Viruși. iunie 2019; 11(6): 562.
Publicat online 18 iunie 2019. doi: 10.3390/v11060562
PMCID: PMC6630270 PMID: 31216641
Clemens Bretscher 1 și Antonio Marchini 1, 2, *
Informații despre autor Note despre articol Informații privind drepturile de autor și licență Declinare a răspunderii
Abstract
Protoparvovirusul H-1PV de șobolan este nepatogen la om, se repetă de preferință în celulele canceroase și are activități oncolitice și oncosupresive naturale. Virusul este capabil să omoare celulele canceroase prin activarea mai multor căi de moarte celulară. Moartea celulelor canceroase mediată de H-1PV este adesea imunogenă și declanșează răspunsuri imune anticancer. Siguranța și tolerabilitatea tratamentului cu H-1PV au fost demonstrate în studiile clinice timpurii la pacienții cu gliom și carcinom pancreatic. Tratamentul cu virus a fost asociat cu semne surogat de eficacitate, inclusiv conversia imună a micromediului tumoral, distribuția efectivă a virusului în patul tumorii chiar și după administrarea sistemică și supraviețuirea globală îmbunătățită a pacientului în comparație cu controlul istoric. Cu toate acestea, utilizarea monoterapeutică a virusului nu a putut eradica tumorile. Prin urmare, sunt necesare studii suplimentare pentru a îmbunătăți profilul anticancer al H-1PV. În această revizuire, descriem proprietățile anticancer ale H-1PV și discutăm eforturile recente de îmbunătățire a eficacității H-1PV și, prin urmare, rezultatul clinic al terapiilor bazate pe H-1PV.
1. Viruși oncolitici: o introducere generală
Virușii oncolitici (OV) sunt o nouă clasă de agenți anticanceriși cu autopropagare care acționează într-un mod multimodal pentru a ucide celulele canceroase [ 1 ]. Baza mecanismului lor de acțiune este capacitatea de a viza selectiv, de a se replica în și, în cele din urmă, de a liza celulele canceroase fără a afecta celulele, țesuturile sau organele normale. Acest oncotropism poate fi fie o proprietate naturală a virusului, fie rezultatul ingineriei virusului la nivelul pătrunderii în celulele virusului (de exemplu, modificarea capsidei virusului pentru a redirecționa OV mai specific către receptorii supraexprimați în celulele canceroase) sau replicarea virusului (de ex. , inserarea miARN-urilor specifice cancerului în promotorii virali, ceea ce restricționează replicarea în celulele transformate).
În plus față de această activitate de ucidere directă, OV-urile pot angaja sistemul imunitar în lupta împotriva cancerului [ 2 ]. În micromediul tumoral, o varietate de mecanisme diferite împiedică sistemul imunitar să atace celulele canceroase [ 3 , 4 ]. OV-urile au capacitatea de a remodela micromediul tumoral și de a restabili supravegherea imună, acționând astfel ca adjuvanți ai vaccinului [ 5] .]. Într-adevăr, pe lângă diseminarea de noi particule virale descendenți, liza celulelor canceroase indusă de OV este asociată cu eliberarea de modele moleculare asociate pericolelor, modele moleculare asociate patogenilor și antigene asociate tumorilor, care declanșează răspunsuri imune inflamatorii îndreptate nu numai împotriva virusul (prin producerea de anticorpi de neutralizare a virusului) dar și tumora. Sistemul imunitar devine așadar cel mai bun aliat al virusului în eliminarea celulelor canceroase, chiar și a celor neinfectate direct de virus (de exemplu, metastaze mici diseminate).
În plus, unele OV au o capacitate naturală de a perturba vascularizația tumorii, inducând astfel necroza celulelor tumorale din cauza privării de oxigen și nutrienți [ 6 , 7 , 8 ].
Tratamentul a mii de pacienți cu cancer cu diferite OV a demonstrat că siguranța și tolerabilitatea lor sunt excelente și că OV sunt asociate doar cu efecte secundare minore, care sunt limitate la simptome asemănătoare gripei, cum ar fi oboseala, febra și frisoanele [9, 10 ] . ].
Talimogene laherparepvec (T-Vec sau Imlygic) a fost primul OV aprobat de Administrația SUA pentru Alimente și Medicamente și Agenția Europeană pentru Medicamente, la sfârșitul anului 2015, pentru tratamentul melanomului metastatic malign [11 , 12 ] . Este un virus herpes simplex modificat genetic (HSV) care poartă factorul de stimulare a coloniilor granulocite-macrofage (GM-CSF), care are scopul de a întări răspunsul imunitar. T-Vec dezvăluie o altă proprietate interesantă a OV: potențialul lor anticancer poate fi întărit prin inserarea unei transgene terapeutice în genomul lor, de exemplu, un inductor de apoptoză cu efecte observatoare pentru a ucide celulele canceroase care în cele din urmă devin rezistente la virus sau modulatoare imunitare ( de exemplu, GM-CSF) pentru a promova o imunitate antitumorală mai susținută.
Ca urmare a proprietăților lor anticancerigene, nu mai puțin de patruzeci de OV din cel puțin zece familii sunt în prezent testate în studii clinice împotriva unui număr de indicații maligne, singure sau în combinație cu alte modalități anticanceroase (de exemplu, chimioterapie, radioterapie și imunoterapie) [ 13 ]. Pe lângă HSV, lista include adenovirusul (Ad), virusul vaccinia, virusul rujeolic, virusul coxsackie, poliovirusul, reovirusul, virusul bolii Newcastle, virusul stomatitei veziculoase, virusul Seneca Valley și protoparvovirusul (PV) [13]. Fiecare dintre aceste OV are un mecanism distinct de acțiune, tropism tumoral, imunogenitate, posibilitatea de exprimare a transgenelor terapeutice, risc potențial de patogenitate, stabilitate și avantaje și limitări specifice asociate cu procesul de producție. Aceste variații justifică dezvoltarea continuă a acestor diferite platforme de virus. Unii dintre acești virusuri au intrat într-o fază târzie de dezvoltare clinică și sperăm că vor deveni în curând o opțiune terapeutică pentru pacienții cu cancer.
Studiile clinice au arătat că tratamentul cu OV este adesea eficient doar la un procent mic de pacienți, ceea ce subliniază importanța dezvoltării de noi strategii pentru a îmbunătăți rezultatul clinic. Ca și în cazul altor tratamente anticancerigene, se crede că combinația de OV cu alte terapii îmbunătățește eficacitatea tratamentului. Prin urmare, proiectarea de noi terapii combinate bazate pe OV este subiectul unei cercetări intense pentru toate OV în curs de dezvoltare clinică [ 14 ]. Deosebit de promițătoare sunt combinațiile de OV cu alte forme de imunoterapie (de exemplu, blocarea punctelor de control) [ 2 , 15 , 16 , 17 ].
În secțiunea următoare, prezentăm unul dintre OV relevante clinic, protoparvovirusul H-1PV de șobolan. Discutăm principalele sale caracteristici și aplicațiile clinice, împreună cu progresele recente în îmbunătățirea activităților sale anticanceroase. Este important de menționat că au fost efectuate studii paralele folosind și alte protoparvovirusuri de rozătoare ca agenți anticancerigen [ 18 , 19 , 20 , 21 , 22 ]. Având în vedere focalizarea revizuirii asupra H-1PV, aceste studii nu vor fi discutate în întregime aici.
2. Protoparvovirusul șobolanului (PV) H-1PV: O schiță biologică
H-1PV a fost descoperit pentru prima dată de Toolan și colegii de muncă la sfârșitul anilor 1950 (prima publicație în 1960) din tumori umane transplantabile [ 23 ]. S-a realizat curând că infecția nu a fost cauzatoare a tumorii, ci mai degrabă oportunistă și că virusul a afișat un tropism natural pentru celulele canceroase umane [ 24 ]. În anii 1960 și mai târziu în 1982, laboratorul lui Toolan a arătat în continuare că H-1PV a suprimat tumorile induse virale și chimice, precum și a redus incidența tumorilor spontane la modelele animale [25 , 26 , 27 ] . Aceste descoperiri au fost fundamentale în stabilirea conceptului că capacitatea H-1PV de a infecta celulele tumorale umane ar putea fi utilizată terapeutic.
H-1PV este un membru al familiei Parvoviridae , genul Protoparvovirus (figura 1), care include, de asemenea, virusul șobolanului Kilham, virusul minut al șobolanului, virusul LuIII, parvovirusul șoarecelui, virusul minut al șoarecilor (MVM) și virusul tumoral X [28 ] . Unele dintre aceste virusuri fac în prezent obiectul unor investigații preclinice menite să evalueze potențialul lor ca terapii anticanceroase. H-1PV este printre cele mai mici virusuri cunoscute, cu un diametru de 25 nm, aproximativ de dimensiunea unui ribozom. Gazdele naturale ale H-1PV sunt șobolanii. H-1PV este eliminat de la animale prin fecale, iar transmiterea are loc pe cale oronazală. În condiții normale, virusul este stabil timp de câteva luni în mediu.
Cartea de identitate a lui H-1PV. O prezentare generală a clasificării H-1PV și a principalelor caracteristici. Genomul virusului este o moleculă de ADN monocatenar (ssDNA) care include doi promotori. Promotorul P4 controlează unitatea nestructurală (NS), care codifică proteinele nestructurale NS1 și NS2; iar promotorul P38 reglează expresia unității genei VP, care codifică proteinele capside VP1 și VP2. La extremitățile sale, genomul viral conține secvențe palindromice (reprezentate cu gri) care sunt importante pentru amplificarea ADN-ului virusului. Este prezentat un model in silico al capsidei virusului [ 41 ]. Consultați textul pentru o descriere mai detaliată.
Capsida virală H-1PV conține o moleculă de ADN liniară, monocatenar, cu o lungime de aproximativ 5100 de baze. Izolatul original de H-1PV a fost derivat dintr-o infecție accidentală a liniei celulare de hepatom Hep-1 uman, transplantată la șobolani imunosuprimați cu cortizon [ 23] .]. De atunci, virusul a fost propagat în continuare în linii celulare transformate umane. Prin urmare, actualul H-1PV poate diferi de izolatele de câmp autentice. Mici diferențe în lungimea și secvența genomului pot apărea în mod natural ca urmare a adaptării virusului la diferite celule gazdă prin dobândirea de mutații missense sau mici deleții în regiunile codificatoare și necodificatoare ale genomului viral (vezi mai jos). Genomul viral include doi promotori: promotorul P4 timpuriu controlează expresia unității de transcripție nestructurale (NS), care codifică proteinele nestructurale NS1 și NS2; iar promotorul P38 târziu reglează expresia unității de transcripție a particulelor virale (VP), care codifică proteinele capsidei VP1 și VP2 și proteina nestructurală tradusă alternativ (SAT). La extremitățile sale,29 , 30 ].
Proteina nestructurală de 83 kDa NS1 este exprimată devreme după infecție și joacă multiple roluri esențiale în timpul ciclului de viață a virusului. Activitățile NS1 sunt modulate de modificări post-translaționale, cum ar fi fosforilarea și acetilarea (vezi mai jos) [ 31 ]. Datorită activităților sale de ATPază și helicază, NS1 este regulatorul major al replicării ADN-ului viral. De asemenea, joacă un rol esențial în transcripția genelor virale, având în vedere capacitatea sa de a modula transcripția propriului promotor P4 și de a activa promotorul P38 prin legarea specifică de ADN [32] (pentru o revizuire detaliată a mecanismelor de acțiune NS1 , vezi Nüesch și Rommelaere, 2014 [ 33]). NS1 este, de asemenea, principalul efector al citotoxicității virusului (vezi mai jos), iar expresia sa este suficientă pentru a declanșa oprirea ciclului celular și apoptoza – similar cu expresia întregului virus [34 ] . Rolul H-1PV NS2 este mai puțin înțeles, dar, pe baza studiilor privind parvovirusul MVM strâns înrudit, se crede că implică modularea replicării ADN-ului viral, traducerea ARNm viral, asamblarea capsidei și citotoxicitatea virusului [35 ] .
