Efecte anti-proliferative induse de statine prin ciclina D1 și p27 într-un studiu faza II cu o fereastră de oportunitate pentru cancerul de sân

J Transl Med. 2015; 13: 133. doi:  10.1186/s12967-015-0486-0 PMCID: PMC4424530PMID: 25925673

Maria Feldt , Olöf Bjarnadottir , Succes Kimbung , Karin Jirström , Pär-Ola Bendahl , Srinivas Veerla , Dorthe Grabau ,

 Ingrid Hedenfalk ,și Signe Borgquist

 Informații despre autor Note despre articol Informații privind drepturile de autor și licență Declinare a răspunderii

Abstract

Scop

S-a demonstrat că statinele care scad colesterolul exercită efecte antitumorale asupra cancerului de sân prin scăderea proliferării, măsurată de Ki67. Mecanismele biologice din spatele efectelor anti-proliferative rămân evazive. Scopul acestui studiu a fost de a investiga potențialele efecte induse de statine asupra regulatorilor centrali ai ciclului celular ciclin D1 și p27.

Design experimental

Acest studiu de fază a II-a cu fereastra de oportunitate (Înregistrarea procesului: ClinicalTrials.gov NCT00816244 , NIH) a inclus 50 de pacienți cu cancer mamar primar invaziv. Doze mari de atorvastatină (80 mg/zi) au fost prescrise pacienților timp de două săptămâni înainte de operație. Probele de tumoră încorporate în parafină pre- și post-tratament cu statină au fost analizate utilizând imunohistochimie pentru expresia receptorului de estrogen (ER), receptorului de progesteron (PR), receptorului 2 al factorului de creștere epidermică uman (HER2) și regulatorii ciclului celular ciclin D1 și p27. Perechile de probe de tumoră congelate corespunzătoare au fost analizate pentru expresia genelor care codifică ciclina D1 și p27, CCND1 și respectiv CDKN1B.

Rezultate

Patruzeci și doi de pacienți au finalizat toate părțile studiului și evaluarea imunohistochimică a ER și PR a fost realizabilă în 30 de perechi de tumori, HER2 în 29 de perechi de tumori, ciclina D1 în 30 de perechi de tumori și p27 în 33 de perechi de tumori. Expresia ER, PR și HER2 nu s-a schimbat semnificativ după tratamentul cu atorvastatină. Expresia ciclinei D1 în ceea ce privește intensitatea nucleară a fost semnificativ scăzută (P = 0,008) după tratamentul cu statine în probe de tumoră pereche. Expresia proteică a supresorului tumoral p27, evaluată fie ca fracțiune de celule tumorale colorate, fie ca intensitate citoplasmatică, a crescut semnificativ (P = 0,03 și, respectiv, P = 0,02). La nivel transcripțional, nu au fost detectate diferențe semnificative în expresia ARNm pentru ciclina D1 (CCND1) și p27 (CDKN1B). In orice caz, Expresia CCND1 a fost mai scăzută în tumorile care au răspuns la tratamentul cu atorvastatină cu o scădere a proliferării, deși nu semnificativ (P = 0,08).

Concluzii

Am raportat anterior efecte anti-proliferative induse de statine în cancerul de sân. Acest studiu sugerează că efectele de reglare a ciclului celular pot contribui la aceste efecte anti-proliferative prin ciclina D1 și p27.

Material electronic suplimentar

Versiunea online a acestui articol (doi:10.1186/s12967-015-0486-0) conține materiale suplimentare, care sunt disponibile utilizatorilor autorizați.

fundal

Statinele, o clasă majoră de medicamente pentru tratamentul hipercolesterolemiei, sunt utilizate pe scară largă datorită unei prevenții notabile a bolilor cardiovasculare, iar dovezile acumulate sugerează un rol promițător al statinelor în cancerul de sân [ 1 ]. Statinele acționează prin inhibarea 3-hidroxi-3metilglutaril coenzima-A reductază (HMGCR), enzima limitatoare de viteză a căii mevalonatului, reducând astfel producția intracelulară de colesterol [ 2 ]. În plus față de capacitatea lor de scădere a lipidelor, statinele exercită alte câteva efecte mediate de diferiți produși ai căii mevalonatului. Aceste efecte independente de lipide includ inhibarea răspunsurilor inflamatorii, acțiuni imunomodulatoare, efecte apoptotice și anti-proliferative, care ar putea contribui la efectele antitumorale sugerate ale acestor agenți.3 , 4 ]. Dovezile epidemiologice care proiectează statinele ca agenți anticancerigen sunt variabile, în funcție de tipul particular de cancer în cauză, precum și de clasa de statine utilizate [ 5 – 9 ]. Date recente sugerează că statinele lipofile pot fi preferabile în fața statinelor hidrofile ca agenți anticancer [ 10 , 11 ]. În cancerul de sân, studiile anterioare au arătat că utilizarea statinei lipofile în urma unui diagnostic de cancer de sân este asociată cu un risc scăzut de recidivă a bolii și cu o mortalitate redusă prin cancer de sân [ 8 , 12 , 13 ]]. Rezultatele unui studiu de fază II cu statine prescrise în cadrul pre-chirurgical au demonstrat reducerea proliferării celulelor tumorale și creșterea apoptozei la pacienții cu cancer de sân in situ de grad înalt [ 14 ]. Efectele anti-proliferative ale statinelor au fost confirmate în cancerul de sân invaziv, așa cum sa raportat într-o publicație anterioară din același studiu pe care se bazează acest studiu [ 15 ]. În ambele studii, efectele anti-proliferative au fost descrise în termeni de scăderea nivelului intratumoral de Ki67 [ 14 , 15 ].]. Cu toate acestea, mecanismele biologice cuprinzătoare din spatele acestui efect anti-proliferativ nu sunt în prezent clare. Ki67 este cel mai utilizat biomarker clinic pentru evaluarea stării proliferative a unui cancer de sân. Ki67 este exprimat în timpul tuturor fazelor active ale ciclului celular (G1, S, G2, M), dar este absent în celulele de repaus (G0) [ 16 , 17 ]. Ciclul celular este o serie complexă și strict controlată de evenimente, care conduc la diviziunea celulară și replicarea ADN-ului. În celulele normale, progresia prin ciclul celular este controlată de kinazele dependente de ciclină (CDK), o familie de kinaze serină/treonină [ 18 ].]. CDK-urile formează complexe cu unitățile lor reglatoare, ciclinele, activând astfel CDK-urile, ducând la fosforilarea proteinelor reglatoare ciclului celular care inițiază și reglează progresia prin diferitele faze ale ciclului celular [ 19 ]. În celulele canceroase de sân, sistemul de control al ciclului celular este dereglat la mai multe niveluri, ceea ce duce la o proliferare celulară anormală [ 20 ]. Ciclina D1 este un regulator vital al tranziției G1/S, așa cum este ilustrat în figură 1. Interacțiunea ciclinei D1 cu CDK4 și CDK6, duce la fosforilare și, prin urmare, la inactivarea proteinei Rb și a funcției sale de menținere G1, care culminează cu exprimarea genelor țintă asociate proliferării [ 21 , 22 ]. Ciclina D1 este supraexprimată la nivel de proteine ​​în până la 50% din toate cancerele de sân primare, în parte datorită amplificării genei ciclinei D1, CCND1 [ 23 ]. Inhibitorul CDK p27, cunoscut și sub numele de Kip1, este implicat în reglarea tranziției fazei G0 la S. p27 interacționează cu complexele CDK2-ciclină E, CDK4/6-ciclină D și CDK2-ciclină A, reglând astfel aceste complexe strict [ 24 , 25 ].]. Supresorul tumoral p27 este frecvent dereglat în cancerul de sân, iar expresia redusă a p27 a fost asociată cu proliferarea crescută, gradul tumoral ridicat, amplificarea HER2, precum și negativitatea receptorului de estrogen (ER) și receptorului de progesteron (PR) [ 25 , 26 ].

