat, în comparație cu o serie mare de pacienți cu glioblastom care au suferit rezecții tumorale totale brute și au fost tratați cu chimio-radioterapie concomitentă, unde supraviețuirea mediană a fost raportată la fi de 18,6 luni (31 ).

Nu este clar dacă supraviețuirea extinsă a pacienților noștri cu semnături de expresie a genei mezenchimale este un rezultat direct al efectelor vaccinului sau răspunsuri bune la terapiile de urmărire după eșecul vaccinului. Deoarece semnăturile mezenchimale reprezintă subgrupuri de glioblastom care sunt mai rezistente la terapia convențională, se poate specula că vaccinarea DC face cumva aceste tumori mai susceptibile la tratamentele ulterioare39 ). Deoarece tratamentul cu temozolomidă adjuvant a fost coordonat în programul vaccinărilor de rapel DC, aceasta este o distincție dificil de făcut din designul studiului nostru. Cu toate acestea, rezultatele noastre sugerează că mezenchimal-semnăturile expresiei genelor exprimă transcrieri ale genelor inflamatorii crescute și posedă o densitate crescută de CD3 + și CD8 + care infiltrează tumorilimfocitele comparativ cu glioblastoamele care exprimă alte semnături genetice. Ca atare, emitem ipoteza că expresia genelor inflamatorii (de exemplu, IL-1R, factori de semnalizare TNF-α și chemokine) poate facilita amorsarea și traficul de celule T specifice tumorii în parenchimul tumoral, care ar putea fi îmbunătățit de DC-vaccinare și modificatori ai răspunsului imun înnăscut. Prin urmare, semnătura expresiei genei mezenchimale poate avea un impact direct asupra bioactivității vaccinului în sine, indiferent de terapia post-vaccin. Studiile clinice de fază III proiectate prospectiv, randomizate, multicentre vor fi necesare pentru a valida astfel de ipoteze, iar dovada beneficiului clinic rămâne de stabilit.

În general, rezultatele raportate aici pot oferi noi perspective pentru selecția potențială a pacienților în studiile viitoare de imunoterapie și pot oferi o credibilitate suplimentară pentru capacitatea semnăturilor expresiei genetice de a oferi date relevante pentru tratamentul personalizat al cancerului. Pe baza rezultatelor acestui studiu de fază I, vom continua să dezvoltăm studii clinice mai avansate cu această abordare specială. În prezent, planificăm un studiu clinic randomizat, multicentric de fază II/III al vaccinării DC pentru glioblastom nou diagnosticat (DCVax-Brain™), care sperăm să ajute la definirea în continuare a subgrupurilor de pacienți care pot răspunde la strategiile de vaccinare tumorală. Acest lucru, la rândul său, poate duce la optimizarea și perfecționarea în continuare a studiilor conexe ale vaccinurilor pe bază de DC pentru pacienții cu glioblastom,

Declarație de relevanță translațională

Identificarea selectivă a pacienților care vor răspunde la o anumită terapie este de o importanță capitală, în special pentru pacienții diagnosticați cu gliom malign. Pacienții diagnosticați cu glioblastom (gradul IV OMS) au o supraviețuire estimată la 5 ani de mai puțin de 3,3%. În acest studiu, raportăm rezultatele unui studiu clinic de fază I în care pacienții cu glioblastom au fost tratați cu o abordare de imunoterapie personalizată, care a inclus vaccinarea cu celule dendritice pulsat de lizate tumorale autologe. În plus, am utilizat profilarea expresiei genelor pentru a identifica un grup de pacienți cu o anumită semnătură a expresiei genei (glioblastom mezenchimal) care au avut o supraviețuire mai lungă după vaccinarea DC, în comparație cu pacienții de control contemporan/istoric din același subgrup de expresie genică, care nu au primit. vaccinare. Această semnătură a fost asociată cu transcrierile inflamatorii și cu limfocitele T infiltrate tumorale îmbunătățite. Astfel, aceste rezultate sugerează că semnăturile expresiei genelor pot fi capabile să identifice un subgrup imunogen de glioblastom care ar putea răspunde mai mult la terapiile bazate pe imun.

Mergi la:

Material suplimentar

1

Click aici pentru a vizualiza. (136K, pptx)

Mergi la:

Mulțumiri

Mulțumim lui Timothy Cloughesy, MD, și Albert Lai, MD, Ph.D. pentru discuții și comentarii utile.

