Transl Oncol. 2008 iulie; 1(2): 65–72. doi: 10.1593/tlo.08106 PMC2510818 PMID: 18633461
Nobuto Yamamoto , * Hirofumi Suyama , † și Nobuyuki Yamamoto *
Informații despre autor Note despre articol Informații privind drepturile de autor și licență Declinare a răspunderii
Abstract
Proteina serică Gc (cunoscută ca proteină de legare a vitaminei D 3 ) este precursorul principalului factor de activare a macrofagelor (MAF). Activitatea precursorului MAF a proteinei serice Gc a pacienților cu cancer de prostată a fost pierdută sau redusă deoarece proteina Gc a fost glicozilată de α- N seric.-acetilgalactosaminidaza (Nagalase) secretata de celulele canceroase. Prin urmare, macrofagele pacienților cu cancer de prostată care au proteina Gc glicozilată nu pot fi activate, ceea ce duce la imunosupresie. Tratamentul treptat al proteinei Gc purificate cu β-galactozidază și sialidază imobilizate a generat cel mai puternic MAF (numit GcMAF) descoperit vreodată, care nu produce niciun efect advers la om. Macrofagele activate de GcMAF dezvoltă o variație considerabilă a receptorilor care recunosc anormalitatea suprafeței celulelor maligne și sunt extrem de tumoricide. Șaisprezece pacienți nonanemici cu cancer de prostată au primit administrare săptămânală de 100 ng de GcMAF. Pe măsură ce activitatea precursorului MAF a crescut, activitatea lor seric Nagalase a scăzut. Deoarece activitatea serică a Nagalazei este proporțională cu sarcina tumorală, întreaga analiză a cursului de timp pentru terapia GcMAF a fost monitorizată prin măsurarea activității Nagalase serice. După 14 până la 25 de administrări săptămânale de GcMAF (100 ng/săptămână), toți cei 16 pacienți au avut niveluri serice foarte scăzute de Nagalase, echivalente cu cele ale valorilor de control sănătoase, ceea ce indică faptul că acești pacienți nu prezintă tumori. Nu a apărut nicio recidivă timp de 7 ani.
Introducere
Cancerul de prostată este cea mai frecventă afecțiune malignă în rândul bărbaților în vârstă. Tratamentul cancerului metastatic cu terapie hormonală controlează temporar simptomele la 70% până la 80% dintre pacienți [ 1 ]. După o perioadă de remisie, apare invariabil o recidivă. După progresie, nu este disponibil un tratament eficient, iar supraviețuirea mediană este de aproximativ 6 luni [ 2 ]. Prin urmare, boala metastatică progresivă refractară la hormoni rămâne o provocare terapeutică. Având în vedere mecanismele despre care se crede că sunt implicate în dezvoltarea bolii recurente, efortul viguros este concentrat pe identificarea tratamentelor nonendocrine [ 2-5 ].]. Cu toate acestea, abordările terapeutice capabile de tumoricide la celulele canceroase hormon-refractare și de îmbunătățire a calității vieții sunt limitate la o anumită imunoterapie fără a provoca efecte adverse.
Administrarea intratumorală a bacilului Calmette-Guérin (BCG) sau a altor celule bacteriene poate duce la regresia tumorilor locale și metastazate, sugerând dezvoltarea imunității specifice împotriva tumorilor [ 6,7 ]. Cu toate acestea, administrarea de BCG în țesuturile normale necanceroase nu are ca rezultat niciun efect semnificativ asupra tumorilor. Țesuturile normale necanceroase inflamate eliberează metaboliți lipidici membranosi, lizofosfatidilcolină (lyso-Pc) și alte lizofosfolipide, care activează eficient macrofagele [ 8-10 ]. Țesuturile canceroase inflamate eliberează și metaboliți lipidici, lizoalchilfosfolipide și alchilgliceroli, deoarece membranele celulelor canceroase conțin alchilfosfolipide [ 11–13 ].]. Atât lizoalchilfosfolipidele, cât și alchilglicerolii sunt de aproximativ 400 de ori mai puternici agenți de activare a macrofagelor decât lizofosfolipidele în ceea ce privește dozele minime necesare pentru activarea optimă a macrofagelor [ 12-16 ]. Acest lucru sugerează că macrofagele puternic activate pot ucide celulele canceroase și explică, de asemenea, de ce inflamația intratumorală eradicează celulele canceroase [ 14,15 ].
Activarea macrofagelor derivate din inflamație este principalul proces de activare a macrofagelor, care necesită proteina serică Gc (cunoscută ca proteină de legare a vitaminei D 3 ) [ 17–19 ] și participarea limfocitelor B și T [ 8–10,20–24 ]. Proteina Gc poartă o trizaharidă (figura 1) constând din N -acetilgalactozamină cu galactoză diramificată și terminale de acid sialic la 420 reziduu de treonină [ 20–24 ]. Această oligozaharidă este hidrolizată de p-galactozidaza membranoasă inductibilă ( Bgl i ) a limfocitelor B amorsate cu inflamație (sau tratate cu lizo-Pc) pentru a produce un factor de proactivare a macrofagelor. Aceasta este hidrolizată în continuare de Neu-1 sialidaza membranoasă a limfocitelor T pentru a produce MAF, proteina cu N -acetilgalactozamină ca zahăr rămas [ 20-24 ] (Figura 1 a). Astfel, proteina Gc este precursorul principalului MAF [ 20-24 ]. Cu toate acestea, activitatea precursorului MAF a proteinei Gc a pacientului cu cancer de prostată este pierdută sau redusă, deoarece proteina Gc din serul lor este glicozilată de α – N -acetilgalactosaminidaza (Nagalase) serica secretată de celulele canceroase [ 25,26 ] (Figura 1 b). Proteina Gc glicozilată nu poate fi convertită în MAF, rezultând nicio activare a macrofagelor. Macrofagele sunt principalele celule fagocitare și prezentatoare de antigen. Deoarece activarea macrofagelor pentru fagocitoză și prezentarea antigenului la limfocitele B și T este primul pas indispensabil în dezvoltarea imunității umorale și celulare, lipsa activării macrofagelor duce la imunosupresie [ 25-30 ]. Pacienții cu cancer avansat au activități Nagalase serice ridicate, ducând la lipsa activării macrofagelor și la imunosupresie severă, ceea ce explică de ce pacienții cu cancer mor cu infecție copleșitoare (de exemplu, pneumonie) [ 25,26 ].
Ilustrarea schematică a formării MAF (a), deglicozilarea proteinei Gc (b) și tratamentul treptat al proteinei Gc cu β-galactozidază și sialidază imobilizate pentru a genera GcMAF (c). Asteriscul (*) indică celulele B amorsate de inflamație: celulele B pot fi tratate cu un metabolit lipidic membranos inflamat, de exemplu, lizofosfatidilcolină.
