Cisplatina reduce nivelul ghrelinelor plasmatice prin receptorul 5-hidroxitriptaminei (5-HT).Acest lucru poate determina tulburări gastro-intestinale induse de cisplatină și împiedică continuarea chimioterapiei.Autorii acestui raport au efectuat un studiu prospectiv, randomizat, de fază 2, pentru a evalua efectele ghrelinului exogen în timpul chimioterapiei pe bază de cisplatină.
METODE:
Patruzeci și doi de pacienți cu cancer esofagian care au primit chimioterapie neoadjuvantă pe bază de cisplatină au fost repartizați fie la un grup de ghrelin (n = 21), fie la un grup placebo (n = 21).Ei au primit fie perfuzii intravenoase de ghrelin uman sintetic (3 pg / kg), fie soluție salină de două ori pe zi, timp de o săptămână, cu administrare de cisplatină.Obiectivul primar a fost modificarea aportului caloric oral, iar obiectivele secundare au fost evenimentele adverse legate de chimioterapie;scorul vizual al scării vizuale analogice (VAS);modificări ale hormonilor gastro-intestinali și starea nutrițională, inclusiv proteine rapide de rulare și calitatea vieții (QoL) estimate la chestionarul de bază QLQ-C30 al Organizației Europene pentru Cercetare și Tratament al Cancerului.
REZULTATE:
Doi pacienți au fost excluși din analiza finală: Un pacient a suspendat administrarea ghrelinului din cauza diaforezei excesive, iar un alt pacient din grupul placebo nu a reușit să monitorizeze chestionarul de auto-evaluare.Aportul alimentar și scorul de apetit VAS au fost semnificativ mai mari în grupul ghrelin decât în grupul placebo (18,2 ± 5,2 kcal / kg / zi față de 12,7 ± 3,4 kcal / kg / zi [P = 0,001] și 6,2 ± 0,9 vs 4,1 ± 0,9 [P <.0001], respectiv).Pacienții din grupul ghrelin au avut mai puține evenimente adverse în timpul chimioterapiei legate de anorexie și greață decât pacienții din grupul martor.Deteriorarea semnificativă a fost observată după chimioterapia în grupul placebo în scorurile calitatea vietii QoL, apetitul, greața și vărsăturile și starea de sănătate globală.
CONCLUZII:
Administrarea pe termen scurt a ghrelinului exogen la începutul chimioterapiei pe bază de cisplatină a stimulat consumul de alimente și a redus efectele adverse.
Cancer.2012 Oct 1; 118 (19): 4785-94.doi: 10.1002 / cncr.27430.Epub 2012 Jan 26.
Furnizarea pe termen scurt a ghrelinului la pacienții cu cancer indică faptul că pot exista beneficii de la furnizarea pe termen lung a ghrelinului pentru tratamentul paliativ al pacienților cu cancer care suferă de pierdere în greutate.Această ipoteză a fost evaluată într-un studiu randomizat, dublu-orb, de fază 2.
METODE:
Pacienții cu cancer cu pierdere în greutate, cu tumori gastrointestinale solide, au fost randomizați să primească fie un tratament cu ghrelin în doză mare (13 micrograme / kg pe zi, n = 17 pacienți) sau un tratament cu doză mică de ghrelină (0,7 μg / kg pe zi, n = 14 pacienți) 8 săptămâni sub formă de injecții subcutanate o dată pe zi.Aperitatea a fost evaluată pe o scală analogică vizuală;și consumul de alimente, consumul de energie în repaus și compoziția corporală (absorbția cu dublă x-absorbție) au fost măsurate înainte de începerea tratamentului și în timpul urmăririi.Au fost măsurate nivelele serice ale ghrelinului, insulinei, factorului de creștere asemănător insulinei 1, hormonului de creștere (GH), trigliceridelor, acizilor grași liberi și glucozei.Calitatea vieții legate de sănătate, anxietatea și depresia au fost evaluate utilizând metode standardizate (Studiul de Sănătate pe Formulare de 36 de articole și Scala de anxietate și depresie).Activitatea fizică, odihna și somnul au fost măsurate prin utilizarea unui monitor cu corp multisenzor.
REZULTATE:
Grupurile de tratament au fost comparabile la includere.Valorile apetitului au fost crescute în mod semnificativ de către ghrelinul cu doză mare, analizat atât pe bază de intenție de tratament, cât și în conformitate cu protocolul.Dozele mari de ghrelin au redus pierderea grăsimii corporale (P <.04) și a serului GH (P <.05).A existat o tendință pentru ghrelinul cu doză mare de a îmbunătăți echilibrul energetic (P <.07; per protocol).
În caz contrar, nu s-au observat diferențe semnificative statistic în variabilele de rezultat între loturile cu doză mare și cele cu doză mică.
Efectele adverse nu au fost observate de ghrelină cu doze mari, cum ar fi nivelurile serice ale markerilor tumorali (antigenul cancerului 125 [CA 125], antigenul carcinoembrionic și CA 19-9).
CONCLUZII:
Rezultatele actuale au sugerat că administrarea zilnică, pe termen lung a ghrelinului la pacienții cu cancer cu pierdere în greutate cu tumori solide susține metabolismul gazdei, îmbunătățește apetitul și atenuează catabolismul.
Departamentul de Chirurgie, Laboratorul de Cercetări Metabolice Chirurgice la Laboratorul Lundberg pentru Cercetarea Cancerului, Academia Sahlgrenska și Spitalul Universitar, Gothenburg, Suedia.kent.lundholm@surgery.gu.se
Există o nevoie stringentă de terapii mai eficiente pentru stimularea apetitului pentru multe grupuri de pacienți, inclusiv pentru cei cu cancer.Am demonstrat anterior că ghrelinul hormonal gastric mărește puternic apetitul la voluntari sănătoși.Aici, am efectuat un studiu clinic acut, randomizat, controlat cu placebo, încrucișat, pentru a determina dacă ghrelinul stimulează pofta de mâncare la pacienții cu cancer cu anorexie.Sapte pacienti cu cancer care au raportat pierderea apetitului au fost recrutati de la clinicile de oncologie la Charing Cross Hospital.Principalele măsuri privind rezultatul au fost consumul de energie dintr-o masă de bufet în timpul administrării de ghrelin sau perfuzie salină și aprecierea mesei, astfel cum a fost evaluată prin scala analogică vizuală.O creștere accentuată a consumului de energie (31 ± 7%, P = 0,005) a fost observată în cazul perfuziei cu ghrelin comparativ cu controlul salinei și fiecare pacient a mâncat mai mult.Scorul de apreciere a masei a fost mai mare cu 28 +/- 8% (P = 0,02) cu tratamentul cu ghrelin.Nu s-au observat efecte secundare.Efectele stimulative ale ghrelinului asupra aportului alimentar și aprecierii mâncării observate în acest studiu preliminar sugerează că ghrelinul ar putea fi un tratament eficace pentru anorexia cancerului și posibil pentru pierderea apetitului la alte grupuri de pacienți.
Cancer-casexia (CC) este o afecțiune multifactorială caracterizată prin scăderea consumului de alimente și pierderea greutății corporale datorită musculaturii reduse, cu sau fără pierderea masei grase.Pacienții cu cancer gastric au o incidență ridicată de cașexie.Am stabilit anterior un nou model de șobolan Cancer-casexia CC indus de celule 85As2 derivate din cancerul gastric uman pentru a examina fiziopatologia Cancer-casexia CC și a identifica terapeutica potențială.La pacienții cu Cancer-casexia CC, se observă deseori anorexie, în ciuda creșterii ghrelinului, ceea ce sugerează că rezistența la ghrelin poate să apară la acești pacienți.
În acest studiu, ne-am propus să clarificăm apariția rezistenței ghrelin la Cancer-casexia șobolanii CC însoțită de anorexie și am investigat dacă rikkunshito (RKT), un medicament tradițional japonez Kampo care potențează semnalizarea ghrelinelor, aameliorat anorexia asociată cu Cancer-casexia CC prin ameliorarea rezistenței ghrelinice.
Șobolanii care suferă de tumori 85As2 au prezentat simptome severe ale Cancer-casexia CC, incluzând anorexia și pierderea greutății corporale / musculaturii, cele din urmă fiind mai mari la șobolanii cachectici decât la șobolanii care nu poartă tumori sau sunt hrăniți cu pereți.
Șobolanii cu Cancer-casexia CC au prezentat răspunsuri slabe la injectarea intraperitoneală de ghrelin.La șobolanii cu Cancer-casexia CC, nivelele de ghrelină din plasmă au fost ridicate, iar nivelele mRNA de peptidă anorexigenă hipotalamică au fost scăzute, în timp ce mRNA receptorului secretor de hormon de creștere hipotalamic ( GHS-R ) nu a fost afectat.
In vitro , rikkunshito RKT a amplificat direct activarea GHS-R indusă de ghrelin. rikkunshito RKT administrată pe cale orală timp de 7 zile a atenuat parțial răspunsul slab la ghrelin și ameliorarea anorexiei fără a afecta creșterea nivelurilor de ghrelină plasmatică la Cancer-casexia șobolani CC.Expresia ARN mRNA neuropeptide h hipotalamice orexigene, dar nu mRNA GHS-R hipotalamic a fost crescută prin rikkunshito RKT.
Astfel, modelul de șobolan cu Cancer-casexia CC indusa de celule 85As2 a dezvoltat rezistența la ghrelin, contribuind eventual la anorexie și la scăderea în greutate corporală.
Mecanismul prin care rikkunshito RKT a ameliorat anorexia în modelul de Cancer-casexia șobolan CC poate implica atenuarea rezistenței ghrelinelor prin intensificarea semnalizării ghrelinelor.Aceste constatări sugerează că rikkunshito RKT poate fi un agent promițător pentru tratamentul Cancer-casexia CC.
Introducere
Sindromul de anorexie-cachexie a cancerului, care apare la 80% dintre pacienții cu cancer avansat, este o boală multifactorială caracterizată prin scăderea aportului alimentar și pierderea greutății corporale și reprezintă cel puțin 20% din decesele legate de cancer [ 1-3 ].Pierderea în greutate, cea mai proeminentă caracteristică clinică a cașexiei, se observă la 30-80% dintre pacienții cu cancer, cu variații observate în funcție de tipul tumorii [ 2 ].De exemplu, pierderea in greutate are loc la o frecventa foarte mare (83%) la pacientii cu cancer gastric si pancreatic, dar este mai putin proeminenta la pacientii cu cancer de san, leucemie acuta nelimfocitara si sarcoame [ 2 ].Citokinele inflamatorii derivate din celulele canceroase și celulele imunitare gazdă, incluzând interleukina (IL) -1, IL-6, factorul de necroză tumorală (TNF) -α și factorul inhibitor al leucemiei (LIF), sunt implicați în dezvoltarea anorexiei canceroase [ 4 – 7 ].Cu toate acestea, mecanismele care stau la baza acestui sindrom nu sunt pe deplin înțelese și nu au fost stabilite terapii adecvate pentru tratamentul casexiei (CC) de cancer.
Atât în diagnosticul, cât și în tratamentul cancerului anorexie-cașexie, tratamentul apetitului este important deoarece întărește rezistența fizică și îmbunătățește calitatea vieții (QOL) și menținerea greutății corporale.Într-adevăr, consumul nutrițional reprezintă 20% din QOL la pacienții cu cancer [ 8 ].Mai mult decât atât, pacienții cu cancer avansat cu satietate timpurie au un risc crescut de deces de 30% [ 9 ].În consecință, ameliorarea anorexiei legate de cașexie la pacienții cu cancer este cheia îmbunătățirii atât a QOL, cât și a prognosticului.
Într-un studiu anterior, am stabilit noi modele de șobolani anorexia-cachexia de cancer prin implantarea șobolanilor nudi cu celule MKN45clone85 sau 85As2 [ 10 ], ambele derivate din linia celulară de cancer de stomac MKN-45 [ 11 ].Modelul de CC indus de 85As2 prezintă cachexie mai veche și mai severă decât modelul MKN45cl85, permițând evaluarea mai rapidă a parametrilor CC asociați cu QOL proastă la pacienți.
Ghrelin, o peptidă cu 28 de aminoacizi, este un ligand endogen al receptorului secretogenului hormonului de creștere (GHS-R) și este secretat în principal din celulele asemănătoare X / A din stomac.Mai multe alte țesuturi, inclusiv hipotalamusul și pancreasul, exprimă niveluri scăzute de ghrelin [ 12 , 13 ].Ghrelin este singura peptidă orexigenică secretă periferic și se cunoaște că are un efect intens de stimulare a apetitului [ 14 ].În plus, ghrelinul stimulează secreția hormonului de creștere (GH), motilitatea gastrică și secreția de acid gastric [ 15 ].Mai mult, ghrelinul din plasmă crește ca răspuns la postul prelungit și scade rapid după hrănire datorită efectelor sale orexigene, sugerând că ghrelinul periferic reglează apetitul [ 16 ].La rozătoare, injecția centrală sau periferică a ghrelinului mărește aportul alimentar și greutatea corporală [ 17].De aceea, ghrelinul poate avea aplicații în tratamentul terapeutic al sindromului de anorexie-cachexie a cancerului și sa demonstrat că ameliorează simptomele de cașexie la modelele pe animale purtătoare de tumori și la pacienții cu cancer [ 18,19 ].Cu toate acestea, la pacienții cu anumite tipuri de CC, concentrațiile plasmatice de ghrelină sunt ridicate, dar încă apare anorexia.Prin urmare, rezistența la ghrelin poate fi observată în starea patologică [ 20-23 ], iar reducerea rezistenței la ghrelin poate fi o țintă terapeutică potențială pentru tratamentul CC.
Rikkunshito (RKT), un medicament tradițional japonez (medicina Kampo), a fost aprobat de Ministerul Sănătății, Muncii și Bunăstării din Japonia și este prescris în general ca un remediu pentru diferite sindroame gastrointestinale superioare, cum ar fi anorexia, dispepsia, și gastrită.Într-un studiu multicentric, dublu-orb, randomizat, controlat cu placebo, sa demonstrat că RKT ameliorează dispepsia funcțională [ 24].La diferite modele experimentale pe animale și la oameni, RKT previne anorexia printr-un mecanism care implică creșterea secreției de ghrelină [ 25-28 ].În plus, sa demonstrat că RKT potențează semnalizarea ghrelin prin creșterea activității GHS-R [ 29 , 30 ].Recent, am demonstrat că RKT ameliorează simptomele CC într-un nou model de șobolan CC indus de 85As2 [ 10 ].Rămâne neclar dacă secreția sau răspunsul ghrelin crescut este legată de mecanismele specifice prin care RKT previne anorexia cancerului – cachexia în acest model.
În acest studiu, ne-am propus să clarificăm apariția rezistenței la ghrelin în modelul nostru de șobolan anorexie-cașexie și am investigat sensibilitatea acestor șobolani la administrarea ghrelinelor exogene.Mai mult, am investigat dacă RKT ameliorat anorexia în modelul nostru de șobolan CC prin intermediul unui mecanism care implică atenuarea rezistenței ghrelinelor.
materiale si metode
Experimentul pe animale
Șoarecii F344 / NJcl-rnu / rnu masculi de șase săptămâni (CLEA Japan, Tokyo, Japonia) au fost găzduiți individual sub un ciclu de lumină-întuneric 12: 12 h (luminile sunt aprinse la ora 08:00) la o temperatură și umiditate cu acces liber la alimente (CE-2, CLEA Japonia) și apă.Șobolanii au fost lăsați să se aclimatizeze în condițiile de laborator timp de 2 săptămâni înainte de experimentare.Toate studiile au fost efectuate în conformitate cu Ghidul pentru experimentele pe animale și aprobate de Comitetul pentru Etică în Experimentarea Animalelor din cadrul Centrului Național pentru Cancer (aprobările nr. T09-050-M02 și T09-050-C04).Aceste linii directoare au respectat standardele etice privind animalele experimentale din Japonia, conform legii.
Linii celulare și condițiile culturii
Celulele 85As2 s-au stabilit din celulele cancerului gastric uman MKN-45 descrise anterior [ 11 ].Celulele au fost menținute în mediu RPMI 1640 (Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japonia) suplimentat cu ser 10% fetal bovin (FBS, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), 100 UI / ml penicilină G sodică și 100 pg / streptomicină sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C.Celulele 293A de rinichi embrionare umană (HEK) 293A care au exprimat în mod stabil GHS-R s-au menținut în mediu Eagle modificat de Dulbecco (DMEM, glucoză înaltă, Wako, Osaka, Japonia) suplimentat cu 10% FBS, 100 UI / ml sulfat de streptomicină și 500 ug / ml soluție apoasă disulfat G418 (Nacalai Tesque, Inc.) sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C.
Pregătirea modelului CC și a șobolanilor hrăniți cu perechi
Modelul de șobolan CC indus de celule 85As2 a fost preparat așa cum s-a descris mai înainte [ 10 ].Pe scurt, celulele s-au menținut în mediu RPMI 1640 suplimentat cu 10% FBS, 100 UI / ml penicilină G sodică și 100 pg / ml sulfat de streptomicină sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C.Celulele 85As2 au fost recoltate din culturi subconfluente după o scurtă expunere la 0,25% tripsină și 0,2% acid etilendiaminotetraacetic.Celulele s-au spălat o dată în mediu fără ser și s-au resuspendat în soluție salină tamponată cu fosfat.Șobolanii anesteziați prin inhalarea izofluranului de 1-2,5% (Mylan, Osaka, Japonia) au fost inoculați subcutanat (sc) cu 1 x 107 celule / situs 85As2 (șobolani care poartă tumori) sau salină (șobolani de control care nu poartă tumori) flancul stâng și dreapta, respectiv în ziua 0. Axele majore și minore ale tumorii au fost măsurate și volumul tumorii a fost estimat utilizând următoarea ecuație: volumul tumorii (cm3) = axa principală (cm) × axa minoră (cm) × axa minoră (cm) × 1/2 [ 31 ].Șobolanii hrăniți cu șobolan au primit o cantitate de alimente care a fost aceeași cu cea consumată de șobolanii CC indusă de 85As2 în ziua precedentă (zilele 1-15), cantitatea de alimente pentru șobolanii hrăniți în pereche în ziua 1 a fost echivalentă cu cea a cachecticului șobolani în ziua 0).S-au evaluat greutatea corporală, greutățile țesuturilor organelor, consumul de alimente și apă, nivelul glucozei plasmatice și expresia mRNA a hormonului de peptidă orexigenic / anorexigenic în regiunile hipotalamice.Greutatea corporală și consumul de alimente și apă au fost măsurate zilnic până în ziua 14 sau 15. În ziua 14 (șobolani CC și șobolani de control care nu sufereau tumori) sau 15 (șobolani hrăniți cu perechi), șobolanii au fost anesteziați prin inhalare de 1-2,5 % izofluran și sângele colectat din aorta abdominală a fost imediat supus măsurării concentrației plasmatice a glucozei utilizând un sistem pilot de glucoză (IWAI Chemicals Company, Tokyo, Japonia).Creierul a fost imediat disecat și depozitat la -80 ° C până la hibridizarea in situ .Țesuturile organelor au fost imediat disecate și cântărite.
Evaluarea efectelor orexigene ale injectării ghrelinului exogen
Șobolanii au fost implantați sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 107 celule / sit) în ziua 0. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori.Alimentele și aportul de apă au fost măsurate săptămânal până în ziua 14. După 2 săptămâni (ziua 14), șobolanii au fost injectați intraperitoneal (ip) cu ghrelin de șobolan (10 nmol / animal, Institutul Peptide, Osaka, Japonia) măsurată timp de o oră după injectare.A doua zi, șobolanii au fost injectați cu soluție salină, iar alimentația și aportul de apă au fost măsurate timp de 1 oră.Salina sau ghrelinul a fost injectat între orele 10:00 și 13:00.