figura 1

Ciclul celular și principalele acțiuni ale ciclinei D1 și p27. Ciclina D1 reglează tranziția fazei G1/S, se leagă și activează Cdk4/Cdk6 pentru a fosforila proteina retinoblastomului (pRb). Fosforilarea Rb duce la separarea de E2F și permite transcrierea genelor de proliferare [ 21 ]. În G0 și G1 timpuriu, p27 inhibă CDK2-ciclina E, iar în faza S CDK2-ciclina A. În G1 există o scădere a p27, permițând CDK2-ciclinei E și CDK2-ciclinei A să activeze transcripția genelor dobândite pentru tranziția G1-S [ 25 ]. P27 interacționează, de asemenea, cu CDK4/6-ciclina D în mod cuprinzător, p27 acționând atât ca inhibitor, cât și ca factor de asamblare necesar pentru complex, în funcție de starea de creștere a celulei [ 24 ].

Scopul acestui studiu a fost de a investiga efectele potențiale induse de statine asupra regulatorilor centrali ai ciclului celular ciclin D1 și p27, pentru a îmbunătăți înțelegerea efectelor anti-proliferative induse de statine raportate anterior. Un scop secundar a fost de a evalua expresia biomarkerilor stabiliți clinic, cum ar fi receptorul de estrogen, receptorul de progesteron și HER2 înainte și după tratamentul cu atorvastatina, ipotezând că nu există modificări induse de statine ale expresiei acestora. Aceste obiective au fost abordate într-un studiu de fază a II-a cu o fereastră de oportunitate cu terapie preoperatorie cu doze mari de atorvastatină de două săptămâni la 50 de pacienți cu cancer mamar primar invaziv.

Mergi la:

Materiale și metode

Design de probă

Studiul a fost conceput ca un studiu cu o fereastră de oportunitate, în care participanților li s-a prescris statină lipofilă atorvastatină timp de două săptămâni, în timpul ferestrei fără tratament dintre diagnosticul cancerului de sân și intervenția chirurgicală. Studiul a fost deschis pentru recrutare în februarie 2009, iar numărul preplanificat de 50 de pacienți a fost atins în martie 2012. În acest studiu de fază II nerandomizat, toți pacienții au primit o doză egală de 80 mg atorvastatină zilnic. Studiul a fost realizat ca studiu cu un singur centru la Spitalul Universitar Skåne din Lund, Suedia.

Comitetul de etică de la Universitatea Lund și Agenția suedeză pentru produse medicale au aprobat acest studiu. Studiul a fost înregistrat la ClinicalTrials.gov (adică, numărul ID: NCT00816244 , NIH). Studiul respectă criteriile REMARK [ 27 ].

Pacienți și tumori

Pacienții diagnosticați cu cancer de sân primar invaziv cu o dimensiune minimă a tumorii de 15 mm măsurată prin ultrasunete, care erau candidați pentru o intervenție chirurgicală radicală, au fost eligibili pentru participarea la acest studiu. Pentru includere au fost necesare, de asemenea, o stare de performanță sub 2 conform Grupului European de Oncologie Cooperativă (ECOG) și o funcție hepatică normală. Sarcina, terapia de substituție hormonală în curs, terapia de scădere a colesterolului (adică, inclusiv statine, fibrați și ezetemib), antecedentele medicale de accident vascular cerebral hemoragic sau reacții alergice atribuite compușilor cu o compoziție biologică similară cu cea a atorvastatinei au cuprins criteriile de excludere. Informații complete privind criteriile de includere și excludere ale studiului,15]. După includere, participanții au fost supuși unor biopsii de bază tumorale specifice studiului înainte de inițierea tratamentului cu statine, o biopsie de bază fiind fixată imediat cu formol și una proaspătă congelată la -80 ° C. După tratamentul cu statine de două săptămâni, intervenția chirurgicală la sân a fost efectuată conform procedurilor chirurgicale standard și țesutul tumoral a fost extras din tumora primară la Departamentul de Patologie a Spitalului Universitar Skåne, Lund, Suedia. Din cei 50 de pacienți înscriși în studiu, un total de 42 de pacienți au finalizat toate părțile studiului. Doi pacienți au fost excluși din studiu deoarece data intervenției chirurgicale a fost pre-programată după înscriere. Doi pacienți au fost excluși din cauza nivelurilor serice crescute ale alanin aminotransferazei. O pacientă a fost exclusă deoarece a fost pus la îndoială diagnosticul de cancer mamar invaziv,

Obiectivele finale și evaluarea tumorii

Obiectivul principal al studiului clinic a fost răspunsul tumoral anti-proliferativ indus de statine, măsurat printr-o scădere a expresiei Ki67, așa cum a fost raportat anterior [ 15 ]. Scopul acestui substudiu a fost de a investiga efectele potențiale ale tratamentului cu statine asupra expresiei ER, PR și HER2, precum și expresia regulatorilor ciclului celular ciclin D1 și p27.

Imunohistochimie

Țesutul tumoral fixat în formol și încorporat în parafină din biopsiile de bază și probele chirurgicale a fost tăiat în secțiuni de 3 până la 4 μm și transferat pe lame de sticlă (Menzel Super Frost Plus), uscat la temperatura camerei și copt într-o cameră încălzită timp de 2 ore la 60 ^○ C. Deparafinizarea și extragerea antigenului au fost efectuate utilizând PT Link (Dako Denmark A/S) folosind un tampon cu pH ridicat. Colorarea a fost efectuată într-un Autostainer Plus(Dako) folosind un kit de vizualizare pe bază de di-amino-benzidină (DAB) (K801021-2, Dako). Contracolorarea a fost efectuată folosind hematoxilina Mayer cu anticorpi împotriva ER (SP1, Thermo Scientific, diluat 1:200), PR (Dako M3569, diluat 1:200), HER2 (4B5, Ventan BenchMark Ultra, Ventana Medical Systems, Inc. Tucson, Arizona). , RU), ciclină D1 (Dako M3635, diluată 1:40) şi p27 (Dako M7203, diluată 1:100).

Evaluarea biomarkerului tumoral

Expresia ER și PR a fost evaluată ca fracțiune de nuclee colorate, utilizând o scară de cinci grade (adică 0-1%, 2-10%, 11-50%, 51-75% și >75% din celulele colorate). HER2 a fost evaluat folosind ghidurile HercepTest (DAKO, Carpinteria, CA) pentru scorul HER2. Nicio colorare observată în <10% din celulele tumorale nu a fost notată cu 0, colorarea slabă observată în >10% din celulele tumorale a fost notată cu 1+, colorarea slabă până la moderată în >10% din celulele tumorale a fost notată cu 2+ și puternică. colorarea în >10% din celulele tumorale a fost notată 3+, conform ghidurilor. Evaluarea exprimării proteinei ciclinei D1 și p27 a fost evaluată luând în considerare fracția de nuclee colorate, folosind o scală de cinci grade (adică 0-1%, 2-10%, 11-50%, 51-75% și >75% din celule colorate) și intensitatea nucleară și intensitatea citoplasmatică, folosind o scală de patru grade (adică negativ, slab,1 : Figura S1 și fișierul suplimentar 2 : Figura S2). Pentru evaluarea Ki67, au fost evaluate 400 de celule tumorale și expresia Ki67 a fost înregistrată ca fracțiune de nuclee pozitive folosind o scară continuă de la 0 la 100 [ 15 ].