Tratamentul treptat al proteinei Gc purificate cu β-galactozidază și sialidază imobilizate generează cel mai puternic MAF (numit GcMAF) [ 20-24 ] (Figura 1 c), care nu produce efecte adverse la om [ 14,15,23,27 ]. Administrarea a 100 ng de GcMAF la om are ca rezultat activarea maximă a macrofagelor cu indice de ingestie crescut de 30 de ori și capacitatea de generare a superoxidului de 15 ori crescută [ 23 ] în 3,5 ore. GcMAF are, de asemenea, o capacitate mitogenă puternică de a acționa asupra celulelor progenitoare mieloide, ducând la o creștere de 40 de ori a numărului de celule macrofage sistemice în 4 zile [ 23,31 ]. Astfel de macrofage sistemice puternic activate sunt recrutate chimiotactic în leziunile inflamate prin creșterea de 180 de ori a numărului de celule macrofage [ 31 ].]. Macrofagele activate de GcMAF dezvoltă o variație considerabilă a receptorilor care recunosc anormalitatea suprafeței celulelor canceroase și ucid celulele canceroase [ 14,15,32-34 ]. Toate celulele maligne au anomalii ale membranei la suprafața lor celulară. O serie de antigene glicolipide, glicoproteice și mucine au fost identificate și desemnate ca antigene asociate tumorii pe suprafața celulei unei largi varietati de celule tumorale umane [ 35 ]. Când macrofagele umane au fost tratate in vitro cu 100 pg GcMAF/ml timp de 3 ore și s-a adăugat o linie celulară de cancer de prostată LNCaP cu un raport efector/țintă de 1,5, aproximativ 51% și 82% din celulele LNCaP au fost distruse în 4 și 18 ore. de incubație, respectiv [ 14,15 ]. Asta in vitrocapacitatea tumoridă a macrofagelor activate de GcMAF ne-a determinat să investigăm eficacitatea terapeutică a GcMAF pentru cancerul de prostată. Terapia GcMAF ca modalitate unică de remediu poate eradica cel mai eficient cancerul de sân și cancerul colorectal metastatic [ 34,36 ]. Deși, în ultimii ani, antigenul prostatic specific (PSA) a fost utilizat ca indice de diagnostic și prognostic pentru cancerul de prostată [ 37,38 ], este de dorit mai multă precizie a indicelui prognostic pentru eficacitatea terapeutică a GcMAF pentru pacienții cu cancer de prostată. Deoarece activitatea Nagalazei serice a pacienților cu cancer este direct proporțională cu sarcina tumorală [ 25,26,32,33 ], activitatea Nagalazei serice a fost utilizată eficient ca indice de diagnostic pentru o varietate de tipuri de cancer [ 14,15,25,26,32, 33,39] și ca indice de prognostic pentru radioterapie [ 25 ], rezecția chirurgicală a tumorilor [ 26 ] și terapia GcMAF pentru modele preclinice și clinice de adenocarcinom mamar [ 32-34 ] și cancere colorectale [ 36 ].
Materiale și metode
Produse chimice și reactivi
Soluția salină tamponată cu fosfat (PBS) a conținut 1 mM fosfat de sodiu și 0,15 M NaCI. Când monocitele din sângele periferic aderă la substratul vasului, ele se comportă ca macrofage care prezintă o sinteza crescută de hidrolaze. Pentru manipulare in vitroși cultivarea celulelor mononucleare din sângele periferic care conțin monocite/macrofage (macrofage pe scurt) și limfocite (celule B și T), a fost utilizat 0,1% mediu RPMI-1640 suplimentat cu albumină de ou (mediu EA). Serurile pentru izolarea proteinei Gc1 (izoforma majoră Gc) au fost donate de membrii institutului și au fost testate în mod obișnuit pentru a fi lipsite de virus folosind teste ELISA pentru anticorpi împotriva imunodeficienței umane și a virusurilor hepatitei B și C (Cambridge Biotechnology, Cambridge, Marea Britanie și Abbott Laboratories, Abbot Park, IL). Proteina Gc a fost purificată prin cromatografie de afinitate cu vitamina D [ 23,40 ]. β-galactozidaza și sialidaza au fost achiziționate de la Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, IN și au fost imobilizate pe Sepharose [ 21-23 ]. Lizofosfatidilcolină (liso-Pc) șip – nitrofenil N -acetil-a- d – galactozaminida au fost cumpărate de la Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO).
Procedura de pregătire a GcMAF
Serul a fost inactivat la căldură la 60°C timp de 1 oră și a fost amestecat cu sulfat de amoniu saturat 30% care precipită fracția de proteină Gc [ 41 ]. Precipitatul a fost dizolvat în PBS (pH 7,4) care conține 0,5% Triton X-100 și 0,3% tri – n -butil fosfat și a fost ținut peste noapte la temperatura camerei pentru a elimina contaminanții microbieni care conțineau lipide, inclusiv virușii înveliți, dacă există. Probele au fost precipitate cu sulfat de amoniu saturat 30%, dizolvate în tampon citrat la pH 4,0 şi păstrate peste noapte. Proteina Gc a fost purificată utilizând cromatografia de afinitate cu 25-hidroxivitamina D3 [ 40]. Această specificitate cromatografică față de proteina Gc dă proteină Gc extrem de pură și elimină toate contaminările posibile ale macromoleculelor. Analiza electroforetică a dovedit puritatea proteinei Gc (MW52.000). Incubarea treptată a proteinei Gc purificate cu β-galactozidază și sialidază imobilizate a produs, probabil, cel mai puternic MAF (GcMAF) descoperit vreodată [ 21-23 ] (Figura 1 c). Enzimele imobilizate au fost îndepărtate prin centrifugare. Astfel, GcMAF este pur și lipsit de contaminarea enzimelor. Produsul final, GcMAF, a fost filtrat printr-un filtru cu legare scăzută de proteine, Millex-HV (Millipore Corp., Bedford, MA) pentru sterilizare.
Deoarece structura moleculară a GcMAF este identică cu cea a MAF uman nativ (figura 1, a și c ), nu ar trebui să aibă efecte adverse asupra oamenilor. De fapt, numeroase administrări (de peste 10 ori pentru o perioadă de 3 până la 6 luni) de GcMAF (100–500 ng/om) la 12 oameni nu au prezentat semne de efecte adverse [ 15,23 ]. Doza optimă de GcMAF pentru om, pentru a obține capacitatea fagocitară cu indicele de ingestie crescut de 30 de ori și capacitatea de generare de superoxid de 15 ori crescută a monocitelor/macrofagelor din sângele periferic, sa dovedit a fi de aproximativ 100 ng/om. Controlul calității preparării GcMAF a fost efectuat pentru testele de activitate, sterilitate și siguranță.
Terapia GcMAF pentru pacienții cu cancer de prostată
Participanții. Un grup de 16 pacienți nonanemici cu cancer de prostată a fost inclus în acest studiu. Deși activitățile serice de Nagalase ale pacienților prostatectomizati indică cantități semnificative de celule tumorale metastazate, tomografia computerizată nu a detectat leziuni tumorale metastazate în alte organe. Acești pacienți au primit terapie GcMAF exclusiv și excluzând terapia combinată cu inducerea eritropoiezei. Astfel, pacienții cu cancer de prostată anemici nu erau eligibili în program. Studiul a fost aprobat de comitetele instituționale de cercetare și etică ale grupului de imunoterapie Nagasaki, Nagasaki, Japonia, și de către consiliul de evaluare instituțional al grupului de imunoterapie Hyogo, Hyogo, Japonia. Participanții și-au dat consimțământul informat în scris înainte de a intra în studiu.
administrarea GcMAF. Deoarece timpul de înjumătățire al macrofagelor activate este de aproximativ 6 zile [ 12,13 ], 100 ng de GcMAF au fost administrate intramuscular o dată pe săptămână.