Capsida H-1PV, ca și cea a altor parvovirusuri, constă din 60 de subunități proteice: 10 copii ale VP1 și 50 de copii ale VP2 [ 36 ]. VP1 (81 kDa) și VP2 (65 kDa) sunt traduse din același ARN prin splicing alternativ, dar diferă în N-terminal. VP1 este cu 142 de aminoacizi mai lung decât VP2 (735 față de 593 de aminoacizi). Regiunea VP1-N-terminală a fost asociată cu activitate asemănătoare fosfolipazei A2 (PLA2) și conține semnale de localizare nucleară. Ambele proprietăți sunt importante pentru transferul genomului viral din compartimentul endocitar la nucleul celular [ 37 , 38 , 39 , 40]]. În virionii complet infecțioși, maturi, dar nu în capsidele goale lipsite de ADN viral, VP2 suferă clivarea proteolitică a 18-21 de aminoacizi la capătul său N-terminal pentru a forma VP3, care devine componenta majoră a capsidei virale [36 ] .
Analiza cristalografică structurală a capsidei H-1PV a dezvăluit capsida tipică a parvovirusurilor: o structură cilindrică înconjurată de o depresiune asemănătoare canionului la axele cinci ori, proeminențe de vârf la axele triple icosaedrice și o depresiune asemănătoare gropiței la axele duble. care pare să fie implicat în recunoașterea și legarea suprafeței celulare [ 36 ].
Receptorii celulari specifici H-1PV rămân de identificat, deși s-a demonstrat că acidul sialic terminal joacă un rol esențial în legarea și intrarea la suprafața celulei H-1PV [41 ] . Într-adevăr, tratamentul cu neuraminidază, care scindează acidul sialic de la suprafața celulară, reduce puternic infecția cu H-1PV prin afectarea atașării celulelor virusului. Rolul esențial al acidului sialic în recunoașterea suprafeței celulelor H-1PV a fost confirmat în celulele ovarelor de hamster chinezesc (CHO). În timp ce celulele parentale CHO Pro-5, care exprimă acid sialic pe suprafața lor, sunt complet sensibile la infecția cu H-1PV, cei doi mutanți izogeni CHO Lec 1 și Lec 2, cărora le lipsește acidul sialic, sunt rezistenți. Două reziduuri la depresiunea dublă, I368 și H374, sunt esențiale pentru legarea la acidul sialic [ 41 ].
Pe baza omologiei cu alți membri ai familiei Parvoviridae , se crede că intrarea în celulele H-1PV are loc după legarea membranei celulare virale, prin endocitoză mediată de clatrină (pentru o revizuire cuprinzătoare a mecanismelor de intrare a PV, a se vedea recenzia de la Ros și colab., 2017 [ 42 ]). Cu toate acestea, căile de intrare în celulele H-1PV rămân de elucidat. După traficul în citosol, H-1PV pătrunde în nucleu. Pentru replicarea ADN-ului viral, virusul are nevoie de celule în proliferare, dar el însuși nu este capabil să inducă o celulă repaus să intre în faza S. Odată ce celula intră în faza S, genomul monocatenar este convertit în forme active dublu catenare care sunt accesibile pentru transcripție [ 42 , 43] .]. De îndată ce capsidele goale sunt asamblate în nucleul celulei, genomul viral monocatenar este transferat în cochilii, iar virusurile descendenți sunt transportate în citoplasmă. La încheierea ciclului său de viață, virusul induce liza celulară, care este asociată cu eliberarea extracelulară a particulelor virale descendențe. Acești noi virioni pot iniția a doua runde de infecție litică în celulele vecine [ 42 ].
3. H-1PV la nivel preclinic: obținerea licenței pentru a ucide celulele canceroase
În acest paragraf discutăm principalele caracteristici care fac din H-1PV un virus oncolitic (OV) atractiv.
3.1. Non-patogenitate la om
Gazda naturală a H-1PV este șobolanul. Oamenii nu sunt în mod natural infectați cu virusul. Nu a fost stabilită nicio legătură între virus și bolile umane și nicio imunitate preexistentă la H-1PV nu a fost demonstrată la om. Acesta din urmă reprezintă un avantaj al H-1PV față de OV-urile bazate pe agenți patogeni umani (de exemplu, HSV și Ad), deoarece H-1PV poate avea o fereastră terapeutică mai mare înainte de apariția anticorpilor neutralizanți. Studiile de laborator au demonstrat că, deși H-1PV poate pătrunde în celulele normale, netransformate, această infecție nu reușește să producă noi particule de virus (adică, este o infecție abortivă) și să induce liza celulară [44 ] . Studiile clinice au arătat că tratamentul cu H-1PV este sigur, bine tolerat și nu este asociat cu efecte secundare nedorite (vezi mai jos).
3.2. Oncotropism natural
Din cauza informațiilor genomice limitate ale H-1PV, ciclul său de viață este strict dependent de celula gazdă. Unii dintre factorii necesari pentru o infecție cu virus productivă sunt mai abundenți sau mai activi în mod specific în celula canceroasă decât în omologul său normal. Astfel, celula canceroasă oferă un mediu mai favorabil decât celula normală pentru susținerea ciclului de viață al virusului. Determinanții oncoselectivității H-1PV au fost în centrul mai multor recenzii recente și nu sunt discutați în detaliu aici [ 18 , 31 , 44]]. Unele dintre aceste interacțiuni au fost descrise pentru MVM strâns înrudit și se crede că au loc pentru alte PV, inclusiv H-1PV. Pe scurt, PV profită de unele dintre defectele (epi)genetice care disting celulele canceroase (enumerate mai jos) în multe etape ale ciclului lor de viață.
3.2.1. Proliferare necontrolată
Replicarea ADN-ului PV și, în special, conversia genomului monocatenar în forma activă dublu catenară se bazează pe factori celulari (de exemplu, complexul ciclină A/CDK2) care sunt specifici fazei S și sunt exprimați de obicei în celulele în proliferare. [ 45 , 46 ].
3.2.2. Căi de semnalizare dereglate
Diferiți factori care sunt supraexprimați în celulele canceroase sunt activi în controlul transferului nuclear PV (de exemplu, ruptura mediată de CDK1/PKCα a învelișului nuclear [47] ) , activitățile NS1 (de exemplu, implicarea PDK1/PKB/PKC în fosforilarea NS1 [47]). 48 ]), expresia genei virale (de exemplu, membrii familiilor de factori de transcripție E2F, Ets și ATF sunt necesari pentru a activa promotorul P4 [ 44 , 47 , 49 ]), replicarea virusului (de exemplu, interacțiunea cu componente ale ADN-ului). răspunsul la daune, cum ar fi RPA-P32, γH2AX, NBS1-P, ATR, ATRIP și ATM, care sunt recrutați în centrele de replicare PV subnucleare, așa-numitele corpuri APAR [50] .]), asamblarea capsidei descendenței virale și transportul nuclear (de exemplu, fosforilarea mediată de MAP3K a intermediarilor capside [ 51 ]) și ieșirea virusului (de exemplu, XPO1, PKB, PKCη și Radexin, care reglementează diferiți pași implicați în traficul virusului). în afara celulei [ 52 , 53 , 54 ]).
3.2.3. Deteriorări ale imunității antivirale înnăscute
Defecte ale sistemului imunitar înnăscut sunt frecvente în celulele canceroase, ceea ce le face adesea incapabile să contracareze eficient o infecție cu virus. Infecția cu H-1PV, în mod similar cu infecția cu MVM, declanșează un răspuns imun înnăscut antiviral care este asociat cu producerea de interferoni de tip I (IFN) în celulele normale, dar nu și în celulele canceroase. Acest răspuns antiviral a blocat eficient multiplicarea H-1PV numai în celulele normale [ 21 ]. Cu toate acestea, sensibilitatea rozătoarelor PV la IFN-urile de tip I este în prezent o chestiune de discuție științifică [ 20 , 55 , 56 , 57 , 58 ].
Toate aceste interacțiuni (și probabil multe altele încă de caracterizat) definesc dacă o anumită celulă canceroasă este sau nu susceptibilă la infecția cu H-1PV. Descoperirea de noi modulatori celulari H-1PV este extrem de importantă, deoarece aceste semnături pot servi drept markeri pentru a prezice dacă un anumit pacient este probabil să răspundă favorabil sau nu la tratamentul cu H-1PV (vezi și mai jos).
3.3. Activități oncolitice
Liniile de celule canceroase și culturile primare derivate din diferite entități tumorale, inclusiv cancerul de creier, pancreas, sân, plămân, col uterin și colorectal, melanomul și osteosarcomul, sunt susceptibile la infecția cu H-1PV și la oncoliză (revizuit în [18] ) . De asemenea, sa demonstrat că H-1PV infectează și ucide în mod eficient liniile de celule canceroase derivate din boli hematologice, cum ar fi limfomul Burkitt, limfomul difuz cu celule B mari, leucemia limfoblastică acută cu celule T și limfomul cutanat cu celule T [59 ] . S-a raportat că atât apoptoza, cât și moartea celulelor non-apoptotice sunt induse de H-1PV [ 34] .]. Mai mult, în celulele gliom, H-1PV induce moartea celulelor dependentă de lizozom cu relocarea catepsinelor active B și L (CTSB și CTSL) din lizozomi în citosol și reprimarea concomitentă a doi inhibitori ai catepsinei, cistatina B și C [60 ] . Prin inducerea acestei căi alternative de moarte celulară, H-1PV este capabil să depășească rezistența celulelor gliom la agenți citotoxici convenționali, cum ar fi cisplatină sau la liganzi de moarte solubili, cum ar fi ligandul inductor de apoptoză legat de TNF (TRAIL) inductor de pro-apoptoză.
Motivele pentru care H-1PV induce moartea celulară dependentă de lizozom în celulele gliomului, dar apoptoza sau alte forme de moarte celulară (de exemplu, necroza) în alte linii de celule canceroase, au fost investigate recent de laboratorul nostru. Am descoperit că membrii pro-supraviețuitori ai familiei BCL2 (de exemplu, BCL2, BCL2L2, BCL2L1 și MCL1), care sunt supraexprimați în celulele gliom (și alte tumori) și contribuie la rezistența lor la inductorii de apoptoză, au acționat ca modulatori negativi ai H. -1PV apoptoză indusă. Într-adevăr, adăugarea de mimetice BH3, cum ar fi ABT-737 (care inhibă proteinele BCL2 pro-supraviețuire) a salvat capacitatea H-1PV de a induce apoptoza în aceste celule, potențiind astfel puternic oncoliza celulelor de gliom H-1PV [61 ] .
Moartea celulară indusă de H-1PV este mediată de NS1 prin acumularea de specii reactive de oxigen, ceea ce duce la stres oxidativ, permeabilizarea membranei mitocondriale exterioare, deteriorarea ADN-ului, oprirea ciclului celular și, în final, activarea caspazei [34 ] .
Moartea celulară indusă de H-1PV este, de asemenea, asociată cu câțiva markeri ai morții celulare imunogene, cum ar fi eliberarea proteinei B1 [62] și a proteinei de șoc termic imunogen HSP72 [ 63 ]. Într-un experiment de cocultură în care celulele melanomului au fost crescute împreună cu celule dendritice (DC), liza celulelor indusă de H-1PV a stimulat maturarea și activarea DC [64], însoțită de producerea de citokine proinflamatorii, cum ar fi IL-6 și TNF . -α. DC mature au fost capabile să activeze celulele T citotoxice specifice antigenului, ceea ce a dus la producerea de IFNγ (discutată în problema de Angelova și Rommelaere [ 58 ]).