extracția ARN

ARN-ul total a fost extras din probe tumorale proaspete congelate folosind minikit-ul Allprep ADN/ARN (QIAGEN, Valencia, CA) într-un QIAcube (Qiagen) conform instrucțiunilor producătorului. Integritatea ARN a fost evaluată pe un bioanalizator Agilent 2100 (Agilent, Santa Clara, CA) și cuantificarea ARN a fost efectuată folosind un NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Products, Wilmington, DE). Probele au fost hibridizate cu Human HT-12 v4.0 Expression BeadChips (Illumina Inc, San Diego, CA) în două loturi la SCIBLU Genomics Center de la Universitatea Lund, Suedia ( www.lth.se/sciblu ). Sondele Illumina au fost re-adnotate folosind pachetul R illuminaHumanv4.db [ 28]. Studiul cu microarray a fost realizat în cadrul unui alt sub-studiu al studiului, iar analizele cuprinzătoare ale datelor fac obiectul unor lucrări nepublicate în prezent. Astfel, în acest studiu sunt raportate aici doar analizele referitoare la expresia sondelor care reprezintă ciclina D1 și p27.

analize statistice

Toate variabilele tumorale imunohistochimice evaluate au fost măsurate pe scale ordinale. Modificările în expresia proteinei ER, PR, HER2, ciclinei D1 și p27 între probele de tratament pre- și post-atorvastatină au fost evaluate utilizând testul Wilcoxon cu perechi semnate. Rho-ul lui Spearman a fost folosit ca măsură a corelației dintre modificarea ciclinei D1 și Ki67 și, respectiv, p27 și Ki67. Pentru a testa diferențele subgrupurilor, a fost utilizată asocierea liniară cu liniară. Toate testele au fost cu două părți și diferențele cu valorile P sub 5% au fost considerate semnificative. Pentru analiza datelor au fost utilizate pachetele software Stata versiunea 12.1 (StataCorp LP, College Station, TX, 2012) și IBM SPSS Statistics Versiunea 19.

Pentru analiza datelor cu microarray, toate datele au fost inițial preprocesate și normalizate folosind metoda de normalizare cuantilă [ 29 ].]. Pentru analize a fost folosit software-ul GenomeStudio V2011.1. Au fost excluse seturile de sonde cu intensitatea semnalului sub intensitatea medie a semnalelor de control negativ în 80% din probe. Seturile de sonde replicate au fost îmbinate prin mediana valorilor intensității semnalului. O analiză de semnificație a Microarrays (SAM) a fost efectuată utilizând software-ul TMeV v4.9 pentru a identifica diferențele de exprimare a CCND1 și CDKN1B între probele pereche de tratament pre- și post-statina. Mai mult, modificările în expresia CCND1 și CDKN1B între perechile de tumori stratificate în două grupuri în funcție de modificările induse de statine în expresia Ki67 au fost evaluate utilizând testul U Mann-Whitney. Modificări ale ratei de proliferare a tumorii, cuantificate prin analiza IHC a expresiei Ki67, au fost raportate anterior [ 15 ].

Mergi la:

Rezultate

Caracteristicile pacientului și datele tumorii

Cincizeci de pacienți au intrat în studiu; un total de 41 de pacienti au fost raportati ca fiind in postmenopauza si noua pacienti ca fiind premenopauza. Patruzeci și doi de pacienți au finalizat toate părțile studiului. Nu au fost raportate evenimente adverse grave. La momentul diagnosticului, vârsta medie dintre toți cei 42 de pacienți era de 63 de ani (interval 35-89 de ani). Dimensiunea medie a tumorii patologice a fost de 21 mm, variind de la 6 la 33 mm și toate cele 42 de tumori au fost cancere de sân invazive. Majoritatea tumorilor au fost cancere ductale, iar majoritatea tumorilor au fost de grad histologic 2 sau 3 (Tabel 1).

tabelul 1

Caracteristicile pacientului și tumorii

Pacienții au finalizat toate părțile studiului	n = 42
Vârsta ani (medie, interval)	63 (35–89)
Dimensiunea tumorii mm (medie, interval)	21 (6–33)
Stare ganglionară pozitivă	17 (41%)
Gradul tumorii (NHG)
eu	9 (21%)
II	17 (41%)
III	16 (38%)
Indicele mitotic
1	23 (55%)
2	5 (12%)
3	14 (33%)
IS (n = 30)
Pozitiv	27 (90%)
Negativ	3 (10%)
PR (n = 30)
Pozitiv	24 (80%)
Negativ	6 (20%)
HER2 (n = 29)
0	7 (24%)
1+	10 (34%)
2+	7 (24%)
3+	5 (17%)
Indicele Ki67 (n = 26)
Scăzut	15 (58%)
Înalt	11 (42%)
HMGCR (n = 38)
Pozitiv	24 (63%)
Negativ	14 (37%)

Deschide într-o fereastră separată

NHG Nottingham grad histologic I-III (raport patologic post-tratament), indice mitotic conform criteriilor Nottingham (raport patologic post-tratament).

Datele inițiale ale tumorii (pretratament): ER (receptor de estrogen), PR (receptor de progesteron), HER2 (receptor 2 al factorului de creștere epidermică uman), Ki67 ridicat dacă >20%, HMGCR pozitiv dacă există colorare citoplasmatică.

Modificări în expresia ER, PR, HER2

Evaluarea ER și PR a fost realizabilă în 30 de perechi de tumori și, respectiv, HER2 în 29 de perechi, în timp ce biopsiile rămase înainte de tratament au arătat o cantitate insuficientă de țesut tumoral pentru evaluarea imunohistochimică a acestor markeri. Expresia de bază a ER, PR și HER2 este prezentată în tabel 1. La contrastarea probelor pre și post-tratament, nici ER, PR, nici HER2 nu s-au schimbat semnificativ (testul Wilcoxon pentru perechi de rang semnat P = 0,68, P = 0,19 și P = 0,08 pentru ER, PR și respectiv HER; Tabel 2) și s-a reținut ipoteza nulă a expresiei egale înainte și după tratamentul cu statine.

tabelul 2

Modificarea exprimării tumorii de la valoarea inițială (adică înainte de tratamentul cu atorvastatină) până la momentul intervenției chirurgicale (adică după tratamentul cu atorvastatină)

	Perechi complete	In scadere	Nealterat	Crescând	Valoarea P
ESTE	n =  30	2	25	3	0,68
relatii cu publicul	n =  30	3	21	6	0,19
HER2	n =  29	7	20	2	0,08
Fracția nucleară ciclină D1	n =  30	4	19	7	0,12
Intensitatea nucleară ciclină D1	n =  30	14	13	3	0,008*
Ciclina D1 intensitatea citoplasmatică	n =  30	10	14	6	0,48
fracția nucleară p27	n =  33	2	22	9	0,03
p27 intensitatea nucleară	n =  33	9	18	6	0,35
p27 intensitatea citoplasmatică	n =  33	3	18	12	0,02

Deschide într-o fereastră separată

Valorile P din testul Wilcoxon pentru perechile semnate.

Receptorul de estrogen ER, receptorul de progesteron PR, receptorul 2 al factorului de creștere epidermic uman HER2.

* Semnificativ chiar și după ajustarea Bonferroni pentru teste multiple în cadrul markerului, P = 0,02.