Proceduri care trebuie utilizate pentru studiul clinic și parametrii studiului. Probele de ser (> 2 ml) au fost colectate săptămânal sau bisăptămânal imediat înainte de fiecare administrare de GcMAF și au fost utilizate pentru analiza prognostică. Evaluarea detaliată a răspunsului pacientului la fiecare administrare de GcMAF a fost efectuată prin determinarea atât a activității precursoare a MAF a proteinei Gc serice, cât și a activității Nagalazei serice. Deoarece activitatea Nagalazei serice este proporțională cu sarcina tumorală [ 26,32,33 ], evaluarea cinetică a răspunsului curativ la terapia GcMAF a fost efectuată prin determinarea activității Nagalazei serice ca indice de prognostic pe parcursul întregului curs terapeutic al tuturor celor 16 pacienți. Valorile PSA au fost, de asemenea, determinate imediat înainte de acest studiu.
Test pentru activitatea precursorului MAF a proteinei Gc din serul pacientului
Au fost colectate probe de sânge de oameni sănătoși în tuburi care conțineau EDTA pentru a preveni coagularea. O probă de sânge de 5 ml și 5 ml de soluție salină (0,9% NaCl) au fost amestecate și așezate ușor pe un tub de centrifugă de 15 ml care conține 3 ml de Lymphoprep (similar cu Ficoll; Polysciences, Inc, Warrington, PA) și centrifugat la 800°C. g timp de 15 minute. Banda densă de celule albe sub formă de celule mononucleare din sângele periferic care conține monocite/macrofage (macrofage pe scurt) și limfocite (celule B și T) a fost colectată folosind o pipetă Pasteur. Amestecul de celule albe a fost spălat de două ori cu PBS, suspendat în mediu EA și plasat în godeuri de 16 mm. Incubare timp de 45 de minute într-un 5 % CO2incubatorul la 37°C a permis aderența macrofagelor la suprafața de plastic. Amestecul de limfocite și macrofage aderente ale oamenilor sănătoși a fost tratat cu 1 pg lizo-Pc/ml în mediu EA timp de 30 de minute. Datorită aderenței macrofagelor la substratul plastic, limfocitele și macrofagele au fost spălate separat cu PBS, amestecate și cultivate în mediu EA care conține 0,1% ser de pacienți cu cancer de prostată sau oameni sănătoși ca sursă de proteină Gc. După 3 ore de cultivare, macrofagele au fost testate pentru capacitatea de generare de superoxid [ 25,26]. Macrofagele au fost spălate cu PBS și incubate în 1 ml de PBS care conține 20 ug de citocrom c timp de 10 minute. La treizeci de minute după adăugarea de acetat de forbol-12-miristat (5 pg/ml), capacitatea macrofagelor de generare de superoxid a fost determinată spectrofotometric la 550 nm. Datele au fost exprimate ca nanomoli de superoxid produs pe minut la 106 celule (macrofage). Aceste valori reprezintă activitatea precursorului MAF a proteinei Gc din serul pacientului [ 28,29]. Activitatea precursorului MAF pierdută sau redusă a proteinei Gc din serul pacientului este exprimată ca o scădere a generării de superoxid în comparație cu controlul proteinei Gc umană sănătoasă. Astfel, activitatea precursorului MAF măsoară atât capacitatea fiecărui pacient de a activa macrofagele, cât și potențialul imunitar. Cu toate acestea, pierderea activității precursorului MAF are ca rezultat imunosupresie.
Cultivarea amestecului de limfocite și macrofage tratate cu lizo-Pc în mediu EA fără ser are ca rezultat producerea a 0,5 până la 0,85 nmol superoxid/min per 106 celule [ 41,42 ]. Astfel, dacă serul pacientului (0,1%) generează <0,85 nmol superoxid/min per 106 celule, se consideră că activitatea precursoare a serului pacientului Gc este pierdută.
Determinarea activității nagalazei în fluxul sanguin al pacientului
Serurile pacientului (300 ui) au fost precipitate cu sulfat de amoniu saturat 70%. Precipitatele au fost dizolvate în tampon citrat de sodiu 50 mM (pH 6,0) şi au fost dializate împotriva aceluiaşi tampon la 4°C timp de 2 ore. Dializatele au fost aduse până la 1 ml în volum și testate pentru activitatea Nagalase [ 25,26 ]. Soluția de substrat (250 ui) a conținut 5 umol de p – nitrofenil N -acetil- a- d – galactozaminidă în tampon citrat 50 mM (pH 6,0). Reacția a fost inițiată prin adăugarea a 250 ui din probele dializate, ținute la 37°C timp de 60 de minute și încheiată prin adăugarea a 200 ui de 10% TCA. După centrifugarea amestecului de reacție, 300 pl de Na2CO3 0,5 Msoluția a fost adăugată la supernatant. Cantitatea de p -nitrofenol eliberat a fost determinată spectrofotometric la 420 nm și a fost exprimată ca nanomoli pe minut per miligram de proteină [ 25,26 ]. Concentrațiile de proteine au fost estimate prin metoda Bradford [ 43 ].
Timpul de înjumătățire al activității Nagalase in vivo este mai mic de 24 de ore, deoarece am observat o scădere bruscă a activității Nagalase în 24 de ore după rezecția tumorii [ 26 ]. Totuși, activitatea Nagalazei în serul colectat este extrem de stabilă, probabil din cauza prezenței unui inhibitor de produs și este foarte reproductibilă după păstrarea serurilor la 4°C timp de mai mult de 6 luni [ 26 ].
Serurile de control sănătoase prezintă niveluri scăzute (0,35–0,65 nmol/min per miligram) ale activității enzimatice. Aceasta este activitatea enzimatică a α-galactozidazei care poate cataboliza substratul cromogen (adică p – nitrofenil N -acetil-α- d – galactozaminidă) pentru Nagalase [ 25,26,28 ]. Reducerea activității serice a Nagalazei la 0,65 nmol/min per miligram sau mai puțin la pacienții în timpul terapiei GcMAF servește drept demonstrație că sarcina tumorală a fost eradicată.
Rezultate
Istoricul terapeutic și parametrii imunodiagnostici ai pacienților cu cancer de prostată nonanemici
Istoricul terapeutic a 16 pacienți cu cancer de prostată înainte de terapia GcMAF este rezumat întabelul 1. Nouă pacienți au primit prostatectomie cu sau fără terapie hormonală. Un total de 12 pacienți au primit terapie hormonală. Deoarece soarta și stadializarea bolii maligne se corelează cu sarcina tumorală și gradul de imunosupresie [ 25,26 ], potența imună și indicele de sarcină tumorală pentru fiecare pacient trebuie determinate înainte de a intra în terapia GcMAF, indiferent de intervalul de timp după prostatectomie și /sau terapie hormonală (tabelul 1).
tabelul 1
Istoricul terapeutic și parametrii de diagnostic ai pacienților cu cancer de prostată.