3.4. Activități oncosupresive
Activitățile oncosupresive ale H-1PV au fost demonstrate în diferite modele animale (revizuite în [ 18 , 44 ]). Oncosupresia este un rezultat nu numai al oncolizei tumorale H-1PV, ci și al activării răspunsurilor imune. Activitățile imunostimulatoare ale H-1PV sunt discutate în ediție de Angelova și Rommelaere [ 58 ]. Ca exemple de activități oncosupresive ale H-1PV, aici rezumăm experimentele efectuate pe modele animale de gliom și adenocarcinom ductal pancreatic (PDAC) [ 58 ].
3.4.1. Modele de gliom
Într-un model de șobolan imunocompetent în care celulele de gliom de șobolan RG2 au fost implantate în creierul șobolanilor alogeni Wistar, tratamentul intratumoral cu o singură doză de H-1PV (1 × 107 unități formatoare de plăci/animal) a crescut semnificativ supraviețuirea globală a tumorii- purtător de animale, cu o treime din animalele tratate suferind remisie completă a tumorii [ 65 ]. Activitate anticanceroasă similară a fost obținută după administrarea sistemică sau intranazală a H-1PV, deși au fost necesare concentrații mai mari de virus în comparație cu injectarea locală [ 65 , 66] .]. Aceste experimente arată capacitatea H-1PV de a traversa bariera hemato-encefalică pentru a ajunge la celulele tumorale. Proteina virală NS1 a fost detectată în tumori, dar nu și în țesuturile normale din jur, confirmând oncoselectivitatea H-1PV. Expresia proteinei virale oncotoxice a fost asociată cu niveluri mai mari de CTSB, confirmând rezultatele anterioare obținute în modelele de cultură celulară [ 60 ]. În plus, virusurile descendenți au fost izolați de la animale, oferind dovezi ale înmulțirii eficiente a virusului în tumori [ 65 ], dar nu și în alte organe sau țesuturi [ 67 , 68 ]. Tratamentul cu virus nu a fost asociat cu pierderea în greutate sau cu alte evenimente toxice adverse [ 65 , 66 , 68], chiar și atunci când virusul a fost injectat direct în creierul șobolanilor naivi la concentrații mari [ 67 ].
Important, a fost demonstrată și implicarea sistemului imunitar în eliminarea celulelor canceroase, deoarece depleția de anticorpi a celulelor T CD8+ a redus puternic oncosupresia mediată de virus [ 69 ].
Activitatea oncosupresivă a H-1PV a fost, de asemenea, confirmată utilizând modelul de xenogrefă U87 al glioamelor umane la șobolani rnu imunodeficienți [ 65 ]. Șobolanii Rnu nu au un timus normal și, prin urmare, nu pot forma celule T. În acest model, celulele T par a fi renunțate pentru oncosupresia H-1PV. Cu toate acestea, nu este posibil să se excludă faptul că alte componente ale sistemului imunitar, cum ar fi macrofagele și celulele natural killer (NK), care sunt încă funcționale la șobolanii rnu, ar fi putut participa la eliminarea celulelor canceroase, compensând astfel absența celulelor T. În sprijinul acestei ipoteze, sa demonstrat că H-1PV stimulează activitatea anticanceroasă a NK [ 70 ].
3.4.2. Modele de adenocarcinom ductal pancreatic (PDAC).
H-1PV a fost utilizat singur sau în combinație cu gemcitabină, tratamentul de primă linie pentru PDAC. Într-un model de șobolan ortotopic singeneic al PDAC, tratamentul cu H-1PV singur a prelungit supraviețuirea globală a animalului. Cu toate acestea, a fost observată o activitate anticancer mai puternică atunci când virusul a fost combinat cu gemcitabină [ 71 ]. Capacitatea lui H-1PV de a se replica în liniile celulare PDAC a corelat pozitiv cu nivelurile de expresie SMAD4. Într-adevăr, s-a văzut că SMAD4 s-a legat de promotorul P4, modulând astfel activitatea acestuia [ 72 ]. Un set mare de experimente a confirmat în modelele PDAC rolul central al sistemului imunitar în oncosupresia mediată de H-1PV. H-1PV are capacitatea de a evoca atât răspunsuri imune înnăscute, cât și adaptive, așa cum a fost discutat în detaliu de Angelova și Rommelaere [ 58 ].
4. H-1PV merge la pacienți: îndeplinirea primelor obiective
Prima utilizare clinică a H-1PV pentru tratamentul cancerului datează din 1965 [ 73 ]. Aceste studii au oferit primele dovezi că tratamentul cu H-1PV este sigur, deși, la regimurile utilizate, nu a modificat cursul cancerelor pacienților. Aceste dovezi, împreună cu rezultatele preclinice ulterioare descrise mai sus, au pus bazele lansării în 2011 a unui studiu clinic de fază I/IIa (numit ParvOryx) folosind H-1PV pentru tratamentul pacienților care suferă de glioblastom recurent (GBM) (vezi de asemenea Angelova și Rommelaere, această problemă [ 58]). GBM este cel mai agresiv și comun tip de tumoră cerebrală malignă primară în creierul adult. GBM rămâne în mod uniform letal, cu o supraviețuire globală mediană dezamăgitoare de numai 12-15 luni și doar 4,5% dintre pacienți supraviețuind mai mult de 5 ani. Prin urmare, sunt necesare urgent noi opțiuni terapeutice [ 74 ]. ParvOryx a fost primul studiu clinic din Germania care a folosit OV. Studiul a implicat 18 pacienți, subdivizați în două brațe care au fost tratați cu doze crescânde de H-1PV administrate intratumoral sau intravenos. Rezultatele studiului sunt rezumate înFigura 2. Studiul și-a îndeplinit obiectivele, demonstrând că monoterapia cu H-1PV este sigură și, în general, bine tolerată. H-1PV a arătat capacitatea de a traversa bariera hemato-encefalică, de a se distribui pe scară largă în micromediul tumoral și de a declanșa răspunsuri inflamatorii, confirmând rezultatele anterioare obținute la nivel preclinic. În comparație cu controalele istorice, supraviețuirea fără progresie și globală a pacienților a fost îmbunătățită, deși toți pacienții au murit în cele din urmă din cauza bolii. Trebuie efectuat un studiu randomizat, dublu-orb pentru a demonstra fără echivoc eficacitatea tratamentului cu H-1PV.
Studiu clinic al H-1PV la pacienții cu glioblastom. (1) H-1PV a fost administrat intratumoral (a) sau intravenos (b). (2) H-1PV injectat intravenos a ajuns la tumora cerebrală prin traversarea barierei hematoencefalice. (3) H-1PV a infectat cu succes celulele canceroase, care au fost pozitive pentru ARN viral și proteina NS1 (deși expresia NS1 a fost sub limitele de detectare când virusul a fost administrat intravenos). (4) H-1PV a indus imunoconversia micromediului tumoral (TME), care a fost caracterizată prin infiltrarea celulelor T CD4+ și CD8+. Celulele T au fost găsite în starea lor activă, așa cum se deduce din expresia perforinei și a granzimei B. Microglia/microfagele au fost de asemenea observate în TME. Aceste celule au exprimat niveluri ridicate de catepsină B. În schimb, doar un număr mic de celule T reglatoare (T-reg), care au fost testate pozitiv pentru FOXP3, și au fost detectate puține celule ucigașe naturale (NK). (5) Seroconversia a avut loc după câteva zile, cu producerea de anticorpi de neutralizare a virusului.
Un al doilea studiu clinic (ParvOryx02), lansat în 2015, a folosit H-1PV pentru a trata pacienții cu PDAC. PDAC este una dintre cele mai letale forme de cancer uman, cu o rată de supraviețuire la cinci ani de aproximativ 6% și o rată medie de supraviețuire a pacientului la mai puțin de șase luni după diagnostic [75 ] . ParvOryx02 a implicat un total de șapte pacienți PDAC cu cel puțin o metastază hepatică. Doze crescătoare de H-1PV au fost administrate intravenos (40% din doză subdivizată în patru fracțiuni zilnice egale) și local în metastaze hepatice (60% într-un singur tratament) [76 ] . Recrutarea a fost finalizată, iar studiul este în prezent în etapa de evaluare. Siguranța și tolerabilitatea sunt principalele obiective ale studiului, în timp ce evaluarea activității antitumorale și eficacitatea clinică sunt obiectivele secundare.
5. H-1PV Înapoi la bancă: Îmbunătățirea în continuare a profilului său anticancer
După cum sa discutat în secțiunile anterioare, rezultatele preclinice și clinice care utilizează H-1PV de tip sălbatic ca monoterapie sunt promițătoare și susțin utilizarea sa ca agent anticancer. Cu toate acestea, aceste rezultate arată, de asemenea, că, așa cum sa observat pentru alte OV, există o discrepanță între eficacitatea anticancer H-1PV obținută la nivel preclinic (de exemplu, la modelele animale) și cea observată la pacienți. Faptul că tratamentul cu H-1PV nu a eradicat tumorile indică clar necesitatea îmbunătățirii eficacității acestuia.
Domeniul terapiei cu virus oncolitic în ultimii ani s-a mutat de la a considera OV-urile ca medicamente auto-amplificatoare capabile să omoare direct celulele canceroase prin inducerea lizei lor, la o formă de imunoterapie care acționează indirect prin inducerea răspunsurilor imune anticancer. Cu toate acestea, rămâne neclar câte runde de cicluri litice sunt necesare pentru a valorifica sistemul imunitar pentru a acționa împotriva cancerului. Experiența clinică acumulată în acești ani a indicat că, cu excepția câtorva cazuri anecdotice, tratamentul cu OV nu a putut elimina toate celulele canceroase. Chiar și în cazurile în care tratamentul cu virus a dus la micșorarea tumorii și inducerea răspunsurilor imune anticanceroase, tumorile nu s-au vindecat complet și în cele din urmă au recidivat.
Credem că, la fel ca pentru alte OV, eforturile H-1PV ar trebui, de asemenea, direcționate în continuare nu numai pentru a îmbunătăți activitățile de modulare imună a virusului, ci și pentru a crește multiplicarea, răspândirea și oncoliza virusului în patul tumoral. Dacă un număr mai mare de celule canceroase sunt vizate și ucise de virus în primul rând, este probabil ca inducerea răspunsurilor imune anticanceroase să fie mai robustă.
De asemenea, de importanță primordială este identificarea biomarkerilor de încredere care ar putea fi utilizați pentru a identifica acei pacienți cel mai probabil să beneficieze de tratamente anticancer bazate pe H-1PV. În prezent, sunt urmărite mai multe abordări în încercarea de a îmbunătăți potențialul anticancer al H-1PV (Figura 3). Dovezi preclinice de concept pentru unele dintre aceste abordări au fost deja dobândite, garantând traducerea clinică a acestor terapii noi.
Îmbunătățirea terapiilor bazate pe H-1PV. ( A ) Combinație cu medicamente. Activitatea anticancer H-1PV poate fi îmbunătățită prin combinarea virusului cu alte modalități anticanceroase. ( B) Dezvoltarea vectorilor PV de a doua generație. (1) H-1PV a fost modificat genetic cu succes prin evoluție moleculară dirijată. Prin trecerea în serie a H-1PV în celulele canceroase semipermisive, virusul a dobândit mutații aleatorii (vârfuri de săgeți portocalii) care au îmbunătățit replicarea și răspândirea virusului. (2 și 3) Elementele funcționale (motive CpG sau o casetă de expresie shARN) au fost inserate în genomul H-1PV fără a afecta capacitatea sa de replicare. Aceste elemente au îmbunătățit modularea imună mediată de virus și, respectiv, oncoliza. (4) Redirecționarea virușilor. Capsida virală a fost modificată genetic prin inserarea unei peptide arginină-glicină-acid aspartic (RGD-4C), care a îmbunătățit specificitatea cancerului la nivelul pătrunderii celulelor virusului. (5) Construcția himerelor Ad-PV. O versiune proiectată a genomului H-1PV a fost inserată într-un genom de adenovirus nereplicativ (Ad). Himera Ad-PV a adus genomul H-1PV în celulele canceroase și a produs particule H-1PV complet infecțioase. Proprietățile anticancer ale himerei Ad-PV pot fi crescute prin inserarea unei transgene terapeutice în componenta Ad a genomului hibrid Ad-PV (în verde).