Modificări ale expresiei ciclinei D1

Evaluarea imunohistochimică a ciclinei D1 a fost realizabilă în 30 din cele 42 de probe perechi limitate de o cantitate insuficientă de țesut tumoral în biopsiile de bază rămase. Masa 3prezintă expresia ciclinei D1 în probele de pretratare. O comparație a expresiei ciclinei D1 între probele pre și post-tratament este prezentată în figura 2. În general, majoritatea probelor au exprimat ciclina D1. Cu toate acestea, intensitatea nucleară a expresiei proteinei a fost semnificativ scăzută (P = 0,008, testul Wilcoxon cu perechi semnate) după tratamentul cu statine (Tabel 2). În plus, expresia ciclinei D1 a fost evaluată în ceea ce privește fracția de nuclee colorate, precum și intensitatea colorării citoplasmatice, dar nici fracția nucleară, nici intensitatea citoplasmatică nu s-au schimbat semnificativ în urma tratamentului. Nu a fost găsită nicio asociere semnificativă între caracteristicile tumorii pre-tratament în legătură cu modificarea ciclinei D1 după tratamentul cu atorvastatină (Fișier suplimentar 3 : Tabelul S1).

Tabelul 3

Expresia tumorii ciclinei D1 și p27 în cadrul pre-tratament

Pacienții au finalizat toate părțile studiului	n = 42
Fracția nucleară ciclină D1 ( n  = 30)
Negativ	2 (7%)
Scăzut (1-50%)	12 (40%)
Ridicat (51-100%)	16 (53%)
Intensitatea nucleară ciclină D1 ( n  = 30)
Negativ	2 (7%)
Slab	5 (12%)
Moderat	14 (33%)
Puternic	9 (30%)
Intensitatea citoplasmatică a ciclinei D1 ( n  = 30)
Negativ	11 (37%)
Slab	14 (47%)
Moderat	2 (7%)
Puternic	3 (10%)
fracția nucleară p27 ( n  = 33)
Negativ	0
Scăzut (1-50%)	8 (24%)
Ridicat (51-100%)	25 (76%)
p27 intensitatea nucleară ( n  = 33)
Negativ	0
Slab	3 (9%)
Moderat	18 (55%)
Puternic	12 (36%)
p27 intensitatea citoplasmatică ( n  = 33)
Negativ	17 (52%)
Slab	14 (42%)
Moderat	2 (6%)
Puternic	0

Deschide într-o fereastră separată

Figura 2

Modificarea exprimării tumorii a ciclinei D1 de la valoarea inițială (adică înainte de tratamentul cu atorvastatină) până la momentul intervenției chirurgicale (adică după tratamentul cu atorvastatină). A) Fracția de nuclee colorate; B) Intensitatea nucleară; C) Intensitatea citoplasmatică. Pentru a reduce problema suprapunerii complet a liniilor în diagrama spaghetti, pentru fiecare pereche de probe pre/post-tratament a fost adăugat un număr aleator dintr-o distribuție uniformă pe intervalul [−0,15, 0,15], deplasând linia corespunzătoare cu cel mult 15 %, în sus sau în jos, dintr-un pas pe scara scorului cu valori întregi.

Modificări ale expresiei p27

Evaluarea imunohistochimică a p27 ar putea fi efectuată pentru 33 din cele 42 de probe de tumoră pereche. Înainte de tratamentul cu atorvastatină, toate probele au demonstrat celule tumorale care exprimă p27 într-o măsură diferită, așa cum se arată în tabel. 3. În urma tratamentului cu atorvastatină a existat o creștere semnificativă a fracției de celule tumorale care exprimă p27 (P = 0,03, testul Wilcoxon cu perechi semnate, Tabel 2și Figura 3). Intensitatea nucleară a p27 nu sa schimbat semnificativ (P = 0,35). În plus, intensitatea citoplasmatică a p27 a fost semnificativ crescută după tratamentul cu atorvastatină (P = 0,02, testul Wilcoxon cu perechi semnate). Caracteristicile inițiale ale tumorii în legătură cu modificarea expresiei p27 după tratamentul cu atorvastatină sunt rezumate în Fișierul suplimentar 4 : Tabelul S2, pentru care nu s-au găsit asocieri semnificative.

Figura 3

Modificarea exprimării tumorii a p27 de la valoarea inițială (adică înainte de tratamentul cu atorvastatină) până la momentul intervenției chirurgicale (adică după tratamentul cu atorvastatină). A) Fracția de nuclee colorate; B) Intensitatea nucleară; C) Intensitatea citoplasmatică. Pentru a reduce problema suprapunerii complet a liniilor în diagrama spaghetti, pentru fiecare pereche de probe pre/post-tratament a fost adăugat un număr aleator dintr-o distribuție uniformă pe intervalul [−0,15, 0,15], deplasând linia corespunzătoare cu cel mult 15 %, în sus sau în jos, dintr-un pas pe scara scorului cu valori întregi.

Corelația dintre modificarea Ki67 și modificarea ciclinei D1 sau p27

Corelația lui Spearman a fost utilizată pentru a evalua dacă o modificare a expresiei ciclinei D1 sau p27 a fost însoțită de o modificare a proliferării determinată de Ki67. Am observat că o scădere a Ki67 a corespuns pozitiv cu o scădere a intensității citoplasmatice a ciclinei D1 (N = 25, P = 0,03, rho Spearman = 0,43), așa cum este ilustrat în figura 4. Nu au fost detectate asocieri semnificative între scăderea Ki67 și modificarea fracției nucleare sau intensității nucleare a ciclinei D1 sau modificarea Ki67 și schimbarea p27, indiferent de localizarea celulară sau intensitatea colorării.

Figura 4

Corelația dintre modificarea Ki67 și modificarea ciclinei D1 (intensitatea citoplasmatică) după tratamentul cu atorvastatină. Culoarea markerului și umplerea reprezintă scorarea imunohistochimică a intensității citoplasmatice a ciclinei D1 în probele de pretratament; cercuri roșii umplute (intensitate ciclină D1 puternică), cercuri goale roșii (internitate ciclină D1 moderată), cercuri goale verzi (intensitate ciclină D1 săptămâna), cercuri verzi pline (fără expresie ciclină D1).

expresia ARNm a genelor asociate proliferării

Inițial, am comparat expresia CCND1 și CDKN1B între probele pereche pre și post-tratament. Au fost disponibile date de bună calitate privind expresia genelor pentru douăzeci și cinci de perechi de tumori; nu a fost observată nicio diferență semnificativă statistic în exprimarea acestor gene. Apoi, a fost efectuată o sub-analiză care compară nivelurile de ARNm ale CCND1 și CDKN1B după împărțirea probelor în două grupuri pe baza modificărilor expresiei Ki67, așa cum a fost evaluată de IHC. Expresia Ki67 a fost scăzută în 15 eșantioane, în timp ce 10 eșantioane au arătat o expresie crescută așa cum a fost raportat anterior [ 15 ]. Au fost efectuate analize separate pentru probele pre și post-tratament. După cum este ilustrat în figura 5A, expresia CCND1 în probele pre-tratament a fost corelată semnificativ cu răspunsul în proliferarea celulelor tumorale (P = 0,02; Mann-Whitney). În mod corespunzător, în probele post-tratament, a fost observată o expresie CCND1 marginal mai mică în rândul tumorilor care răspund cu o scădere a Ki67 în comparație cu tumorile cu o creștere a Ki67 (Figura 5B; P = 0,08; Mann-Whitney). Expresia ARNm CDKN1B nu a diferit semnificativ între tumorile care răspund cu un răspuns Ki67 sau nu (Figura 5CD; P = 0,3, 0,06: Mann–Whitney).