| Rabdator | Istoria terapeutică | Terapie pre-GcMAF * | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Nu. | Varsta (ani) | PSA | Interventie chirurgicala | PSA | Endocrin | PSA | Precursor | Nagalase |
| 1 | 64 | 16.5 | Nu | — | da | 21.7 | 0,82 | 4,92 |
| 2 | 76 | 2.5 | Pxy | <0,1 | Nici unul | 3,52 | 3.19 | 2.30 |
| 3 | 46 | 35.4 | Pxy | 0,3 | da | 8.2 | 2.44 | 2,85 |
| 4 | 68 | 4.5 | Nu | — | da | 4.2 | 2.26 | 3.25 |
| 5 | 68 | 68.4 | Pxy | 0,2 | da | 0,09 | 3,77 | 3.15 |
| 6 | 50 | 20.5 | Pxy | 0,1 | da | 1.0 | 2.20 | 3,73 |
| 7 | 56 | 18.0 | Pxy | 0,2 | da | 3.4 | 2,88 | 1,95 |
| 8 | 61 | 25.3 | Pxy | 0,2 | Nici unul | 5.8 | 2.29 | 3.45 |
| 9 | 56 | 8.4 | Nu | — | da | 6.5 | 2,85 | 2.50 |
| 10 | 53 | 8.0 | Pxy | 0,1 | Nici unul | 3.8 | 0,85 | 4,72 |
| 11 | 66 | 16.6 | Nu | — | da | 10.2 | 2.05 | 4.02 |
| 12 | 66 | 22.5 | Pxy | 0,1 | da | 4.2 | 2,75 | 3,62 |
| 13 | 68 | 6.2 | Nu | — | da | 10.1 | 1.02 | 5.34 |
| 14 | 73 | 3.1 | Nu | — | da | 3.2 | 2.23 | 3,52 |
| 15 | 58 | 6.0 | Pxy | 0,1 | Nici unul | 7.8 | 1,68 | 4.32 |
| 16 | 63 | 6.6 | Nu | — | da | 5.8 | 2.22 | 3,58 |
| C † | 4,84 | 0,39 ‡ |
Deschide într-o fereastră separată
Pxy indică prostatectomie.
* Teste de terapie pre-GcMAF pentru PSA, activitatea precursorului (nmol/min per 106
celule ) și Nagalase (nmol/min per miligram). Activitatea precursorului de <0,9 nmol/min per 106
celule nu poate dezvolta capacitatea fagocitară a macrofagelor și este considerată a fi o pierdere a activității precursorului.
† Media a șapte controale sănătoase.
‡ Acest nivel de activitate este activitatea enzimatică a α-galactozidazei și nu a Nagalazei.
Deoarece activarea macrofagelor pentru fagocitoză și prezentarea antigenului la celulele B și T este primul pas indispensabil pentru dezvoltarea imunitară, lipsa activării macrofagelor duce la imunosupresie [ 26,27 ]. Deoarece proteina Gc serică este precursorul principalului MAF, activitatea precursorului MAF a proteinei Gc serică a pacientului a fost mai întâi determinată. Așa cum se arată întabelul 1, activitățile precursoare MAF ale proteinei Gc serice ale pacienților cu cancer de prostată au fost pierdute (<0,85 nmol superoxid/min la 106 celule ) sau au fost reduse. Deoarece pierderea sau scăderea activității precursoare a MAF a proteinei Gc a pacientului rezultă din glicozilarea proteinei Gc de către Nagalase seric secretat de celulele canceroase [ 25,26 ] (Figura 1 b), au fost determinate activitățile Nagalase serice ale acestor pacienți cu cancer. Pacienții care au o activitate precursoare mai scăzută a proteinei Gc au avut o activitate serica Nagalaza mai mare (tabelul 1). Deoarece activitatea Nagalazei serice a pacienților cu cancer este direct proporțională cu sarcina lor tumorală [ 26,32,33 ], activitatea Nagalazei serice indică cantitatea totală a tumorii primare (dacă nu este prostatectomizată) și a celulelor tumorale metastazate. Astfel, activitatea Nagalase serica a pacienților individuali ar trebui utilizată ca control de bază pentru analiza prognostică în timpul terapiei GcMAF. Valorile PSA ale fiecărui pacient la diagnosticul inițial, după prostatectomie și înainte de a intra în terapia GcMAF sunt, de asemenea, prezentate întabelul 1.
Activitatea precursorului MAF a proteinei Gc și a activității nagalazei serice ca parametri de prognostic în timpul terapiei GcMAF pentru pacienții cu cancer de prostată
În cursul terapiei GcMAF, au fost analizate activitatea precursorului MAF și activitatea Nagalazei serice a cinci pacienți. Pe măsură ce terapia GcMAF a progresat, activitatea precursorului MAF a tuturor celor cinci pacienți a crescut și activitatea lor seric Nagalase a scăzut invers, așa cum se arată înmasa 2. Pentru a ilustra corelarea cantitativă a acestor parametri, cursul de timp al activității precursorului MAF al pacientului individual cu cancer de prostată a fost reprezentat în funcție de activitatea Nagalazei serice corespunzătoare. Pe măsură ce terapia GcMAF a progresat, activitatea precursorului MAF a crescut cu o scădere concomitentă a activității Nagalazei serice, așa cum se arată înFigura 2. Acești parametri de prognostic ai tuturor celor cinci pacienți individuali se încadrează în aceeași corelație liniară inversă. Când activitatea precursorului MAF a crescut spre valoarea controlului sănătos, activitățile Nagalazei serice ale acestor pacienți au scăzut spre nivelul controlului sănătos (Figura 2). Astfel, acești parametri de malignitate ai pacienților cu cancer de prostată au servit ca indici de prognostic excelenți. Deoarece Nagalase seric este proporțional cu sarcina tumorală [ 26,32,33 ], pe măsură ce terapia GcMAF a progresat, activitatea Nagalazei serice a scăzut și, concomitent, sarcina tumorală a scăzut. Astfel, întreaga analiză a cursului de timp a sarcinii tumorale în timpul terapiei GcMAF a tuturor celor 16 pacienți ar trebui efectuată prin măsurarea activității Nagalase serice ca indice de prognostic. Scăderea cinetică a activității Nagalazei serice ne permite să imaginăm un proces curativ al malignității ca o scădere a sarcinii tumorale.
Corelația inversă între activitatea precursorului MAF a proteinei Gc serice și activitatea serică a α – N -acetilgalactosaminidazei (Nagalase) a pacienților cu cancer de prostată în timpul terapiei GcMAF
masa 2
Corelația activității precursoare MAF a pacienților individuali cu cancer de prostată cu activitatea lor nagalazei în ser în timpul terapiei GcMAF.
| Pacientul nr. | Timp analizat (săptămâni) | Activitatea precursorului Superoxid (nmol) | Nagalase (nmol/min per miligram) |
|---|---|---|---|
| 1 (7) * | 0 | 2,88 | 1,95 |
| 1 | 3.38 | 1,74 | |
| 2 | 3,51 | 1,59 | |
| 4 | 3,61 | 1.32 | |
| 6 | 3.44 | 1.19 | |
| 10 | 3,92 | 1.08 | |
| 12 | 4.05 | 0,96 | |
| 21 | 4.13 | 0,68 | |
| 2 (8) | 0 | 2.29 | 3.45 |
| 1 | 2.40 | 2,89 | |
| 2 | 2,62 | 2,75 | |
| 3 | 2,88 | 2.43 | |
| 4 | 2,92 | 2.21 | |
| 6 | 3.21 | 2.02 | |
| 10 | 3.33 | 1,69 | |
| 14 | 3,62 | 1,38 | |
| 17 | 3,72 | 0,94 | |
| 21 | 4.29 | 0,66 | |
| 3 (6) | 0 | 2.20 | 3,73 |
| 1 | 2.28 | 3.09 | |
| 2 | 2,75 | 2,73 | |
| 4 | 3.18 | 3.34 | |
| 8 | 3.03 | 2.18 | |
| 11 | 3.33 | 2.01 | |
| 15 | 3,50 | 1,89 | |
| 19 | 3,65 | 1,67 | |
| 23 | 3,75 | 1.29 | |
| 26 | 4.24 | 0,67 | |
| 4 (12) | 0 | 2,75 | 2,62 |
| 1 | 3.11 | 3.16 | |
| 2 | 3.16 | 2.01 | |
| 3 | 3.20 | 1,82 | |
| 9 | 3.25 | 1,71 | |
| 16 | 3.35 | 1.43 | |
| 22 | 4.23 | 0,64 | |
| 5 (13) | 0 | 1.02 | 5.34 |
| 1 | 1.22 | 5.11 | |
| 2 | 1,37 | 4,87 | |
| 3 | 1,68 | 4.31 | |
| 4 | 1,97 | 4.12 | |
| 9 | 2.22 | 3,54 | |
| 14 | 3,81 | 1.10 | |
| 18 | 3,79 | 0,83 | |
| 24 | 4.28 | 0,72 | |
| control † | 4.25 | 0,52 |
Deschide într-o fereastră separată
* Numerele din paranteze se referă la nr. în
† Valoarea medie a cinci controale sănătoase.