5.1. Terapii combinate pe bază de H-1PV
Eterogenitatea cancerului limitează adesea eficacitatea unui singur tratament anticancer, făcându-l incapabil să elimine toate celulele canceroase. O tendință comună în terapia anticancer este, prin urmare, proiectarea rațională a unor noi tratamente combinatorii care combină doi sau mai mulți agenți cu mecanisme de acțiune complementare, conducând la efecte anticancer aditive sau sinergice mai bune, fără a crește evenimentele adverse. În mod similar, o abordare logică pentru a îmbunătăți eficacitatea H-1PV (și, în general, a oricărui OV) este căutarea altor modalități anticanceroase care cresc potența virusului, păstrând în același timp profilul de siguranță (Figura 3).
5.1.1. H-1PV în combinație cu tratamente convenționale
Pentru a accelera traducerea clinică, OV-urile au fost combinate cu tratamente de primă linie, cum ar fi radioterapia și chimioterapia, adesea cu rezultate încurajatoare [ 77 , 78 ]. Geletneky și colegii săi au arătat că radioterapia a sensibilizat culturile cu trecere joasă de gliom uman la tratamentul cu H-1PV [ 79 ]. În special, pre-iradierea cu 24 de ore înainte de infecția cu H-1PV a crescut fracția de celule de gliom în faza S, făcând astfel celulele mai susceptibile la replicarea H-1PV. Acest efect a dus la creșterea uciderii celulelor chiar și în celulele gliom rezistente la radiații. Cu toate acestea, acest protocol promițător nu a fost încă validat pe modele animale. Deoarece radioterapia are și activitate imunostimulatoare [ 80], ar fi interesant de verificat dacă co-tratamentul are ca rezultat și reacții imune anticancer mai susținute.
Gemcitabina este un medicament chimioterapeutic care acționează ca un analog al citidinei. Cu toate acestea, utilizarea sa este adesea însoțită de toxicitate ridicată și eficacitate limitată datorită dobândirii rapide a rezistenței la medicamente de către celula canceroasă [ 81 ]. Tratamentul concomitent cu H-1PV/gemcitabină a arătat o activitate de distrugere aditivă in vitro care a fost asociată cu niveluri mai ridicate de catepsină B, sugerând că tratamentul concomitent a declanșat o cale de moarte a celulelor lizozomale. Au fost observate, de asemenea, niveluri mai ridicate de semnalizare a pericolului HMGB1, oferind unele indicii că activitatea de ucidere a indus răspunsuri imune anticancer mai susținute [ 62 ].
H-1PV a infectat și a ucis eficient celulele PDAC rezistente la gemcitabină, eludând astfel rezistența la medicamente a celulelor canceroase. Prin contrast, pretratamentul cu gemcitabină părea să potențeze activitatea anticancer H-1PV prin mecanisme încă necaracterizate. Într-un model de șobolan ortotopic singeneic al PDAC, combinația consecutivă de gemcitabină și H-1PV a crescut supraviețuirea globală a animalelor purtătoare de tumori fără efecte citotoxice nedorite aparent [71], justificând traducerea clinică a unui astfel de protocol . Sunt necesare studii suplimentare pentru a optimiza aceste protocoale și pentru a găsi cele mai oportune regimuri specifice, secvența de adăugare și programul temporal de tratament.
5.1.2. H-1PV în combinație cu modulatori epigenetici
Inhibitorul histon deacetilazei (HDI), acidul valproic (VPA), crește semnificativ activitatea oncolitică a H-1PV. S-a demonstrat că VPA și alte HDI induc stoparea ciclului celular și apoptoza în celulele canceroase [ 82 ]. VPA, care este în prezent în uz clinic pentru tratamentul epilepsiei, este testat în diferite studii clinice ca agent anticancer, singur sau în combinație cu alte medicamente (sursa: https://clinicaltrials.gov ) . La doze din intervalul clinic utilizat pentru tratamentul pe termen lung al pacienților epileptici și subletale pentru celulele canceroase, VPA a stimulat activitatea oncolitică a H-1PV într-o manieră sinergică în liniile de celule canceroase derivate din carcinoamele cervicale și pancreatice, dar nu și în cazul normal, non. -culturi de celule transformate [ 83]. Activitatea anticanceroasă sinergică a fost atribuită capacității VPA de a crește starea de acetilare a proteinei NS1. Două reziduuri de lizină, K85 și K257, au fost găsite prin spectrometrie de masă ca fiind acetilate în NS1, iar nivelurile lor de acetilare au fost îmbunătățite prin adăugarea de VPA. NS1 acetilat a crescut legarea ADN-ului și activitățile transcripționale, ceea ce a dus la o replicare îmbunătățită a virusului în celulele tumorale. Tratamentul concomitent cu H-1PV și VPA a fost asociat cu o creștere semnificativă a stresului oxidativ asociat cu acumularea de specii reactive intracelulare de oxigen și deteriorarea ADN-ului. Replicarea H-1PV îmbunătățită și stresul oxidativ au contribuit la activitatea de ucidere sinergică. Cu toate acestea, din cauza acțiunii pleiotrope a VPA, rolul altor mecanisme necaracterizate (de exemplu, Modularea mediată de VPA a răspunsului imun înnăscut) nu a putut fi exclusă. Validarea protocolului pe modele animale a arătat că VPA a îmbunătățit puternic activitatea de oncosupresie a H-1PV, ceea ce a dus la o remisiune completă și de lungă durată a tumorii la toate animalele tratate concomitent în condițiile în care un singur tratament nu a avut beneficii, sau doar ușoare. pentru supraviețuirea animalelor. Acest rezultat a fost însoțit de o înmulțire mai mare a virusului, stres oxidativ și deteriorare a ADN-ului, confirmând astfel rezultatele obținute în experimentele de cultură celulară. beneficii pentru supraviețuirea animalelor. Acest rezultat a fost însoțit de o înmulțire mai mare a virusului, stres oxidativ și deteriorare a ADN-ului, confirmând astfel rezultatele obținute în experimentele de cultură celulară. beneficii pentru supraviețuirea animalelor. Acest rezultat a fost însoțit de o înmulțire mai mare a virusului, stres oxidativ și deteriorare a ADN-ului, confirmând astfel rezultatele obținute în experimentele de cultură celulară.83 ].
5.1.3. H-1PV în combinație cu inductori de apoptoză
Mai recent, s-a descoperit că mimeticul BH3 ABT-737 acționează sinergic cu H-1PV [ 61 ]. ABT-737 este un inhibitor al proteinelor Bcl-2 pro-supraviețuire/anti-apoptotice, care sunt implicate în reglarea apoptozei. Defecte ale căilor apoptotice apar frecvent în celulele canceroase. Unul dintre cele mai comune mecanisme prin care celulele canceroase contracarează stimulii apoptotici este supraexprimarea proteinelor Bcl-2 [ 84] .]. Adăugarea medicamentului a potențat semnificativ oncoliza H-1PV împotriva unui panou mare de linii de celule canceroase derivate din tumori solide, inclusiv glioame, carcinoame pancreatice și carcinoame cervicale, precum și cancere pulmonare, capului și gâtului, sânului și colonului. Acest efect anticancer puternic a fost observat și în liniile de celule canceroase care au fost slab susceptibile la oncoliza H-1PV. Mai recent, co-tratamentul a fost validat în modele de șobolan xenogrefă de gliom uman și carcinom pancreatic. În aceste modele animale, ABT-737 a stimulat semnificativ oncosupresia mediată de H-1PV, rezultând o creștere semnificativă a supraviețuirii globale a animalelor (rezultate nepublicate).
5.1.4. H-1PV în combinație cu medicamente antiangiogenice și imunomodulatoare
Datorită activităților lor imunostimulatoare și capacității de a converti un micromediu tumoral rece (TME) imunosupresor într-unul inflamat, OV-urile sunt în prezent în evaluare ca amplificatori ai altor forme de imunoterapie, cu rezultate foarte promițătoare obținute atât la nivel preclinic, cât și la nivel clinic [ 2 , 12 , 85 ]. Combinația de H-1PV cu alte terapii imune (de exemplu, blocarea punctelor de control) este foarte promițătoare, așa cum s-a discutat în ediția Angelova și Rommelaere [ 58 ] și în alte recenzii recente [ 69 , 86]]. Această promisiune a fost exemplificată de un raport recent care descrie nouă pacienți cu glioblastom primar sau recurent care au fost tratați ca parte a unui program de utilizare compasivă cu o combinație de H-1PV, anticorpul antiangiogenic bevacizumab și blocarea punctului de control PD-1, nivolumab [87] .]. Acest studiu susține puternic combinația de H-1PV cu medicamente antiangiogenice și blocarea punctelor de control și justifică investigații suplimentare pentru a defini regimurile optime de tratament. Din păcate, evaluarea preclinică a tratamentelor combinate care implică H-1PV și blocarea punctelor de control imun (de exemplu, cu anticorpi împotriva PD-1, PD-L1) este îngreunată de lipsa unei linii celulare de cancer de șoarece care este permisivă pentru infecția cu H-1PV, care exclude utilizarea modelelor de tumori singeneice de șoarece. Cu toate acestea, pe măsură ce domeniul imunoterapiei cancerului progresează rapid, anticorpii împotriva proteinelor de control imun la șobolan pot deveni disponibili în viitorul apropiat, făcând posibilă utilizarea modelelor de șobolani care sunt susceptibile la tratamentul cu H-1PV.
5.2. Vectori bazați pe H-1PV de a doua generație de propagare
Strategiile urmate până acum pentru a îmbunătăți proprietățile anticancer ale H-1PV sunt enumerate mai jos și rezumate înFigura 3B.
5.2.1. Mutanți de fitness H-1PV
H-1PV este un virus cu evoluție rapidă care se poate adapta la un mediu specific al celulei gazdă prin dobândirea de modificări genetice spontane. O variantă naturală a H-1PV a fost izolată într-o linie de celule renale umane nou-născute NB-E în cursul purificării de rutină a plăcii [ 88 ]. Virusul a prezentat o ștergere în cadru de 114 nucleotide (nt) (nt 2022-2135 a genomului viral) care cuprinde regiunea NS și o duplicare a unei secvențe repetate de 58 nt în palindromul din dreapta. Ca o consecință a deleției, proteinele NS1 și NS2 au pierdut 38 de aminoacizi la capătul C-terminal și, respectiv, intern. Eliminarea a conferit virusului o capacitate superioară la nivelul exportului și răspândirii nucleare în comparație cu H-1PV de tip sălbatic [ 89] .]. Într-un studiu ulterior, Hashemi et al. a explorat efectele mutațiilor din regiunea de codificare a H-1PV NS. Prin introducerea în genomul H-1PV a unor modificări de un singur nucleotide care s-a dovedit că îmbunătățesc fitness-ul tulpinii limfotrope strâns legate de MVM, autorii au generat variante de fitness H-1PV cu infectivitate și eficiență de transducție îmbunătățite [35 ] .
Într-un alt studiu, Nuesch et al. a generat un număr de variante adaptate prin trecerea în serie a H-1PV în culturi de celule de gliom uman semipermisive, cu trecere joasă. Variantele conțineau mici deleții și/sau mutații punctuale care conduc la substituții de un singur aminoacid atât în regiunile de codificare (unități ale genei NS și VP), cât și în regiunile netraduse ale genomului viral [90] .]. Similar cu studiile anterioare, s-au găsit mici ștergeri între anii 2000 și 2200 ale genomului viral, sugerând că această parte a genomului poate reprezenta un punct fierbinte de variabilitate pentru adaptarea virusului la o anumită gazdă celulară. Virușii adaptați au prezentat o capacitate mai mare de a se replica în celulele gliomului și o infecțiozitate crescută. Evaluarea activității oncolitice a acestor mutanți de fitness, atât în culturi celulare, cât și pe modele animale, împreună cu evaluarea profilului lor de siguranță, reprezintă un domeniu interesant de cercetare viitoare.