Figura 5

Exprimarea tratamentului cu CCND1 și CDKN1B pre și post-atorvastatină, împărțită în tumori care răspund cu o scădere sau creștere a proliferării (Ki67) după tratamentul cu statine. A) Expresia CCND1 pre-tratament, B) Expresia CCND1 post-tratament, C) Expresia CDKN1B pre-tratament, D) Expresia CDKN1B post-tratament.

Mergi la:

Discuţie

În studiul de față, am investigat efectele administrării pe termen scurt a unei doze mari de atorvastatină asupra markerilor patologici convenționali ai cancerului de sân ER, PR, HER2, precum și asupra regulatorilor ciclului celular ciclin D1 și p27. Rezultatele noastre indică faptul că expresia ER, PR și HER2 rămâne stabilă după tratamentul cu atorvastatină. Cu toate acestea, s-a observat o scădere semnificativă a expresiei ciclinei D1 și o creștere semnificativă a expresiei p27, ceea ce indică faptul că efectele anti-proliferative ale statinelor pot fi determinate de efectele de reglare a ciclului celular ale ciclinei D1 și p27.

Există un interes în creștere pentru statine, datorită efectelor lor care se extind dincolo de capacitatea lor bine-cunoscută de scădere a lipidelor [ 3 ]. După cum sa raportat anterior din acest studiu, o scădere semnificativă a proliferării tumorii, în ceea ce privește scăderea expresiei Ki67, a fost observată în special în sub-setul de tumori care exprimă HMGCR la momentul inițial [ 15 ]. Această diferență de proliferare poate fi determinată de modificări ale regulatorilor ciclului celular ciclin D1 și p27, așa cum a fost abordat în acest studiu. S-a propus că efectele anti-proliferative și pro-apoptotice ale statinelor se datorează inhibării intermediarilor izoprenoizi din aval, cum ar fi farnesil-pirofosfatul (FPP) și geranil-geranil-pirofosfatul (GGPP) [ 30 – 32 ].]. FPP și GGPP sunt molecule care modifică post-translațional un număr de proteine ​​prin crearea unui domeniu hidrofob, permițând astfel proteinelor să se ancoreze la membranele celulare și să își îndeplinească funcțiile normale, un proces cunoscut sub numele de prenilarea proteinelor [ 33 ]. Prenilarea proteinelor este necesară pentru activarea multor proteine ​​care participă la căile de semnalizare de care depind tumorile, cum ar fi superfamilia RAS/Rho. Căile dependente de RAS reglează expresia atât a p27, cât și a ciclinei D1, asamblarea ciclinei D1 cu CDK4/6 și reglarea, transcripția și stabilizarea ciclinei D1 induse de factorul de creștere [ 34 ].

În concordanță cu rezultatele noastre, s-a demonstrat că statinele inhibă creșterea celulelor, cu stoparea G1, ceea ce duce la o tranziție redusă la fazele S și G2/M ale ciclului celular [ 35 ]. Atât ciclina D1 cât și p27 sunt implicate în reglarea acestor tranziții, ciclina D1 prin asocierea cu CDK4 și CDK6 și p27 prin interacțiunea cu complexele CDK2/ciclină E, CDK2/ciclină A și CDK4/6-ciclină D. O scădere a ciclinei D1 presupune că p27 este eliberat din complexul CDK4/6-ciclină D și, în schimb, este capabil să se asambla cu și să inhibe CDK2, promovând astfel stoparea ciclului celular și inhibarea proliferării [ 24 ].]. Acest lucru sugerează că o oprire a ciclului celular indus de statine la G1 ar putea fi rezultatul unei scăderi a expresiei ciclinei D1 și o creștere corespunzătoare a p27, așa cum sugerează datele noastre. Studiile anterioare in vitro au arătat rezultate similare cu o reglare în sus indusă de statine a p27 [ 36-38 ] și niveluri reduse de ciclină D1 [ 39 ] în diferite linii celulare tumorale . Ciclina D1 și p27 sunt ambele reglate de o multitudine de căi diferite de transducție a semnalului [ 25 , 40 ]], iar mecanismele care stau la baza scăderii observate a ciclinei D1 și creșterea p27 în acest studiu nu sunt evidente. Având în vedere efectele sugerate ale statinelor asupra regulatorilor ciclului celular și aprobarea recentă a unui inhibitor CDK4/6 pentru tratamentul de primă linie al cancerului mamar avansat ER pozitiv [ 41 ], studii suplimentare care examinează potențialele efecte sinergice ale statinelor și inhibitorilor CDK4/6. ar avea o importanță clinică.

Expresia biomarkerilor stabiliți clinic, cum ar fi ER, PR și HER2, a fost evaluată atât în ​​probe pre- și post-tratament pentru a stabili dacă acești markeri au fost afectați de tratamentul cu statine. Marea majoritate a perechilor de mostre au rămas neschimbate. Recent, sa demonstrat că metabolitul colesterolului 27-hidroxicolesterol (27HC) crește creșterea dependentă de ER în modelele de șoarece de cancer de sân [ 42 ]. În domeniul de cercetare endocrinologic, 27HC a fost legat de o scădere a densității minerale osoase, în parte datorită capacității sale de a se lega și de a modula activitatea transcripțională a ER [ 43 ]. Un studiu in vitro a arătat că simvastatina a exercitat efecte osteoinductoare, parțial realizate printr-o creștere a expresiei ER [ 44 ].]. În ceea ce privește HER2, semnalizarea prin acest receptor este dependentă de conținutul de colesterol al plutelor lipidice [ 45 ]. Astfel, teoretic, statinele pot permite modificări ale expresiei atât a receptorilor de steroizi, cât și a HER2. Astfel de modificări nu au fost detectate în acest studiu. Cu toate acestea, durata tratamentului de numai două săptămâni ar putea fi insuficientă pentru a induce modificări ale expresiei ER sau PR, datorită naturii lor relativ stabile [ 46 , 47 ].]. Absența unei modificări semnificative în expresia ER, PR și HER2 ar putea fi de interes clinic, indicând faptul că tratamentul cu statine poate fi administrat în siguranță la pacientele cu cancer de sân, fără a modifica markerii de prognostic și de predicție de tratament utilizați clinic. În evaluările imunohistochimice ale ciclinei D1 și p27, expresia a fost punctată atât pentru procentul de nuclee pozitive, cât și pentru intensitatea nucleară și pentru intensitatea citoplasmatică. În prezent, sistemele de notare stabilite pentru evaluarea imunohistochimică a ciclinei D1 și p27 nu sunt disponibile. Într-o recenzie a lui Chu et al. , [ 25] majoritatea studiilor de prognostic au punctat p27 pe baza procentului de nuclei tumorali pozitivi, cu diferite limite. Alții au punctat atât procentul de nuclee pozitive, cât și intensitatea colorării. Cu toate acestea, majoritatea studiilor au omis notarea expresiei citoplasmatice a p27. În acest studiu, evaluările imunohistochimice au demonstrat modificări semnificative în ceea ce privește intensitatea nucleară cu ciclină D1, fracțiunea de celule colorate cu p27 și intensitatea citoplasmatică a p27. Atât ciclina D1 cât și p27 își exercită efectele asupra controlului tranziției G1/S atunci când sunt localizate în nucleu [ 25 , 48 ].] O scădere a ciclinei D1 are ca rezultat p27 să nu mai fie sechestrată de complexul CDK4/6-ciclină D în aceeași măsură. Datele sugerează că celula favorizează menținerea unor niveluri scăzute de p27 în spațiul nuclear și, ulterior, localizează greșit p27 în compartimentul citoplasmatic atunci când nivelurile de p27 nuclear sunt crescute [ 24 ], ceea ce poate explica creșterea concomitentă a expresiei p27 atât în ​​​​nucleul nuclear. și compartimentele citoplasmatice din acest studiu. Foarte important, datele din studiile funcționale sugerează că translocarea citoplasmatică a p27 își poate schimba funcția în celulele tumorale [ 49 ], promovând astfel alte funcții opuse rolului său supresor tumoral, de exemplu migrarea celulelor [ 50 ]. O revizuire a lui Guan et al.a concluzionat că sunt necesare studii suplimentare pentru a înțelege rolul p27 citoplasmatic în cancerul de sân [ 26 ]. Cu toate acestea, semnificația localizării celulare a p27 nu poate fi explicată pe baza rezultatelor acestui studiu. Intensitatea citoplasmatică a ciclinei D1 a fost asociată cu Ki67 (Figura 4), deși expresia nu s-a schimbat semnificativ în timpul tratamentului. În timpul G1, ciclina D1 se acumulează în nucleu, dar este exportată în spațiul citoplasmatic atunci când celula intră în faza S [ 48 ], implicând posibil o colorare mai intensă a ciclinei D1 citoplasmatice în tumorile agresive cu proliferare ridicată, o corelație găsită în adenocarcinomul pancreatic. 51 ], și explicând sugestiv corelația pozitivă cu Ki67. În plus, au fost efectuate analize de expresie genică a probelor tumorale pereche. Doar modificări marginale ale expresiei CCDN1 și CDKN1B au fost observate după două săptămâni de tratament cu statine. Cu toate acestea, modificările dependente de ciclul celular în ciclina D1 și p27 pot apărea ambele prin alte mecanisme, inclusiv dereglarea post-transcripțională. [ 23 , 25]. S-a constatat că expresia genei CCND1 este corelată semnificativ cu răspunsul în proliferarea celulelor tumorale, indicând o diferență în răspunsul la statine între cancerele cu sau fără supraexpresie CCND1.