Studiu în timp al activității nagalazei serice a pacienților cu cancer de prostată în timpul terapiei GcMAF
Analizele cursului de timp ale activității Nagalase serice ale pacienților cu cancer de prostată evaluează eficacitatea GcMAF. Acești pacienți au avut activități inițiale de Nagalase variind de la 1,95 la 5,34 nmol/min per miligram (tabelul 1). Așa cum se arată înFigura 3, activitățile Nagalase serice ale tuturor celor 16 pacienți au scăzut pe măsură ce terapia GcMAF a progresat. După aproximativ 14 până la 25 de administrări (14–25 săptămâni) a 100 ng de GcMAF, toți cei 16 pacienți au avut niveluri foarte scăzute de activitate a Nagalasei serice echivalente cu cele ale valorilor de control sănătoase, cuprinse între 0,37 și 0,68 nmol/min per miligram. Aceste activități enzimatice scăzute sunt cele ale α-galactozidazei și nu ale Nagalazei specifice maligne [ 25,26]. Deoarece activitatea serică a Nagalazei este proporțională cu sarcina tumorală, rezultatele sugerează că acești pacienți nu au celule canceroase. Pe parcursul a 7 ani de observație după terminarea terapiei cu GcMAF, acești pacienți nu au prezentat nicio creștere a activităților lor serice Nagalase, indicând nicio recidivă a cancerului de prostată. Mai mult, scanările tomografice computerizate anuale ale acestor pacienți au confirmat că aceștia nu au recidivat tumora timp de 7 ani.
Studiu în timp al terapiei GcMAF a 16 pacienți cu cancer de prostată cu α – N -acetilgalactosaminidază (Nagalase) seric ca indice de prognostic.
Rata curativă a terapiei GcMAF pentru cancerul de prostată depinde de gradul de anomalie a suprafeței celulare
Celulele canceroase slab diferențiate (numite nediferențiate) ar trebui să aibă mai multe anomalii la suprafața celulei decât celulele canceroase moderat/imediat diferențiate (numite diferențiate pe scurt) [ 34,36 ]. Deoarece macrofagele activate recunosc eficient și ucid rapid celulele canceroase care au mai multe anomalii, macrofagele activate ucid celulele nediferențiate mai rapid decât celulele diferențiate [ 34,36 ]. Astfel, scăderea rapidă a activităților Nagalase serice în timpul terapiei GcMAF implică mai multe anomalii în celulele nediferențiate. După cum se arată în studiul cursului de timp al terapiei GcMAF înFigura 3, activitatea Nagalase serica a pacientului nr. 2, 5, 7, 8, 9, 11, 12 și 16, de exemplu, au scăzut brusc în primele câteva săptămâni (până la 4 săptămâni), urmată de o scădere lentă în timpul perioadei terapeutice rămase (aproximativ 8-14 săptămâni). ). Aceste grafice de regresie tumorală bifazică sugerează că celulele nediferențiate sunt amestecate cu celule diferențiate în cadrul tumorilor [ 34,36 ]. Astfel, celulele nediferențiate au fost ucise rapid în primele câteva săptămâni, iar celulele diferențiate au fost ucise lent în perioada terapeutică GcMAF rămasă. Aceste populații de celule mixte păreau să fie dezvoltate prin diferențiere în timpul creșterii celulelor tumorale nediferențiate [ 34,36]]. În schimb, pacienții nr. 1, 6, 10, 13 și 15 au arătat că activitatea lor seric Nagalase a scăzut liniar și a atins rapid valorile de control între 14 și 18 săptămâni. Aceste rate curative liniare, în scădere, sunt mai lente decât ratele curative ale populației nediferențiate din populația mixtă menționată anterior (adică, nediferențiate și diferențiate) de cancere de prostată. Prin urmare, cel din urmă grup de tumori este deja diferențiat și diferențierea ulterioară a acestor tumori nu a avut loc în timpul creșterii tumorii. Rezultate similare au fost observate și în timpul terapiei GcMAF pentru pacienții cu cancer de sân metastatic [ 34 ].
Corelația dintre activitatea nagalazei serice și nivelurile de PSA în timpul terapiei GcMAF
Deoarece activitatea Nagalazei serice este un indice excelent pentru estimarea sarcinii tumorale [ 26,32 ], nivelurile serice de PSA au fost comparate cu activitatea Nagalazei serice în timpul terapiei GcMAF a cinci pacienți cu cancer de prostată. Așa cum se arată înTabelul 3, Nivelurile PSA ale pacienților prostatectomizati au scăzut pe măsură ce Nagalase seric a scăzut în timpul terapiei cu GcMAF. La pacienții fără rezecție tumorală, totuși, deși activitatea Nagalazei serice a scăzut pe măsură ce terapia GcMAF a progresat, valorile lor PSA au rămas neschimbate. Rezultatul sugerează că PSA derivat din prostată purtătoare de tumori nu s-a schimbat în timp ce sarcina tumorală a scăzut. Deoarece inflamația indusă de tumoră în țesuturile necanceroase de prostată determină secreția de PSA [ 38 ], PSA produs din aceste țesuturi de prostată necanceroase inflamate nu poate fi schimbat prin scăderea sarcinii tumorale.
Tabelul 3
Corelația dintre activitatea nagalazei serice și PSA în timpul studiului cursului de timp al terapiei GcMAF pentru pacienții cu cancer de prostată.
| Pacientul nr. | Varsta (ani) | Săptămâni testate după primul GcMAF | Activitate specifică a nagalazei (nmol/min per miligram) | PSA (ng/ml) |
|---|---|---|---|---|
| A1 | 67 | 0 | 2,53 | 27.60 |
| 2 | 2.27 | 27.20 | ||
| 4 | 2.00 | 25.90 | ||
| 5 | 1,94 | 28.25 | ||
| 6 | 1,93 | 23.79 | ||
| 12 | 1.47 | 26.74 | ||
| 24 | 0,69 | 25.95 | ||
| A2 | 83 | 0 | 3,66 | 18.02 |
| 2 | 2,94 | 15.64 | ||
| 3 | 2,74 | 13.91 | ||
| 4 | 2,63 | 18.77 | ||
| 5 | 2,55 | 21.94 | ||
| 10 | 0,72 | 18.53 | ||
| A3 | 60 | 0 | 2.18 | 58,49 |
| 3 | 1,85 | 42,49 | ||
| 4 | 1,77 | 56,54 | ||
| 5 | 1,62 | 63,61 | ||
| 6 | 1,62 | 82.30 | ||
| 7 | 1,54 | 65,20 | ||
| 10 | 0,84 | 58,45 | ||
| A4 (prostatectomie) | 76 | 0 | 3,94 | 11.85 |
| 1 | 3.44 | 10.56 | ||
| 4 | 2.46 | 5.22 | ||
| 12 | 1,92 | 0,33 | ||
| 15 | 1.36 | 0,24 | ||
| 20 | 0,69 | 0,10 | ||
| A5 (prostatectomie) | 66 | 0 | 2.00 | 5,82 |
| 1 | 1,79 | 5.43 | ||
| 2 | 1,69 | 4.05 | ||
| 4 | 1.49 | 3.12 | ||
| 6 | 1,38 | 2,77 | ||
| 9 | 1.21 | 2.46 | ||
| 13 | 1.19 | 1,89 | ||
| 18 | 1.07 | 0,86 | ||
| 21 | 0,92 | 0,14 | ||
| 26 | 0,62 | 0,10 |
Deschide într-o fereastră separată
Discuţie
Diagnosticul și prognosticul cancerului de prostată au fost ajutate de disponibilitatea măsurării PSA [ 37,38 ]. Când pacienții au primit prostatectomie radicală, a fost observată o scădere bruscă a nivelurilor ridicate de PSA la valori foarte scăzute (tabelul 1). Astfel, PSA este produs predominant din leziunile tumorale primare de prostată în comparație cu leziunile metastazate. Deși Nagalase seric a scăzut în timpul terapiei cu GcMAF la pacienții cu prostată purtătoare de tumoră, PSA a rămas neschimbat (Tabelul 3). Prin urmare, valorile PSA nu pot fi utilizate pentru teste de prognostic în timpul terapiei GcMAF.