Efectele RKT asupra atenuării efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii CC
RKT a fost fabricat de către Tsumura și Co. (Tokyo, Japonia) prin uscarea prin pulverizare a unui extract de apă fierbinte din următoarele opt medicamente brute pentru a forma un extract pulverulent: 18,6% Atractylodis lanceae rhizoma (rizom de Atractylodes lancea De Candolle, Compositae) % De ginseng radix (rădăcină de Panax ginseng CA Meyer, Araliaceae), 18,6% tubel Pinelliae (tuber de Pinellia ternateBreitenbach), 18,6% Hoelen (sclerotium Poria cocos Wolf, Polyporaceae), 9,3% Zizyphi fructus (fructul Zizyphus jujuba Miller var ( Rinacea ), 4,3 % Glycyrrhizae radix (rădăcină și stolon de Glycyrrhiza uralensis Fisher, Leguminosae) și 2,3% Zingiberis rhizoma (rhizomul de Zingiber officinale Roscoe, Zingiberaceae).RKT a fost dizolvat în apă distilată (DW) la g / 10 mL în laboratorul nostru și a fost administrat prin gavaj oral.Șobolanii au fost implantați sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 107 celule / sit) în ziua 0. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori.Șobolanii care sufereau tumori au fost împărțiți în două grupe: un grup de tratament (85As2 + RKT) și un grup de control al tumorilor (85As2 + DW).Grupul de tratament a fost administrat pe cale orală RKT de două ori pe zi la 1 g / kg / zi timp de 7 zile (de la ziua 14 până în ziua 20).Grupului de control purtător al tumorii și șobolanilor care nu poartă tumori s-au administrat DW (10 ml / kg) în aceeași perioadă.Pentru evaluarea efectelor orexigene induse de ghrelin, șobolanii au fost injectați ip cu ghrelin (10 nmol / animal) în ziua 21, iar consumul alimentar a fost măsurat timp de 1 oră sau 22 ore după injectare.A doua zi, șobolanii au fost injectați ip cu vehicul (soluție salină) ca martor, iar consumul de alimente a fost măsurat timp de 1 oră sau 22 h.
Efectele RKT asupra anorexiei-cachexiei, ghrelinului plasmatic și a peptidei orexigene / anorexigenice hipotalamice în modelul CC
Într-o procedură similară cu cea utilizată pentru evaluarea efectelor RKT asupra atenuării efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii indusă de 85As2, s-au preparat trei grupuri (control + DW, 85As2 + DW și 85As2 + RKT).Aportul alimentar și greutatea corporală au fost măsurate săptămânal până în ziua 14 și zilnic după aceea.În plus față de creșterea și pierderea în greutate după administrare, datele privind greutatea corporală în zilele 14-21 după administrarea RKT sau DW au fost exprimate utilizând următoarea relație ca comparații zilnice:% din pre (%) = greutatea corporală a fiecărui animal după administrare zilele 15-21) / greutatea corporală a fiecărui animal înainte de administrare (în ziua 14) × 100. Aportul de alimente după administrarea RKT sau DW a fost calculat ca valoarea medie zilnică din zilele 16 până la 21 după cum urmează: consumul mediu zilnic de hrană pentru fiecare animal (după) – consumul de hrană al fiecărui animal (înainte).
În ziua 21, pentru măsurarea concentrațiilor plasmatice de acil ghrelin, șobolanii au fost anesteziați cu izofluran, sângele colectat din aorta abdominală a fost centrifugat (1700 x g timp de 10 minute) și plasmă a fost păstrată la -80 ° C până la analiză.Pentru măsurarea mARN – urilor neuropeptidului Y ( NPY ) și GHS-R și a hibridizării in situ , creierul sau hipotalamusul a fost imediat disecat și depozitat la -80 ° C până la analiză.
Măsurarea concentrațiilor plasmatice de grelină
Sângele colectat din aorta abdominală a fost centrifugat (1700 x g timp de 10 minute).Pentru a preveni degradarea acil ghrelinului, plasmă a fost imediat tratată cu 1/10 volum de HCI 1 M.Plasma a fost stocată la -80 ° C până la analiză.Nivelele plasmatice de acil ghrelină au fost măsurate utilizând un kit de testare a imunosorbantului enzimatic (ELISA) (SCETI, Tokyo, Japonia) conform instrucțiunilor producătorului.
Extracția ARN, transcripția inversă și reacția în lanț în timp real a polimerazei (PCR)
PCR în timp real a fost realizat așa cum s-a descris mai sus [ 32 ].Pe scurt, suprafața hipotalamică a fost disecată pe o placă metalică rece pe gheață și ARN-ul total a fost izolat utilizând un kit Isogen (Nippon Gene Co., Ltd., Tokyo, Japonia) conform instrucțiunilor producătorului.Primul catenar ADNc a fost transcris invers din 5 ug ARN total utilizând sistemul de sinteză SuperScript First-Strand (Invitrogen) într-un volum final de 100 pl.Cromatografia rapidă (2 pL) a fost amplificată într-un ciclu termic rapid (LightCycler, Roche Diagnostics, Barcelona, Spania) folosind LightCycler 480 SYBR Green I MasterMix (Roche) și următoarele primeri: GHS-R1a , 5'-GAAAGCAAACACCACCACAG-3'- și (invers) 5'-AGGAAGCTATGGCGGAGAC-3' ;NPY , (înainte) 5'-CCGCTCTGCGACACTACAT-3 ' și (invers) 5'-TGTCTCAGGGCTGGATCTCT-3' ;GAPDH, (înainte) 5'-CCCCCAATGTATCCGTTGTG-3 ' și (invers) 5'-TAGCCCAGGATGCCCTTTAGT-3' .Produsele PCR au fost cuantificate utilizând software-ul LightCycler 480.Cantitatea de ARNm țintă în grupul experimental relativ la cea din grupul martor a fost determinată din valorile de fluorescență și de prag (CT) rezultate utilizând metoda 2- ΔΔCT [ 33 ].
Hibridizarea in situ
Hibridizarea in situ a fost realizată așa cum s-a descris mai înainte [ 10 , 34 ].Pe scurt, s-au preparat secțiuni de creier coronat grosime de 12 um înghețate într-un criostat la -20 ° C, dezghețate și montate pe diapozitive acoperite cu gelatină / crom de aluminiu.Nucleul paraventricular (PVN), nucleul arcuat (ARC) și zona hipotalamică laterală (LHA) au fost identificate conform atlasului Paxinos și Watson [ 35 ] și confirmate prin microscopie.Hibridizarea a fost realizată sub o acoperitoare Nescofilm (Bando Chemical IMD, Osaka, Japonia).[35S] marcat 3′-end-deoxyoligonucleotides complementare transcrieri care codifică NPY (5'-GGAGTAGTATCTGGCCATGTCCTCTGCTGGCGCGTC-3'), proteina agouti-asociată (AgRP; 5'-CGACGCGGAGAACGAGACTCGCGGTTCTGTGGATCTAGCACCTCTGCC-3'), proopiomelanocortin (POMC; 5'-CTTCTTGCCCAGCGGCTTGCCCCAGCAGAAGTGCTCCATGGACTAGGA-3'), cocaină și-amfetamina reglementate transcript (CART; 5'-TGGGGACTTGGCCGTACTTCTTCTCATAGATCGGAATGC-3'), orexin (5'-TTCGTAGAGACGGCAGGAACACGTCTTCTGGCGACA-3'), de eliberare a corticotropinei hormonului (CRH;5'-CAGTTTCCTGTTGCTGTGAGCTTGCTGAGCTAACTGCTCTGCCCTGGC-3'), hormonul de eliberare a tirotropinei (TRH;5'-GTCTTTTTCCTCCTCCTCCCTTTTGCCTGGATGCTGCGCTTTTGTGAT-3' ) și hormonul de concentrare a melaninei ( MCH ; 5'-CCAACAGGGTCGGTAGACTCGTCCCAGCAT-3' ) au fost utilizați ca probe specifice genei.
Au fost utilizate numerele totale de 6×105 cpm / diapozitiv pentru NPY, AgPR, POMC, CART, MCH, TRH și CRH și 4×105 cpm / diapozitiv pentru orexină.Secțiunile hibridizate care conțin regiunile ARC, LHA și PVN au fost expuse filmului autoradiografic (Hyperfilm; Amersham, Buckinghamshire, UK) timp de 4 zile pentru orexină și 7 zile pentru NYP, AgRP, POMC, CART, MCH și CRH.Imaginile autoradiografice au fost capturate la 40x mărire și cuantificate folosind un analizor MCID imagistic (Imaging Research, St. Catherines, ON, Canada).Absorbanța medie a fost măsurată și comparată cu eșantioanele microscale de 14 C expuse simultan (Amersham).Curba standard a fost adaptată în funcție de absorbția microscalelor de 14 C pe același film.
Evaluarea semnalizării ghrelinelor utilizând sistemul CellKey
Măsurarea semnalizării ghrelinelor de către sistemul CellKey (MDS Sciex, Ontario, Canada) a fost efectuată utilizând metodele descrise anterior [ 36 ].Pe scurt, o placă CellKey cu 96 de godeuri a fost spălată cu apă sterilă timp de 1 oră după acoperirea suprafeței cu poli- d- lizină.Celulele HEK293A care exprimă GHS-R au fost însămânțate la o densitate de 25.000 celule / godeu și incubate sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C.Celulele au fost tratate cu vehicul sau ghrelin la 28 ° C.Ghrelin a fost preparat la o concentrație finală de 10x ( 10-10 , 3×10-10 și 10-9 M) diluată cu soluție salină echilibrată Hank (1,3 mM CaCI2 2H2O, 0,81 mM MgS04, 5,4 mM KCI, 0,44 mM KH2P04, 4,2 mM NaHC03, 136,9 mM NaCI, 0,34 mM Na2HP04 și 5,6 mM d- glucoză) conținând 20 mM acid 4- (2-hidroxietil) -1-piperazetansulfonic (HEPES).Plăcile celulare s-au spălat de trei ori cu pH 7,4. Soluția salină echilibrată Hank conținând 20 mM HEPES (HHBS) și 135 pL HHBS s-a adăugat la fiecare godeu.Plăcile au fost lăsate să se echilibreze la 28 ° C timp de 30 de minute.O linie de bază a fost stabilită timp de 5 minute, s-a adăugat 15 ui de soluție de ghrelin sau vehicul (HHBS), iar impedanța dintre electrozii a fost măsurată la fiecare 10 s timp de 15 minute pentru a măsura semnalizarea ghrelinică.Pentru a evalua efectele RKT asupra activării semnalizării ghrelinice, s-au adăugat 135 pl soluție RKT (10 pg / ml) la plăci după spălarea finală și s-au lăsat să se echilibreze la 28 ° C timp de 1 oră în dispozitivul CellKey.Impedanța a fost apoi măsurată după adăugarea soluției de ghrelin sau a vehiculului.
Efectele hrănirii pe termen lung a unei diete care conține RKT asupra anorexiei în modelul CC
Șobolanii au fost împărțiți în trei grupe: un grup care nu poartă tumori (control + CE-2), un grup de control al grupului tumoral (85As2 + CE-2) și un grup de tratament (85As2 + RKT-1%).Șobolanii au fost implantați sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 106 celule / sit) în ziua 0 ca șobolani care poartă tumoare.Șobolanii inoculați cu soluție salină servesc ca grup de control care nu poartă tumori.Grupul de tratament a fost alimentat cu o dietă RKT-1% (dieta CE-2 conținând 1% RKT) cu acces ad libitum în timpul experimentului (din ziua -7 până în ziua 28).Grupul de control al tumorii și cel care nu poartă tumori a fost alimentat cu CE-2 în aceeași perioadă.Volumul tumoral, consumul mediu zilnic de hrană și greutatea corporală au fost măsurate săptămânal în această perioadă.
analize statistice
Toate datele sunt exprimate ca medie ± eroare standard a mediei (SEM).Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând testele teste ale lui Aspin-Welch, t- testele pereche, analiza unică a varianței (ANOVA), urmate de testele comparative multiple ale lui Dunnett, ANOVA cu o singură cale, urmate de testele comparative multiple ale lui Bonferroni post- hoc sau două – în repetate rânduri, ANOVA, urmată de teste Bonferroni post-hoc.Nivelul de semnificație α a fost stabilit la 0,05, iar diferențele cu o valoare pbidirecțională de mai puțin de 0,05 au fost considerate semnificative.Toate analizele statistice au fost efectuate utilizând GraphPad Prism versiunea 5 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, SUA).
Rezultate
Caracterizarea modelului de șobolan CC indus de 85As2 comparativ cu șobolanii hrăniți cu perechi
Greutatea corporală și consumul de alimente și apă au fost examinate la șobolani până la 14 zile după tratamentul cu 85As2 (sau vehicul) sau la începutul hrănirii cu perechi.Implantarea subcutanată a celulelor 85As2 a determinat creșterea progresivă a tumorii la șobolani;volumele tumorale și greutățile la 14 zile după implantarea celulelor 85As2 sunt prezentate în Tabelul 1 .Greutățile corporale ale șobolanilor care nu suferă de tumori au continuat să crească în timpul experimentului, în timp ce greutățile corporale ale șobolanilor din grupurile 85As2 și cele alimentate cu perechi nu au fost.Măsurile repetate în două direcții ANOVA ale greutăților corporale în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale timpului (F) (F (14, 210) = 34.98, p <0.0001) și interacțiunea de tratament (grup) 22,59, p <0,0001], dar nu și tratamentul [F (2, 210) = 2,789, nu semnificativ (ns)].Greutățile corporale ale șobolanilor din grupul 85As2 în ziua 10 au fost semnificativ mai mici decât cele din grupul martor, iar după aceea, diferențele au crescut treptat (măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc, ziua 10: p <0,05 , ziua 11: p <0,01, zilele 12-14: p <0,001;Pe de altă parte, șobolanii hrăniți cu perechi au prezentat modificări ale greutății corporale în timp, similare cu cele din șobolanii CC induși de 85As2, iar greutatea corporală a acestora a fost semnificativ mai mică decât cea din grupul de control (măsurători repetate ANOVA, hoc teste Bonferroni, ziua 10: p <0,05; zilele 11-12: p <0,01; zilele 13-14: p <0,001; Fig. 1A ).Reducerea consumului alimentar a fost observată în grupul 85As2 în comparație cu grupul martor;prin urmare, aportul alimentar în grupul alimentat cu perechi a fost redus similar cu cel din grupul 85As2.Măsurile repetate în două direcții ANOVA privind aportul alimentar la toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului [F (2, 210) = 35,05, p <0,0001], timpul [F (14, 210) = 31,50, p <0,0001] × timp de interacțiune [F (28, 210) = 7,26, p <0,0001].Reducerea consumului alimentar în grupul 85As2 în comparație cu animalele de control a fost observată la 6 zile după implantare, iar diferența a devenit mai mare cu 8 zile mai târziu.Ulterior, reducerea a fost stabilă și persistată (măsurători repetate în două direcții ANOVA urmate de teste post-hoc Bonferroni, zilele 6-7: p <0,01, zilele 8-14: p <0,001;Similar cu observarea la șobolanii CC indus de 85As2, aportul alimentar la șobolanii hrăniți cu perechi a fost semnificativ redus (măsurători repetate în două sensuri ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, zilele 6, 8 și 14: p <0,01; și 9-13: p <0,001; Fig. 1B ).În plus, mușchii (mai mare pectoral, gastrocnemius și tibialis anterior), țesutul adipos (grăsime epididimală și mesenterială), greutatea ficatului, splinei și a rinichilor au fost substanțial reduse atât la șobolanii CC hrăniți cu perechi cât și 85As2, comparativ cu șobolanii de control Tabelul 1 ).Nivelurile de glucoză din plasmă au fost, de asemenea, semnificativ mai scăzute atât la șobolanii hrăniți cu perechi, cât și la șobolanii CC decât la șobolanii control.Greutatea corporală, după scăderea greutății tumorii, a fost mai scăzută în cazul cachectic decât în cazul șobolanilor hrăniți cu perechi.În plus, greutatea mai mare a mușchilor pectorali în grupul 85As2 a fost semnificativ mai mică decât cea din grupul hrănit cu perechi.Aportul de apă a fost redus în grupul 85As2 comparativ cu cel din grupul martor și a fost ușor redus în grupul hrănit cu perechi.Măsurile repetate în două direcții ANOVA privind aportul de apă în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului [F (2, 210) = 8,744, p <0,01], timpul [F (14, 210) = 26,17, p <0,0001] × timp de interacțiune [F (28, 210) = 4.318, p <0.0001].Reducerea șobolanilor CC a fost semnificativă, stabilă și persistentă (măsurători repetate în două direcții ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, zile 7-8: p <0,01, zile 9-14: p<0,001;Cu toate acestea, spre deosebire de șobolanii CC, aportul de apă la șobolanii hrăniți cu perechi a prezentat o reducere semnificativă numai în ziua 14.
tabelul 1
Organismul, tumora, mușchiul, grăsimile, greutățile organelor și nivelurile de glucoză din plasmă la șobolani cu hrănire cu perechi și la șobolani indusă de 85As2.
Șobolanii au fost inoculate cu celule sc A 85As2 (1 x 10 7 celule / sau site – ul) , injectat cu soluție salină în ambele flancuri. Datele sunt exprimate ca media ± SEM a șase șobolani. Toate datele privind greutatea sunt exprimate în grame. Datele privind glucoza din plasmă sunt exprimate în mg / dl. Volumul tumorii a fost estimată utilizând următoarea ecuație: volumul tumorii (cm 3) = axa principală (cm) × axa minoră (cm) × axa minoră (cm) × 1/2. Tumoarea și volumul tumoral sunt exprimate ca total pentru ambele situsuri. Greutățile corporale și țesuturile au fost măsurate în ziua 14 (85As2 și grupurile de control) sau 15 (grup de hrană cu perechi). % Schimbare = greutate corporală fără tumori (BW-TW) în ziua 14 sau 15 / greutate corporală pre-inoculare cu celule 85As2 sau soluție salină în ziua 0 x 100. Valorile pentru țesuturile musculare bilaterale reprezintă media celor pentru cele două țesuturi unilaterale. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate folosind Aspin-Welch t – test.
Comparația șobolanilor CC indusă de pereche și 85As2 indusă.
Schimbări în greutatea corporală (A), (B) consumul de alimente și (C) consumul de apă. Șobolanii au fost inoculați subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Șobolanii hrăniți cu perechi au primit o cantitate de alimente care a fost aceeași cu cea consumată de șobolanii CC indusă de 85As2 pentru ziua precedentă (zilele 1-15). Fiecare punct de date reprezintă media ± SEM a șase șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc; * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001 comparativ cu grupul de control corespunzător.
nivelele mRNA ale peptidei hrănite hipotalamice hrănite au fost evaluate la 14 zile după implantarea celulelor 85As2. One-way ANOVA a expresiei POMC și MCH mRNA în toate grupurile a relevat efecte semnificative [ POMC , F (2, 15) = 23,98, p <0,0001; MCH , F (2, 15) = 12,42, p <0,001]. Nivelurile mRNA ale POMC în ARC și MCH în LHA au fost semnificativ mai mici la șobolanii CC indusă de 85As2 decât la șobolanii de control (ANOVA cu o singură cale urmată de testele de comparație multiplă Bonferroni post-hoc, p <0,001, respectiv p <0,01 ; figura 2 ). One-way ANOVA a NPY, Expresia AgRP , CART , ORX , CRH și TRH mRNA în toate grupurile nu a evidențiat efecte semnificative [ NPY , F (2, 15) = 2.611, n . s .; AgRP , F (2, 15) = 2,349, n . s .; CART , F (2, 15) = 3,385, n . s .; ORX , F (2, 15) = 0,7201, n . s .; CRH , F (2, 15) = 0,1887, n . s .; TRH , F (2, 15) = 0,9264,n . s .]. nivelele mRNA ale NPY , AgRP și CART în ARC, ORX în LHA și CRH și TRH în PVN nu au fost diferite de cele ale șobolanilor de control. Pe de altă parte, la șobolanii hrăniți-pereche, nivelurile de expresie ale tuturor peptidelor expuse variații similare celor la șobolanii CC ( POMC , p <0,001; MCH , p <0,001, NPY , n . S ;. AgRP , n . S . ; COȘUL , n. s .; ORX , n . s .; CRH , n . s .; TRH , n . s ., cu o singură cale ANOVA, urmată de testele comparative multiple ale lui Bonferroni post-hoc; Fig. 2 ).