Dacă și cum doza sau durata tratamentului cu statine influențează rezultatele prezentate aici nu este clar și nu poate fi elucidat în continuare din acest studiu, deoarece toți pacienții din studiu au primit atorvastatină timp de două săptămâni la doza maximă recomandată pentru a optimiza administrarea medicamentului în celule de cancer mamar. Nu s-au observat evenimente adverse grave și doar un pacient s-a retras din studiu din cauza efectelor secundare, ceea ce indică faptul că tratamentul cu doze mari de atorvastatină a fost bine tolerat în timpul administrării de două săptămâni. Pentru a obține mai multe informații cu privire la efectele induse de statine asupra expresiei regulatorilor ciclului celular, poate fi necesară o durată prelungită a tratamentului pentru a demonstra efectul maxim asupra regulatorilor ciclului celular. Cu toate acestea, din cauza considerentelor etice, acest studiu de fereastră nu a putut prelungi timpul de la diagnostic până la intervenție chirurgicală, care a restrâns durata tratamentului cu statine la două săptămâni. Astfel, așa cum este implicat în designul studiului și scopul studiilor cu fereastră, aceste studii pot genera ipoteze adecvate care ar trebui evaluate, de preferință, în studiile de fază III mai mari.52 ]. După cum au propus recent de Ahern și colab., dovezile existente care susțin un efect protector al statinelor asupra prognosticului cancerului de sân sunt considerate suficiente pentru a lansa un studiu clinic de fază III cu statine în cadru adjuvant [ 1 ].

Mergi la:

Concluzii

În concluzie, rezultatele acestui studiu cu fereastră de oportunitate indică un efect indus de statine asupra regulatorilor centrali ai ciclului celular, în ceea ce privește o expresie reglată în sus a supresorului tumoral p27 și o expresie reglată în jos a ciclinei oncogene D1 în cancerul de sân. . Rezultatele sunt concordante cu rezultatele studiilor anterioare și sugerează că efectele de reglare a ciclului celular pot contribui la efectele anti-proliferative prin ciclina D1 și p27.

Mergi la:

Mulțumiri

Dorim să ne exprimăm recunoștința profundă față de asistenta medicală responsabilă de studiu, doamna Charlotte Fogelström, pentru eforturile sale devotate și de încredere. În plus, dorim să mulțumim tuturor asistentelor și medicilor dedicați din Departamentul de Chirurgie și Departamentul de Patologie Clinică care au fost esențiale în timpul înscrierii la studiu. Mulțumirile noastre se adresează și doamnei Kristina Lövgren pentru asistența tehnică excelentă.

Sprijin financiar

Acest studiu a fost susținut de subvenții de la finanțarea guvernamentală a cercetării clinice de la Serviciile Naționale de Sănătate, Organizația suedeză pentru cancerul de sân (BRO) și Fundația doamnei Berta Kamprad.

Fișiere suplimentare

Fișier suplimentar 1: Figura S1. ^{(335K, pdf)}

Exemple de colorare imunohistochimică cu ciclină D1 cu expresie nucleară și citoplasmatică negativă (a) , expresie nucleară și citoplasmatică slabă (b) , expresie nucleară și citoplasmatică moderată (c) și, respectiv, expresie nucleară și citoplasmatică slabă (d) .Fișier suplimentar 2: Figura S2. ^{(244K, pdf)}

Exemple de colorare imunohistochimică p27 cu expresie nucleară slabă și citoplasmatică negativă (a) , nucleară moderată și citoplasmatică slabă (b) , nucleară moderată și citoplasmatică (c) și, respectiv, nucleară puternică și citoplasmatică moderată (d) .Fișier suplimentar 3: Tabelul S1. ^{(12K, xlsx)}

Caracteristicile tumorii de biopsie de bază în relație cu modificarea fracției nucleare ciclinei D1, intensitatea nucleară și intensitatea citoplasmatică, pre- până la post-atorvastatina.Fișier suplimentar 4: Tabelul S2. ^{(12K, xlsx)}

Caracteristicile tumorii de biopsie de bază în relație cu modificarea fracțiunii nucleare p27, intensitatea nucleară și intensitatea citoplasmatică, pre- până la post-atorvastatina.

Mergi la:

Note de subsol

Interese concurente

Autorii declară că nu au interese concurente.

Contribuțiile autorilor

MF a contribuit la analizele imunohistochimice și interpretarea datelor și la elaborarea manuscrisului. OB a participat la analizele expresiei genelor și la elaborarea manuscrisului. SK a contribuit la analiza și interpretarea datelor și la elaborarea manuscrisului. KJ a contribuit la conceperea și proiectarea studiului și la revizuirea manuscrisului. PB a efectuat analizele statistice și a revizuit manuscrisul. SV a contribuit la analiza și interpretarea datelor despre expresia genelor. DG a contribuit la colectarea datelor imunohistochimice și la revizuirea manuscrisului. IH a contribuit la achiziționarea de date și analize privind expresia genelor și la revizuirea manuscrisului. SB a condus studiul și a contribuit la achiziția, interpretarea și analiza datelor și la elaborarea manuscrisului.

Mergi la:

Informații despre colaborator

Maria Feldt, Email: es.ul.dem@tdlef.airam .

Olöf Bjarnadottir, Email: es.ul.dem@rittodanrajb.folo .

Succes Kimbung, E- mail: es.ul.dem@gnubmik.rekis .

Karin Jirström, E- mail: es.ul.dem@mortsrij.nirak .

Pär-Ola Bendahl, Email: es.ul.dem@lhadneb.alo-rap .

Srinivas Veerla, Email: es.ul.dem@alreev.savinirs .

Dorthe Grabau, Email: es.enaks@ubarg.ehtrod .

Ingrid Hedenfalk, E- mail: es.ul.dem@klafnedeh.dirgni .