5.2.2. H-1PV-uri înarmate cu stimulatoare imune
Capacitatea limitată de ambalare a PV permite inserarea numai a secvențelor mici de ADN heterologe (max. 250 de baze) în genomul lor (inserția de transgene mai mari poate fi doar în detrimentul regiunii VP, făcând replicarea PV recombinantă deficitară [ 91 ] ).
Raykov și colab. a introdus motive CpG în regiunea netradusă a genomului H-1PV în aval de unitatea genei VP [ 92 ]. Aceste secvențe se găsesc frecvent în genomul microbilor și au activități imunostimulatoare. Inserarea elementelor CpG în genomul virusului nu a afectat replicarea și infectarea virusului. Virușii înarmați cu CpG au fost dotați cu imunogenitate sporită și capacitate adjuvantă atât în cultura celulară, cât și în modelele animale [ 58 , 92 , 93 ].
5.2.3. H-1PV-uri înarmate cu declanșatoare de interferență ARN
Tumorile sunt adesea foarte eterogene în natură. În cadrul unei anumite tumori, o fracțiune de celule poate fi moderat susceptibilă la infecția cu H-1PV și poate supraviețui tratamentului cu virus, ducând la recidiva tumorală. Tehnologia interferenței ARN este utilizată pentru a reduce la tăcere expresia genelor implicate în carcinogeneză pentru a inversa fenotipul malign. Pentru a potența oncotoxicitatea H-1PV și pentru a oferi virusului un mod suplimentar de acțiune pentru uciderea acelor celule canceroase care sunt slab sensibile la infecția sa, am introdus casete de expresie unice de ARN (shRNA) în ac de păr în regiunea netradusă a genomului H-1PV. Într-un studiu de dovadă a conceptului, am arătat că noul virus, pe care l-am numit silencer H-1PV, a fost capabil să exprime shRNA-uri la niveluri ridicate și a fost eficient în tăcere genetică, păstrând în același timp capacitatea de a se replica și de a se propaga eficient.94 ]. Mai recent, am construit un amortizor de zgomot H-1PV care exprimă shRNA care vizează CDK9 (H-1PV sil-shCDK9), a cărui expresie și activitate sunt adesea dereglate în celulele canceroase, contribuind astfel la dezvoltarea cancerului. H-1PV sil-shCDK9 are activitate oncolitică superioară în liniile celulare de cancer semipermisive derivate din pancreas și prostată în comparație cu virusul de tip sălbatic. Validarea acestor rezultate în modelele de șobolan nud xenogrefă ale carcinoamelor pancreatice umane (AsPC-1) și de prostată (PC3) a confirmat activitatea anticanceroasă mai puternică a H-1PV sil-shCDK9, ceea ce a condus la o creștere semnificativă a supraviețuirii globale a animalelor tratate. Aceste rezultate justifică dezvoltarea în continuare a acestei abordări promițătoare.
5.2.4. H-1PV redirecționate împotriva cancerului
Deși H-1PV își exprimă și replică preferabil genomul în celulele (pre)neoplazice, este, de asemenea, capabil să infecteze celulele normale într-un mod neproductiv, în care este inofensiv pentru celule. Cu toate acestea, absorbția virusului de către celulele normale sechestrează o parte semnificativă din doza virală administrată departe de ținta tumorii, reducând astfel eficacitatea acesteia [ 95 ]. Ar fi benefic să se limiteze intrarea H-1PV în mod specific la celulele canceroase, în special având în vedere livrarea sistemică a virusului în aplicații terapeutice. Allaume et al. a arătat că este posibilă modificarea genetică a capsidei H-1PV și modificarea tropismului virusului la nivelul intrării virusului [ 41 ]. Bazat pe un model in silico (figura 1), autorii au identificat două reziduuri presupuse implicate în legarea de acid sialic la axa dublă de simetrie a capsidei virusului. Schimbul de aminoacizi la unul dintre aceste situsuri (H174R) a redus puternic legarea și intrarea la suprafața celulei fără a afecta formarea capsidei virale. Acest mutant a fost folosit ca șablon pentru inserarea unei peptide ciclice arginină-glicină-acid aspartic (RGD)-4, cunoscută că leagă α V β 3 și α V β 5 , două integrine care sunt adesea supraexprimate în celulele canceroase și angiogenice. vasele de sânge [ 96 ]. Inserarea peptidei într-una dintre cele mai proeminente bucle ale vârfului triplu al capsidei virusului a salvat infectia virusului și a conferit virusului o specificitate îmbunătățită pentru celulele canceroase.
5.2.5. Adenovirus (Ad)–PV Himera
Pentru a combina titrul ridicat și capacitatea eficientă de transfer de gene a lui Ad cu potențialul anticancer al H-1PV (PV), o versiune proiectată a genomului H-1PV a fost inserată într-un vector Ad5 cu defect de replicare (șters cu E1 și E3). genomului pentru a crea o himeră Ad-PV [ 97 ]. Purtătorul de publicitate servește ca un cal troian pentru a aduce genomul H-1PV în celulele canceroase, unde ADN-ul PV este excizat din coloana vertebrală publicitară și inițiază în mod autonom un ciclu PV autentic, rezultând în producerea de particule PV. Aceste particule PV păstrează capacitatea de a infecta celulele canceroase vecine, de a le ucide și de a induce runde secundare de infecție litică, amplificând astfel activitatea citotoxică inițială a himerei (Figura 4). În consecință, himera Ad-PV exercită activități citotoxice mai puternice împotriva diferitelor linii de celule canceroase decât cele ale virusurilor PV și Ad parentale, în timp ce este încă inofensivă pentru un grup de celule umane primare normale. Himera Ad-PV oferă, de asemenea, avantajul de a depăși capacitatea de încărcare limitată a PV. Într-adevăr, coloana vertebrală Ad poate găzdui transgene terapeutice care codifică factori pro-apoptotici sau imunostimulatori, a căror activitate poate întări efectul anticancer al PV. Prin urmare, himera oferă avantajul combinării într-un singur vector,
Strategia himeră Ad-PV. Întregul genom oncolitic H-1PV (albastru deschis) a fost inserat într-un genom de vector Ad5 cu deleție E1 și E3 defect de replicare (Ad, în negru). Himera furnizează eficient genomul PV în celulele canceroase, din care sunt generate particulele PV descendențe. În plus, o transgenă (în verde) este exprimată din genomul vectorului și poate acționa intracelular sau extracelular. Aceste particule PV pot infecta celulele canceroase vecine, le pot ucide și induce runde secundare de infecție litică, amplificând astfel activitatea citotoxică inițială a himerei [ 97 ].
5.3. Vectori pe bază de H-1PV cu deficit de propagare recombinanți
După cum sa raportat mai sus, protoparvovirusurile au o capacitate de ambalare limitată. Ca rezultat, în genomul parvoviral pot fi inserate numai secvențe mici de ADN heterologe, fără a afecta capacitatea virusului de a se autopropaga. Înarmarea protoparvovirusurilor cu transgene mai mari este încă posibilă prin înlocuirea unei părți a unității genei VP cu o genă terapeutică [ 95 , 98] .]. Aceste PV recombinante (recPV) rețin secvențele de codificare NS1/2 (controlate de promotorul P4 parvoviral) și telomerii genomului parvoviral, care sunt necesari pentru amplificarea și ambalarea ADN-ului viral. Expresia transgenei este, în general, ținută sub controlul promotorului tardiv parvoviral autentic P38, a cărui activitate este reglată în sus de NS1. Producerea recPV are loc în liniile celulare producătoare la co-transfecția genomului viral recombinant (conținând transgena) cu o a doua plasmidă care adăpostește unitatea genei VP (Figura 5). Acesta din urmă furnizează în trans proteinele VP necesare pentru asamblarea virusului, compensând astfel perturbarea genelor structurale din genomul viral recombinant. Particulele parvovirale recombinante generate în acest mod sunt competente pentru replicarea ADN-ului, dar defectuoase la propagare și ating expresia transgenei numai în celulele infectate în primul rând ca un eveniment cu o singură lovitură. Deleția unei porțiuni din genele structurale oferă posibilitatea de a insera transgene până la aproximativ 1200 nt, în timp ce inserarea de transgene mai mari afectează puternic producția de virus. Parvovirusurile recombinante de rozătoare au fost construite folosind plasmide infecțioase MVM și H-1PV ca schele vertebrale. Exemple de produse transgene exprimate prin intermediul vectorilor H-1PV recombinanți includ apoptina pro-apoptotică [ 99], citokine/chemokine imunostimulatoare (de exemplu, IL2 umană , CCL7 și CCL2 ) [ 100 ] și modulatori antiangiogenici (de exemplu, CXCL10 și CXCL4L1) [ 101 , 102 ]. Unele dintre aceste recPV-uri sunt promițătoare din punct de vedere terapeutic, deoarece s-au dovedit a avea o activitate anticanceroasă îmbunătățită în modelele animale preclinice. Cu toate acestea, producția eficientă a acestor recombinante rămâne un obstacol major în drumul lor către clinică [ 98 ]. Co-transfecția sistemului auxiliar de mai sus cu o plasmidă care conține genele adenovirale E2a, E4(orf6) și ARN VA (de exemplu, plasmida pXX6) a îmbunătățit producția de recPV-uri de peste 10 ori [91 ]]. Pe baza acestor rezultate, a fost construit și utilizat ca ajutor un anunț care adăpostește unitatea genei VP. Acest VP care exprimă Ad a îmbunătățit în continuare randamentele recPV, deoarece a permis liniilor celulare dificil de transfectat, dar eficiente în producerea de recPV (de exemplu, NB324K) să fie utilizate conform unui protocol care se baza în întregime pe infecția cu virus [103 ] . Merită desfășurate activități suplimentare de cercetare și dezvoltare pentru a optimiza și extinde producția recPV.
Producerea de H-1PV recombinant. Pentru producerea de H-1PV recombinant, o parte a regiunii VP1/VP2 a genomului de tip sălbatic este îndepărtată și înlocuită cu o transgenă (în verde). Unitatea genei VP sub controlul unui citomegalovirus (CMV) sau promotor P38 este furnizată în trans de o plasmidă helper (pVP). La co-transfecția plasmidelor, linia celulară producătoare generează particule de parvovirus complet infecțioase, dar cu deficit de propagare, care conțin genomul viral recombinant.
6. Unde urmează pentru H-1PV?
Cercetările asupra H-1PV ca agent oncolitic datează din anii 1960. De atunci, multe eforturi au fost dedicate elucidării ciclului de viață a virusului, a interacțiunilor stricte cu gazda celulei canceroase și a proprietăților sale anticanceroase. După mai bine de 50 de ani de cercetări preclinice, aceste eforturi au culminat cu lansarea, menționată mai sus, a primului studiu clinic la pacienții cu glioblastom recurent. Rezultatele studiului clinic au arătat că tratamentul cu H-1PV este sigur, bine tolerat și asociat cu primele semne de eficacitate anticanceroasă. Aceste rezultate oferă un nou impuls pentru activități noi de cercetare și dezvoltare care vizează întărirea în continuare a profilului anticancer H-1PV și aducerea în clinică a unor terapii mai puternice bazate pe H-1PV, care ar putea îmbunătăți rezultatul clinic.
În secțiunea 5, am oferit exemple despre modul în care acest lucru ar putea fi realizat prin proiectarea rațională a terapiilor combinate bazate pe H-1PV și/sau dezvoltarea unor vectori H-1PV noi, mai puternici, de a doua generație. Aceste studii sunt deosebit de importante și ar trebui să garanteze un portofoliu de tratamente noi, mai eficiente, bazate pe PV, care urmează să fie testate în studiile clinice. Toate aceste strategii ar trebui să urmărească creșterea oncolizei nu numai în termeni cantitativi, ci și calitativi. Într-adevăr, modul în care un anumit tratament ucide celulele canceroase determină succesul terapiei, deoarece tratamentele variază în ceea ce privește imunogenitatea și, astfel, angajează sistemul imunitar să acționeze împotriva cancerului în grade diferite. Pentru a maximiza rolul sistemului imunitar în distrugerea celulelor canceroase, combinațiile de H-1PV cu alte forme de imunoterapie sunt strategii deosebit de promițătoare.Secțiunea 5 ).