Exprimarea mRNA care codifică neuropeptidul Y ( NPY ), proteina asociată cu agouti ( AgRP ), proopiomelanocortina ( POMC ) și transcripția reglementată cu cocaină și amfetamină ( CART ) în nucleul arcuat (ARC); hormonul de eliberare a corticotropinei ( CRH ) și hormonul eliberator al tireotropinei ( TRH ) în nucleul paraventricular (PVN); și orexin ( ORX ) și hormon de concentrare a melaninei ( MCH ) în zona hipotalamică laterală (LHA) la șobolanii CC indus de control, hrăniți cu perechi și 85As2 2 săptămâni după implantare.
Șobolanii au fost inoculați subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Șobolanii hrăniți cu perechi au primit o cantitate de alimente care a fost aceeași cu cea consumată de șobolanii CC indus de 85As2 în ziua precedentă (zilele 1-15). Hibridizarea in situ a fost efectuată la 2 săptămâni după implantare (șobolani hrăniți cu perechi: ziua 15). Autoradiografii reprezentative ale secțiunilor hibridizate cu secvențe 35Sondă de oligodeoxinucleotidă marcată cu S complementară la ARNm relevant. Intensitatea semnalului a variat de la mare (negru) la joasă (alb). Bara neagră = 1 mm. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a șase șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA cu o singură cale urmată de teste Bonferroni post-hoc; ** p <0,01, *** p <0,001 comparativ cu grupul de control corespunzător.
Atenuarea efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii CC indus de 85As2
Reacțiile orexigene induse de ghrelin au fost examinate la șobolani timp de 2 săptămâni (ziua 14) după tratamentul cu 85As2 sau vehicul. Creștere a tumorii (4,32 ± 0,45 cm 3 ) și cașexie simptome, cum ar fi pierderea de greutate corporală și anorexie, au fost induse la sobolani implantat cu celule 85As2 (greutate corporală: grup de control, 238.90 ± 2,85 g, grupa 85As2, 188.68 ± 3,39 g, p <0,001; alimentar aportul zilnic: lotul martor, 22,79 ± 0,42 g, grupa 85As2, 15,31 ± 1,32 g, p <0,001; aportul zilnic de apă: grup de control, 27,99 ± 0,84 ml, grupa 85As2, 18,70 ± 0,48 ml, p <0,001 , măsurători repetate în două direcții ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni), care este în concordanță cu cele precedente [ 10 ] și prezente ( Fig. 1). La șobolanii care nu sufereau de tumori, injecția ip a ghrelinului a indus o creștere semnificativă a consumului de alimente timp de 1 oră în comparație cu injectarea în vehicul (salină) (testul t- pair, p <0,05). Cu toate acestea, la șobolanii CC care poartă 85As2, injectarea ip a ghrelinului nu a modificat consumul de alimente timp de 1 oră în comparație cu injecția vehiculului ( Fig. 3A ). În contrast, nu au existat diferențe în aportul de apă de 1 oră după injectarea ip a ghrelinului între grupuri ( Fig. 3B ). Pe de altă parte, măsurătorile repetate în ambele sensuri, ANOVA, pentru aportul alimentar de o oră nu au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grup) [F (1, 8) = 0,4732, n . s .], injectarea [F (1, 8) = 1,121, n . s.] și interacțiunea de tratament × injectare [F (1, 8) = 1.425, n . s .]. În plus, măsurătorile repetate în două direcții ANOVA de admisie de apă de o oră nu au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grup) [F (1, 8) = 4.468, n . s .], injectare [F (1, 8) = 1,518, n . s .] și interacțiunea de tratament x injectare [F (1, 8) = 0,05166, n . s .].
Atenuarea efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii CC indus de 85As2.
(A) consumul de alimente și (B) aportul de apă după injectarea ip a ghrelinului sau vehiculului. Șobolanii au fost inoculați subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Șobolanii s-au injectat ip cu 10 nmol ghrelin și s-au măsurat consumul de alimente și apa de 1 h în ziua 14. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a cinci șobolani. Diferențele dintre vehicul și ghrelin în fiecare grup au fost evaluate folosind t-teste asociate .
Îmbunătățirea semnalizării ghrelinelor prin RKT în celulele HEK293A care exprimă GHS-R
Stimularea ghrelină în celulele HEK293A care exprimă GHS-R a determinat modificări ale impedanței specifice proteinei Gq într-o manieră dependentă de concentrație ( fig.4A și 4B ). Schimbările de impedanță induse de ghrelin de 3 x 10-10 M au fost îmbunătățite prin pretratarea cu 10 ug / ml RKT ( Fig. 4C ); RKT a îmbunătățit răspunsul de semnalizare ghrelin până la 160% ± 11,9% ( Fig. 4D ). Măsurile repetate în două direcții ANOVA ale răspunsului la semnalizarea ghrelinului au evidențiat efecte semnificative ale medicamentului (cu sau fără RKT) [F (1, 10) = 13,06, p <0,01], tratamentul (cu sau fără ghrelină) [F ) = 235,1, p <0,0001] și interacțiunea cu medicamentul x [F (1, 10) = 16,57, p<0,01]. Amplificarea răspunsului de semnalizare ghrelin prin RKT a fost semnificativă (măsurători repetate în două direcții ANOVA urmate de teste post-hoc Bonferroni, p <0,01; Fig. 4D ).
Îmbunătățirea semnalizării ghrelinelor prin RKT în celulele HEK293A care exprimă GHS-R.
(A) schimbările dependente de timp impedanta induse prin stimularea cu ghrelin la diferite concentrații (10 -10, 3 x 10 -10 , sau 10 -9 M) în celulele care exprimă HEK293A GHS-R. (B) Răspuns la 3×10-10 M ghrelin la 10 min după injectare. (C) Modificări dependente de timp în răspuns la 3 x 10 -10 M ghrelin la 60 min după pre-tratament cu 10 ug / ml RKT. (D) Răspunsuri la 3 x 10 -10 M ghrelin la 10 min după injectare. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a șase determinări. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hip Bonferroni. RKT: rikkunshito; GHS-R: receptor de secreție de hormon de creștere.
Ameliorarea rezistenței ghrelin la șobolanii CC indusă de 85As2 de către RKT
La șobolanii implantați cu 85As2, simptomele de cașexie, cum ar fi pierderea în greutate corporală și anorexia, s-au dezvoltat clar în ziua 14 după implantare (greutatea corporală: grupul Control + DW, 227,7 ± 5,1 g, grupul 85As2 + DW, 186,7 ± 6,7 g, 85As2 + RKT, 189,6 ± 7,8 g, p <0,001, p <0,01 față de Control + DW și, respectiv, consumul zilnic de alimente: grupul Control + DW, 22,12 ± 0,58 g, grupul 85As2 + DW 14,91 ± 1,36 g, 85As2 + RKT grup, 14,24 ± 1,04 g; p <0,001, p <0,001 versus control + DW, respectiv) , în concordanță cu alte descoperirile noastre (Figurile (Figs11 și and3).3). Ulterior, șobolanilor li s-a administrat RKT sau DW timp de 7 zile. La șobolanii care nu poartă tumori (Control + DW), injectarea ip a ghrelinului a determinat o creștere semnificativă a consumului de alimente timp de o oră în comparație cu injectarea vehiculului (teste t-perete, p <0,05, figura 5A ). Dimpotrivă, la șobolanii cu CC 85As2 (85As2 + DW), injecția ip a ghrelinului a crescut cu mult aportul alimentar de 1 h comparativ cu injectarea vehiculului. Măsurile repetate în două direcții ANOVA pentru aportul alimentar de o oră în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale injectării ip [F (1, 14) = 5.502, p <0.05] și tratament (grup) [F (2, 14) = 4.606, p<0,05], dar nu injectarea ip × interacțiunea tratamentului [F (2, 14) = 1,953, ns]. Diferența dintre grupul ghrelin Control + DW + și ghrelinul 85As2 + DW + a fost semnificativă (măsurători repetate în două direcții ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, p <0,01; Fig. 5A ). RKT a blocat, parțial, dar nu în mod semnificativ, scăderea aportului alimentar de 1 h indusă de ghrelin la șobolanii CC care poartă 85As2 ( Fig. 5A ). Nu au existat diferențe semnificative între grupul 85As2 + RKT și șobolanii care nu poartă tumori (Control + DW). Ulterior, aportul de alimente după injectarea ghrelinului a fost măsurat până la 22 ore. Spre deosebire de aportul alimentar de o oră, nu au existat diferențe între vehicul și ghrelin în toate grupurile (pereche t(teste, ns), care arată că efectele injectării ghrelinului au dispărut rapid (în 1-2 ore de la rezultatele preliminare). Măsurile repetate în două direcții ANOVA privind aportul alimentar cumulativ de 22 ore la toate grupurile au evidențiat un efect semnificativ al tratamentului (grup) [F (2, 14) = 7,280, p<0,01], dar nu și injecția ip [F (1, 14) = 0,1694, ns] și ip injectare x interacțiune de tratament [F (2, 14) = 0,00446, ns]. La șobolani CC 85As2 (85As2 + DW), aportul alimentar de 22 ore după injectarea ip atât a vehiculului, cât și a ghrelinului a fost semnificativ mai scăzut comparativ cu cel al șobolanilor care nu sufereau de tumori (admisie de 22 de ore după injectarea vehiculului: Control + DW, 21,28 ± 1,13 g, 85,32 ± DW, 14,33 ± 1,19 g, consum de alimente timp de 22 de ore după injectarea de ghrelin: Control + DW, 21,61 ± 0,82 g, 85As2 + DW, 14,78 ± 1,25 g, prin teste post-hoc Bonferroni, p <0,01, p <0,05, respectiv; Fig. 5B). RKT a redus, parțial, dar nu semnificativ, scăderea aportului alimentar de 22 de ore la șobolanii cu CC 85As2 (85As2 + RKT, 17,45 ± 1,10 g, 17,69 ± 2,44 g, vehicul și ghrelin, respectiv, Fig.5B).
Efectele RKT asupra atenuării efectelor orexigenice induse de ghrelin la șobolanii CC indus de 85As2.
(A) Efectele RKT asupra efectelor orexigene induse de ghrelin atenuat (creșterea aportului alimentar de o oră) la șobolanii CC indus de 85As2. (B) consumul cumulativ de hrană (22 ore) după injectarea vehiculului sau ghrelină în toate grupurile. Șobolanii au fost implantate sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7celule / sit). La două săptămâni după implantare, RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat pe cale orală de două ori pe zi timp de 7 zile. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori și au fost administrați DW. Șobolanii au fost injectați ip cu ghrelin (10 nmoli) după administrarea RKT sau DW timp de 7 zile, și s-au măsurat consumul de alimente timp de 1 oră și adaosul alimentar cumulativ de 22 ore. A doua zi, toți șobolanii au fost injectați ip cu vehicul (soluție salină) ca martor, și s-au măsurat aportul de alimente 1 h și 22 ore. Fiecare coloană de date reprezintă media ± SEM a 5-6 șobolani. Diferențele dintre tratamentele cu vehicul și ghrelin în fiecare grup au fost evaluate utilizând t- teste asociate . Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni; * p <0,05, **p <0,01 față de grupul tratat cu Control + DW. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată.
Efectele RKT asupra simptomelor de anorexie-cașexie, a nivelurilor de ghrelină plasmatică și a expresiei genei GHS-R și NPY hipotalamice la șobolanii indusă de 85As2
CC clar dezvoltat în ziua 14, adică la 2 săptămâni după implantarea celulelor 85As2 ( S1 Fig ); după acest timp, șobolanilor li s-a administrat RKT sau DW timp de 7 zile. În grupul implantat cu 85As2, în timpul experimentului sa observat o creștere progresivă a tumorii, iar RKT nu a afectat volumul tumorii ( Fig. 6A). Măsurile repetate în două direcții ANOVA ale volumului tumorii au relevat efecte semnificative ale timpului [F (3, 81) = 149,8, p <0,001], dar nu tratamentul [F (1, 81) = 0,001769, ns] F (3, 81) = 0,1338, ns]. Greutățile corporale ale șobolanilor din grupul Control + DW au continuat să crească în comparație cu cele din ambele grupuri 85As2 + DW și 85As2 + RKT în timpul experimentului ( Fig. 6B). Măsurile repetate în două direcții ANOVA a greutăților corporale în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grup) [F (2, 294) = 25,97, p <0,001], timp [F (14, 294) = 15.96, p < și interacțiunea de tratament × timp [F (14, 294) = 21,24, p <0,0001]. Greutățile corporale ale șobolanilor din grupul Control + DW au fost semnificativ mai mari decât cele din grupul 85As2 + DW (măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, zilele 16-21: p <0,001; Fig. 6B ); ajungând la 105,6% ± 0,5% în ziua 21 și au fost semnificativ crescute în comparație cu cele de dinainte de administrare [perechi t -tests, Pre (ziua 14) , comparativ cu post (ziua 21): p <0,001;Fig. 6C )]. În contrast, greutățile corporale ale șobolanilor din grupul 85As2 + DWscăzut treptat, ajungând la 97,8% ± 0,7% în ziua 21,arată scăderi semnificative comparativ cu cele înainteadministrare (pereche t -tests, Pre versus Post: p <0.01 ,Figura 6C ). Dimpotrivă, greutățile corporale ale șobolanilor din grupul 85As2 + RKT nu au fost modificate comparativ cu cele înainte de administrare, măsurând 99,6% ± 0,8% în ziua 21 (figurile6B și 6C). Astfel, administrarea RKT ameliorează pierderea în greutate corporală.
Efectele RKT asupra creșterii tumorale, scăderii în greutate corporală și anorexiei în modelul CC indus de 85As2.
Schimbări în volumul tumorii (A) în timp și (B) greutatea corporală după administrarea RKT sau DW. Compararea câștigului de greutate corporală (C) și a creșterii (D) a aportului mediu zilnic de hrană înainte și după administrarea RKT sau DW la șobolani individuali. Șobolanii s- au implantat subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) în ziua 0. RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat oral de două ori pe zi , timp de 7 zile de la ziua 14. Rats inoculați cu salina a servit ca un grup de control care nu poartă tumori și au fost administrate DW. Fiecare punct de date reprezintă media ± SEM de 14-16 șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc; *** p<0,001 față de grupul tratat cu 85As2 + DW (B). Diferențele înainte de (pre) și după (post) administrarea RKT sau DW au fost evaluate folosind t- teste pereche ; ## p <0.01, ### p <0,001 comparativ cu grupul corespunzător înainte de administrare (fiecare sistem de referință a fost stabilită ca 0) (C, D). Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA într-o singură direcție, urmată de testele de comparație multiple Dunnett post-hoc; ** p <0,01 față de grupul tratat cu 85As2 + DW (D). RKT: rikkunshito; DW: apă distilată; ns: nu este semnificativ.
Atât în grupul 85As2 + DW, cât și în grupul 85As2 + RKT, consumul zilnic de alimente înainte de administrare a scăzut semnificativ la 2 săptămâni după implantare comparativ cu cel din grupul Control + DW ( S1 Fig ). Ulterior, în grupul 85As2 + RKT, consumul mediu zilnic de alimente după administrarea din ziua 16 până la 21 a crescut semnificativ comparativ cu cel anterior administrării ( t- teste perechi , p<0,001; Fig. 6D ), în timp ce cele ale grupului Control + DW și grupe 85As2 + DW au prezentat doar creșteri foarte ușoare (zilnic câștig aportul alimentar: control + grup DW, 0,20 ± 0,34 g; 85As2 + grup DW, 0,22 ± 0,52 g; 85As2 + grupa RKT, 2,38 ± 0,55 g; Fig 6D). One-way ANOVA a câștigului mediu zilnic de aport alimentar în toate grupurile a evidențiat efecte semnificative [F (2, 42) = 6,839, p <0,01]. Diferențele dintre grupurile 85As2 + DW și 85As2 + RKT au fost semnificative (ANOVA cu o singură cale, urmată de testele de comparație Dunnett post-hoc multiple, p <0,01; Fig. 6D ).
In 85As2 + DW grup, mușchi (mai mare pectoral, gastrocnemian, solear si tibial anterior), țesutul adipos (epididimului, perirenal și grăsime mezenterului), ficatului și splinei greutăți a scăzut substanțial în comparație cu cei din grupul de control + DW ( Tabelul 2 ). Aceste scăderi cauzate de cașexie păreau mai mari decât cele din grupul 85As2 din Tabelul 1, deoarece creșterea tumorii și cachexia au progresat mult mai mult în decurs de 21 de zile de la 14 zile. Tratamentul cu RKT a crescut semnificativ masele musculare pectorale și greutățile totale ale mușchilor în comparație cu cele din grupul 85As2 + DW ( test t -Aspin-Welch , p <0,05, Tabelul 2 ).
masa 2
Organismul, tumora, mușchiul, grăsimile și greutățile de organe la șobolanii CC indusă de 85As2 cu sau fără tratament cu RKT.
Control + DW
85As2 + DW
85As2 + RKT
Greutatea tumorii (TW)
0,00 ± 0,00
7,74 ± 0,47
7,76 ± 0,72
Volumul tumorii
0,00 ± 0,00
11,03 ± 1,03
12,35 ± 1,37
Greutatea corporală (BW)
252,90 ± 4,00
194,71 ± 3,40 ***
198,48 ± 3,19 ***
BW-TW
252,90 ± 4,00
186,97 ± 3,36 ***
190,72 ± 2,97 ***
BW (pre-inoculare)
190,78 ± 3,11
190,81 ± 2,78
189,99 ± 2,94
% Schimbare (post / pre)
132,62 ± 1,07
98,02 ± 1,32 ***
100,44 ± 1,15 ***
Greutăți musculare
Mai mare pectoral
2,31 ± 0,07
1,60 ± 0,06 ***
1,84 ± 0,08 *** , #
gastrocnemian
1,33 ± 0,02
1,05 ± 0,02 ***
1,08 ± 0,02 ***
Tibialis anterior
0,50 ± 0,01
0,40 ± 0,01 ***
0,42 ± 0,01 ***
solear
0,08 ± 0,00
0,07 ± 0,00 ***
0,07 ± 0,00 ***
Total mușchi
6,14 ± 0,09
4,62 ± 0,12 ***
5,00 ± 0,11 *** , #
Greutăți de grăsime
epididim
3,36 ± 0,17
1,50 ± 0,08 ***
1,50 ± 0,06 ***
perirenal
2,73 ± 0,16
0,58 ± 0,08 ***
0,72 ± 0,06 ***
mezenterului
2,16 ± 0,10
0,51 ± 0,08 ***
0,68 ± 0,07 ***
Grăsime totală
8,25 ± 0,40
2,58 ± 0,24 ***
2,90 ± 0,18 ***
Greutăți de organe
Ficat
10,27 ± 0,29
6,98 ± 0,22 ***
7,43 ± 0,18 ***
Splină
0,56 ± 0,02
0,47 ± 0,02 ***
0,46 ± 0,01 ***
Șobolanii au fost implantate sc fie cu celule 85As2 (1 x 10 7 celule / locului) sau ser fiziologic , în ambele flancuri. Datele sunt exprimate ca media ± SEM de 10-12 șobolani. Toate datele privind greutatea sunt exprimate în grame. Volumul tumorii a fost estimată utilizând următoarea ecuație: volumul tumorii (cm 3 ) = axa majoră (cm) x axa minoră (cm) x axa minoră (cm) x 1/2. Tumoarea și volumul tumoral sunt exprimate ca total pentru ambele situsuri. Greutatea corporală și a țesuturilor au fost măsurate în ziua 21. Modificarea (post / pre) a fost exprimată după cum urmează:% schimbare = greutate corporală fără tumori (BW-TW) / greutate corporală preinoculare cu celule 85As2 sau salină în ziua 0 × 100. Valorile pentru țesuturile bilaterale musculare reprezintă media celor pentru cele două țesuturi unilaterale. Diferențele între grupuri au fost evaluate folosind metoda Aspin-Welch t -Test.