Signe Borgquist, Email: es.ul.dem@tsiuqgrob.engis .

Mergi la:

Referințe

1. 

Ahern TP, Lash TL, Damkier P, Christiansen PM, Cronin-Fenton DP. Statine și prognosticul cancerului de sân: dovezi și oportunități. Lancet Oncol. 2014; 15 (10):e461–8. doi: 10.1016/S1470-2045(14)70119-6. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]2. 

Goldstein JL, Brown MS. Reglarea căii mevalonatului. Natură. 1990; 343 (6257):425–30. doi: 10.1038/343425a0. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]3. 

Bellosta S, Ferri N, Bernini F, Paoletti R, Corsini A. Non-lipid-related effects of statins. Ann Med. 2000; 32 (3): 164–76. doi: 10.3109 / 07853890008998823. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]4. 

Demierre MF, Higgins PD, Gruber SB, Hawk E, Lippman SM. Statine și prevenirea cancerului. Nat Rev Cancer. 2005; 5 (12):930–42. doi: 10.1038/nrc1751. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]5. 

Kuoppala J, Lamminpaa A, Pukkala E. Statine și cancer: o revizuire sistematică și meta-analiză. Eur J Cancer. 2008; 44 (15): 2122–32. doi: 10.1016/j.ejca.2008.06.025. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]6. 

Dale KM, Coleman CI, Henyan NN, Kluger J, White CM. Statine și riscul de cancer: o meta-analiză. JAMA. 2006; 295 (1):74–80. doi: 10.1001/jama.295.1.74. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]7. 

Desai P, Chlebowski R, Cauley JA, Manson JE, Wu C, Martin LW, et al. Analiza prospectivă a asocierii dintre utilizarea de statine și riscul de cancer de sân în inițiativa pentru sănătatea femeilor. Biomarkeri de epidemiol de cancer Prev. 2013; 22 (10):1868–76. doi: 10.1158/1055-9965.EPI-13-0562. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]8. 

Ahern TP, Pedersen L, Tarp M, Cronin-Fenton DP, Garne JP, Silliman RA și colab. Prescripții de statine și risc de recidivă a cancerului de sân: un studiu de cohortă prospectiv la nivel național danez. J Natl Cancer Inst. 2011; 103 (19):1461–8. doi: 10.1093/jnci/djr291. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]9. 

El-Serag HB, Johnson ML, Hachem C, Morgana RO. Statinele sunt asociate cu un risc redus de carcinom hepatocelular la o cohortă mare de pacienți cu diabet. Gastroenterologie. 2009; 136 (5):1601–8. doi: 10.1053/j.gastro.2009.01.053. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]10. 

Clendening JW, Penn LZ. Dirijarea metabolismului celulelor tumorale cu statine. Oncogene. 2012; 31 (48):4967–78. doi: 10.1038/onc.2012.6. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]11. 

Campbell MJ, Esserman LJ, Zhou Y, Shoemaker M, Lobo M, Borman E și colab. Prevenirea creșterii cancerului de sân prin statine. Cancer Res. 2006; 66 (17):8707–14. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-05-4061. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]12. 

Nielsen SF, Nordestgaard BG, Bojesen SE. Utilizarea de statine și reducerea mortalității cauzate de cancer. N Engl J Med. 2012; 367 (19):1792–802. doi: 10.1056/NEJMoa1201735. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]13. 

Murtola TJ, Visvanathan K, Artama M, Vainio H, Pukkala E. Utilizarea statinelor și supraviețuirea cancerului de sân: un studiu de cohortă la nivel național din Finlanda. Plus unu. 2014; 9 (10) doi: 10.1371/journal.pone.0110231. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]14. 

Garwood ER, Kumar AS, Baehner FL, Moore DH, Au A, Hylton N, și colab. Fluvastatina reduce proliferarea și crește apoptoza la femeile cu cancer de sân de grad înalt. Tratament pentru cancerul de sân. 2010; 119 (1):137–44. doi: 10.1007/s10549-009-0507-x. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]15. 

Bjarnadottir O, Romero Q, Bendahl PO, Jirstrom K, Ryden L, Loman N, et al. Direcționarea HMG-CoA reductazei cu statine într-un studiu privind cancerul de sân cu o fereastră de oportunitate. Tratament pentru cancerul de sân. 2013; 138 (2):499–508. doi: 10.1007/s10549-013-2473-6. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]16. 

Luporsi E, Andre F, Spyratos F, Martin PM, Jacquemier J, Penault-Llorca F, et al. Ki-67: nivelul de dovezi și considerații metodologice pentru rolul său în managementul clinic al cancerului de sân: revizuire analitică și critică. Tratament pentru cancerul de sân. 2012; 132 (3):895–915. doi: 10.1007/s10549-011-1837-z. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]17. 

Lopez F, Belloc F, Lacombe F, Dumain P, Reiffers J, Bernard P, et al. Modalități de sinteză a antigenului Ki67 în timpul stimulării limfocitelor. Citometrie. 1991; 12 (1):42–9. doi: 10.1002/cyto.990120107. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]18. 

Malumbres M, Barbacid M. kinaze dependente de ciclină de mamifere. Trends Biochem Sci. 2005; 30 (11): 630–41. doi: 10.1016/j.tibs.2005.09.005. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]19. 

Morgan DO. Kinaze dependente de ciclină: motoare, ceasuri și microprocesoare. Annu Rev Cell Dev Biol. 1997; 13 :261–91. doi: 10.1146/annurev.cellbio.13.1.261. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]20. 

Buckley MF, Sweeney KJ, Hamilton JA, Sini RL, Manning DL, Nicholson RI, et al. Exprimarea și amplificarea genelor ciclinei în cancerul de sân uman. Oncogene. 1993; 8 (8):2127–33. [ PubMed ] [ Google Scholar ]21. 

Massague J. Controlul ciclului celular G1 și cancerul. Natură. 2004; 432 (7015):298–306. doi: 10.1038/nature03094. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]22. 

Musgrove EA, Lee CS, Buckley MF, Sutherland RL. Inducerea ciclinei D1 în celulele cancerului de sân scurtează G1 și este suficientă pentru ca celulele oprite în G1 să finalizeze ciclul celular. Proc Natl Acad Sci US A. 1994; 91 (17):8022–6. doi: 10.1073/pnas.91.17.8022. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]23. 

Arnold A, Papanikolaou A. Ciclina D1 în patogeneza cancerului de sân. J Clin Oncol. 2005; 23 (18):4215–24. doi: 10.1200/JCO.2005.05.064. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]24. 

Blain SW. Activarea și oprirea activității ciclin D-Cdk4 kinazei. Ciclul celulei. 2008; 7 (7):892–8. doi: 10.4161/cc.7.7.5637. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]25. 

Chu IM, Hengst L, Slingerland JM. Inhibitorul Cdk p27 în cancerul uman: potențial de prognostic și relevanță pentru terapia anticancer. Nat Rev Cancer. 2008; 8 (4):253–67. doi: 10.1038/nrc2347. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]26. 

Guan X, Wang Y, Xie R, Chen L, Bai J, Lu J și colab. p27 (Kip1) ca factor de prognostic în cancerul de sân: o revizuire sistematică și meta-analiză. J Cell Mol Med. 2010; 14 (4):944–53. doi: 10.1111/j.1582-4934.2009.00730.x. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]27. 

McShane LM, Altman DG, Sauerbrei W, Taube SE, Gion M, Clark GM. Recomandări de raportare pentru studiile de prognostic tumoral MARKer (REMARK) Breast Cancer Res Treat. 2006; 100 (2):229–35. doi: 10.1007/s10549-006-9242-8. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]28. 