Antigenul specific de prostată, ca serin protează, a fost considerat a fi specific pentru malignitatea prostatică și una dintre enzimele de degradare a matricei extracelulare care este necesară pentru invazivitatea țesuturilor canceroase [ 44,45 ]. Cu toate acestea, țesutul normal inflamat de prostată poate elibera PSA [ 38], în special în anumite stări de boală, cum ar fi hipertrofia benignă a prostatei și prostatita. Acțiunea enzimatică invazivă a PSA canceros asupra țesuturilor prostatice necanceroase din jur induce un proces inflamator ușor care poate determina celulele necanceroase de prostată să elibereze PSA. Din cauza predominanței producției de PSA în țesuturile prostatice, testul PSA nu poate estima cu exactitate pierderea fracționată a sarcinii tumorale. Acest lucru este confirmat în articolul de față prin analiza comparativă a activității Nagalazei serice cu PSA în timpul terapiei GcMAF (Tabelul 3).
În plus, PSA, fiind o serin protează, poate să nu fie limitată la prostată. S-a demonstrat că antigenul specific prostatic este produs de țesuturile extraprostatice, incluzând neoplasmul glandelor salivare, epiteliul glandular cloacogen și țesuturile mamare normale și canceroase ale femeilor [ 46–48 ]. Astfel, PSA este mai puțin specific malignității prostatice.
În contrast, Nagalase este secretat exclusiv din celulele canceroase, dar nu din țesuturile normale (chiar și din țesuturile necanceroase inflamate). Astfel, nivelul activității Nagalase în fluxul sanguin este proporțional cu sarcina tumorală la gazde [ 25,28,29 ] și a fost utilizat ca indice de prognostic pentru terapia GcMAF pentru modelele de cancer preclinice și clinice [ 14,15,25, 32–34,36 ]. Nagalase seric deglicozilează proteina Gc serică. Proteina Gc glicozilată își pierde activitatea precursorului MAF și nu poate fi convertită în MAF, rezultând nicio activare a macrofagelor care să conducă la imunosupresie [ 25,26 ]. Astfel, măsurarea activității Nagalazei serice și a activității precursoare a MAF a proteinei Gc serice ne permite să vedem gradul de imunosupresie și starea bolii.
Deoarece trizaharida proteinei Gc din fluxul sanguin este eficient desglicozilată de Nagalase seric [ 25-28 ] (Figura 1 b), serul Nagalase pare a fi o endo-Nagalaza, dar nu ca o exo-enzimă în mediul ser coloidal. Când GcMAF (100 ng) este administrat pacienților cu cancer, GcMAF nu este afectat de Nagalase seric al pacientului [ 34,36 ], ocolește proteina Gc glicozilata și acționează direct asupra macrofagelor pentru o activare extinsă. Astfel de macrofage puternic activate dezvoltă o variație considerabilă a receptorilor, recunosc anomaliile suprafeței celulelor maligne și eradicează celulele canceroase [ 34,36 ]. Această natură fundamentală a macrofagelor de a recunoaște anomaliile celulelor maligne este universală pentru toate tipurile de cancer. De fapt, administrarea de GcMAF (100 ng/săptămână) la pacienții cu cancer nonanemic a arătat efecte curative asupra unei varietăți de tipuri de cancer fără discernământ [ 15,33,34,36]]. Tipurile de cancer testate până acum sunt de prostată, sân, colon, stomac, ficat, plămân (inclusiv mezoteliom), rinichi, vezică urinară, uter, ovar, cap/gât, melanomul și fibrosarcom [ 34 ]. Progresul terapiei GcMAF pentru aceste tipuri de cancer este monitorizat prin măsurarea activității Nagalasei serice specifice celulelor maligne, care se găsește universal la pacienții cu o mare varietate de cancere [ 25,26 ]. Ratele curative ale diferitelor tipuri de cancer depind de gradul de anomalie a suprafeței celulare care corespunde gradului de diferențiere a celulelor maligne. Precizia măsurării activității Nagalase ne-a permis să determinăm gradul de anomalie a suprafeței celulare prin rata curativă în timpul terapiei GcMAF. Celulele tumorale nediferențiate sunt ucise mai eficient decât celulele diferențiate.34,36 ]. De fapt, adenocarcinoamele, cum ar fi celulele canceroase de sân și prostată, sunt nediferențiate și ucise rapid de macrofagele activate, în timp ce celulele canceroase bine diferențiate, cum ar fi celulele de carcinom scuamos, sunt distruse lent de macrofagele activate. Rate curative mai rapide, care necesită mai puțin de 22 de săptămâni, au fost întotdeauna observate în timpul terapiei GcMAF pentru cancerul de sân [ 34 ].]. În schimb, terapia GcMAF pentru carcinoamele cu celule scuamoase bine diferențiate, cum ar fi cancerele de cap/gât, necesită mai mult de 75 de săptămâni. Astfel, rata curativă mai rapidă a cancerului de prostată se datorează recunoașterii eficiente de către macrofage a anomaliei suprafeței celulelor canceroase de prostată. Cu toate acestea, o varietate de cancere conțin populație mixtă de celule nediferențiate și diferențiate în cadrul unei tumori (de exemplu, cancere de sân și colorectal) [ 34,36 ]. Acest tip de diferențiere fină în cancerul de prostată este cunoscut de mulți ani. În 1977, Gleason [ 49] a separat modelele histologice ale cancerului de prostată într-un model de diferențiere de gradul 1 până la 5, tiparul tumoral de gradul 1 fiind cel mai diferențiat și modelul de gradul 5 fiind cel mai puțin diferențiat (slab diferențiat sau nediferențiat). Modelul tumoral de gradul 3 (Gleason gradul 3) este cel mai frecvent model histologic și este considerat moderat bine diferențiat. Cu toate acestea, se poate interpreta cu ușurință modelul histologic al gradului 3 (diagrama schematică dezvoltată de Gleason) ca un amestec de celule diferențiate (gradul 1) și celule cel puțin diferențiate (nediferențiate) (gradul 5). Acest lucru poate explica graficele de regresie tumorală bifazică în timpul terapiei GcMAF pentru majoritatea cancerului de prostată fiind un amestec de celule diferențiate și nediferențiate. Datorită disponibilității măsurătorilor de precizie a Nagalasei serice, au fost posibile măsurătorile ratei curative ale tumorilor în timpul terapiei GcMAF și estimarea gradului de diferențiere a tumorii. Prin urmare, semnificația terapiei GcMAF pentru cancer a fost mult îmbunătățită prin descoperirea Nagalasei specifice celulelor canceroase care poate monitoriza cu precizie rata regresiei tumorii în timpul terapiei cu GcMAF.32–34,36 ].