* p <0,05,
** p <0,01,
*** p <0,001 față de grupul Control + DW,
# p <0,05 față de grupul 85As2 + DW.
Nivelele de ghrelină plasmatică au fost semnificativ crescute la șobolanii cu CC care suferă de 85As2 comparativ cu cei din șobolanii care nu sufereau de tumori (ANOVA, F (2, 28) într-o singură direcție = 4,167, p <0,05, teste Dunnett post- p <0,05; Fig. 7A ). Spre deosebire de aceasta, administrarea RKT timp de 7 zile nu a afectat nivelele crescute de ghrelină plasmatică la șobolanii CC care poartă 85As2. Nivelurile de exprimare a genotipului GH -R ale hipotalamice nu s-au schimbat la șobolanii care poartă 85As2 comparativ cu cei din șobolanii care nu poartă tumori ( Fig. 7B ). În plus, tratamentul cu RKT nu a reușit, de asemenea, să modifice expresia acestei gene în șobolanii care purtau tumori 85As2. Hypothalamic NPYexpresia genelor nu s-a schimbat la șobolanii care sufereau de tumori 85As2 comparativ cu cei din șobolanii care nu sufereau de tumori. Cu toate acestea, tratamentul RKT a crescut semnificativ hipotalamic NPY expresia genelor la șobolani purtători de tumori 85As2 (one – way ANOVA, F (2, 30) = 3.784, p<0,05, teste multiple comparație post hoc Dunnett, p <0,01; Fig 7C ) . Într-un studiu preliminar, nivelele de mRNA ale peptidelor hipotalamice de hrănire a hranei au fost evaluate prin hibridizare in situ. În comparație cu șobolanii 85As2 CC, RKT a redus semnificativ expresia TRH în PVN și a crescut expresia NPY în ARC; totuși, această ultimă diferență nu a fost semnificativă ( S2 Fig ).
Efectele RKT asupra nivelurilor plasmatice de acil ghrelină și a mRNA-urilor GHS-R și NPYhipotalamice la șobolanii CC induși de 85As2.
(A) nivelele de ghrelină plasmatică și (B) mRNA GHS-R și (C) NPY în hipotalamus la șobolanii de control și șobolani CC indus de 85As2 cu sau fără administrare RKT la 3 săptămâni după implantare. Șobolanii s- au implantat subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / site). La două săptămâni după implantare, RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat pe cale orală de două ori pe zi timp de 7 zile. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori și au fost administrați DW. Probele de plasmă sau de hipotalam au fost colectate după administrarea RKT timp de 7 zile. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM de 10-12 șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA cu o singură cale, urmată de testele comparative Dunnett multiple. * p <0,05, **p <0,01 față de grupul tratat cu 85As2 + DW. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată; GHS-R: receptor de secreție de hormon de creștere.
Efectele preventive ale hrănirii pe termen lung a dietei RKT asupra anorexiei în modelul CC indus de 85As2
Pentru evaluarea efectelor pe termen lung ale RKT am folosit un model în care CC a evoluat treptat. Adică, șobolanii au fost implantați cu o zecime din numărul de celule 85As2 (1 x 10 6 celule / site) utilizat în modelul CC convențional. Tumorile au crescut lent, iar simptomele de cașexie, cum ar fi pierderea în greutate corporală și anorexia, nu au fost observate la 14 zile după implantarea tumorii, spre deosebire de șobolanii inoculați cu 1 x 107 celule / sit ( Fig.8A-8C ). Măsurile repetate în două rânduri ANOVA privind greutatea corporală în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grupul) [F (2.140) = 5.001, p <0.05], timp [F (5, 140) = 706.7, p < × interacțiunea timpului [F (10, 140) = 31,73, p<0,0001]. Mai mult, măsurătorile repetate cu două sensuri ANOVA ale aportului alimentar la toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului [F (2140) = 3.714, p <0.05], timpul [F (5, 140) = 17.02, p <0.0001] timp de interacțiune [F (10, 140) = 5,146, p <0,0001]. În grupul de control al tumorii (85As2 + CE2), greutatea corporală și consumul alimentar zilnic au scăzut semnificativ după 21 de zile (măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, p <0,001) comparativ cu cele din care nu prezintă tumori (control + CE-2) și aceste diferențe păreau mai mari la 28 de zile (teste Bonferroni, p <0,001; fig.8B și 8C). În contrast, hrănirea a RKT-1% dieta care începe înainte de implantarea tumorii ameliorata semnificativ aportul redus de alimente în ziua 28 la șobolanii CC 85As2 induse (testele post-hoc Bonferroni, p <0,01; Fig 8C ), în timp ce tratamentul nu a afectat creșterea tumorală sau pierderea în greutate corporală la șobolanii CC ( fig.8A și 8B ).
Efectele hrănirii pe termen lung a RKT (dieta 1%) înainte de implantarea tumorii asupra creșterii tumorale sau anorexiei în modelul CC indus de 85As2.
Schimbări în volumul tumorii (A), (B) greutatea corporală și (C) consumul mediu zilnic de alimente în timpul experimentului. Șobolanii s- au implantat subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 6 celule / fiecare loc) în ziua 0. RKT (CE-2 dietă conținând 1% RKT) sau CE-2 a fost alimentat timp de 35 de zile de la ziua -7. Șobolanii inoculați cu soluție salină servesc ca un grup de control care nu poartă tumori și au fost hrăniți în mod similar timp de 35 de zile. Fiecare punct de date reprezintă media ± SEM de 9-11 șobolani. Diferențele dintre grupuri în timpul de greutate corporală și consumul de alimente au fost evaluate utilizând măsuri repetate în două direcții ANOVA urmate de testul Bonferroni post-hoc; *** p <0,001 comparativ cu grupul Control + CE-2 corespunzător, ## p <0,01 față de grupul corespunzător 85As2 + CE-2. RKT: rikkunshito.
În studiul prezent, am constatat că modelul de șobolan anorexie-cachexie a cancerului, indus de celulele 85As2 derivate din cancerul gastric uman, a dezvoltat rezistența la ghrelin. Această constatare a sugerat că rezistența ghrelinului poate fi implicată în dezvoltarea anorexiei în modelul nostru CC în prezența ghrelinului plasmatic crescut. RKT, care îmbunătățește semnalizarea ghrelinelor prin GHS-R, a atenuat parțial rezistența la ghrelin și simptomele de cașexie ameliorată, cum ar fi anorexia și pierderea în greutate corporală, fără a afecta ghrelinul plasmatic crescut în model. Aceste rezultate au sugerat că mecanismele prin care RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cachexiei cancerului în acest model pot implica atenuarea rezistenței ghrelinelor, posibil prin amplificarea semnalizării ghrelinelor.
Am arătat că șobolanii implantați cu 85As2 au prezentat în mod clar simptome de cașexie reproductibilă, incluzând anorexia, pierderea în greutate corporală și țesuturile musculare și adipoase reduse, până la 14 zile după implantare. Greutățile corporale ale șobolanilor hrăniți cu perechi au fost reduse la niveluri similare cu cele ale șobolanilor de cașexie indusă de 85As2, în conformitate cu consumul scăzut de alimente. Cu toate acestea, când greutatea tumorii a fost scăzută, greutățile corporale ale șobolanilor de cașexie indusă de 85As2 au fost mai mici decât cei ai șobolanilor hrăniți cu perechi, susținută de scăderi mai mari ale țesuturilor musculare și adipoase la șobolanii CC indusă de 85As2. Diferențele în pierderile de greutate corporală dintre șobolanii hrăniți prin pereche și CC au fost probabil cauzate de alți factori decât consumul scăzut de alimente. Am demonstrat anterior că o creștere a consumului de energie a fost crescută la șobolanii CC indusă de 85As2, comparativ cu cei din șobolanii de control [10 ]. Prin urmare, creșterea consumului de energie la șobolanii cu CC indusa de 85As2 poate avea o exacerbare a pierderii în greutate corporală, inclusiv scăderea țesuturilor adipoase și musculare. Pe de altă parte, în ceea ce privește peptidele orexigene ( mRNA NPY și AgRP în mRNA ARC, ORX și MCH în LHA) sau peptide anorexigene ( ARN, PTHC și CART în ARC, CRH și TRHmRNA în PVN) în hipotalamus, nivelele ARNm au prezentat în cea mai mare parte variații similare la șobolanii CC indus de 85As2 și șobolanii hrăniți cu perechi. Prin urmare, modificările în aceste mARN peptidice hipotalamice la șobolanii CC indus de 85As2 păreau a fi implicați în reducerea consumului alimentar. Cu toate acestea, în ciuda consumului similar de alimente, aportul zilnic de apă a fost semnificativ redus la șobolanii 85As2-cachectici, în timp ce reducerea șobolanilor hrăniți cu perechi a fost minoră. Această constatare a sugerat că disfuncția în sistemul nervos central care controlează corpul lichid, cum ar fi aportul de apă atunci când percepe starea de deshidratare, poate apărea la șobolanii cachectici; cu toate acestea, sunt necesare studii suplimentare.
Interesant, șobolanii cu CC indusă de 85As2 la 2 săptămâni după implantare au prezentat o sensibilitate slabă la ghrelinul exogen/extern, sugerând că rezistența ghrelină sa dezvoltat în aceste condiții patologice. Ghrelinul indus de stimularea apetitului a apărut în principal prin activarea neuronilor NPY / AgRP în ARC a hipotalamusului, un situs important pentru reglarea apetitului în sistemul nervos central. Ghrelinul circulant, secretat de stomac, este transportat peste bariera hematoencefalică și se leagă de GHS-R localizat în neuronii NPY / AgRP, ducând la transmiterea semnalului către hipotalamus. Activarea GHS-R în neuronii NPY / AgRP ai hipotalamului stimulează apetitul. În plus, ghrelinul periferic se leagă de GHS-R localizat în nervul gastric aferent vagului și transmite un semnal de ghrelin către neuronii NPY / AgRP în hipotalamus [37 ]. Astfel, activarea GHS-R de către ghrelin în neuronii NPY / AgRP ai hipotalamusului prin aceste căi periferice stimulează pofta de mâncare. La șobolanii cu CC indusa de 85As2, nivelele de ghrelină din plasmă au fost semnificativ ridicate. Această constatare a fost raportată, de asemenea, la pacienții cu CC [ 20 , 21 ], care susțin rezultatele noastre. Deoarece postul și un echilibru energetic negativ cresc ghrelinul plasmatic [ 38], nivelurile ridicate de ghrelin din modelul nostru de șobolan CC ar putea fi un efect compensator ca răspuns la balanța energetică negativă. Cu toate acestea, consumul de alimente a fost în continuă scădere la șobolanii cachectici, sugerând că stimularea endogenă a ghrelinului indusă de apetitul nu a fost produsă fiziologic. Ulterior, pentru a elucida mecanismele prin care administrarea ghrelinului exogen la șobolanii cachectici nu a favorizat aportul suficient de alimente, am evaluat exprimarea genelor GHS-R în hipotalamus la șobolanii cachectici indusă de 85As2 și am constatat că GHS-Rexpresia la șobolani cachectici a fost comparabilă cu cea din șobolanii care nu poartă tumori. Prin urmare, este puțin probabil ca dezvoltarea rezistenței ghrelin la șobolanii cachectici să fie cauzată de răspunsul atenuat la ghrelin prin scăderea expresiei GHS-R.
Am constatat anterior că celulele 85As2 cultivate produc LIF, care este o citokină inflamatorie și factorul cachectic [ 7 ]. Receptorul LIF este localizat în neuronii anorexigenici POMC / CART [ 39 ]. În concordanță cu rezultatele din culturile celulare 85As2, concentrațiile plasmatice ale LIF au crescut la șobolanii care purtau 85As2 cu evoluția simptomelor de cașexie și îndepărtarea chirurgicală a tumorii nu numai că au eliminat simptomele de cașexie, dar și că au scăzut nivelurile LIF plasmatice sub limita de detecție, LIF contribuie la simptomele de cașexie în modelul CC indus de 85As2 [ 10 ]. Astfel, LIF poate contribui la rezistența ghrelină observată în CC indus de 85As2; totuși, sunt necesare studii suplimentare pentru a clarifica asocierea.
RKT este utilizat pe scară largă pentru tratamentul simptomelor disfuncției motorii gastrointestinale [ 40 ]. Sa dovedit că RKT ameliorează anorexia prin creșterea secreției de ghrelină. Takeda și colab. a raportat că RKT crește secreția de ghrelin prin antagonismul receptorului serotoninei 2b / 2c și ameliorează anorexia indusă de cisplatina medicamentului anticancer [ 25 ]. În plus, Matsumura și colab. a raportat că RKT crește concentrațiile plasmatice de ghrelină la șoareci și la oameni [ 26 ] și Arai et al. a raportat că RKT ameliorează simptomele gastrointestinale superioare la pacienții cu dispepsie funcțională însoțită de creșterea ghrelinului plasmatic [ 28 ]. Mai recent, sa demonstrat că RKT potențează semnalizarea ghrelin prin intensificarea activității GHS-R [ 29, 30 ]. În studiul de față, am investigat dacă RKT ar putea amplifica direct semnalizarea ghrelinelor utilizând sistemul CellKey, care este adaptat în mod special la detectarea receptorului cuplat cu proteine G și produce profiluri de răspuns care sunt consecvente într-o gamă largă de condiții de testare, cu capacitatea de distingând semnalele dintre subtipurile Gs, Gi / o și Gq ale proteinei Gα [ 41 , 42 ]. În plus, acest sistem permite teste nemarcate, cu celule întregi, în timp real și de mare viteză și poate fi utilizat pentru măsurarea răspunsului integrat al celulelor întregi la activarea receptorului prin măsurarea impedanței în celule [ 41]. Adică modificările impedanței în celule sunt dependente de tipul de proteină G, cuplată cu un receptor specific. GHS-R este un receptor cuplat la proteina Gq; prin urmare, stimularea ghrelină în celulele HEK293A care exprimă GHS-R a indus schimbări de impedanță specifice Gq într-o manieră dependentă de concentrație. RKT a îmbunătățit în continuare modificările impedanței induse de ghrelin, sugerând că RKT a amplificat direct semnalizarea ghrelină după legarea ghrelinului de GH-R. Acest rezultat a fost în concordanță cu rapoartele anterioare utilizând celulele care exprimă GHS-R [ 29 , 30 ].
În studiul prezent, am constatat că rezistența ghrelină sa dezvoltat la șobolani CC indusă de 85As2 la 2 săptămâni după implantare; prin urmare, am examinat dacă RKT, care îmbunătățește semnalizarea ghrelinelor, atenuează rezistența ghrelinelor. Interesant, la șobolanii cu 85As2 (DW), la 3 săptămâni după implantare, injectarea ip a ghrelin nu a crescut semnificativ consumul de alimente timp de 1 h, sugerând că dezvoltarea rezistenței ghrelinului a accelerat între 2 și 3 săptămâni după implantare. Administrarea RKT timp de 7 zile a ameliorat parțial sensibilitatea slabă la ghrelinul exogen la șobolanii cachectic la 3 săptămâni după implantare, sugerând că RKT atenuează rezistența la ghrelină. RKT a atenuat scăderea indusă de cașexie în consumul alimentar atât la o oră după injectarea de ghrelină, cât și la 22 de ore după administrarea de ghrelin sau injecție cu vehicul. Prin urmare,RKT este susceptibilă de a spori sensibilitatea la ghrelin endogen prin potențarea semnalizării ghrelinice și creșterea dozei de hrană de 22 ore, deoarece creșterea indusă de injectarea ghrelinului a avut o durată de 1-2 ore. Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,10 ].
Pe lângă efectele tratamentului cu RKT asupra cașexiei emergente, am constatat că tratamentul prealabil cu RKT începând înainte de implantarea tumorii a împiedicat anorexia în Administrarea RKT timp de 7 zile a ameliorat parțial sensibilitatea slabă la ghrelinul exogen la șobolanii cachectic la 3 săptămâni după implantare, sugerând că RKT atenuează rezistența la ghrelină. RKT a atenuat scăderea indusă de cașexie în consumul alimentar atât la o oră după injectarea de ghrelină, cât și la 22 de ore după administrarea de ghrelin sau injecție cu vehicul. Prin urmare,RKT este susceptibilă de a spori sensibilitatea la ghrelin endogen prin potențarea semnalizării ghrelinice și creșterea dozei de hrană de 22 ore, deoarece creșterea indusă de injectarea ghrelinului a avut o durată de 1-2 ore. Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,10 ]. modelul CC indus de 85As2. Cu toate acestea, ameliorarea CC prin RKT nu sa datorat creșterii secreției de ghrelină deoarece RKT nu a afectat nivelele plasmatice de ghrelină la șobolanii CC. În plus, RKT nu a afectat creșterea tumorală. De asemenea, RKT nu a modificat nivelurile plasmatice ale LIF, după cum sa raportat anterior [ 10 ]. Aceste rezultate au arătat că efectele anticachetice ale RKT nu au fost legate de regresia tumorii sau de nivelurile LIF.
Ulterior, am constatat că RKT nu a afectat expresia genică GHS-R hipotalamică la șobolanii CC indus de 85As2, sugerând că ameliorarea rezistenței ghrelin prin RKT nu se datorează creșterii expresiei GHS-R . Yakabi și colab. raportat anterior că RKT a inversat în mod semnificativ reducerea expresiei genei GHS-Rindusă de cisplatină, în timp ce RKT nu a afectat expresia GHS-R la șobolanii normali [ 43 ]. Acest rezultat a sugerat că scăderea acută a consumului de alimente indusă de cisplatină a fost implicată în reducerea GHS-Rexpresia genelor. În contrast, în studiul prezent, sa demonstrat că rezistența la ghrelin la șobolanii cachectici este implicată în răspunsul atenuat ca urmare a legării ghrelinului de GHS-R, deoarece expresia genei GHS-R la șobolanii cachectici a fost comparabilă cu cea din non-tumorale șobolani. Prin urmare, constatările noastre sugerează că ameliorarea rezistenței la ghrelin și ameliorarea anorexiei la șobolanii cachectici tratați cu RKT are loc prin amplificarea semnalizării ghrelin după legarea GHS-R mai degrabă decât prin creșterea expresiei GHS-R. Îmbunătățirea apetitului de către ghrelin este implicată în reglarea peptidei orexigene NPY. Prin urmare, am investigat efectele amplificării dependente de RKT a semnalizării ghrelin la expresia NPY hipotalamică . Am constatat că RKT a crescutExpresia NPY în hipotalamusul șobolanilor cachectici indusă de 85As2. Într-un studiu in vitro , RKT a intensificat, de asemenea, creșterea indusă de ghrelin a Ca2 + intracelulare în neuronii NPY, care exprimă GHS-R, izolat de ARC [ 29 ]. Aceste constatări sugerează că activarea neuronilor NPY prin amplificarea semnalizării ghrelin prin RKT poate contribui la ameliorarea rezistenței la ghrelin și ameliorarea anorexiei la șobolanii cachectici.
Ulterior, am examinat efectele RKT asupra peptidelor hipotalamice orexigene / anorexigenice la șobolani cachectici indusă de 85As2. Expresia mRNA NPY în ARC a fost mai mare la șobolanii cachectici tratați cu RKT decât la cei care nu au fost tratați cu RKT, deși diferența nu a fost semnificativă. Studiul nostru anterior a demonstrat că RKT a ameliorat anorexia indusă de cisplatină la șobolani și a inversat scăderea indusă de cisplatină în exprimarea genei NPY hipotalamice în ARC [ 34 ]. În studiul preliminar prezent, cu toate acestea, nu am observat aceste efecte ale RKT. În hipotalamus, atât ARC cât și PVN s-au dovedit a juca roluri importante în sporirea aportului alimentar prin administrarea de ghrelin [ 44]. Studiul preliminar a demonstrat de asemenea că RKT a scăzut semnificativ expresia genei TRH în PVN comparativ cu cea a șobolanilor CC indusă de 85As2. TRH este o peptidă anorexigenică, iar injecția centrală a TRH reduce aportul alimentar la șobolani [ 45 ]. In plus, neuronii TRH in PVN sunt dens inervate de la terminalele axon care conțin NPY ARC [ 46 – 48 ]. Mai mult, administrarea intracerebroventriculară a NPY scade expresia genei TRH în PVN [ 49 ]. Luate împreună, această reducere a TRHexpresia genelor în PVN la șobolani cachectici prin RKT poate fi parțial implicată în ameliorarea anorexiei-cașexiei prin RKT. Cu toate acestea, aceste mecanisme nu sunt încă elucidate complet și sunt necesare studii suplimentare pentru a clarifica asocierea efectelor anticachetice ale RKT și variațiile peptidelor orexigene / anorexigenice modificate de RKT în regiunea hipotalamică, inclusiv ARC, PVN și LHA. În contrast, RKT afectează direct stomacul și se cunoaște că facilitează golirea gastrică, relaxarea adaptivă gastrică și motilitatea gastrointestinală superioară [ 50 – 52 ]. Aceste efecte pot ameliora în mod sinergic casexia-anorexia.