Barbosa-Morais NL, Dunning MJ, Samarajiwa SA, Darot JF, Ritchie ME, Lynch AG, et al. O conductă de re-adnotare pentru Illumina BeadArrays: îmbunătățirea interpretării datelor despre expresia genelor. Acizi nucleici Res. 2010; 38 (3) doi: 10.1093/nar/gkp942. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]29. 

Irizarry RA, Hobbs B, Collin F, Beazer-Barclay YD, Antonellis KJ, Scherf U, et al. Explorarea, normalizarea și rezumatele datelor la nivel de sondă ale matricei de oligonucleotide de înaltă densitate. Biostatistica. 2003; 4 (2):249–64. doi: 10.1093/biostatistics/4.2.249. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]30. 

Cimino M, Gelosa P, Gianella A, Nobili E, Tremoli E, Sironi L. Statins: multiple mechanisms of action in the ischemic brain. Neuroștiință. 2007; 13 (3):208–13. doi: 10.1177/1073858406297121. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]31. 

Zhou Q, Liao JK. Efectele pleiotrope ale statinelor. – Cercetare de bază și perspective clinice. Circ J. 2010; 74 (5):818–26. doi: 10.1253/circj.CJ-10-0110. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]32. 

Liao JK, Laufs U. Efectele pleiotropice ale statinelor. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2005; 45 :89–118. doi: 10.1146/annurev.pharmtox.45.120403.095748. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]33. 

Zhang FL, Casey PJ. Prenilarea proteinelor: mecanisme moleculare și consecințe funcționale. Annu Rev Biochem. 1996; 65 :241–69. doi: 10.1146/annurev.bi.65.070196.001325. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]34. 

Coleman ML, Marshall CJ, Olson MF. GTPazele RAS și RHO în reglarea ciclului celular în faza G1. Nat Rev Mol Cell Biol. 2004; 5 (5):355–66. doi: 10.1038/nrm1365. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]35. 

Keyomarsi K, Sandoval L, Band V, Pardee AB. Sincronizarea celulelor tumorale și normale de la G1 la mai multe cicluri celulare de către lovastatin. Cancer Res. 1991; 51 (13):3602–9. [ PubMed ] [ Google Scholar ]36. 

Wachtershauser A, Akoglu B, Stein J. mevastatina inhibitor de HMG-CoA reductază sporește efectul inhibitor al creșterii butiratului în linia celulară de carcinom colorectal Caco-2. Carcinogeneza. 2001; 22 (7):1061–7. doi: 10.1093/carcin/22.7.1061. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]37. 

Zhong WB, Hsu SP, Ho PY, Liang YC, Chang TC, Lee WS. Lovastatina inhibă proliferarea celulelor anaplazice de cancer tiroidian prin reglarea în sus a p27 prin interferarea cu calea mediată de Rho/ROCK. Biochem Pharmacol. 2011; 82 (11):1663–72. doi: 10.1016/j.bcp.2011.08.021. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]38. 

Relja B, Meder F, Wilhelm K, Henrich D, Marzi I, Lehnert M. Simvastatin inhibă creșterea celulelor și induce apoptoza și oprirea ciclului celular G0/G1 în celulele canceroase hepatice. Int J Mol Cell Med. 2010; 26 (5):735–41. [ PubMed ] [ Google Scholar ]39. 

Mohammed A, Qian L, Janakiram NB, Lightfoot S, Steele VE, Rao CV. Atorvastatina întârzie progresia leziunilor pancreatice către carcinom prin reglarea semnalizării PI3/AKT la șoarecii p48Cre/+ LSL-KrasG12D/+. Int J Cancer. 2012; 131 (8):1951–62. doi: 10.1002/ijc.27456. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]40. 

Lavoie JN, L’Allemain G, Brunet A, Muller R, Pouyssegur J. Expresia ciclinei D1 este reglată pozitiv de calea p42/p44MAPK și negativ de calea p38/HOGMAPK. J Biochim. 1996; 271 (34):20608–16. [ PubMed ] [ Google Scholar ]41. 

Dhillon S. Palbociclib: Prima aprobare globală. Droguri. 2015. doi:10.1007/s40265-015-0379-9 [ PubMed ]42. 

Nelson ER, Wardell SE, Jasper JS, Park S, Suchindran S, Howe MK și colab. 27-Hidroxicolesterolul leagă hipercolesterolemia și patofiziologia cancerului de sân. Ştiinţă. 2013; 342 (6162):1094–8. doi: 10.1126/science.1241908. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]43. 

Nelson ER, DuSell CD, Wang X, Howe MK, Evans G, Michalek RD, et al. Oxisterolul, 27-hidroxicolesterolul, leagă metabolismul colesterolului de homeostazia osoasă prin acțiunile sale asupra receptorilor X de estrogen și ficat. Endocrinologie. 2011; 152 (12):4691–705. doi: 10.1210/en.2011-1298. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]44. 

Park JB, Zhang H, Lin CY, Chung CP, Byun Y, Park YS și colab. Simvastatina menține viabilitatea osteoblastică în timp ce promovează diferențierea prin reglarea parțială a expresiilor receptorilor de estrogen alfa. J Surg Res. 2012; 174 (2):278–83. doi: 10.1016/j.jss.2010.12.029. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]45. 

Chen X, Resh MD. Depleția colesterolului din membrana plasmatică declanșează activarea independentă de ligand a receptorului factorului de creștere epidermic. J Biochim. 2002; 277 (51):49631–7. [ PubMed ] [ Google Scholar ]46. 

​​Robertson JF. Receptorul de estrogen: un fenotip stabil în cancerul de sân. Br J Cancer. 1996; 73 (1):5–12. doi: 10.1038/bjc.1996.2. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]47. 

Gomez-Fernandez C, Daneshbod Y, Nassiri M, Milikowski C, Alvarez C, Nadji M. Fenotipul receptorului de estrogen determinat imunohistochimic rămâne stabil în cancerul de sân recurent și metastatic. Am J Clin Pathol. 2008; 130 (6):879–82. doi: 10.1309/AJCPD1AO3YSYQYNW. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ][ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] 48. 

Baldin V, Lukas J, Marcote MJ, Pagano M, Draetta G. Ciclina D1 este o proteină nucleară necesară pentru progresia ciclului celular în G1. Genes Dev. 1993; 7 (5):812–21. doi: 10.1101/gad.7.5.812. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar49. 

Ishida N, Hara T, Kamura T, Yoshida M, Nakayama K, Nakayama KI. Fosforilarea p27Kip1 pe serină 10 este necesară pentru legarea sa de CRM1 și exportul nuclear. J Biochim. 2002; 277 (17):14355–8. [ PubMed ] [ Google Scholar ]50. 

Wu FY, Wang SE, Sanders ME, Shin I, Rojo F, Baselga J, et al. Reducerea p27 citosolic (Kip1) inhibă motilitatea celulelor canceroase, supraviețuirea și tumorigenitatea. Cancer Res. 2006; 66 (4):2162–72. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-05-3304. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]51. 

Lebe B, Sagol O, Ulukus C, Coker A, Karademir S, Astarcioglu H, et al. Importanța exprimării ciclinei D1 și Ki67 asupra comportamentului biologic al adenocarcinoamelor pancreatice. Pathol Res Pract. 2004; 200 (5):389–96. doi: 10.1016/j.prp.2004.02.010. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]52. 

Glimelius B, Lahn M. Trialuri în fereastră de oportunitate pentru a evalua activitatea clinică a noilor entități moleculare în oncologie. Ann Oncol. 2011; 22 (8):1717–25. doi: 10.1093/annonc/mdq622. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]