Note de subsol
1 Această investigație a fost susținută parțial de Grantul AI-32140 al Serviciului de Sănătate Publică din SUA și de un grant al Fundației Elsa U. Pardee.
Referințe
1.
Klein LA. Carcinom de prostată. N Engl J Med. 1968; 300 :824–833. [ PubMed ] [ Google Scholar ]2.
Eisenberger MA, Simon R, O’Dwyer PJ, Wittes RE, Friedman MA. O reevaluare a chimioterapiei citotoxice nonhormonale în tratamentul carcinomului de prostată. J Clin Oncol. 1985; 3 :827–841. [ PubMed ] [ Google Scholar ]3.
Maulard-Durdux C, Dufour B, Hennequin C, Chretien Y, Delaninian S, Housset M. Studiu de fază II al combinației orale de ciclofosfamidă și etoposide orale la pacienții cu carcinom de prostată refractar la hormoni. Cancer. 1996; 77 :1144–1148. [ PubMed ] [ Google Scholar ]4.
Raghavan D. Chimioterapia non-hormonală pentru cancerul de prostată: principii de tratament și aplicare la testarea noilor medicamente. Semin Oncol. 1988; 15 :371–389. [ PubMed ] [ Google Scholar ]5.
Tannock IF. Există dovezi că chimioterapia este benefică pentru pacienții cu carcinom de prostată? J Clin Oncol. 1985; 3 :1013–1021. [ PubMed ] [ Google Scholar ]6.
Morton D, Eibler FR, Malmgren RA, Wood WC. Factori imunologici care influențează răspunsul la imunoterapie în melanomul malign. Interventie chirurgicala. 1970; 68 :158–164. [ PubMed ] [ Google Scholar ]7.
Zbar B, Tanaka T. Imunoterapia cancerului: regresia tumorilor după injectarea intralezională de Mycobacterium bovis viu . Ştiinţă. 1971; 172 :271–273. [ PubMed ] [ Google Scholar ]8.
Ngwenya BZ, Yamamoto N. Activarea macrofagelor peritoneale de către lizofosfatidilcolină. Biochim Biophys Acta. 1985; 839 :9–15. [ PubMed ] [ Google Scholar ]9.
Ngwenya BZ, Yamamoto N. Efectele produselor de inflamație asupra sistemului imunitar: lizofosfatidilcolina stimulează macrofagele. Cancer Immunol Immunother. 1986; 21 :174–182. [ PubMed ] [ Google Scholar ]10.
Ngwenya BZ, Yamamoto N. Contribuția celulelor neaderente tratate cu lizofosfatidilcolină la mecanismul de activare a macrofagelor. Proc Soc Exp Biol Med. 1990; 193 :118–124. [ PubMed ] [ Google Scholar ]11.
Yamamoto N, Ngwenya BZ. Activarea macrofagelor de către lizofosfolipide și derivați eterici ai lipidelor și fosfolipidelor neutre. Cancer Res. 1987; 47 :2008–2013. [ PubMed ] [ Google Scholar ]12.
Yamamoto N, Ngwenya BZ, Pieringer PA. Activarea macrofagelor de către analogi eterici ai lizofosfolipidelor. Cancer Immunol Immunother. 1987; 25 :185–192. [ PubMed ] [ Google Scholar ]13.
Yamamoto N, St Claire DA, Homma S, Ngwenya BZ. Activarea macrofagelor de șoarece de către alchilgliceroli, produși de inflamație ai țesuturilor canceroase. Cancer Res. 1988; 48 :6044–6049. [ PubMed ] [ Google Scholar ]14.
Yamamoto N, Ueda M. Tratamentul pacienților cu cancer cu factor de activare a macrofagelor derivate din proteinele care leagă vitamina D (GcMAF) eradicează rapid celulele canceroase. J Imunalt. 2006; 29 :677–678. [ Google Scholar ]15.
Yamamoto N, Ueda M. Immunology 2004. Bologna, Italia: Medmond Ltd; 2004. Eficacitatea terapeutică a factorului de activare a macrofagelor (GcMAF) derivat de proteina de legare a vitaminei D (proteina Gc) pentru cancerele de prostată și de sân; pp. 201–204. [ Google Scholar ]16.
Homma S, Yamamoto N. Procesul de activare a macrofagelor după tratamentul in vitro al limfocitelor de șoarece cu dodecilglicerol. Clin Exp Immunol. 1990; 79 :307–313. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]17.
Yamamoto N, Homma S, Millman I. Identificarea factorului seric necesar pentru activarea in vitro a macrofagelor: rolul proteinei de legare a vitaminei D (componentă specifică grupului, Gc) în activarea lizofosfolipidelor macrofagelor peritoneale de șoarece. J Immunol. 1991; 147 :273–280. [ PubMed ] [ Google Scholar ]18.
Yamamoto N, Homma S, Haddad JG, Kowalski MN. Proteina de legare a vitaminei D 3 necesară pentru activarea in vitro a macrofagelor după tratamentul cu dodecilglicerol al celulelor peritoneale de șoarece. Imunologie. 1991; 74 :420–424. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]19.
Homma S, Yamamoto M, Yamamoto N. Proteina de legare a vitaminei D (componenta specifică grupului, Gc) este singura proteină serică necesară pentru activarea macrofagelor după tratamentul celulelor peritoneale cu lizofosfatidilcolină. Immunol Cell Biol. 1993; 71 :249–257. [ PubMed ] [ Google Scholar ]20.
Yamamoto N, Homma S. Proteina de legare a vitaminei D 3 (componentă specifică grupului, Gc) este un precursor pentru semnalul de activare a macrofagelor din limfocitele tratate cu lizofosfatidilcolină. Proc Natl Acad Sci USA. 1991; 88 :8539–8543. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]21.
Yamamoto N, Kumashiro R. Conversia proteinei de legare a vitaminei D3 (componentă specifică grupului) la un factor de activare a macrofagelor prin acțiunea treptată a β-galactozidazei celulelor B și a sialidazei celulelor T. J Immunol. 1993; 151 :2794–2802. [ PubMed ] [ Google Scholar ]22.
Naraparaju VR, Yamamoto N. Rolurile β-galactozidazei limfocitelor B și sialidazei limfocitelor T în activarea macrofagelor provocată de inflamație. Immunol Lett. 1994; 43 :143–148. [ PubMed ] [ Google Scholar ]23.
Yamamoto N. Definiția structurală a unui factor puternic de activare a macrofagelor derivat din proteina de legare a vitaminei D 3 cu activitate adjuvantă pentru producerea de anticorpi. Mol Immunol. 1996; 33 :1157–1164. [ PubMed ] [ Google Scholar ]24.
Yamamoto N. Vitamina D și sistemul imunitar. În: Delves PJ, Roitt I, editori. Enciclopedia de imunologie. a 2-a ed. Londra, Anglia: Academic Press Ltd; 1998. p. 2494–2499. [ Google Scholar ]25.