În concluzie, am demonstrat că modelul nostru de șobolan anorexie-cachexia de cancer, indus de celulele 85As2 derivate din cancerul gastric uman, a prezentat rezistență la ghrelin, contribuind eventual la anorexie și pierderea în greutate corporală. Mecanismul prin care RKT a ameliorat simptomele cancerului anorexie-cașexie poate implica ameliorarea rezistenței ghrelinului prin îmbunătățirea semnalizării ghrelinelor. Aceste constatări sugerează că RKT poate fi un agent promițător pentru tratamentul pacienților cu CC care prezintă niveluri ridicate de ghrelin circulant.
Informatii justificative
S1 Fig
Modificări în (a) greutatea corporală și (b) consumul de alimente înainte de administrarea RKT în modelul de cașexie cauzat de 85As2.
Șobolanii au fost implantate sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Fiecare punct sau coloană de date reprezintă media ± SEM de 14-16 șobolani. Diferențele dintre grupele de greutate corporală și consumul de alimente în timp au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc. ** p <0,01, *** p <0,001 față de grupul Control + DW corespunzător. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată.
Efectele RKT asupra peptidelor hipotalamice orexigenice / anorexigenice la șobolanii CC indusă de 85As2.
(a) Exprimarea ARNm-urilor care codifică neuropeptida Y ( NPY ), proteina asociată cu agouti ( AgRP ), proopiomelanocortin ( POMC ) și transcripția reglementată cu cocaină și amfetamină ( CART ) în nucleul arcuat (ARC); hormonul de eliberare a corticotropinei ( CRH ) și hormonul eliberator al tireotropinei ( TRH ) în nucleul paraventricular (PVN); și orexina ( ORX ) și hormonul de concentrare a melaninei ( MCH ) în zona hipotalamică laterală (LHA) au fost măsurate prin hibridizare in situ . (b) GHS-R și (c) NPYmRNA în hipotalamus în martori și șobolani CC indus de 85As2 cu sau fără administrare RKT la 3 săptămâni după implantare. Șobolanii au fost implantate sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / site). La două săptămâni după implantare, RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat pe cale orală de două ori pe zi timp de 7 zile. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori și au fost administrați DW. Probele de hipotalam au fost colectate după administrarea RKT timp de 7 zile. Analizele mRNA hipotalamice care codifică peptide orexigene / anorexigenice în fiecare regiune a creierului (ARC, PVN sau LHA) au fost măsurate prin hibridizare in situ . Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a șase șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA cu o singură cale urmată de teste Bonferroni post-hoc; # p<0,05 față de grupul 85As2 + DW. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată.
Acest articol a fost citat de alte articole din PMC.
Recunoasteri
Mulțumim colegilor din laboratorul nostru pentru asistența tehnică și comentarii utile. Am dori să mulțumim Editage ( www.editage.jp ) pentru editarea limbii engleze.
Declarație de finanțare
Sprijinul acordat de KT a fost acordat KT prin: 1. Granturi-ajutor pentru cercetare științifică (C) de la Ministerul Educației, Culturii, Sportului, Științei și Tehnologiei, Japonia [ http://www.jsps.go.jp/j -grantsinaid / index.html ] Grant nr. 22590510. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 2. Fundația pentru promovarea cercetării în domeniul cancerului în Japonia [ http://www.ncc.go.jp/jp/ ]. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. Acordarea de sprijin a fost acordată lui Y. Uezono prin: 1. Strategia cuprinzătoare pe 10 ani pentru controlul cancerului de la Ministerul Sănătății, Muncii și Protecției Sociale, Japonia; [ http://www.mhlw.go.jp/] Grant nr. H22-General-035. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 2. Granturi-ajutor pentru cercetare științifică (C) de la Ministerul Educației, Culturii, Sportului, Științei și Tehnologiei, Japonia; [ http://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html ] Grant nr. 24590740. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 3. Granturi din cadrul Proiectului de cercetare pentru îmbunătățirea calității în domeniul sănătății și colectarea dovezilor științifice privind medicina integrată [ http://www.amed.go.jp/] Grant nr. 15lk0310003h0001, 16lk0310020h0001. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 4. Cercetarea practică pentru controlul inovator al cancerului de la Agenția Japoneză pentru Cercetare și Dezvoltare Medicală, AMED; [ http://www.amed.go.jp/ ] Grant nr. 15ck0106059h0002, 16nk0101311h0002. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 5. Fondul Național de Cercetare și Dezvoltare al Centrului Național de Cancer [ http://www.ncc.go.jp/jp/] Grant nr. 23-A-2, 23-A-29 și 23-A-38. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 6. Un grant de la Tsumura & Co. (Ibaraki, Japonia) [ https://www.tsumura.co.jp/ ]. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului.
Disponibilitatea datelor
Toate datele relevante se găsesc în fișă și în fișierele cu informații de asistență.
Referințe
1. Evans WJ, Morley JE, Argiles J, Bales C, Baracos V, Guttridge D, și colab. Cachexia: o nouă definiție . Clin Nutr .2008;27 ( 6 ): 793-9. Epub 2008/08/23. doi: 10.1016 / j.clnu.2008.06.013 [ PubMed ]
2. Laviano A, Meguid MM, Inui A, Muscaritoli M, Rossi-Fanelli F. Perspectiva terapiei: Sindromul de anorexie- cachexie a cancerului – când tot ce poți mânca ești singur . Nat Clin Pract Oncol .2005;2 ( 3 ): 158-65. Epub 2005/11/03.[ PubMed ]
3. Muscaritoli M, Bossola M, Aversa Z, Bellantone R, Rossi Fanelli F. Prevenirea și tratamentul cazhexiei de cancer: noi perspective asupra unei probleme vechi . Eur J Cancer . 2006; 42 ( 1 ): 31-41. Epub 2005/11/30. doi: 10.1016 / j.ejca.2005.07.026 [ PubMed ]
4. Tisdale MJ. Mecanismele cașexiei de cancer . Physiol Rev .2009;89 ( 2 ): 381-410. Epub 2009/04/04. doi: 10.1152 / physrev.00016.2008 [ PubMed ]
5. Chang JW, Yeh KY, Shen YC, Hsieh JJ, Chuang CK, Liao SK, și colab. Producerea citokinelor multiple și inducerea cașexiei la șoarecii atimici niti printr-o nouă linie celulară carcinom tiroidian anaplazic . J Endocrinol .2003;179 ( 3 ): 387-94. Epub 2003/12/06.[ PubMed ]
6. Ebrahimi B, Tucker SL, Li D, Abbruzzese JL, Kurzrock R. Cytokine în carcinomul pancreatic: corelarea cu caracteristicile și prognosticul fenotipic . Rac . 2004; 101 ( 12 ): 2727-36. Epub 2004/11/05. doi: 10.1002 / cncr.20672 [ PubMed ]
7. Mori M, Yamaguchi K, Honda S, Nagasaki K, Ueda M, Abe O, și colab. Sindromul de cașexie a cancerului sa dezvoltat la șoareci nud care poartă celule de melanom care produc factor de inhibiție a leucemiei . Cancer Res . 1991; 51 ( 24 ): 6656-9. Epub 1991/12/15.[ PubMed ]
8. Ravasco P, Monteiro-Grillo I, Vidal PM, Camilo ME. Cancerul: boala și nutriția sunt determinanții cheie ai calității vieții pacienților . Asistență pentru îngrijirea cancerului . 2004; 12 ( 4 ): 246-52. Epub 2004/03/05. doi: 10.1007 / s00520-003-0568-z [ PubMed ]
9. Walsh D, Rybicki L., Nelson KA, Donnelly S. Simptome și prognostic în cancerul avansat . Asistență pentru îngrijirea cancerului .2002;10 ( 5 ): 385-8. Epub 2002/07/24. doi: 10.1007 / s00520-001-0318-z [ PubMed ]
10. Terawaki K, Sawada Y, Kashiwase Y, Hashimoto H, Yoshimura M, Suzuki M, și colab. Nou model de cancer de cașexie de șobolan, generat prin implantarea unei linii celulare de cancer de stomac uman derivată din peritoneală . Am J Physiol Endocrinol Metab .2014;306 ( 4 ): E373-87. Epub 2013/12/19. doi: 10.1152 / ajpendo.00116.2013 [ PubMed ]
11. Yanagihara K, Takigahira M, Mihara K, Kubo T, Morimoto C, Morita Y și colab. Efectele inhibitorii ale izoflavonilor asupra creșterii tumorale și a cașexiei în modelele de șoareci cachectic nou înființate care transportă cancer de stomac uman . Nutr Cancer .2013;65 ( 4 ): 578-89. Epub 2013/05/11. doi: 10.1080 / 01635581.2013.776089 [ PubMed ]
12. Kojima M, Hosoda H, data Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin este o peptidă acilată eliberată de hormon de creștere din stomac . Natura .1999;402 ( 6762 ): 656-60. Epub 1999/12/22. doi: 10.1038 / 45230 [ PubMed ]
13. Date Y, Murakami N, Toshinai K, Matsukura S, Niijima A, Matsuo H, și colab. Rolul nervului vagal aferent gastric asociat hranei induse de ghrelin și secreției de hormon de creștere la șobolani . Gastroenterologie .2002;123 ( 4 ): 1120-8. Epub 2002/10/03.[ PubMed ]
14. Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG și colab. Ghrelin sporește apetitul și mărește aportul de alimente la om . Jurnalul de endocrinologie clinică și metabolism .2001;86 ( 12 ): 5992 Epub 2001/12/12. doi: 10.1210 / jcem.86.12.8111 [ PubMed ]
15. Tack J, Depoortere I, Bisschops R, Delporte C, Coulie B, Meulemans A, și colab. Influența ghrelinului asupra motilității gastrointestinale interdigestive la om . Gut . 2006; 55 ( 3 ): 327-33. Epub 2005/10/12. doi: 10.1136 / gut.2004.060426 [ articolul gratuit PMC ] [ PubMed ]
16. Tschop M, Wawarta R, Riepl RL, Friedrich S, Bidlingmaier M, Landgraf R, și colab. Reducerea postprandială a nivelurilor de ghrelin uman care circulă . Oficial al investigației endocrinologice .2001;24( 6 ): RC19-21. Epub 2001/07/04. doi: 10.1007 / BF03351037 [ PubMed ]
17. Nakazato M, Murakami N, Data Y, Kojima M, Matsuo H, Kangawa K, și colab. Un rol pentru ghrelin în reglementarea centrală a hrănirii . Natura .2001;409 ( 6817 ): 194-8. Epub 2001/02/24. doi: 10.1038 / 35051587 [ PubMed ]
18. Hanada T, Toshinai K, Kajimura N, Nara-Ashizawa N, Tsukada T, Hayashi Y, și colab. Efectul anti-cachectic al ghrelinului asupra șoarecilor goi care poartă celule de melanom umane . Biochem Biophys Res Commun .2003;301 ( 2 ): 275-9. Epub 2003/02/05.[ PubMed ]
19. Neary NM, Small CJ, Wren AM, Lee JL, Druce MR, Palmieri C, și colab. Ghrelin crește aportul de energie la pacienții cu cancer cu apetit afectat: studiu acut, randomizat, controlat cu placebo . Jurnalul de endocrinologie clinică și metabolism . 2004; 89 ( 6 ): 2832-6. Epub 2004/06/08. doi: 10.1210 / jc.2003-031768 [ PubMed ]
20. Garcia JM, Garcia-Touza M, Hijazi RA, Taffet G, Epner D, Mann D, și colab. Nivelurile active de ghrelin și raportul total de ghrelin activ în cazexia indusă de cancer . Jurnalul de endocrinologie clinică și metabolism .2005;90 ( 5 ): 2920-6. Epub 2005/02/17. doi: 10.1210 / jc.2004-1788 [ PubMed ]
21. Shimizu Y, Nagaya N, Isobe T, Imazu M, Okumura H, Hosoda H, și colab. Nivel crescut de ghrelină plasmatică în cazexia cancerului pulmonar . Clin Cancer Res .2003;9 ( 2 ): 774-8. Epub 2003/02/11.[ PubMed ]
22. Ramos EJ, Suzuki S, Marks D, Inui A, Asakawa A, Meguid MM. Sindromul anorexie-cașexie a cancerului: citokine și neuropeptide . Curr Opin Clin Nutr Metab Îngrijire . 2004; 7 ( 4 ): 427-34. Epub 2004/06/12.[ PubMed ]
23. Wang W, Andersson M., Iresjo BM, Lonnroth C, Lundholm K. Efectele ghrelinului asupra anorexiei la șoarecii purtători de tumori cu cașexie legată de eicosanoid .Int J Oncol .2006; 28 ( 6 ): 1393-400. Epub 2006/05/11.[ PubMed ]
24. Suzuki H, Matsuzaki J, Fukushima Y, Suzaki F, Kasugai K, Nishizawa T, și colab. Studiu clinic randomizat: rikkunshito în tratamentul dispepsiei funcționale – un studiu multicentric, dublu-orb, randomizat, controlat cu placebo . Neurogastroenterolul Motil .2014;26 ( 7 ): 950-61. Epub 2014/04/29. doi: 10.1111 / nmo.12348 [ PubMed ]
25. Takeda H, Sadakane C, Hattori T, Katsurada T, Ohkawara T, Nagai K, și colab. Rikkunshito, un medicament pe bază de plante, suprimă anorexia indusă de cisplatină la șobolani prin antagonismul receptorului 5-HT2 . Gastroenterologie .2008;134 ( 7 ): 2004-13. Epub 2008/04/29. doi: 10.1053 / j.gastro.2008.02.078 [ PubMed ]
26. Matsumura T, Arai M, Yonemitsu Y, Maruoka D, Tanaka T, Suzuki T, și colab. Medicamentul tradițional japonez Rikkunshito crește nivelul plasmatic al ghrelinului la oameni și la șoareci . J Gastroenterol .2010;45 ( 3 ): 300-7. Epub 2009/12/10. doi: 10.1007 / s00535-009-0166-z [ PubMed ]
27. Fujitsuka N, Asakawa A, Hayashi M, Sameshima M, Amitani H, Kojima S, și colab. Inhibitorii selectivi ai recaptării serotoninei modifică activitățile motorii gastrointestinale fiziologice prin receptorul 5-HT2c și acil ghrelinul . Biol Psihiatrie .2009;65 ( 9 ): 748-59. Epub 2008/12/09. doi: 10.1016 / j.biopsych.2008.10.031 [ PubMed ]
28. Arai M, Matsumura T, Tsuchiya N, Sadakane C, Inami R, Suzuki T, și colab. Rikkunshito îmbunătățește simptomele la pacienții cu dispepsie funcțională, însoțită de o creștere a nivelului de ghrelină plasmatică . Hepatogastroenterologie .2012;59 ( 113 ): 62-6. Epub 2012/01/21. doi: 10.5754 / hge11246 [ PubMed ]
29. Fujitsuka N, Asakawa A, Uezono Y, Minami K, Yamaguchi T, Niijima A, și colab. Potențarea semnalizării ghrelinului atenuează anorexia cancerului – cașexia și prelungește supraviețuirea . Transl Psihiatrie . 2011; 1 : e23 Epub 2011/01/01. doi: 10.1038 / tp.2011.25 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
30. Fujitsuka N, Asakawa A, Morinaga A, Amitani MS, Amitani H, Katsuura G, și colab. Creșterea semnalizării ghrelinelor prelungește supraviețuirea în modelele de șoarece ale îmbătrânirii umane prin activarea sirtuin1 . Moleculară psihiatrie . 2016. Epub 2016/02/03.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
31. Zaki MH, Nemeth JA, Trikha M. CNTO 328, un anticorp monoclonal la IL-6, inhibă cașexia indusă de tumori umane la șoareci nudi .Int J Cancer .2004; 111 ( 4 ): 592-5. Epub 2004/07/09. doi: 10.1002 / ijc.20270 [ PubMed ]
32. Suzuki M, Narita M, Ashikawa M, Furuta S, Matoba M, Sasaki H, și colab. Modificări ale receptorilor de melanocortină în hipotalamusul unui model de șobolan de cașexie de cancer . Sinapse .2012;66 ( 8 ): 747-51. Epub 2012/03/31. doi: 10.1002 / syn.21559 [ PubMed ]
33. Livak KJ, Schmittgen TD. Analiza datelor expresiei genetice relative utilizând PCR cantitativ în timp real și metoda 2 (Delta Delta C (T)) . Metode .2001;25 ( 4 ): 402-8. Epub 2002/02/16. doi: 10.1006 / met.2001.1262 [ PubMed ]
34. Yoshimura M, Matsuura T, Ohkubo J, Ohno M, Maruyama T, Ishikura T, și colab. Expresia genică a peptidelor care ajustează hrănirea hipotalamică la șobolanii anorexici indusă de cisplatină . Peptide .2013;46 : 13-9. Epub 2013/05/21. doi: 10.1016 / j.peptides.2013.04.019 [ PubMed ]
35. Paxinos G, Watson C. Creierul de șobolan în coordonate stereotaxice . Sydney: Academic Press; 1982.
36. Miyano K, Sudo Y, Yokoyama A, Hisaoka-Nakashima K, Morioka N, Takebayashi M, și colab. Istoricul testelor receptorului proteinei G (GPCR) de la testul biosenzorului la cele tradiționale . J Pharmacol Sci .2014;126 ( 4 ): 302-9. Epub 2014/11/26. doi: 10.1254 / jphs.14R13CP [ PubMed ]
37. Bănci WA, Tschop M, Robinson SM, Heiman ML. Extinderea și direcția transportului ghrelinului prin bariera hemato-encefalică este determinată de structura primară unică . J. Pharmacol Exp Ther .2002;302( 2 ): 822-7. Epub 2002/07/20. doi: 10.1124 / jpet.102.034827 [ PubMed ]
38. Toshinai K, Mondal MS, Nakazato M, Date Y, Murakami N, Kojima M, și colab. Uregularea expresiei Ghrelin în stomac după post, hipoglicemia indusă de insulină și administrarea leptinei . Biochem Biophys Res Commun .2001;281 ( 5 ): 1220-5. Epub 2001/03/13. doi: 10.1006 / bbrc.2001.4518 [ PubMed ]
40. Suzuki H, Inadomi JM, Hibi T. Medicina japoneză pe bază de plante în tulburări funcționale gastro-intestinale . Neurogastroenterolul Motil .2009;21 ( 7 ): 688-96. Epub 2009/07/01. doi: 10.1111 / j.1365-2982.2009.01290.x [ articolul gratuit PMC ] [ PubMed ]
41. Peters MF, Vaillancourt F, Heroux M, Valiquette M, Scott CW. Comparând biosenzorii fără etichete pentru screeningul farmacologic cu analize funcționale bazate pe celule . Test Drug Dev Technol .2010;8 ( 2 ): 219-27. Epub 2010/01/21. doi: 10.1089 / adt.2009.0232 [ PubMed ]
42. Scott CW, Peters MF. Etichete fără celule întregi: extinderea scopului de screening GPCR . Drug Discov Astăzi .2010;15 ( 17-18 ): 704-16. Epub 2010/07/06. doi: 10.1016 / j.drudis.2010.06.008 [ PubMed ]
43. Yakabi K, Kurosawa S, Tamai M, Yuzurihara M, Nahata M, Ohno S, și colab. Rikkunshito și antagonistul receptorului 5-HT2C îmbunătățesc anorexia indusă de cisplatină prin interacțiunea ghrelină hipotalamică . Regula Pept .2010;161 ( 1-3 ): 97-105. Epub 2010/02/23. doi: 10.1016 / j.regpep.2010.02.003 [ PubMed ]
44. Currie PJ, Mirza A, Fuld R, Park D, Vasselli JR. Ghrelinul este o peptidă de semnalizare de tip orexigenic și metabolic în nucleele arcuite și paraventriculare . Jurnal american de fiziologie Fiziologie de reglementare, integrativă și comparativă .2005;289 ( 2 ): R353-R8. Epub 2005/04/09. doi: 10.1152 / ajpregu.00756.2004 [ PubMed ]
45. Vettor R, Fabris R, Pagano C, Federspil G. Reglementarea neuroendocrină a comportamentului alimentar . Oficial al investigației endocrinologice .2002;25 ( 10 ): 836-54. Epub 2003/01/02. doi: 10.1007 / BF03344047 [ PubMed ]
46. Broberger C, Visser TJ, Kuhar MJ, Hokfelt T. Neuropeptida Y și neuronii care exprimă receptorul neuropeptide-Y-Y1 în nucleul hipotalamic paraventricular al șoarecelui . Neuroendocrinologie .1999;70 ( 5 ): 295-305. Epub 1999/11/24.[ PubMed ]
47. Toni R, Jackson IM, Lechan RM. Inervația neuropeptidică-Y-imunoreactivă a neuronilor care sintetizează hormonul de eliberare a tireotropinei în nucleul paraventricular hipotalamic de șobolan . Endocrinologie . 1990; 126 ( 5 ): 2444-53. Epub 1990/05/01. doi: 10.1210 / endo-126-5-2444 [ PubMed ]
48. Legradi G, Lechan RM. Nucleul arcuat este sursa majoră pentru inervația neuropeptidelor Y a neuronilor hormonului care eliberează tirotropină în nucleul paraventricular hipotalamic . Endocrinologie . 1998; 139 ( 7 ): 3262-70. Epub 1998/06/30.[ PubMed ]
49. Fekete C, Kelly J, Mihaly E, Sarkar S, Rand WM, Legradi G, și colab. Neuropeptida Y are o acțiune inhibitoare centrală pe axa hipotalamo-pituitară-tiroidă . Endocrinologie .2001;142 ( 6 ): 2606-13. Epub 2001/05/18.[ PubMed ]
50. Yanai M, Mochiki E, Ogawa A, Morita H, Toyomasu Y, Ogata K, și colab. Administrarea intragastrică a rikkunshito stimulează motilitatea gastrointestinală superioară și golirea gastrică la câinii conștienți . J Gastroenterol .2013;48 ( 5 ): 611-9. Epub 2012/10/12. doi: 10.1007 / s00535-012-0687-8 [ PubMed ]
51. Tominaga K, Kido T, Ochi M, Sadakane C, Mase A, Okazaki H, și colab. Medicina tradițională japoneză Rikkunshito promovează golirea gastrică prin acțiunea antagonistă a căii receptorilor 5-HT (3) la șobolani .Comportament bazat pe evidente Alternat Med .2011; 2011 : 248481 Epub 2009/10/29. doi: 10.1093 / ecam / nep173 [ articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
52. Hayakawa T, Arakawa T, Kase Y, Akiyama S, Ishige A, Takeda S, și colab. Liu-Jun-Zi-Tang, o medicină campo, promovează relaxarea adaptivă în stomacurile izolate de cobai . Drugs Exp Clin Res .1999;25 ( 5 ): 211-8. Epub 1999/11/24.[ PubMed ]
Articolele de la PLoS ONE sunt oferite aici prin amabilitatea Bibliotecii Publice a Științei
Casexia în cancer afectează negativ percepția pacienților asupra simptomelor, bunăstării și răspunsului la terapie și scurtează supraviețuirea.Anamorelin, un mimetic oral de ghrelin, s-a dovedit a crește masa corporală și nivelul hormonilor anabolici la voluntari sănătoși și este investigat pentru a trata cașexia cancerului.