Pentru a crește rata de succes a tratamentului cu virus, este, de asemenea, foarte important să se identifice biomarkeri care ar putea prezice rezultatul terapiei. În prezent, încă ne lipsesc cunoștințele de bază despre determinanții care fac o tumoră susceptibilă sau rezistentă la infecția cu H-1PV. De exemplu, rămâne evaziv de ce unele celule canceroase susțin replicarea virusului mai eficient decât altele. De asemenea, căile de intrare utilizate de H-1PV și mecanismele care stau la baza traficului de virus în nucleu sunt în mare măsură necaracterizate. Studiile în aceste domenii pot dezvălui modulatorii celulari cheie (fie activatori, fie represori) ai ciclului de viață al virusului, care ne-ar putea ajuta să anticipăm dacă un anumit pacient este probabil să beneficieze de tratamentul cu virus. Aceste informații pot fi utilizate ca parte a unui tratament viral mai personalizat, în care o anumită terapie este selectată în funcție de structura genetică a tumorii pacientului. În același timp, aceste studii pot oferi cheia pentru îmbunătățirea tratamentului viral, de exemplu, ghidându-ne în identificarea de noi medicamente care ar putea întări replicarea și oncoliza virusului în celulele tumorale sau a unor noi mijloace de îmbunătățire a vectorilor PV de generația următoare (de ex. , shRNA care vizează modulatorii negativi ai ciclului de viață al virusului). Aceste noi evoluții pot depăși restricțiile moleculare actuale care limitează eficacitatea și, prin urmare, extind succesul terapiilor bazate pe H-1PV. de exemplu, ghidându-ne în identificarea de noi medicamente care ar putea întări replicarea și oncoliza virusului în celulele tumorale sau de noi mijloace de îmbunătățire a vectorilor PV de generația următoare (de exemplu, shRNA care vizează modulatorii negativi ai ciclului de viață al virusului). Aceste noi evoluții pot depăși restricțiile moleculare actuale care limitează eficacitatea și, prin urmare, extind succesul terapiilor bazate pe H-1PV. de exemplu, ghidându-ne în identificarea de noi medicamente care ar putea întări replicarea și oncoliza virusului în celulele tumorale sau de noi mijloace de îmbunătățire a vectorilor PV de generația următoare (de exemplu, shRNA care vizează modulatorii negativi ai ciclului de viață al virusului). Aceste noi evoluții pot depăși restricțiile moleculare actuale care limitează eficacitatea și, prin urmare, extind succesul terapiilor bazate pe H-1PV.
Mulțumiri
Mulțumim Assia Angelova, Jean Rommelaere și Caroline Hadley (INLEXIO) pentru lectura critică.
Contribuții ale autorului
CB și AM au scris manuscrisul și au conceput figurile.
Finanțarea
Această lucrare a fost susținută parțial de granturi de cercetare de la Fundația Cancerului din Luxemburg, Télévie și Cooperarea germano-israeliană în cercetarea cancerului DKFZ-MOST către AM
Conflicte de interes
AM este inventator în mai multe brevete/cereri de brevet legate de H-1PV. Niciun alt conflict de interese nu este declarat de către autori.
Referințe
1.
Kaufman HL, Kohlhapp FJ, Zloza A. Viruși oncolitici: O nouă clasă de medicamente pentru imunoterapie. Nat. Rev. Drug Discov. 2015; 14 :642–662. doi: 10.1038/nrd4663. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]2.
Achard C., Surendran A., Wedge ME, Ungerechts G., Bell J., Ilkow CS Aprinderea unui incendiu în micromediul tumoral folosind imunoterapia oncolitică. EBioMedicine. 2018; 31 :17–24. doi: 10.1016/j.ebiom.2018.04.020. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]3.
Najafi M., Goradel NH, Farhood B., Salehi E., Solhjoo S., Toolee H., Kharazinejad E., Mortezaee K. Micromediul tumoral: Interacțiuni și terapie. J. Cell. Physiol. 2019; 234 :5700–5721. doi: 10.1002/jcp.27425. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]4.
Balkwill FR, Capasso M., Hagemann T. Micromediul tumoral dintr-o privire. Pt 23 J. Cell Sci. 2012; 125 :5591–5596. doi: 10.1242/jcs.116392. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]5.
Breitbach CJ, Lichty BD, Bell JC Oncolitic Viruses: Therapeutics With an Identity Crisis. EBioMedicine. 2016; 9 :31–36. doi: 10.1016/j.ebiom.2016.06.046. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]6.
Breitbach CJ, Arulanandam R., De Silva N., Thorne SH, Patt R., Daneshmand M., Moon A., Ilkow C., Burke J., Hwang TH și colab. Virusul vacciniei oncolitice perturbă vascularizația asociată tumorii la om. Cancer Res. 2013; 73 :1265–1275. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-12-2687. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]7.
Benencia F., Courreges MC, Conejo-Garcia JR, Buckanovich RJ, Zhang L., Carroll RH, Morgan MA, Coukos G. HSV oncolitic exercită activitate antiangiogenă directă în carcinomul ovarian. Zumzet. Gene Ther. 2005; 16 :765–778. doi: 10.1089/hum.2005.16.765. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]8.
Cinatl J., Jr., Michaelis M., Driever PH, Cinatl J., Hrabeta J., Suhan T., Doerr HW, Vogel JU Virusul herpes simplex multimutat g207 este un inhibitor puternic al angiogenezei. Neoplazie. 2004; 6 :725–735. doi: 10.1593/neo.04265. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]9.
Chiocca EA, Rabkin SD Viruși oncolitici și aplicarea lor în imunoterapia cancerului. Cancer Immunol. Res. 2014; 2 :295–300. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-14-0015. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]10.
Russell SJ, Peng KW, Bell JC Viroterapia oncolitică. Nat. Biotehnologia. 2012; 30 :658–670. doi: 10.1038/nbt.2287. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]11.
Ledford H. Virușii care luptă împotriva cancerului câștigă aprobarea. Natură. 2015; 526 :622–623. doi: 10.1038/526622a. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]12.
Conry RM, Westbrook B., McKee S., Norwood TG Talimogene laherparepvec: First in class oncolitic virotherapy. Zumzet. Vaccin Imunalt. 2018; 14 :839–846. doi: 10.1080/21645515.2017.1412896. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]13.
Fountzilas C., Patel S., Mahalingam D. Review: Viroterapia oncolitică, actualizări și direcții viitoare. Oncotarget. 2017; 8 :102617–102639. doi: 10.18632/oncotarget.18309. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]14.
Marchini A., Scott EM, Rommelaere J. Depășirea barierelor în viroterapie oncolitică cu inhibitori HDAC și blocare a punctelor de control imun. Viruși. 2016; 8 :9. doi: 10.3390/v8010009. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]15.
Bommareddy PK, Shettigar M., Kaufman HL Integrarea virusurilor oncolitice în imunoterapia combinată a cancerului. Nat. Rev. Immunol. 2018; 18 :498–513. doi: 10.1038/s41577-018-0014-6. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]16.
LaRocca CJ, Warner SG Viruși oncolitici și inhibitori ai punctelor de control: Terapia combinată în studiile clinice. Clin. Transl. Med. 2018; 7:35 . doi: 10.1186/s40169-018-0214-5. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]17.
Samson A., Scott KJ, Taggart D., West EJ, Wilson E., Nuovo GJ, Thomson S., Corns R., Mathew RK, Fuller MJ și colab. Livrarea intravenoasă a reovirusului oncolitic la pacienții cu tumori cerebrale pregătește imunologic blocarea ulterioară a punctelor de control. Sci. Transl. Med. 2018; 10 :eaam7577. doi: 10.1126/scitranslmed.aam7577. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]18.
Marchini A., Bonifati S., Scott EM, Angelova AL, Rommelaere J. Oncolytic parvoviruses: From basic virology to clinical applications. Virol. J. 2015; 12 :6. doi: 10.1186/s12985-014-0223-y. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]19.
Vollmers EM, Tattersall P. Sorte distincte ale celulelor gazdă pentru melanomul malign uman vizat de parvovirusurile de rozătoare oncolitice. Virologie. 2013; 446 :37–48. doi: 10.1016/j.virol.2013.07.013. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]20.
Paglino JC, Andres W., van den Pol AN Parvovirusurile autonome nici nu stimulează și nici nu sunt inhibate de răspunsul interferonului de tip I în celulele umane normale sau canceroase. J. Virol. 2014; 88 :4932–4942. doi: 10.1128/JVI.03508-13. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]21.
Grekova S., Zawatzky R., Horlein R., Cziepluch C., Mincberg M., Davis C., Rommelaere J., Daeffler L. Activarea unui răspuns antiviral în celulele de șoarece normale, dar netransformate: un nou determinant al virusul minut al oncotropismului la șoareci. J. Virol. 2010; 84 :516–531. doi: 10.1128/JVI.01618-09. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]22.
Vollmers EM, D’Abramo A., Jr., Cotmore SF, Tattersall P. Genome sequence of tumor virus x, a member of the genus protoparvovirus in the family parvoviridae. Anunțul genomului. 2014; 2 :e00758-14. doi: 10.1128/genomeA.00758-14. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]23.
Toolan HW, Dalldore G., Barclay M., Chandra S., Moore AE Un agent filtrabil neidentificat izolat din tumorile umane transplantate. Proc. Natl. Acad. Sci. STATELE UNITE ALE AMERICII. 1960; 46 :1256–1258. doi: 10.1073/pnas.46.9.1256. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]24.
Toolan HW Un virus asociat cu tumori umane transplantabile. Taur. NY Acad. Med. 1961; 37 :305–310. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]25.
Toolan HW Lipsa efectului oncogen al virusurilor H pentru hamsteri. Natură. 1967; 214 :1036. doi: 10.1038/2141036a0. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]26.
Toolan HW, Ledinko N. Inhibarea de către virusul H-1 a incidenței tumorilor produse de adenovirusul 12 la hamsteri. Virologie. 1968; 35 :475–478. doi: 10.1016/0042-6822(68)90226-2. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]27.
Toolan HW, Rhode SL, al treilea, Gierthy JF Inhibarea tumorilor induse de 7,12-dimetilbenz(a)antracen la hamsterii sirieni prin infecția anterioară cu parvovirus H-1. Cancer Res. 1982; 42 :2552–2555. [ PubMed ] [ Google Scholar ]28.
Cotmore SF, Agbandje-McKenna M., Chiorini JA, Mukha DV, Pintel DJ, Qiu J., Soderlund-Venermo M., Tattersall P., Tijssen P., Gatherer D. și colab. Familia Parvoviridae. Arc. Virol. 2014; 159 :1239–1247. doi: 10.1007/s00705-013-1914-1. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]29.
Cotmore SF, Tattersall P. Parvovirusuri: Mici nu înseamnă simplu. Annu. Pr. Virol. 2014; 1 :517–537. doi: 10.1146/annurev-virology-031413-085444. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]30.
Li L., Cotmore SF, Tattersall P. Urechile parvovirale de la capătul stâng în ac de păr sunt esențiale în timpul infecției pentru stabilirea unui șablon de transcripție intranucleară funcțională și pentru încapsidarea eficientă a genomului descendenților. J. Virol. 2013; 87 :10501–10514. doi: 10.1128/JVI.01393-13. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]31.
Nuesch JP, Lacroix J., Marchini A., Rommelaere J. Molecular pathways: Rodent parvoviruses-Mechanisms of oncolysis and perspectives for clinical cancer treatment. Clin. Cancer Res. 2012; 18 :3516–3523. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-11-2325. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]32.