Suport pentru cercetare.Această lucrare a fost susținută parțial de granturile NIH/NCI K01-CA111402 și RO1-CA123396 (către RMP), R01 CA 112358 (către LML), Fundațiile Philip R. și Kenneth A. Jonsson, Fundația familiei Neidorf, Ben & Catherine Ivy Foundation și Northwest Biotherapeutics, Inc. RMP este beneficiarul premiului Howard Temin NCI pentru Dezvoltarea Carierei și premiul STOP Cancer Development. Citometria în flux a fost efectuată la Centrul de Cancer Comprehensiv UCLA Jonsson (JCCC) Core Facility, iar expresia genelor a fost efectuată în Resursa Partajată JCCC Gene Expression, care este susținută de premiul NIH CA16042. Analiza microarray a fost susținută de Fundația Carson. Achiziția de țesut și IHC au fost susținute de UCLA Brain Tumor Translational Resource (BTTR), în timp ce Centrul General de Cercetare Clinică (GCRC) a fost susținut de M01-RR00865.

Mergi la:

Note de subsol

Declinări de răspundere. Autorii nu au niciun conflict de interese în această lucrare.

Mergi la:

REFERINȚE

1. 

Deorah S, Lynch CF, Sibenaller ZA, Ryken TC. Tendințe în incidența cancerului cerebral și supraviețuirea în Statele Unite: Programul de supraveghere, epidemiologie și rezultate finale, 1973 până în 2001. Neurosurg Focus. 2006; 20 :E1. [ PubMed ] [ Google Scholar ]2. 

Cohen MH, Li Shen Y, Keegan P, Pazdur R. Rezumatul aprobării medicamentelor FDA: Bevacizumab (Avastin (R)) ca tratament al glioblastomului multiform recurent. Oncolog. 2009 [ PubMed ] [ Google Scholar ]3. 

Lai A, Filka E, McGibbon B, et al. Studiu pilot de fază II al bevacizumab în combinație cu temozolomidă și radioterapie regională pentru tratamentul inițial al pacienților cu glioblastom multiform nou diagnosticat: analiză intermediară a siguranței și toleranței. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2008 [ PubMed ] [ Google Scholar ]4. 

Stupp R, Mason WP, van den Bent MJ, et al. Radioterapia plus temozolomidă concomitentă și adjuvantă pentru glioblastom. N Engl J Med. 2005; 352 :987–996. [ PubMed ] [ Google Scholar ]5. 

Yang MY, Zetler PM, Prins RM, Khan-Farooqi H, Liau LM. Imunoterapia pentru pacienții cu gliom malign: de la principii teoretice la aplicații clinice. Expert Rev Neurother. 2006; 6 :1481–1494. [ PubMed ] [ Google Scholar ]6. 

De Vleeschouwer S, Fieuws S, Rutkowski S, et al. Imunoterapia postoperatorie adjuvantă pe bază de celule dendritice la pacienții cu glioblastom multiform recidivat. Clin Cancer Res. 2008; 14 :3098–3104. [ PubMed ] [ Google Scholar ]7. 

Kikuchi T, Akasaki Y, Abe T, et al. Vaccinarea pacienților cu gliom cu fuziuni de celule dendritice și gliom și interleukina umană recombinantă 12. J Immunother. 2004; 27 :452–459. [ PubMed ] [ Google Scholar ]8. 

Liau LM, Prins RM, Kiertscher SM, et al. Vaccinarea cu celule dendritice la pacienții cu glioblastom induce răspunsuri sistemice și intracraniene ale celulelor T modulate de micromediul tumoral local al sistemului nervos central. Clin Cancer Res. 2005; 11 :5515–5525. [ PubMed ] [ Google Scholar ]9. 

Walker DG, Laherty R, Tomlinson FH, Chuah T, Schmidt C. Rezultatele unui studiu de fază I de vaccin cu celule dendritice pentru astrocitomul malign: interacțiune potențială cu chimioterapia adjuvantă. J Clin Neurosci. 2008; 15 :114–121. [ PubMed ] [ Google Scholar ]10. 

Wheeler CJ, Black KL, Liu G, et al. Vaccinarea provoacă răspunsuri imune și clinice corelate la pacienții cu glioblastom multiform. Cancer Res. 2008; 68 :5955–5964. [ PubMed ] [ Google Scholar ]11. 