METODE:
Acest studiu multicentric, dublu-orb, controlat cu placebo, încrucișat, a evaluat efectele anamorelinului la 16 pacienți cu diferite forme de cancer și cașexie.Pacientii au fost repartizati aleatoriu la anamorelin 50 mg / zi sau placebo timp de 3 zile.A urmat o perioadă de spălare de la 3 la 7 zile și tratamentele au fost schimbate.Evaluările au inclus greutatea corporală, apetitul, consumul de alimente, nivelurile hormonului de creștere (GH), evaluările simptomelor raportate de pacient (de exemplu, Scala de evaluare a simptomelor Anderson și, de asemenea, un criteriu de includere) și siguranța.
REZULTATE:
Anamorelin a crescut semnificativ greutatea corporală comparativ cu placebo (0,77 kg față de -0,33 kg).Aportul alimentar a crescut comparativ cu placebo, dar nu semnificativ.GH a crescut semnificativ în toate punctele de timp (0,5-4 ore după administrarea dozei).Factorul de creștere asemănător insulinei-1 (IGF-1) a crescut semnificativ cu 54,09 ng / ml cu tratamentul cu anamorelin, comparativ cu -3,56 ng / ml pentru placebo;modificările semnificative ale proteinei 3 de legare a factorului de creștere similar celui de insulină (IGFBP-3) au fost de 0,75 μg / ml față de -0,19 μg / ml.Simptomele raportate de pacienți, inclusiv apetitul măsurat prin ASAS, s-au îmbunătățit semnificativ cu anamorelin (8,1 vs. 1,0 pentru placebo).Evenimentele adverse (AE) la patru pacienți au fost probabil sau probabil legate de anamorelin: hiperglicemie (doi pacienți), greață (un pacient) și amețeli (un pacient).Majoritatea AE au fost ușoare;niciun pacient nu sa retras din cauza AE.
CONCLUZII:
Anamorelin a arătat efecte semnificative metabolice, clinice și de către pacienți în casexia de cancer.Studiile suplimentare sunt justificate.
Casexia și atrofia musculară sunt consecințe comune ale cancerului și chimioterapiei.Noul hormon ghrelin a fost propus ca tratament pentru această afecțiune.Creșterea aportului alimentar și efectele directe asupra proteolizei musculare și a sintezei proteinelor pot media aceste efecte, dar căile care duc la aceste evenimente nu sunt bine înțelese.
metode
Am caracterizat căile moleculare implicate în atrofia musculară indusă de implantul tumoral al Lewis carcinom pulmonar (LLC) la șoarecii masculi adulți c57 / bl6 și prin administrarea agentului chimioterapeutic cisplatină la șoareci și în miotuburile C2C12.Efectele administrării exogene a ghrelinului și mecanismele sale de acțiune au fost examinate în aceste situații.
Rezultate
Implantarea tumorii și atrofia musculară indusă de cisplatină prin activarea citokinelor pro-inflamatorii, p38-C / EBP-β și myostatin și prin reglarea în jos a Akt, myoD și myogenin, conducând la activarea proteolizei mediate de ubiquitin-proteazom și slăbiciune musculară .Implantarea tumorii a crescut de asemenea mortalitatea.In vitro , miostatica și atroginul-1 cu cisplatină reglată prin activarea C / EBP-β și FoxO1 / 3.Ghrelin a împiedicat aceste modificări in vivo și in vitro , sporind semnificativ masa musculară ( P <0,05 pentru LLC și P <0,01 pentru modelele cu cisplatină) și rezistența la strângere ( P = 0,038 pentru LLC și P = 0,001 pentru modelele cu cisplatină) = 0,021 pentru modelul LLC).
Concluzie
Ghrelin previne atrofia musculară prin reglarea în jos a inflamației, p38 / C / EBP-β / myostatin și activarea Akt, myogenin și myoD.Aceste modificări apar, cel puțin parțial, pentru a direcționa direct celulele musculare.Administrarea ghrelinului în acest context este asociată cu o îmbunătățire a rezistenței musculare și a supraviețuirii.
Introducere
Casexia (pierderea involuntară a mușchilor și a masei grasei) este o complicație obișnuită a multor afecțiuni cronice, incluzând cancerul, insuficiența cardiacă cronică, boala pulmonară și boala renală.1 La stabilirea cancerului, aceasta este asociată cu toleranță slabă la terapie, scăderea calității vieții și creșterea mortalității.2 În ciuda semnificației sale, în prezent nu există tratamente pentru această condiție.
Suplimentele nutritive singure nu inversează cașexia, 1 antrenament de rezistență poate îmbunătăți puterea musculară și masa fizică slabă, dar nu este prescrisă în mod obișnuit pacienților în această situație, 3 și se folosesc adesea medicamente, cum ar fi agenți progestativi, masa și poate provoca tromboză venoasă profundă, insuficiență suprarenală și hipogonadism.4 O creștere a proteolizei musculare și o scădere a sintezei proteinelor determinate de activarea proteazomului ubiquitin-proteazom, 5 kinazelor proteinei mitogen activate (MAP), 6 și a căilor de miostatină 3 printre altele au fost identificate ca procese centrale în casexia indusă de tumori, dar căile care duc la acestea nu au fost pe deplin caracterizate.7
Cisplatina este un agent chimioterapeutic care face parte din standardul de îngrijire pentru tratamentul mai multor tipuri de cancer, incluzând cancerul pulmonar, capului și gâtului, ovarul, testiculul și vezica urinară și, paradoxal, este cunoscută că determină pierderi de greutate și mase musculare.8 Am raportat recent mecanismele prin care cisplatina modifică metabolismul lipidic, provocând astfel atrofie de grăsime, incluzând o creștere a lipolizei și oxidării lipidelor și o scădere a lipogenezei.Cu toate acestea, măsura în care sinteza și degradarea proteinelor musculare sunt afectate în acest context și mecanismele care mediază aceste efecte nu au fost caracterizate.Având în vedere că cachexia este adesea un efect secundar limitativ al dozei de cisplatină și alți agenți chimioterapeutici, tratarea sau prevenirea cașexiei ar permite utilizarea unor doze mai mari și mai eficiente de cisplatină.
Ghrelin, ligandul endogen pentru receptorul secretagogon al hormonului de creștere (GHSR) -1a, a fost propus ca potențial țintă terapeutic pentru cașexia, având potențialul de a crește pofta de mâncare, grăsime și masa musculară.9 , 10 Desi mecanismele sale de actiune nu au fost elucidate complet, o crestere a consumului de alimente si o scadere a consumului de energie prin efecte hipotalamice, 11 , 12 o scadere a inflamatiei, 13 o crestere a GH, 14 si efecte directe in tesutul adipos 15 și mușchiul scheletic 16 se consideră că pot media aceste efecte.
În acest studiu, am stabilit efectele ghrelinului în stabilirea pierderilor musculare induse de chimioterapie și tumori și caracterizarea căilor implicate.Am studiat aceste două modele pentru a determina măsura în care aceste mecanisme au fost modulate diferențiat, analizând expresia genei și a proteinei, precum și impactul lor funcțional și efectul asupra supraviețuirii.Deoarece căile multiple sunt susceptibile de a juca un rol în medierea efectelor ghrelinului, am presupus că mai multe ținte vor fi modulate de ghrelin în aceste setări.
materiale si metode
animale
Adulți (vârsta de 90 ± 10 zile) șoareci masculi c57bl / 6J au fost utilizați pentru toate experimentele.Animalele au fost adăpostite individual, au fost aclimatizate în cuștile lor și au fost manevrate la om timp de o săptămână înainte de experimente și au fost menținute pe un ciclu 12/12 de lumină / întuneric (luminile au fost aprinse la ora 6 dimineața).Toate experimentele au fost realizate cu aprobarea Comitetului pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale și au fost în conformitate cu Ghidul instituțiilor naționale de sănătate pentru utilizarea și îngrijirea animalelor de laborator.Pentru toate experimentele au fost utilizate mărimi de probe de 8-10 animale / grup.
Ghrelinul acilat a fost utilizat pentru toate studiile in vivo și toate studiile in vitro .Pentru modelul de cașexie indus de cisplatină, animalele au primit vehicul (soluție salină), cisplatină, ghrelin acilat + cisplatină sau ghrelin acilat.Cisplatina a fost achiziționată de la APP Pharmaceuticals (Schaumburg, IL) și ghrelinul acilat de rozătoare a fost sintetizat de Anaspec (Fremont, CA).Doza de cisplatină a fost de 2,5 mg / kg administrată zilnic timp de 10 zile la 8:30 am intraperitoneal (IP), iar doza pentru ghrelin a fost de 0,8 mg / kg de două ori pe zi IP la 8 am și 5 pm timp de 21 zile.Doza de ghrelin acilat a fost administrată la 30 minute înainte de cisplatină.Această doză specială de cisplatină și ghrelin acilat a fost selectată pe baza activității noastre anterioare care a evidențiat pierderea în greutate indusă de cisplatină și anorexia fără toxicitate și prevenirea anorexiei, atrofiei grase și scăderii în greutate a ghrelinului.8
Pentru modelul de cachexie a cancerului Lewis (LLC), celule de LLC de 100 mcl (1 x 106 celule) (American Type Culture Collection, Manassas, VA) sau un volum egal și un număr de celule LLC ucise cu căldură ) a fost injectat subcutanat în flancul drept.Gellin (vehicul tumoral + ghrelin, grupul TG) sau vehicul (sare, tumoare + vehicul, grup TV) a fost injectat subcutanat în flancul stâng al șoarecilor din ziua 7 după implantarea LLC, când tumoarea a devenit palpabilă (aproximativ 1 cm în diametru).Doza pentru ghrelin a fost de 0,8 mg / kg de două ori pe zi la 8 am și 5 pm. Șoarecii au fost sacrificați în ziua 28 a implantării LLC, aproximativ 21 de zile după ce tumoarea a devenit palpabilă.
Greutatea corporală și aportul alimentar au fost evaluate zilnic prin cântărirea alimentelor și a animalelor înainte de injectarea.Modificările greutății corporale au fost exprimate ca schimbare față de valoarea inițială, iar consumul de alimente a fost exprimat în grame / zi.Masa corpului macră și masa de grăsime au fost măsurate prin rezonanță magnetică nucleară (RMN) cu un spectrometru RMN Minispec mq (Bruker optics, The Woodlands, TX).Rezistența la strângere a fost măsurată cu un contor de forță de aderență cu manometru digital (Columbus Instruments, Columbus, OH).
S-au colectat pentru analize mușchii picioarelor [quadriceps, gastrocnemius, soleus, tibialis anterioris (TA) și extensor digitalis longus].Comparațiile dintre grupuri (de exemplu, zona secțiunii musculare și expresia genei sau a proteinei) au fost întotdeauna efectuate de la aceleași mușchi.Greutățile musculare au fost normalizate prin masa corporală slabă la momentul inițial.Pentru modelul de cașexie indus de LLC, greutatea corporală și masa corporală slabă au fost exprimate ca greutate după ce greutatea tumorii a fost scăzută și exprimată ca schimbare față de valoarea inițială.
Cultură de celule
C2o12 (ATCC, Manassas, VA) s-au menținut în mediu Dagbecco modificat Eagle (DMEM) (Life Technologies, Grand Island, NY) cu 10% ser de bovine fetale (HyClone, Logan, UT), penicilină (200 unități / și streptomicină (50 pg / ml) (Invitrogen, Carlsbad, CA).La confluență de 90%, mediul a fost schimbat la DMEM plus 2% ser de cal (Life Technologies, Grand Island, NY) pentru a induce formarea miotuburilor.Celulele au fost tratate cu cisplatină (50 uM), ghrelin acilat (1 uM) sau ambele în ziua 3 când s-a format myotube și s-au recoltat 24 de ore după.
În timp real, reacția în lanț polimerazică cantitativă
A fost izolat ARN din gastrocnemii sau myotuburi C2C12 cultivate (reactiv Trizol, Life Technologies, Grand Island, NY).Nivelurile de transcriere au fost măsurate prin PCR în timp real (7000 Sequence Detection System, Applied Biosystems).ARN-ul total a fost transcris invers (kitul de transcriere cu referință QuantiTect, Qiagen, Valencia, CA) la cADN.Primerii pentru amplificarea PCR în timp real utilizați sunt de la Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, vezi informația de susținere, tabelul S1 ).Semnalele sunt exprimate în raport cu gliceraldehidă-3-fosfat dehidrogenază utilizând metoda standard 2- ΔCT .
Western blot
Proteina din gastrocnemii sau miotuburi a fost izolată folosind reactiv de lizare / reacție de extracție a țesutului sau reactiv de liză celulară (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) cu inhibitori de protează și cocktailuri de inhibitor de protează de fosforilare (Roche, Nutley, NJ).Concentrația de proteină a fost măsurată utilizând testul de proteină BCA Pierce (Thermo Scientific, Logan, UT).Proteina nucleară a fost izolată utilizând kitul de extracție nucleară EpiQuik (Epigentek Farmingdale, NY).După spălarea cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), celulele au fost răzuite și centrifugate.Peletele de celule s-au resuspendat în 100 pl de soluție diluată NE1 [1X, 1: 1000 raport de ditiotreitol (DTT) și Cocktail inhibitor de protează (PIC)] și s-au incubat pe gheață timp de 10 minute, apoi s-au turbionat și centrifugat timp de 1 minut la 24000 g .Extractul citoplasmatic a fost îndepărtat din peleta nucleară și două volume de DTT și PIC conținând NE2 (raport 1: 1000) au fost adăugate la peleta nucleară.Extractul a fost incubat pe gheață timp de 15 minute, probele se agită timp de 5 s la fiecare 3 minute.Factorii de transcripție C / EBP-p și FOXO1 au fost evaluați în extracte nucleare dat fiind că se leagă la secvențe ADN specifice care controlează transcripția la mRNA în nuclee.Am separat extractele de proteine pe geluri NuPAGE de 4-12% (Invitrogen, Carlsbad, CA) și le-am blotat pe fluorură de poliviniliden de tip Immobilon (PVDF) (Millipore, Billerica, MA).Membranele au fost blocate la temperatura camerei (RT) timp de 1 oră în 5% albumină serică bovină (BSA) și incubate în anticorpi lary peste noapte la 4 ° C.Au fost utilizați anticorpi IgG 2ry anti-iepure / șoarece / capră DyLight 680/800 (Thermo Scientific, Waltham, MA) timp de 1 oră la RT.După trei spălări în TBST, bloturile au fost scanate cu LI-COR Odyssey (LI-COR, Lincoln, NE) și cuantificate cu Image-Pro plus.
Următorii anticorpi au fost utilizați pentru a evalua prin nivele de proteine cu blocaje vestică etapele cheie din căile de interes: p- Akt (Ser 473, cat # 4060), p- p38 (T180, cat # 9212) , FOX03a (cat # 9464), C / EBP-p (cat # 3084) și gliceraldehidă-3-fosfat dehidrogenază (pisică # 2118) de la Cell Signaling (Beverly MA);myoD (cat # 12344), myosin (cat # M4276), myostatin (GDF8, cat # 1403860) și laminat A / C (cat # L9393) de la Sigma-Aldrich;și Akt (cat # 8312) și atrogin-1 / MAFbx (cat # 33782) de la Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA).
Sinteza și degradarea proteinelor
Sinteza de proteine s-a măsurat pornind de la încorporarea l- [3,5-3H] tirozinei (5 uCi / ml; PerkinElmer, Waltham, MA) în proteine celulare în timpul unei incubări de 24 h așa cum este descris în altă parte.7 , 8Myotuburile au fost apoi spălate de trei ori cu PBS răcit cu gheață înainte de adăugarea a 10% acid tricloracetic (TCA) pentru a precipita proteinele.După trei spălări suplimentare de PBS, precipitatul a fost clătit de două ori cu TCA și solubilizat prin sonicare în soluție de liză (1% Triton X-100 și 1 N NaOH).Încorporarea radioactivității tirozinului radiomarcat a fost măsurată utilizând scintilația lichidă (Beckman Coulter, Brea, CA) și concentrația proteinei a fost măsurată folosind testul proteinei BCA de proteină.
s -a adăugat ll [3,5-3H] tirozină (5 uCi / ml; PerkinElmer, USA) la myotuburile C2C12 și s-a incubat 24 ore.După spălare cu DMEM ser proaspăt de 2%, miotuburile au fost tratate cu vehicul (PBS), cisplatină (50 pM) și cisplatină (50 pM) + ghrelin (1 pM).Alicoturi (200 pl) de mediu de cultură s-au luat la momente specificate pentru cuantizarea eliberării de l- [3,5-3H] tirozină.Proteinele au fost precipitate la 4 ° C cu 10% TCA și centrifugate la 37000 g timp de 5 min.Precipitatul a fost clătit de două ori cu TCA și solubilizat prin sonicare în soluție de liză (1% Triton X-100 și 1 N NaOH).Radioactivitatea în supernatantul solubil în TCA și proteinele (fracțiunea insolubilă în TCA) au fost măsurate utilizând numărarea cu scintilație lichidă.La sfârșitul perioadei de urmărire, celulele au fost clătite de două ori în PBS și precipitate la 4 ° C în 10% TCA și radioactivitatea în proteina celulară a fost măsurată așa cum s-a descris mai sus.Toată radioactivitatea este suma radioactivității reziduale din proteinele celulare și a radioactivității solubile în TCA la momente diferite de timp.Degradarea proteinei a fost exprimată ca l-[3,5-3H] tirozină eliberată ca procent din totalul de l- [3,5-3H] tirozină incorporat.