Cotmore SF, Christensen J., Nuesch JP, Tattersall P. Polipeptida NS1 a virusului minut al parvovirusului murin al şoarecilor se leagă la secvenţele ADN care conţin motivul [ACCA]2-3. J. Virol. 1995; 69 :1652–1660. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]33.
Nuesch JP, Rommelaere J. Tumor Suppressing Properties of Rodent Parvovirus NS1 Proteins and Their Derivatives. Adv. Exp. Med. Biol. 2014; 818 :99–124. [ PubMed ] [ Google Scholar ]34.
Hristov G., Kramer M., Li J., El-Andaloussi N., Mora R., Daeffler L., Zentgraf H., Rommelaere J., Marchini A. Through Its Nonstructural Protein NS1, Parvovirus H-1 Induces Apoptoza prin acumularea de specii reactive de oxigen. J. Virol. 2010; 84 :5909–5922. doi: 10.1128/JVI.01797-09. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]35.
Hashemi H., Condurat AL, Stroh-Dege A., Weiss N., Geiss C., Pilet J., Cornet Bartolome C., Rommelaere J., Salome N., Dinsart C. Mutations in the Non-Structural Protein -Secvența de codificare a Protoparvovirusului H-1PV Îmbunătățește fitness-ul virusului și arată beneficii cheie în ceea ce privește eficiența de transducție a vectorilor derivați. Viruși. 2018; 10 :150. doi: 10.3390/v10040150. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]36.
Halder S., Nam HJ, Govindasamy L., Vogel M., Dinsart C., Salome N., McKenna R., Agbandje-McKenna M. Caracterizarea structurală a parvovirusului H-1: Comparația virionilor infecțioși cu capsidele goale. J. Virol. 2013; 87 :5128–5140. doi: 10.1128/JVI.03416-12. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]37.
Harbison CE, Chiorini JA, Parrish CR The parvovirus capside odyssey: From the cell surface to the nucleus. Tendințe Microbiol. 2008; 16 :208–214. doi: 10.1016/j.tim.2008.01.012. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]38.
Cotmore SF, D’Abramo AM, Jr., Ticknor CM, Tattersall P. Tranzițiile conformaționale controlate în virionul MVM expun capătul N VP1 și genomul viral fără dezasamblarea particulelor. Virologie. 1999; 254 :169–181. doi: 10.1006/viro.1998.9520. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]39.
Mani B., Baltzer C., Valle N., Almendral JM, Kempf C., Ros C. Procesarea endozomală dependentă de pH scăzut a virusului parvovirus minut al virionului de șoarece duce la externalizarea secvenței N-terminale VP1 ( N-VP1), clivajul N-VP2 și neacoperirea genomului de lungime completă. J. Virol. 2006; 80 :1015–1024. doi: 10.1128/JVI.80.2.1015-1024.2006. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]40.
Zadori Z., Szelei J., Lacoste MC, Li Y., Gariepy S., Raymond P., Allaire M., Nabi IR, Tijssen P. Pentru infectarea parvovirusului este necesară o fosfolipază virală A2. Dev. Celulă. 2001; 1 :291–302. doi: 10.1016/S1534-5807(01)00031-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]41.
Allaume X., El-Andaloussi N., Leuchs B., Bonifati S., Kulkarni A., Marttila T., Kaufmann JK, Nettelbeck DM, Kleinschmidt J., Rommelaere J., et al. Redirecționarea parvovirusului H-1PV de șobolan către celulele canceroase prin inginerie genetică a capsidei virale. J. Virol. 2012; 86 :3452–3465. doi: 10.1128/JVI.06208-11. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]42.
Ros C., Bayat N., Wolfisberg R., Almendral JM Protoparvovirus Cell Entry. Viruși. 2017; 9 :313. doi: 10.3390/v9110313. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]43.
Cotmore SF, Tattersall P. Gama de gazde parvovirale și mecanismele de intrare în celule. Adv. Virus Res. 2007; 70 :183–232. [ PubMed ] [ Google Scholar ]44.
Angelova AL, Geletneky K., Nuesch JP, Rommelaere J. Tumor Selectivity of Oncolytic Parvoviruses: From in vitro and Animal Models to Cancer Patients. Față. Bioing. Biotehnologia. 2015; 3:55 . doi: 10.3389/fbioe.2015.00055. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]45.
Deleu L., Pujol A., Faisst S., Rommelaere J. Activarea promotorului P4 al virusului autonom parvovirus minut al șoarecilor în faza S timpurie este necesară pentru infecția productivă. J. Virol. 1999; 73 :3877–3885. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]46.
Bashir T., Rommelaere J., Cziepluch C. Acumularea in vivo a ciclinei A și a factorilor de replicare celulară în virusul minut al parvovirusului autonom al corpurilor de replicare asociate șoarecilor. J. Virol. 2001; 75 :4394–4398. doi: 10.1128/JVI.75.9.4394-4398.2001. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]47.
Porwal M., Cohen S., Snoussi K., Popa-Wagner R., Anderson F., Dugot-Senant N., Wodrich H., Dinsart C., Kleinschmidt JA, Pante N., et al. Parvovirusurile provoacă distrugerea anvelopei nucleare prin activarea enzimelor cheie ale mitozei. PLoS Pathog. 2013; 9 :e1003671. doi: 10.1371/journal.ppat.1003671. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]48.
Bar S., Rommelaere J., Nuesch JP PKCeta/Rdx-driven phosphorylation of PDK1: Un nou mecanism care promovează supraviețuirea celulelor canceroase și permisivitatea pentru liza indusă de parvovirus. PLoS Pathog. 2015; 11 :e1004703. doi: 10.1371/journal.ppat.1004703. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]49.
Fuks F., Deleu L., Dinsart C., Rommelaere J., Faisst S. ras activarea dependentă de oncogene a promotorului P4 al virusului minut al șoarecilor printr-un element P4 proximal care interacționează cu familia Ets de factori de transcripție. J. Virol. 1996; 70 :1331–1339. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]50.
Majumder K., Etingov I., Pintel DJ Protoparvovirus Interactions with the Cellular DNA Damage Response. Viruși. 2017; 9 :323. doi: 10.3390/v9110323. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]51.
Riolobos L., Valle N., Hernando E., Maroto B., Kann M., Almendral JM Oncoliză virală care vizează controlul semnalizării Raf-1 al transportului nuclear. J. Virol. 2010; 84 :2090–2099. doi: 10.1128/JVI.01550-09. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]52.
Bar S., Daeffler L., Rommelaere J., Nuesch JP Ieșirea veziculoasă a parvovirusurilor litice non-învelite depinde de funcționarea gelsolinei. PLoS Pathog. 2008; 4 :e1000126. doi: 10.1371/journal.ppat.1000126. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]53.
Nuesch JP, Bar S., Lachmann S., Rommelaere J. Proteinele familiei Ezrin-radixin-moesin sunt implicate în replicarea și răspândirea parvovirusului. J. Virol. 2009; 83 :5854–5863. doi: 10.1128/JVI.00039-09. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]54.
Eichwald V., Daeffler L., Klein M., Rommelaere J., Salome N. Proteinele NS2 ale virusului minut al parvovirusului la șoareci sunt necesare pentru evacuarea nucleară eficientă a virionilor descendenți în celulele de șoarece. J. Virol. 2002; 76 :10307–10319. doi: 10.1128/JVI.76.20.10307-10319.2002. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]55.
Grekova S., Aprahamian M., Giese N., Schmitt S., Giese T., Falk CS, Daeffler L., Cziepluch C., Rommelaere J., Raykov Z. Celulele imune participă la activitatea oncosupresivă a parvovirusului H. -1PV și sunt activate ca urmare a infecției lor abortive cu acest agent. Cancer Biol. Acolo. 2010; 10 :1280–1289. doi: 10.4161/cbt.10.12.13455. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]56.
Mattei LM, Cotmore SF, Tattersall P., Iwasaki A. Parvovirusul evades controlul viral dependent de interferon în fibroblastele primare embrionare de șoarece. Virologie. 2013; 442 :20–27. doi: 10.1016/j.virol.2013.03.020. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]57.
Schlehofer JR, Rentrop M., Mannel DN Parvovirusurile sunt ineficiente în inducerea interferonului-beta, a factorului de necroză tumorală-alfa sau a interleukinei-6 în celulele de mamifere. Med. Microbiol. Imunol. 1992; 181 :153–164. doi: 10.1007/BF00202055. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]58.
Angelova A., Rommelaere J. Immune System Stimulation by Oncolytic Rodent Protoparvoviruses. Viruși. 2019; 11 :415. doi: 10.3390/v11050415. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]59.
Angelova AL, Witzens-Harig M., Galabov AS, Rommelaere J. The Oncolytic Virotherapy Era in Cancer Management: Prospects of Applying H-1 Parvovirus to Treat Blood and Solid Cancers. Față. Oncol. 2017; 7:93 . doi: 10.3389/fonc.2017.00093. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]60.
Di Piazza M., Mader C., Geletneky K., Herrero y Calle M., Weber E., Schlehofer J., Deleu L., Rommelaere J. Cytosolic Activation of Cathepsins Mediates Parvovirus H-1-Induced Killing of Cisplatin și celule de gliom rezistente la TRAIL. J. Virol. 2007; 81 :4186–4198. doi: 10.1128/JVI.02601-06. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]61.
Marchini A., Li J., Schroeder L., Rommelaere J., Geletneky K. Terapia cancerului cu un parvovirus combinat cu un inhibitor Bcl-2. 9.889.169. Patent SUA. 13 februarie 2018;62.
Angelova AL, Grekova SP, Heller A., Kuhlmann O., Soyka E., Giese T., Aprahamian M., Bour G., Ruffer S., Cziepluch C., et al. Inducerea complementară a morții celulelor imunogene de către parvovirusul oncolitic H-1PV și gemcitabină în cancerul pancreatic. J. Virol. 2014; 88 :5263–5276. doi: 10.1128/JVI.03688-13. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]63.
Moehler M., Zeidler M., Schede J., Rommelaere J., Galle PR, Cornelis JJ, Heike M. Parvovirusul oncolitic H1 induce eliberarea proteinei de șoc termic HSP72 în celulele tumorale umane susceptibile, dar este posibil să nu afecteze celulele imune primare . Gena cancerului Ther. 2003; 10 :477–480. doi: 10.1038/sj.cgt.7700591. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]64.
Moehler MH, Zeidler M., Wilsberg V., Cornelis JJ, Woelfel T., Rommelaere J., Galle PR, Heike M. Moartea celulelor tumorale induse de parvovirus H-1 îmbunătățește răspunsul imun uman in vitro prin creșterea fagocitozei, maturării și prezentarea încrucișată de către celulele dendritice. Zumzet. Gene Ther. 2005; 16 :996–1005. doi: 10.1089/hum.2005.16.996. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]65.
Geletneky K., Kiprianova I., Ayache A., Koch R., Herrero Y Calle M., Deleu L., Sommer C., Thomas N., Rommelaere J., Schlehofer JR Regression of advanced rat and human glioams by tratament local sau sistemic cu parvovirus H-1 oncolitic la modele de șobolan. Neuro-Oncologie. 2010; 12 :804–814. doi: 10.1093/neuonc/noq023. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]66.
Kiprianova I., Thomas N., Ayache A., Fischer M., Leuchs B., Klein M., Rommelaere J., Schlehofer JR Regresia gliomului la modele de șobolan prin aplicarea intranazală a parvovirusului h-1. Clin. Cancer Res. 2011; 17 :5333–5342. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-10-3124. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]67.
Geletneky K., Leoni AL, Pohlmeyer-Esch G., Loebhard S., Leuchs B., Hoefer C., Jochims K., Dahm M., Huber B., Rommelaere J., et al. Biodisponibilitatea, biodistribuția și toxicitatea SNC a parvovirusului H1 de grad clinic după injectarea intravenoasă și intracerebrală la șobolani. Comp. Med. 2015; 65 :36–45. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]68.