Yamanaka R, Abe T, Yajima N, et al. Vaccinarea pacienților cu gliom recurent cu celule dendritice pulsate de lizate tumorale provoacă răspunsuri imune: rezultatele unui studiu clinic de fază I/II. BrJCancer. 2003; 89 :1172–1179. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]12. 

Yamanaka R, Homma J, Yajima N, et al. Evaluarea clinică a vaccinării cu celule dendritice pentru pacienții cu gliom recurent: rezultatele unui studiu clinic de fază I/II. Clin Cancer Res. 2005; 11 :4160–4167. [ PubMed ] [ Google Scholar ]13. 

Yu JS, Liu G, Ying H, Yong WH, Black KL, Wheeler CJ. Vaccinarea cu celule dendritice pulsate de lizat tumoral provoacă celule T citotoxice specifice antigenului la pacienții cu gliom malign. Cancer Res. 2004; 64 :4973–4979. [ PubMed ] [ Google Scholar ]14. 

Yu JS, Wheeler CJ, Zeltzer PM și colab. Vaccinarea pacienților cu gliom malign cu celule dendritice pulsate de peptide provoacă citotoxicitate sistemică și infiltrarea intracranienă a celulelor T. Cancer Res. 2001; 61 :842–847. [ PubMed ] [ Google Scholar ]15. 

Prins RM, Craft N, Bruhn KW, et al. Agonistul TLR-7, imiquimod, îmbunătățește supraviețuirea celulelor dendritice și promovează amorsarea celulelor T specifice antigenului tumoral: relație cu imunitatea antitumorală a sistemului nervos central. J Immunol. 2006; 176 :157–164. [ PubMed ] [ Google Scholar ]16. 

Zhu X, Nishimura F, Sasaki K, et al. Toll like receptor-3 ligand poli-ICLC promovează eficacitatea vaccinărilor periferice cu epitopi peptidici derivați de antigen tumoral în modelele de tumori ale SNC murine. J Transl Med. 2007; 5:10 . [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]17. 

Yang I, Kremen TJ, Giovannone AJ, et al. Modularea moleculelor complexului major de histocompatibilitate de clasă I și a peptidelor imunogene legate de complexul major de histocompatibilitate induse de tratamentul cu interferon-alfa și interferon-gamma al glioblastomului multiform uman. J Neurochirurgie. 2004; 100 :310–319. [ PubMed ] [ Google Scholar ]18. 

Bigner DD, Pitts OM, Wikstrand CJ. Inducerea encefalomielitei alergice experimentale letale la primate non-umane și cobai cu țesut multiform de glioblastom uman. J Neurochirurgie. 1981; 55 :32–42. [ PubMed ] [ Google Scholar ]19. 

Ziua A, Carlson MR, Dong J, O’Connor BD, Nelson SF. Celsius: o resursă comunitară pentru datele microarray Affymetrix. Genom Biol. 2007; 8 :R112. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]20. 

Freije WA, Castro-Vargas FE, Fang Z, et al. Profilul expresiei genice a gliomelor prezice puternic supraviețuirea. Cancer Res. 2004; 64 :6503–6510. [ PubMed ] [ Google Scholar ]21. 

Lee Y, Scheck AC, Cloughesy TF, et al. Analiza expresiei genice a glioblastoamelor identifică baza moleculară majoră pentru beneficiul prognostic al vârstei mai fragede. BMC Med Genomics. 2008; 1:52 . [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]22. 

Thumann P, Moc I, Humrich J, et al. Încărcarea cu antigen a celulelor dendritice cu preparate de celule tumorale întregi. Jurnal de metode imunologice. 2003; 277 :1–16. [ PubMed ] [ Google Scholar ]23. 

Prins RM, Cloughesy TF, Liau LM. Imunitatea citomegalovirusului după vaccinarea cu lizat de glioblastom autolog. N Engl J Med. 2008; 359 :539–541. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]24. 

Phillips HS, Kharbanda S, Chen R, et al. Subclasele moleculare de gliom de grad înalt prezic prognosticul, delimitează un model de progresie a bolii și seamănă cu etapele neurogenezei. Celula canceroasă. 2006; 9 :157–173. [ PubMed ] [ Google Scholar ]25. 

Verhaak RG, Hoadley KA, Purdom E, et al. Analiza genomică integrată identifică subtipuri relevante clinic de glioblastom caracterizate prin anomalii în PDGFRA, IDH1, EGFR și NF1. Celula canceroasă. 2010; 17 :98–110. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]26. 