Imunofluorescența colorată
Secțiunile mușchilor TA fuzionați sau miotuburile C2C12 au fost fixate cu 4% paraformaldehidă.După trei spălări saline Tween-20 (TBST) cu tampon Tris, diapozitivele au fost blocate timp de o oră (Dako North America, Inc., Carpentaria, CA).Anticorpul primar (1: 100) a fost incubat peste noapte la 4 ° C.S-au folosit anticorpi secundari Alexa Fluor 488 sau 546 (Tehnologii Life, Grand Island, NY) cu diluții 1: 1000 și incubate 1 h la temperatura camerei.A fost utilizată 4’6-diamidino-2-fenilindol (semnalizare celulară) pentru a colora nucleele.
Pentru a evalua diferențele în zonele secțiunii transversale ale miofiberilor, s-au colorat secțiuni de 8 pm de mușchi TA cu un anticorp anti-laminin (Sigma-Aldrich).S-au măsurat zonele cu cel puțin 500 de miofibre (mărire x100) pe mușchi TA.În studiile cu miotuburi C2C12, după ce au fost colorate cu lanț greu anti-miozin / miozin (Skeletal, Fast, Sigma-Aldrich), s-au măsurat zonele de 200 de miotuburi în cel puțin 10 câmpuri (mărire × 100).
Analiza proteazomilor
Așa cum s-a descris anterior, 17gastrocnemius a fost omogenizat în tampon de liză (20 mM Tris-HCI [pH 7,2], 0,1 mM EDTA, 1 mM 2-mercaptoetanol, 1 mM DTT, 5 mM ATP, 20% glicerol, v) Triton X-100).Lizatul a fost centrifugat și supernatantul a fost colectat.Concentrația de proteine a fost determinată utilizând kitul de testare a proteinei BCA Pierce.Activitatea proteasomei asemănătoare cu chymotripsina a fost determinată fluorometric prin incubarea a 40 ug proteină cu 0,167 pg / pl de N-succinil-Leu-Leu-Val-Try-7-amido-4-metilcumarină (N-Suc-LLVY-AMC, Sigma-Aldrich ) în tampon de incubare (100 mM Tris-HCI [pH 7,4], 50 mM HEPES [pH 8,0] și 5 mM acid etilenglicoltetraacetic) timp de 1 oră la 37 ° C.
Testul luciferazei
Plasmida recombinantă a genei reporterului luciferazei cu miocentină a fost furnizată de Dr. Allen.Reactivul lipidic Tranfectin (Bio-Rad, Hercules, CA) a fost utilizat pentru transfecția plasmidei recombinante la myoblastele C2C12.Când celulele sunt confluente în proporție de 80%, în celule s-au adăugat complexe de ADN (plasmidă recombinantă și referință internă Renilla, phRLTK-luc, Promega, Madison, WI) și soluții de transfecție.După o incubare de 6 ore, mioblastele au fost tratate cu vehicul (PBS), ghrelin (1 pM), cisplatină (50 pM) și cisplatină (50 pM) + ghrelin (1 pM).Pentru exprimarea tranzitorie, s-a măsurat activitatea pentru activitatea genei reporter 24 ore după transfecție.Sistemul de testare a reporterului dual-luciferază (Promega) a fost utilizat pentru detectarea activității luciferazei.
analize statistice
Programul SPSS 18.00 pentru Windows (SPSS Inc., Chicago, IL) a fost folosit pentru toate analizele statistice.Parametrii sunt exprimați ca medie ± eroare standard a mediei.S-au realizat comparații statistice utilizând ANOVA cu o singură cale, urmată de ajustările testelor Tukey pentru comparații multiple.Valorile P de 0,05 sau mai mici au fost considerate semnificative din punct de vedere statistic.Autorii certifică faptul că respectă liniile directoare etice privind autorizarea și publicarea Jurnalului Cachexiei, Sarcopeniei și Muschi.19
Rezultate
Efectul ghrelinului asupra greutății corporale, masei musculare și modificărilor dimensiunii miofiberului cauzate de tumora LLC sau cisplatină
Atât LLC cât și cisplatina au indus o scădere semnificativă a greutății corporale în comparație cu animalele de control, în timp ce administrarea de ghrelin a împiedicat aceste modificări ( FiguraA A și B).B ).Cisplatina și ghrelinul au împiedicat, de asemenea, aceste schimbări (pentru modelul LLC, schimbarea de la valoarea inițială a vehiculelor ucise cu căldură + HK + V 95,70 ± 4,30%, tumoare + vehicul [T + V] 83,41 ± 0,78%, iar pentru tumora + ghrelin [T + G] 96,47 ± 2,04%, P <0,05; pentru modelul de cisplatină, modificarea față de valoarea inițială pentru vehicul [V] 100,39 ± 0,41% cisplatină + ghrelin [C + G] 93,39 ± 0,61%, iar ghrelin [G] 110,20 ± 0,92%, P <0,01). Toti mușchii din piciorul posterior au prezentat o atrofie semnificativă și prevenită de ghrelin șid).D ).Paralel cu modificările masei musculare, puterea de prindere a fost semnificativ redusă prin implantarea tumorii și cisplatină, iar aceste modificări au fost împiedicate de ghrelin, subliniind impactul funcțional al acestor intervenții ( Figura1E 1E și F).F ).Casexia în aceste două modele a fost asociată cu o scădere a consumului zilnic de alimente care a fost împiedicată și de ghrelin (pentru modelul LLC, HK + V 3,55 ± 0,13 g / zi, T + V 2,74 ± 0,16 g / zi și T + G 3,23 ± 0,08 g / zi, P <0,05; pentru modelul de cisplatină, V 3,67 ± 0,05 g / zi, C 2,55 ± 0,09 g / zi, C + G 3,12 ± 0,05 g / zi și G 4,05 ± 0,06 g / zi , P <0,01), sugerând că unul dintre mecanismele care influențează efectele ghrelinului este prin scăderea anorexiei.Implantarea LLC și administrarea cisplatinei au determinat o scădere semnificativă în zona secțiunii transversale a miocitului în mușchii TA, iar acest lucru a fost împiedicat de ghrelin (vezi Suporting Information, Figura S1 A-D, pentru modelul LLC, P <0,05; pentru modelul de cisplatină, P <0,05).Implantarea LLC și cisplatina au diminuat semnificativ masa de grăsime, măsurată prin RMN.Aceste modificări au fost împiedicate de ghrelin (pentru modificarea modelului LLC față de valoarea inițială pentru HK + V 85,25 ± 0,75%, T + V 32,80 ± 5,13% și T + G 57,53 ± 5,01%, P<0,01, pentru modificarea modelului de cisplatină de la valoarea inițială pentru V 101,70 ± 1,34%, C 60,92 ± 2,51%, C + G 85,75 ± 0,93% și G 116,66 ± 1,45%, P <0,01).
Ghrelin îmbunătățește tumora și cachexia indusă de cisplatină.(A) Modificări ale greutății corporale în modelul de cașexie indus de carcinomul pulmonar Lewis (LLC).HK-V reprezintă grupul injectat cu LLC ucis de căldură (HK) LLC și vehicul.TV (grupuri tumorale + vehicul) și TG (grupuri tumorale + ghrelin) reprezintă animale inoculate cu LLC (106 celule) care primesc vehicul (salină) sau ghrelin (0,8 mg / kg de două ori pe zi).Modificarea este exprimată ca% din valoarea inițială.Greutatea carcasei reprezintă greutatea după scăderea masei tumorale.(B) Modificări ale greutății corporale în cazexia indusă de cisplatină.V, grupul tratat cu vehicul;C, grupul tratat cu cisplatină;CG, grupul tratat cu cisplatină + ghrelin;G, grupul tratat cu ghrelin.Modificarea exprimată ca% din valoarea inițială.(C) Quadriceps, gastrocnemius, soleus, tibialis anterioris (TA) și masa musculară extensor digitalis longus (EDL) normalizată la greutatea corpului în stare brută (LBM) prin rezonanța magnetică nucleară în modelul de cașexie indusă de LLC.(D) Masa musculară în cazexia indusă de cisplatină.(E) Schimbarea procentului de aderență% față de valoarea inițială în comparație cu grupul HK-V în cazexia indusă de LLC.(F) Schimbarea rezistenței la aderență în cazexia indusă de cisplatină.Modificările neajustate ale greutății musculare în ambele modele (nereprezentate) urmăresc același model ca și modificările modificate ale greutății musculare prezentate în Figura1C 1C și și DD .
Proteoliza și activitatea proteazomilor
Implantarea tumorii și administrarea de cisplatină au fost asociate cu o creștere a expresiei liganzilor ubiquitin MAFbx / Atrogin-1 și a inelului muscular deget-1 (MuRF-1) ( Figura2A-D);2A- D);în timp ce markerii diferențierii musculare MyoD și myogenin au scăzut prin LLC și cisplatina.Aceste modificări au fost prevenite de ghrelin, sugerând că proteoliza scăzută de ghrelin și masele musculare crescute sunt mediate cel puțin parțial prin aceste căi.De asemenea, pentru a confirma relevanța modificărilor la atrogin-1 / MuRF-1 observate în aceste modele, am măsurat activitatea proteazomului direct.Așa cum se arată în figura2E 2E și F,F , cisplatina și LLC implantarea tumorii a crescut activarea proteazomului, iar acest lucru a fost împiedicat și de ghrelin.Transcripția Atrogin-1 și MuRF-1 este crescută parțial prin defosforilarea factorului transcripțional Fox-O1-3, care este la rândul său reglat de mediatorul central Akt.Inocularea LLC și cisplatina au scăzut fosforilarea Akt ( Figura2C 2C și și D),D ), sugerând că această cale este implicată în LLC și atrofia musculară indusă de cisplatină.
Ghrelin crește markerii de sinteză a proteinelor și scade markerii proteolitici și activitatea proteazomului indusă de administrarea de tumori sau de cisplatină.nivelele mRNA de MyoD, myogenin, atrogin-1 / MAFbx, MuRF-1 și myostatin în cașexia indusă de carcinomul pulmonar Lewis (LLC) (A) și în cachexia indusă de cisplatină (B).nivelele ARNm au fost normalizate la gliceraldehidă-3-fosfat dehidrogenază (GAPDH) și exprimate ca schimbare ori de la martori.Nivelurile de proteine măsurate prin Western blot (I) în cașexia indusă de LLC (C) și în cachexia indusă de cisplatină (D).Cuantificarea atrogin-1 / MAFbx (II) și a miostatinei (III) a fost normalizată la GAPDH, p-Akt (IV) până la Akt total și p-p38 (V) la p38 total.Activitatea proteazomilor în cazexia indusă de LLC (E) și în cachexia indusă de cisplatină (F) exprimată ca unități de fluorescență arbitrare / pg proteină.HK-V, vehicul omorât cu căldură (HK) LLC +.TV (grupuri tumorale + vehicul) și TG (grupuri tumorale + ghrelin) reprezintă animale inoculate cu LLC (106 celule) care primesc vehicul (salină) sau ghrelin (0,8 mg / kg de două ori pe zi).V, grupul tratat cu vehicul;C, grupul tratat cu cisplatină;CG, grupul tratat cu cisplatină + ghrelin;G, grupul tratat cu ghrelin.
Myostatinul a fost reglat în sus prin inoculare cu LLC sau cisplatină, iar aceste modificări au fost, de asemenea, eliminate de ghrelin.De asemenea, se consideră că kinaza MAP p38 mediază degradarea proteinelor în cazexia de cancer prin activarea directă a atrogin-1 și prin reglarea în sus a miostatinei.Nivelurile p38 fosforilate au fost crescute prin inocularea LLC sau administrarea de cisplatină, iar acest lucru a fost prevenit de ghrelin.
Pro-inflamatorii citokine
Inflamația joacă un rol în pierderea musculară prin activarea p38 și reglarea în jos a Akt printre alte mecanisme, 20 , 21 și ghrelinul a fost propus să aibă efecte antiinflamatorii în non-cancer.Nivelurile serice ale citokinelor proinflamatorii interleukina (IL) -6, factorul de necroză tumorală (TNF) -α și IL-1β au fost semnificativ crescuți la animalele tratate cu tumori și cisplatină și acest lucru a fost prevenit prin administrarea concomitentă ghrelin (a se vedea Informații de susținere, Figura S2 ).
Efectul ghrelinului asupra defalcării miotubelor, sintezei proteinelor și modificărilor de proteoliză induse de cisplatină in vitro
Pentru a caracteriza în continuare mecanismele care mediază efectele cisplatinei și ghrelinului în cașexie, miotuburile C2C12 au fost tratate cu vehicul, cisplatină, ghrelin sau ghrelin + cisplatină.Cisplatina a indus o scădere semnificativă a dimensiunii micotubului și a conținutului de lanț greu al miozinei, iar aceste modificări au fost împiedicate de ghrelin ( Figura3A-D).3A- D).Cisplatina a mărit expresia atrogin-1, MuRF-1, p38 și miostatina și a scăzut expresia Akt, myoD și myogenin, iar aceste modificări au fost împiedicate de ghrelin ( Figura4).4 ).Măsurătorile directe ale sintezei proteinelor și degradării în miotuburile tratate cu cisplatină sau cisplatină + ghrelin au urmat același model care confirmă relevanța acestor modificări (sinteza proteinelor după 24 de ore măsurată prin încorporarea l – [3,5-3H] tirozinei în comparație cu probele martor: cisplatină 53,00 ± 2,00%, C + G 75,50 ± 3,50%, ghrelin 114,00 ± 2,00%, P <0,01, degradare proteică după 24 ore măsurată prin eliberarea de l- [3,5-3H] tirozină comparativ cu martor: cisplatina 127,98 ± 2,14 %, C + G 102,57 ± 2,86%, ghrelin 76,57 ± 4,52%, P <0,01).
Ghrelin îmbunătățește distrugerea miotuburilor induse de cisplatină.(A) Colorarea cu imunofluorescență pentru anticorpi anti-miozină / lanț greu de miozină (MHC) în miotuburi C2C12.Pătrunderea MHC conturează miotuburile (roșu).4’6-Diamidino-2-fenilindol a fost utilizat pentru a pata nucleul (albastru).(B) Dimensiunea myotuburilor exprimată ca% din vehicul.(C-D) Western blot de MHC și gliceraldehidă-3-fosfat dehidrogenază (GAPDH) în miotuburi C2C12.V, grupul tratat cu vehicul;C, grupul tratat cu cisplatină;CG, grupul tratat cu cisplatină + ghrelin.
Ghrelin previne schimbările induse de cisplatină în sinteza și degradarea proteinelor in vitro .(A) mRNA pentru mioD, myogenin, atrogin-1 / MAFbx, MuRF-1 și myostatin normalizat la gliceraldehidă-3-fosfat dehidrogenază (GAPDH) și exprimat ca vehicul.(B) Western blot de miotuburi C2C12 tratate cu cisplatină și ghrelin (I).Atrogin-1 / MAFbx (II), Myostatin (III) și MyoD (IV) sunt normalizați la GAPDH, p-Akt (V) până la Akt total și p-p38V, grupul tratat cu vehicul;C, grupul tratat cu cisplatină;CG, grupul tratat cu cisplatină + ghrelin.
Nuclear C / EBP-β și FoxOl / 3 au fost semnificativ crescute de cisplatină și prevenite de ghrelin în miotubele C2C12 ( Figura5A).5A ).Apoi am confirmat importanța acestor căi pe exprimarea miostatinei utilizând un construct care exprimă luciferază alături de situsurile de legare FoxO1 / 3, SMAD 2/3 și C / EBP-p în promotorul de miostatină.Așa cum este arătat în figura5B ,5B , activarea indusă de cisplatină a promotorului miostatinei, și aceasta a fost împiedicată de ghrelin.De asemenea, am folosit un construct diferit cu situsuri de legare FoxO1 / 3 și C / EBP-β intacte sau mutante în promotorul atrogin-1 pentru a testa contribuția relativă a acestor doi factori transcripționali la activitatea atrogin-1.Așa cum este prezentat în Figura5C ,5C , Fox01 / 3 și C / EBP-β, ambele contribuie în mod semnificativ la activarea promotorului atrogin-1 în mod similar.
Mecanismul de acțiune al ghrelinului în miotuburile C2C12.(A) Western blot de factor transcripțional în extracte nucleare.(I) Blot și cuantificarea C / EBP-β (II) și FoxO1 (III) în proteine nucleare, Lamin A a fost utilizat ca referință.(B) Testul de luciferază al promotorului de miostatină.Harta promotorului de miostatină (partea superioară), care include mamele FoxO, drosophila împotriva proteinei decapentaplegice (SMAD) și situsurile de legare a ADN-ului C / EBP-β și sunt legate de un vector care conține luciferază.Activitatea relativă a luciferazei (partea de jos) este exprimată ca schimbare ori de la vehicul.(C) Testul de luciferază al promotorului atrogin-1 / MAFbx.Sus este harta promotorului atrogin-1 / MAFbx, pA include situsurile de legare a ADN-ului C / EBP-β și FoxO.pA-C / EBP-β-M include un situs mutant C / EBP-p și un situs normal FoxO.pA-FOXO-M include un situs mutant FoxO și un situs normal C / EBP-p.Activitatea relativă a luciferazei exprimată ca schimbare plată față de vehicul (fund). V, grupul tratat cu vehicul;C, grupul tratat cu cisplatină;CG, grupul tratat cu cisplatină + ghrelin;G, grupul tratat cu ghrelin.
Supravieţuire
Masa tumorală nu a fost diferită între animalele tratate cu vehicul și ghrelin (masa tumorală pentru T + V 5,87 ± 1,08 g, iar pentru T + G 6,54 ± 1,89 g, P = 0,756).Supraviețuirea a fost redusă la animalele purtătoare de tumori și aceasta a fost îmbunătățită semnificativ prin administrarea de ghrelin ( Figura6).6 ).
Regimul de cisplatină folosit nu a fost letal.:)) – POTI MURI DE LA CISPLATINA!!!
Ghrelinul crește supraviețuirea în carachemul indus de carcinomul pulmonar Lewis (LLC) (curba Kaplan-Meyer).Zilele au supraviețuit din momentul în care au fost observate tumori și au început ghrelinul și injecțiile cu vehicule (aproximativ 7 zile după inocularea celulelor LLC).T + V, tumoră + vehicul;T + G, tumoare + ghrelină.
Cachexia este o complicație devastatoare a cancerului care contribuie la scăderea calității vieții și la decesul precoce la persoanele cu această afecțiune.2 Paradoxal, este exacerbată de administrarea de medicamente chimioterapeutice, cum ar fi cisplatina, și cașexia este adesea un efect secundar limitativ al dozei acestor agenți.Atrofia musculară contribuie cel mai mult la scăderea funcționalității la pacienții cu cancer și este asociată cu un risc crescut de toxicitate indusă de chimioterapie 23 și de un rezultat slab.În ciuda semnificației sale, mecanismele care stau la baza atrofiei musculare induse de cancer sau chimioterapie sunt înțelese incomplet.
Ghrelinul hormonal gastric determină creșterea în greutate prin creșterea consumului de alimente și prin mecanismele independente de admisie alimentară 8 , 24-26 , iar agoniștii receptorilor de ghrelin sau ghrelin au fost propuși ca terapii potențiale pentru cașexia cancerului, deoarece pot îmbunătăți anorexia, masa musculară și rezistența, și pierderea în greutate la pacienții cu cancer, în special cei cărora li se administrează chimioterapie pe bază de cisplatină.27 , 11 Cu toate acestea, mecanismele lor de acțiune în mușchi rămân să fie complet elucidate.