Geletneky K., Leoni AL, Pohlmeyer-Esch G., Loebhard S., Baetz A., Leuchs B., Roscher M., Hoefer C., Jochims K., Dahm M. și colab. Patologia, distribuția organelor și răspunsul imun după injectarea intravenoasă unică și repetată la șobolani cu parvovirus H1 de grad clinic. Comp. Med. 2015; 65 :23–35. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]69.
Geletneky K., Nuesch JP, Angelova A., Kiprianova I., Rommelaere J. Double-faceted mechanism of parvoviral oncosuppression. Curr. Opinează. Virol. 2015; 13 :17–24. doi: 10.1016/j.coviro.2015.03.008. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]70.
Bhat R., Dempe S., Dinsart C., Rommelaere J. Enhancement of NK cell antitumoral responses using an oncolitic parvovirus. Int. J. Cancer. 2011; 128 :908–919. doi: 10.1002/ijc.25415. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]71.
Angelova AL, Aprahamian M., Grekova SP, Hajri A., Leuchs B., Giese NA, Dinsart C., Herrmann A., Balboni G., Rommelaere J., et al. Îmbunătățirea terapiei pe bază de gemcitabină a carcinomului pancreatic prin parvovirusul oncolitic H-1PV. Clin. Cancer Res. 2009; 15 :511–519. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-08-1088. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]72.
Dempe S., Stroh-Dege AY, Schwarz E., Rommelaere J., Dinsart C. SMAD4: Un marker predictiv al permisivității celulelor PDAC pentru infecția oncolitică cu parvovirus H-1PV. Int. J. Cancer. 2010; 126 :2914–2927. doi: 10.1002/ijc.24992. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]73.
Toolan HW, Saunders EL, Southam CM, Moore AE, Levin AG H-1 virus viremia la om. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1965; 119 :711–715. doi: 10.3181/00379727-119-30278. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]74.
Johnson DR, O’Neill BP Supraviețuirea glioblastomului în Statele Unite înainte și în timpul erei temozolomidei. J. Neurooncol. 2012; 107 :359–364. doi: 10.1007/s11060-011-0749-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]75.
Malvezzi M., Bertuccio P., Levi F., La Vecchia C., Negri E. European cancer mortality predictions for the year 2014. Ann. Oncol. 2014; 25 :1650–1656. doi: 10.1093/annonc/mdu138. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]76.
Hajda J., Lehmann M., Krebs O., Kieser M., Geletneky K., Jager D., Dahm M., Huber B., Schoning T., Sedlaczek O., et al. Un studiu necontrolat, cu un singur braț, deschis, de fază II, al administrării intravenoase și intratumorale a ParvOryx la pacienții cu cancer pancreatic metastatic, inoperabil: protocolul ParvOryx02. BMC Cancer. 2017; 17 :576. doi: 10.1186/s12885-017-3604-y. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]77.
Ottolino-Perry K., Diallo JS, Lichty BD, Bell JC, McCart JA Design inteligent: Terapie combinată cu virusuri oncolitice. Mol. Acolo. 2010; 18 :251–263. doi: 10.1038/mt.2009.283. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]78.
Wennier ST, Liu J., McFadden G. Bugs and drugs: Viroterapia oncolitică în combinație cu chimioterapie. Curr. Farmacia. Biotehnologia. 2012; 13 :1817–1833. doi: 10.2174/138920112800958850. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]79.
Geletneky K., Hartkopf AD, Krempien R., Rommelaere J., Schlehofer JR Îmbunătățirea uciderii celulelor umane de gliom de înaltă calitate prin combinarea radiațiilor ionizante cu infecția cu parvovirus H-1 oncolitic. J. Biomed. Biotehnologia. 2010; 2010 :350748. doi: 10.1155/2010/350748. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]80.
Wennerberg E., Vanpouille-Box C., Bornstein S., Yamazaki T., Demaria S., Galluzzi L. Immune recognition of iradiated cancer cells. Imunol. Rev. 2017; 280 :220–230. doi: 10.1111/imr.12568. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]81.
Burris HA, 3rd, Moore MJ, Andersen J., Green MR, Rothenberg ML, Modiano MR, Cripps MC, Portenoy RK, Storniolo AM, Tarassoff P. și colab. Îmbunătățiri ale supraviețuirii și beneficiului clinic cu gemcitabină ca terapie de primă linie pentru pacienții cu cancer de pancreas avansat: un studiu randomizat. J. Clin. Oncol. 1997; 15 :2403–2413. doi: 10.1200/JCO.1997.15.6.2403. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]82.
Minucci S., Pelicci PG Inhibitorii histone deacetilazei și promisiunea unor tratamente epigenetice (și mai multe) pentru cancer. Nat. Rev. Cancer. 2006; 6 :38–51. doi: 10.1038/nrc1779. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]83.
Li J., Bonifati S., Hristov G., Marttila T., Valmary-Degano S., Stanzel S., Schnolzer M., Mougin C., Aprahamian M., Grekova SP, et al. Combinație sinergică de acid valproic și parvovirus oncolitic H-1PV ca terapie potențială împotriva carcinoamelor cervicale și pancreatice. EMBO Mol. Med. 2013; 5 :1537–1555. doi: 10.1002/emmm.201302796. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]84.
Andersen MH, Svane IM, Kvistborg P., Nielsen OJ, Balslev E., Reker S., Becker JC, Straten PT Imunogenicitatea Bcl-2 la pacienții cu cancer. Sânge. 2005; 105 :728–734. doi: 10.1182/blood-2004-07-2548. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]85.
Twumasi-Boateng K., Pettigrew JL, Kwok YYE, Bell JC, Nelson BH Viruși oncolitici ca platforme de inginerie pentru imunoterapie combinată. Nat. Rev. Cancer. 2018; 18 :419–432. doi: 10.1038/s41568-018-0009-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]86.
Moehler M., Goepfert K., Heinrich B., Breitbach CJ, Delic M., Galle PR, Rommelaere J. Oncolytic Virotherapy as Emerging Immunotherapeutic Modality: Potential of Parvovirus H-1. Față. Oncol. 2014; 4:92 . doi: 10.3389/fonc.2014.00092. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]87.
Geletneky K., Bartsch A., Weiss C., Bernhard H., Marchini A., Rommelaere J. ATIM-40. Rata mare de raspuns obiectiv anti.tumoral la 9 pacienti cu glioblastom dupa viro-imunoterapie cu parvovirus H-1 oncolitic in combinatie cu bavacicumab si blocarea punctului de control PD-1. Neuro-Oncologie. 2018; 20 (Supl. 6):vi10. doi: 10.1093/neuonc/noy148.035. [ CrossRef ] [ Google Scholar ]88.
Faisst S., Faisst SR, Dupressoir T., Plaza S., Pujol A., Jauniaux JC, Rhode SL, Rommelaere J. Izolarea unei variante complet infecțioase de parvovirus H-1 care înlocuiește tulpina standard în celulele umane. J. Virol. 1995; 69 :4538–4543. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]89.
Weiss N., Stroh-Dege A., Rommelaere J., Dinsart C., Salome N. O ștergere în cadru în secvența de codificare a proteinei NS a parvovirusului H-1PV stimulează eficient exportul și infecțiozitatea virionilor descendenți. J. Virol. 2012; 86 :7554–7564. doi: 10.1128/JVI.00212-12. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]90.
Nüesch J., Thomas N., Plotzky C., Jean R. Modified Rodent Parvovirus Capable of Propagating and Spread through Human Gliomes. Brevet nr. EP2384761B1. 4 sept 2013;91.
El-Andaloussi N., Endele M., Leuchs B., Bonifati S., Kleinschmidt J., Rommelaere J., Marchini A. Novel sistem de ajutor bazat pe adenovirus pentru a sprijini producția de parvovirus recombinant. Gena cancerului Ther. 2011; 18 :240–249. doi: 10.1038/cgt.2010.73. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]92.
Raykov Z., Grekova S., Leuchs B., Aprahamian M., Rommelaere J. Arming parvoviruses with CpG motifs to improve their oncosuppressive capacity. Int. J. Cancer. 2008; 122 :2880–2884. doi: 10.1002/ijc.23472. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]93.
Grekova SP, Aprahamian M., Giese NA, Bour G., Giese T., Grewenig A., Leuchs B., Hörlein R., Heller A., Angelova AL, et al. Îmbogățirea genomice CpG a parvovirusurilor oncolitice ca strategie de vaccinare anticanceroasă puternică pentru tratamentul adenocarcinomului pancreatic. J. Vaccinuri Vaccin. 2014; 5 doi: 10.4172/2157-7560.1000227. [ CrossRef ] [ Google Scholar ]94.
Illarionova A., Rommelaere J., Leuchs B., Marchini A. Modified Parvovirus Useful for Gene Silencing. Brevet nr. EP2620503. 31 iulie 2013;95.
Cornelis JJ, Salome N., Dinsart C., Rommelaere J. Vectors based on autonomous parvoviruses: Novel tools to treat cancer? J. Gene Med. 2004; 6 (Supl. 1): S193–S202. doi: 10.1002/jgm.502. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]96.
Zitzmann S., Ehemann V., Schwab M. Peptida arginină-glicină-acid aspartic (RGD) se leagă atât la celulele tumorale, cât și la celulele endoteliale tumorale in vivo. Cancer Res. 2002; 62 :5139–5143. [ PubMed ] [ Google Scholar ]97.
El-Andaloussi N., Bonifati S., Kaufmann JK, Mailly L., Daeffler L., Deryckere F., Nettelbeck DM, Rommelaere J., Marchini A. Generarea unei himere adenovirus-parvovirus cu potențial oncolitic îmbunătățit. J. Virol. 2012; 86 :10418–10431. doi: 10.1128/JVI.00848-12. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]98.
Cornelis JJ, Lang SI, Stroh-Dege AY, Balboni G., Dinsart C., Rommelaere J. Cancer gene therapy through autonomous parvovirus–mediated gene transfer. Curr. Gene Ther. 2004; 4 :249–261. doi: 10.2174/1566523043346228. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]99.
Olijslagers S., Dege AY, Dinsart C., Voorhoeve M., Rommelaere J., Noteborn MH, Cornelis JJ Potențiarea unui parvovirus oncolitic recombinant prin expresia apoptinei. Gena cancerului Ther. 2001; 8 :958–965. doi: 10.1038/sj.cgt.7700392. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]100.
Dempe S., Lavie M., Struyf S., Bhat R., Verbeke H., Paschek S., Berghmans N., Geibig R., Rommelaere J., Van Damme J., et al. Activitatea antitumorală a eliberării IL-2 și MCP-3/CCL7 mediată de parvovirus în cancerul pancreatic uman: Implicația recrutării leucocitelor. Cancer Immunol. Imunalt. 2012; 61 :2113–2123. doi: 10.1007/s00262-012-1279-4. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]101.
Lavie M., Struyf S., Stroh-Dege A., Rommelaere J., Van Damme J., Dinsart C. Capacity of wild-type and chemokine-armed parvovirus H-1PV for inhibiting neo-angiogenesis. Virologie. 2013; 447 :221–232. doi: 10.1016/j.virol.2013.09.019. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]102.
Dinsart C., Pervolaraki K., Stroh-Dege A., Lavie M., Ronsse I., Rommelaere J., Van Damme J., Van Raemdonck K., Struyf S. Recombinant Parvoviruses Armed to Deliver CXCL4L1 and CXCL10 Are Deteriorat în efectele lor antiangiogenice și antitumorale într-un model de tumoră cu sarcom Kaposi din cauza interferenței chemokinelor cu ciclul virusului. Zumzet. Gene Ther. 2017; 28 :295–306. doi: 10.1089/hum.2016.108. [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]103.
El-Andaloussi N., Leuchs B., Bonifati S., Rommelaere J., Marchini A. Producție eficientă de parvovirus recombinant cu ajutorul sistemelor derivate din adenovirus. J. Vis. Exp. 2012; 62 :e3518. doi: 10.3791/3518. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
TRATAMENTE CANCER EFICIENTE, NON - toxice 