Camus M, Tosolini M, Mlecnik B, et al. Coordonarea reacției imune intratumorale și a recidivei cancerului colorectal uman. Cancer Res. 2009; 69 :2685–2693. [ PubMed ] [ Google Scholar ]27. 

Galon J, Costes A, Sanchez-Cabo F, et al. Tipul, densitatea și localizarea celulelor imune în tumorile colorectale umane prezic rezultatul clinic. Ştiinţă. 2006; 313 :1960–1964. [ PubMed ] [ Google Scholar ]28. 

Yang I, Tihan T, Han SJ și colab. Infiltratul de celule T CD8+ în glioblastomul nou diagnosticat este asociat cu supraviețuirea pe termen lung. J Clin Neurosci. 2010 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]29. 

Heimberger AB, Sun W, Hussain SF și colab. Răspunsuri imunologice la un pacient cu glioblastom multiform tratat cu cure secvențiale de temozolomidă și imunoterapie: studiu de caz. Neuro Oncol. 2008; 10 :98–103. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]30. 

Mirimanoff RO, Gorlia T, Mason W, et al. Radioterapie și temozolomidă pentru glioblastom nou diagnosticat: analiză recursivă de partiționare a studiului randomizat de fază III EORTC 26981/22981-NCIC CE3. J Clin Oncol. 2006; 24 :2563–2569. [ PubMed ] [ Google Scholar ]31. 

Stupp R, Hegi ME, Mason WP, et al. Efectele radioterapiei cu temozolomidă concomitentă și adjuvantă comparativ cu radioterapia în monoterapie asupra supraviețuirii în glioblastom într-un studiu randomizat de fază III: analiza pe 5 ani a studiului EORTC-NCIC. Lancet Oncol. 2009; 10 :459–466. [ PubMed ] [ Google Scholar ]32. 

Louis DN, Ohgaki H, Wiestler OD, et al. Clasificarea OMS din 2007 a tumorilor sistemului nervos central. Acta neuropathol. 2007; 114 :97–109. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]33. 

Beetz C, Bergner S, Brodoehl S, et al. Profilul bazat pe rezultat al tumorilor astrocitare identifică semnăturile prognostice ale expresiei genelor care leagă patologia moleculară și cea bazată pe morfologie. Int J Oncol. 2006; 29 :1183–1191. [ PubMed ] [ Google Scholar ]34. 

Li A, Walling J, Ahn S, et al. Analiza nesupravegheată a profilurilor transcriptomice relevă șase subtipuri de gliom. Cancer Res. 2009; 69 :2091–2099. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]35. 

Mischel PS, Shai R, Shi T, et al. Identificarea subtipurilor moleculare de glioblastom prin profilarea expresiei genice. Oncogene. 2003; 22 :2361–2373. [ PubMed ] [ Google Scholar ]36. 

Nutt CL, Mani DR, Betensky RA, et al. Clasificarea bazată pe expresia genică a glioamelor maligne se corelează mai bine cu supraviețuirea decât clasificarea histologică. Cancer Res. 2003; 63 :1602–1607. [ PubMed ] [ Google Scholar ]37. 

Shai R, Shi T, Kremen TJ, et al. Profilul expresiei genice identifică subtipurile moleculare de glioame. Oncogene. 2003; 22 :4918–4923. [ PubMed ] [ Google Scholar ]38. 

Shirahata M, Iwao-Koizumi K, Saito S, et al. Sistemul de diagnostic molecular bazat pe expresia genelor pentru glioamele maligne este superior diagnosticului histologic. Clin Cancer Res. 2007; 13 :7341–7356. [ PubMed ] [ Google Scholar ]39. 

Wheeler CJ, Das A, Liu G, Yu JS, Black KL. Reactivitatea clinică a glioblastomului multiform la chimioterapie după vaccinare. Clin Cancer Res. 2004; 10 :5316–5326. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

Exprimati-va pararea!

Completează mai jos detaliile tale sau dă clic pe un icon pentru a te autentifica:

Logo WordPress.com

Comentezi folosind contul tău WordPress.com. Dezautentificare /  Schimbă )

Poză Twitter

Comentezi folosind contul tău Twitter. Dezautentificare /  Schimbă )

Fotografie Facebook

Comentezi folosind contul tău Facebook. Dezautentificare /  Schimbă )

Conectare la %s

Acest site folosește Akismet pentru a reduce spamul. Află cum sunt procesate datele comentariilor tale.