Yamamoto N, Naraparaju VR, Asbell SO. Glicozilarea proteinei serice care leagă vitamina D și imunosupresia la pacienții cu cancer. Cancer Res. 1996; 56 :2827–2831. [ PubMed ] [ Google Scholar ]26.
Yamamoto N, Naraparaju VR, Urade M. Utilitatea prognostică a α – N -acetilgalactosaminidazei serice și imunosupresia au rezultat din glicozilarea proteinei Gc serice la pacienții cu cancer oral. Cancer Res. 1997; 57 :295–299. [ PubMed ] [ Google Scholar ]27.
Yamamoto N, Ueda M. Immunology 2004. Bologna, Italia: Medmond Ltd; 2004. Eradicarea HIV prin tratamentul pacienților infectați cu HIV/SIDA cu factor de activare a macrofagelor derivate din proteina de legare a vitaminei D (proteina Gc) (GcMAF) pp. 197–200. [ Google Scholar ]28.
Yamamoto N, Naraparaju VR, Srinivasula SM. Modificarea structurală a proteinei serice de legare a vitaminei D 3 și imunosupresia la pacienții infectați cu HIV. SIDA Res Hum Retrovirusuri. 1995; 11 :1373–1378. [ PubMed ] [ Google Scholar ]29.
Yamamoto N. Semnificația patogenă a α – N -acetilgalactosaminidazei găsite în glicoproteina gp160 de anvelopă a virusului imunodeficienței umane tip 1. SIDA Res Hum Retroviruses. 2006; 22 :262–271. [ PubMed ] [ Google Scholar ]30.
Yamamoto N, Urade M. Semnificația patogenă a α – N -acetilgalactosaminidazei găsite în hemaglutinina virusului gripal. Microbii Infectează. 2005; 7 :674–681. [ PubMed ] [ Google Scholar ]31.
Yamamoto N, Naraparaju VR. Factorul de activare a macrofagelor bine definit din punct de vedere structural derivat din proteina de legare a vitaminei D3 are o activitate adjuvantă puternică pentru imunizare. Immunol Cell Biol. 1998; 76 :237–244. [ PubMed ] [ Google Scholar ]32.
Koga Y, Naraparaju VR, Yamamoto N. Efectele antitumorale ale factorului de activare a macrofagelor derivate din proteine de legare a vitaminei D 3 asupra șoarecilor purtători de tumoră Ehrlich. Proc Soc Exp Biol Med. 1999; 220 :20–26. [ PubMed ] [ Google Scholar ]33.
Yamamoto N, Naraparaju VR. Imunoterapia șoarecilor BALB/c purtători de tumoare de ascită Ehrlich cu factor de activare a macrofagelor derivate din proteina de legare a vitaminei D. Cancer Res. 1997; 57 :2187–2192. [ PubMed ] [ Google Scholar ]34.
Yamamoto N, Suyama H, Yamamoto NY, Ushijima N. Imunoterapia pacienţilor cu cancer de sân metastatic cu factor de activare a macrofagelor derivate din proteinele care leagă vitamina D (GcMAF) Int J Cancer. 2008; 122 :461–467. [ PubMed ] [ Google Scholar ]35.
Zhang S, Zhang HS, Reuter VE, Slovin SF, Scher HI, Livingston PO. Exprimarea antigenelor țintă potențiale pentru imunoterapie pe cancerul de prostată primar și metastatic. Clin Cancer Res. 1998; 4 :293–302. [ PubMed ] [ Google Scholar ]36.
Yamamoto N, Suyama H, Nakazato H, Yamamoto NY, Koga Y. Imunoterapia cancerului colorectal metastatic cu factor de activare a macrofagelor derivate din proteinele care leagă vitamina D, GcMAF. Cancer Immunol Immunother. 2008; 57 :1007–1016. [ PubMed ] [ Google Scholar ]37.
Murphy GP. A doua conferință de la Stanford privind standardizarea internațională a testelor PSA. Cancer. 1995; 75 :1–7. [ PubMed ] [ Google Scholar ]38.
Murphy GP, Barren RJ, Erickson SJ, Bowes BW, Wolfert RL, Bartsch G, Klocker H, Pointaner J, Reissigl A, cLeod DG și colab. Evaluarea și compararea a doi noi markeri de carcinom de prostată. Antigenul specific prostatic liber și antigenul specific de membrană prostatică. Cancer. 1996; 74 :809–818. [ PubMed ] [ Google Scholar ]39.
Reddi AL, Sankaranarayanan K, Arulraj HS, Devaraj N, Devaraj H. α – N -acetilgalactosaminidaza serică este asociată cu diagnosticul/prognosticul pacienților cu carcinom spinocelular al colului uterin. Rac Lett. 2000; 158 :61–64. [ PubMed ] [ Google Scholar ]40.
Link RP, Perlman KL, Pierce EA, Schnoes HK, DeLuca HF. Purificarea proteinei de legare a vitaminei D din ser uman prin cromatografie cu 25-hidroxivitamina D3- Sepharose . Biochimie anală. 1986; 157 :262–269. [ PubMed ] [ Google Scholar ]41.
Yamamoto N, Willett NP, Lindsay DD. Participarea proteinelor serice la activarea macrofagelor provocată de inflamație. Inflamaţie. 1994; 18 :311–322. [ PubMed ] [ Google Scholar ]42.
Yamamoto N, Kumashiro R, Yamamoto M, Willett NP, Lindsay ND. Reglarea activării macrofagelor provocată de inflamație de către doi factori serici, proteina de legare a vitaminei D 3 și albumina. Infectează Imun. 1993; 61 :5388–5391. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]43.
Bradford MM. O metodă rapidă și sensibilă pentru cuantificarea cantităților de micrograme de proteină utilizând principiul legării proteine-colorant. Biochimie anală. 1976; 72 :248–254. [ PubMed ] [ Google Scholar ]44.
Mignatti P, Rifkin DB. Biologia și biochimia proteinazelor în invazia tumorală. Physiol Rev. 1993; 73 :161–195. [ PubMed ] [ Google Scholar ]45.
Osterling JE. Antigenul specific de prostată: o evaluare critică a celui mai util marker tumoral pentru adenocarcinomul de prostată. J Urol. 1991; 145 :907–923. [ PubMed ] [ Google Scholar ]46.
Kamoshida S, Tsutsumi Y. Localizarea extra prostatică a fosfatazei acide de prostată și a antigenului specific prostatic: distribuția în epiteliul glandular cloacogen și expresia dependentă de sex în glanda anală umană. Hum Pathol. 1990; 21 :1108–1111. [ PubMed ] [ Google Scholar ]47.
Van Krieken TH. Imunoreactivitatea markerului de prostată în neoplasmele glandelor salivare. O capcană rară în imunohistochimie. Am J Surg Pathol. 1993; 17 :410–414. [ PubMed ] [ Google Scholar ]48.
Yu H, Giai M, Diamandis EP, Katsaros D, Southerland DJA, Levesque MA, Roagna R, Ponzone R, Sismondi P. Antigenul specific prostatic este un nou indicator de prognostic favorabil pentru femeile cu cancer de sân. Cancer Res. 1995; 55 :2104–2110. [ PubMed ] [ Google Scholar ]49.
Gleason DF. Grupul de Cercetare Urologică Cooperativă a Administrației Veteranilor: Clasificarea histologică și stadializarea clinică a carcinomului de prostată. În: Tannenbaum M, editor. Patologia urologică: Prostata. Philadelphia, PA: Lea & Febiger; 1977. p. 171–198. [ Google Scholar ]
TRATAMENTE CANCER EFICIENTE, NON - toxice 