În acest studiu, animalele tratate cu tumori și cisplatină au dezvoltat atrofie și slăbiciune musculară marcate care au fost asociate cu activarea căii ubiquitin-proteazomale.Akt fosforilat, despre care se știe că reglementează această cale prin fosforilarea factorului transcripțional FoxO 1-3, a fost scăzut de către tumoare sau cisplatină.Aceste modificări au fost prevenite prin administrarea de ghrelin în ambele modele, sugerând că efectele ghrelinului sunt mediate prin calea ubiquitin-proteazom în aceste regiuni.Este demn de remarcat faptul că celulele LLC de la diferiți furnizori se comportă oarecum diferit în ceea ce privește capacitatea lor de a induce catabolismul muscular și de a activa căi de semnalizare conexe.De exemplu, în acest studiu, am utilizat celulele LLC din ATCC, care durează 28 de zile pentru a dezvolta complet cașexia și pentru a induce reglarea în sus a MuRF1 prin activarea FoxO mediată de Akt.Cu toate acestea, celulele LLC de la National Cancer Institute (NCI) necesită doar jumătate din perioada de timp pentru a dezvolta cașexia, totuși, fără activarea FoxOs și upregulând MuRF1.Este, de asemenea, important de remarcat faptul că contribuția relativă a acestei căi la cachexia de cancer la om nu este bine înțeleasă cu aproximativ 30 dar nu toate studiile 31 care arată o creștere a degradării proteinelor prin această cale.
Citokinina inflamatorie IL-6 este crescută la stabilirea cancerului și poate scădea fosforilarea Akt prin activarea supresorului de semnalizare-3 a citokinelor.Alte citokine inflamatorii cum ar fi IL-1 β și TNF-α pot juca un rol important în inducerea cașexiei prin activarea factorilor nucleari kappa-B și MAP kinazelor, incluzând p38.32 Grigelina a demonstrat că reduce inflamația în stabilirea sepsisului indus de LPS și a bolii renale cronice.13 Nu se cunoaște dacă acest lucru este valabil și în ceea ce privește stabilirea cancerului.Aici, demonstrăm că implantarea tumorii și administrarea cisplatinei au crescut nivelurile citokinelor circulante, iar aceste modificări au fost prevenite prin administrarea concomitentă de ghrelin.Aceste rezultate sugerează că efectele ghrelinului în acest mediu pot fi mediate prin efectele sale antiinflamatorii, cel puțin parțial.
Sa demonstrat că kinaza MAP p38 joacă un rol în dezvoltarea cașexiei și trebuie activată prin inflamație.Cu toate acestea, rolul său specific este controversat cu rapoartele privind p38 crescând în stabilirea casexiei de cancer 29 sau scăzând în contextul pierderii musculare induse de dexametazonă.Mai mult, s-a arătat că ghrelinul descrește activarea p38 în celulele C2C12.Am constatat că nivelele fosforilate ale p38 cresc odată cu administrarea de tumori sau cisplatină și că ghrelinul a împiedicat aceste modificări.Creșterea activării p38 este descrisă în concordanță cu modelele tumorale anterioare, iar reglarea descendentă a acestei căi cu ghrelin sugerează că efectele sale în stabilirea pierderii musculare pot depinde parțial de modelul utilizat, determinându-l în jos în modele în care inflamația joacă un rol (de exemplu, cazexia indusă de cancer), dar nu și în alte modele non-inflamatorii de pierdere (de exemplu, atrofie musculară indusă de dexametazonă).
Mușchiul care se pierde în casexia de cancer a fost, de asemenea, asociat recent cu o reglare în sus a miostatinei.Myostatinul, un membru al familiei beta-factorului de creștere transformant (TGF-β) realizat în mușchi, este cunoscut că activează receptorul activin IIB și reduce semnalul Akt.De asemenea, s-a arătat că direcționarea acestei căi duce la ameliorarea cașexiei.În studiul nostru, miostatina a fost semnificativ reglată prin implantarea tumorii și prin cisplatină, iar acest lucru a fost prevenit prin administrarea de ghrelin.Acest lucru este în contrast cu un raport recent al ghrelinului care nu împiedică creșterea miostatinei induse de dexametazonă. 16 Având în vedere că p38 mediază efectele sale prin C / EBP-p și că activarea C / EBP-p, la rândul său, induce expresia miostatinei, 40am testat apoi relevanța acestei căi utilizând diferite construcții. Cisplatina a indus o creștere a C / EBP-β nucleară și a miostatinei în celulele C2C12 confirmând activarea căii p38 / C / EBP-p / myostatin în acest context. Mai mult, ghrelinul a împiedicat aceste schimbări. Luate impreuna, aceste date sugereaza ca ghrelin poate preveni activarea myostatinei prin inactivarea p38 si C / EBP-β. Acest lucru ar putea explica de ce ghrelin nu a reușit să scadă expresia miostatinei indusă de dexametazonă, un model în care stimularea p38 nu a fost observată.
Factorii de reglare miogeni MyoD și myogenin au demonstrat că joacă un rol important în cazexia indusă de tumori prin reglarea regenerării musculare și sunt reglați prin fosforilarea Akt, p38, myostatin și TNF-a. 41 , 42 Nivelurile de exprimare au scăzut în ambele modele, sugerând că proliferarea celulară prin satelit și diferențierea și regenerarea celulelor musculare pot fi afectate. Aceste modificări au fost, de asemenea, prevenite prin administrarea de ghrelin in vivo în ambele modele. Acest lucru evidențiază un potențial nou mecanism pentru ghrelin de ameliorare a cașexiei.43
De asemenea, am dezvoltat un model de toxicitate cisplatinei în celulele C2C12 pentru a determina dacă efectele cisplatinei s-au datorat unui efect direct asupra celulelor musculare. Administrarea cisplatinei la celulele C2C12 a provocat atrofie miotubă și aceasta a fost asociată cu activarea pg38, miostatinei și liganzilor ubiquitin atrogin-1 și MuRF-1 împreună cu reglarea în jos a Akt și calea regenerativă (MyoD și myogenin) a demonstrat in vivo . Acest lucru sugerează că cisplatina exercită cel puțin o parte din efectele sale direct asupra mușchiului și este în acord cu un raport anterior al cisplatinei care induce atrofie la miotub prin intermediul reglementării Akt în jos. 44Efectele tratamentului cu cisplatină asupra celulelor C2C12 pot, de asemenea, să reprezinte perturbarea procesului de diferențiere și sa sugerat înainte ca ghrelinul să poată restabili acest proces. 37 Ghrelin a crescut aportul de alimente și se crede că aceasta mediază unele, dar nu toate, efectele sale în acest cadru, așa cum am arătat recent 8 și alții 45 . Aceste studii in vitro sugerează că ghrelinul își exercită efectele cel puțin parțial direct asupra celulelor musculare, independent de efectele sale orexigene, după cum sugerează aceste studii anterioare.
Singurul receptor identificat pentru ghrelin până la această dată este GHSR-1a, iar acest receptor nu este exprimat în țesut muscular sau celule C2C12. 46 , 16 Cu toate acestea, rapoartele recente sugerează că unele dintre efectele ghrelinului nu sunt mediate prin acest receptor. 47 , 16 noastre in vitro studiile arata ca ghrelin poate preveni atrofia indusă de cisplatină în absența GHSR-1a. Foarte recent, receptorul factorului 2 de eliberare a corticotrofinei a fost postulat pentru a media o parte din efectul ghrelinului asupra metabolismului glucozei. 48 Studiile viitoare ar trebui să se concentreze pe aceasta sau despre alte căi alternative care ar putea explica efectele ghrelin lui în absența GHSR-1a.
În cele din urmă, administrarea de ghrelin conduce la creșterea supraviețuirii la animalele care poartă tumori, indicând faptul că beneficiile îmbunătățirii masei musculare depășesc pur și simplu o creștere a funcționalității. Acest lucru este, de asemenea, relevant având în vedere potențialele preocupări pentru un agent anabolic cum ar fi ghrelinul în inducerea creșterii tumorale și agravarea rezultatelor. Desi in vitrostudiile au dat rezultate contradictorii cu unele prezentând o creștere și unele care arată o scădere a proliferării celulare cu administrarea ghrelin, 49 , 50 toate in vivo modele și studii umane în care au fost utilizate ghrelin sau ghrelin mimeticele nu au demonstrat o creștere a proliferării tumorale , deși niciunul dintre aceste studii nu a raportat anterior supraviețuirea. 51 , 52
În rezumat, prezentăm aici modul în care căile multiple interacționează și sunt implicate în dezvoltarea cașexiei induse de o tumoră sau paradoxal de agentul chimioterapeutic cisplatină. Activarea p38 / C / EBP-β, a miostatinei și a citokinelor inflamatorii și o scădere a Akt și Myogenin / myoD conduc în cele din urmă la proteoliză sporită, la scăderea masei musculare și la rezistență. Noul hormon ghrelin previne atrofia musculară prin scăderea inflamației, prin reglarea în jos a căii p38 / C / EBP-β / myostatin și prin creșterea fosforației Akt și prin activarea miogeninei și mioD. Creșterea forței musculare și a supraviețuirii induse de ghrelin în animalele purtătoare de tumori evidențiază relevanța clinică a acestor rezultate.
Recunoasteri
Îi mulțumim doctorului David Allen (Univ. Din Colorado, Boulder) că ne-a oferit promotorul de miostatină și dr. Pradip Saha pentru ajutorul său în măsurarea sintezei și degradării proteinelor.
Confirmare
Autorii certifică faptul că respectă liniile directoare etice privind autorizarea și publicarea Jurnalului Cachexiei, Sarcopeniei și Muscle (von Haehling S, Morley JE, Coats AJS, Anker SD.) Ghidul etic pentru autor și publicare în Journal of Cachexia, Sarcopenia și Muscle, J. Cachexia Sarcopenia Muscle, 2010, 1: 7-8).
Finanțarea
Departamentul Afacerilor Veteranilor din SUA (Granturile de merit I01-BX000507 și I01 CX000174, Programul de evaluare a meritelor de intrare și un premiu de dezvoltare a carierei de dezvoltare a rețelei de asistență medicală din Europa Centrală); Caroline Wiess Legea Fondului de Medicină Moleculară; Institutele naționale de sănătate (AG040583 la JMG și AR063786 la YPL); Institutul Național de îmbătrânire (T32AG000183) în BG; Fundația Națională de Științe Naturale din China (81072262 și 81372944) către JAC; Vanderbilt MMPC (susținut în parte de U24 DK59637); Centrul Medical Vanderbilt Medical Center pentru analiza hormonului și servicii analitice Core (susținut de granturile naționale DK059637 și DK020593); Universitatea din Virginia (DK076037); și Centrul de Cercetare pentru Diabet și Endocrinologie Baylor (P30 DK079638).
Conflictele de interese
Jose M Garcia primește sprijin pentru cercetare și este consultant pentru Aeterna Zentaris, Inc și Helsinn Therapeutics, Inc.
informatii justificative
Informațiile de susținere sunt disponibile la Jurnalul de Casexia, Sarcopenie și Muschi online.
Figura S1. Ghrelin previne scăderea dimensiunii miofiberului cauzată de tumoare sau cisplatină. ( A ) Colorarea cu imunofluorescență pentru anticorpul anti-laminin al mușchilor TA în cașexia indusă de LLC. Lamininul colorat (verde) conturează miofiurile. Dapi a fost folosit pentru a pata nucleele (albastru). ( B ) Colorarea cu imunofluorescență pentru anticorpul anti-laminin al mușchiului TA în cachexia indusă de cisplatină. ( C ) aria medie a secțiunii transversale a miofiberilor în cazexia indusă de LLC. ( D ) Aria medie a secțiunii transversale a miofiberilor în cazexia indusă de cisplatină. HK-V reprezintă grupul injectat cu LLC ucis de căldură (HK) LLC și vehicul. TV și grupul TG reprezintă animale inoculate cu LLC (10 6celulele care primesc vehicul (salin) sau ghrelin (0,8 mg / kg de două ori pe zi). V, grupul tratat cu vehicul, grupul tratat cu cisplatină; CG, grupul tratat cu cisplatină + ghrelin; G, grupul tratat cu ghrelin. * P <0,05, ** P <0,01, comparativ cu grupul HK-V sau vehicul; § P <0,05, §§ P <0,01 comparativ cu grupul TV sau C.
Figura S2. Nivelurile serice ale IL-6, TNF-a și IL-1p în cașexia indusă de LLC ( A ) și cașexia indusă de cisplatină ( B ). Ghrelin previne creșterea acestor citokine proinflamatorii induse de cașexia indusă de tumori și cisplatină. * P <0,05 comparativ cu grupul HK-V sau vehicul; § P <0,05 comparativ cu grupul TV sau C.
Acest articol a fost citat de alte articole din PMC.
Referințe
Fearon K, Strasser F, Anker SD, Bosaeus I, Bruera E, Fainsinger RL, și colab. Definirea și clasificarea cașexiei cancerului: un consens internațional.Lancet Oncol.2011;12 : 489-495.[ PubMed ]
Utech AE, Tadros EM, Hayes TG, Garcia JM. Prezicerea supraviețuirii la pacienții cu cancer: rolul cașexiei și markerilor hormonali, nutriționali și inflamatori. J Cachexia Sarcopenie Muscle.2012;3 : 245-251.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Micul JP, Phillips SM. Exerciții de rezistență și nutriție pentru a contracara pierderea musculară. Appl Physiol Nutr Metab.2009;34 : 817-828.[ PubMed ]
Loprinzi CL, Kugler JW, Sloan JA, Mailliard JA, Krook JE, Wilwerding MB, și colab. Compararea aleatorie a acetatului de megestrol față de dexametazonă față de fluoximeteron pentru tratamentul anorexiei / cașexiei cancerului.J Clin Oncol.1999;17 : 3299-3306.[ PubMed ]
Lecker SH, Solomon V, Mitch WE, Goldberg AL. Distrugerea proteinei musculare și rolul critic al căii ubiquitin-proteazom în stările normale și de boală. J Nutr.1999;129 : 227S-237S.[ PubMed ]
Cai D, Frantz JD, Tawa NE, Jr, Melendez PA, Oh BC, Lidov HG și colab. Activarea IKKbeta / NF-kappaB cauzează pierdere musculară severă la șoareci.Cell.2004;119 : 285-298.[ PubMed ]
Garcia JM, Scherer T, Chen JA, Guillory B, Nassif A, Papusha V și colab. Inhibarea catabolismului lipidic indus de cisplatină și pierderea în greutate de către ghrelin la șoarecii masculi. Endocrinologie.2013;154 : 3118-3129.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Wisse BE, Frayo RS, Schwartz MW, Cummings DE. Inversarea anorexiei de cancer prin blocarea receptorilor centrali de melanocortină la șobolani. Endocrinologie.2001;142 : 3292-3301.[ PubMed ]
Garcia JM, Garcia-Touza M, Hijazi RA, Taffet G, Epner D, Mann D, și colab. Nivelurile active de ghrelin și raportul total de ghrelin activ în cazexia indusă de cancer. J Clin Endocrinol Metab.2005;90 : 2920-2926.[ PubMed ]
Garcia JM, Friend J, Allen S. Potențialul terapeutic al anamorelinului, un roman mimetic ghrelinic, la pacienții cu cașexie asociată cancerului: un studiu pilot multicentric, randomizat, dublu-orb, crossover.Asistență pentru îngrijirea cancerului.2013;21 : 129-137.[ PubMed ]
Murphy MG, Plunkett LM, Gertz BJ, He W, Wittreich J, Polvino WM și colab. MK-677, un secretagog al hormonului de creștere pe cale orală, inversează catabolismul indus de dietă. J Clin Endocrinol Metab.1998;83 : 320-325.[ PubMed ]
Dixit VD, Schaffer EM, Pyle RS, Collins GD, Sakthivel SK, Palaniappan R, și colab. Ghrelinul inhibă exprimarea citokinelor proinflamatorii induse de leptină și activare de către monocitele umane și celulele T. J Clin Invest.2004;114 : 57-66.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Garcia JM, Polvino WJ. Efecte hormonale farmacodinamice ale anamorelinului, un nou mimetic de ghrelin oral și secretagogon de hormon de creștere la voluntari sănătoși. Hormul de creștere IGF Res.2009;19 : 267-273.[ PubMed ]
Kos K, Harte AL, O’Hare PJ, Kumar S, McTernan PG. Ghrelin și reglarea diferențială a des-acilului (DSG) și ghrelinului oct-anoil (OTG) în țesutul adipos uman (AT) Vol. 70. Clin Endocrinol (Oxf); 2009. pp. 383-389.[ PubMed ]
Porporato PE, Filigheddu N, Reano S, Ferrara M, Angelino E, Gnocchi VF și colab. Ghrelinul acilat și neacilat afectează atrofia mușchilor scheletici la șoareci. J Clin Invest.2013;123 : 611-622.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Zhou X, Wang JL, Lu J, Song Y, Kwak KS, Jiao Q, și colab. Inversarea canhexiei și a pierderii musculare de către antagoniștii ActRIIB duce la supraviețuirea prelungită.Cell.2010;142 : 531-543.[ PubMed ]
Allen DL, Unterman TG. Reglarea expresiei miostatinei și diferențierii mioblastelor de către factorii de transcripție FoxO și SMAD. Am J Physiol Cell Physiol.2007;292 : C188-C199.[ PubMed ]
von Haehling S, Morley JE, Coats AJ, Anker SD. Instrucțiuni etice pentru autor și publicare în Jurnalul Cachexiei, Sarcopeniei și Musculaturii. J Cachexia Sarcopenie Muscle.2010;1 : 7-8.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Paul PK, Gupta SK, Bhatnagar S, Panguluri SK, Darnay BG, Choi Y și colab. Ablația țintită a TRAF6 inhibă risipirea mușchilor scheletici la șoareci. J Cell Biol.2010;191 : 1395-1411.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Zhang L, Du J, Hu Z, Han G, Delafontaine P, Garcia G, și colab. IL-6 și sinergia serică a amiloidului A mediază pierderea musculară indusă de angiotensina II. J Am Soc Nephrol.2009;20 : 604-612.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Deboer MD, Zhu X, Levasseur PR, Inui A, Hu Z, Han G și colab. Tratamentul cu ghrelin al bolii renale cronice: îmbunătățiri ale masei corporale slabe și a profilului citokinelor. Endocrinologie.2008;149 : 827-835.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Prado CM, Baracos VE, McCargar LJ, Mourtzakis M, Mulder KE, Reiman T, și colab. Compoziția corpului ca determinant independent al toxicității chimioterapice pe bază de 5-fluorouracil.Clin Cancer Res.2007;13 : 3264-3268.[ PubMed ]
Tschop M, Smiley DL, Heiman ML. Ghrelin induce adipozitatea la rozătoare.Natură.2000;407 : 908-913.[ PubMed ]
Granore M, Priego T, Martin AI, Villanua MA, Lopez-Calderon A. Ghrelin, agonistul receptorului GHRP-2 previne creșterea indusă de artrită în expresiile genelor MuRF1 și MAFbx în mușchiul scheletic în enzimele de legare a ubiquitinei E3. Am J Physiol Endocrinol Metab.2005;289 : E1007-E1014.[ PubMed ]
Sugiyama M, Yamaki A, Furuya M, Inomata N, Minamitake Y, Ohsuye K, și colab. Ghrelinul îmbunătățește pierderea în greutate corporală și catabolismul mușchilor scheletici asociate cu cașexia indusă de angiotensina II la șoareci. Regula Pept.2012;178 : 21-28.[ PubMed ]
Hiura Y, Takiguchi S, Yamamoto K, Kurokawa Y, Yamasaki M, Nakajima K, și colab. Scăderea concentrațiilor plasmatice de ghrelină după chimioterapia pe bază de cisplatină la pacienții cu cancer esofagian. Int J Clin Oncol.2012;17 : 316-323.[ PubMed ]
Sandri M, Sandri C, Gilbert A, Skurk C, Calabria E, Picard A, și colab. Factorii de transcripție Foxo induc atrofia-1 legată de atributul ubiquitin și provoacă atrofie musculară scheletică.Cell.2004;117: 399-412.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Zhang G, Jin B, Li YP. C / EBPbeta mediază reglarea uroquitin ligazei indusă de tumori, atrogin1 / MAFbx, și pierderea musculară. EMBO J. 2011; 30 : 4323-4335.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Soarele YS, Ye ZY, Qian ZY, Xu XD, Hu JF. Exprimarea TRAF6 și a mRNA ubiquitin în mușchii scheletici ai pacienților cu cancer gastric. J Exp Clin Cancer Res.2012;31 : 81.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Stephens NA, Gallagher IJ, Rooyackers O, Skipworth RJ, Tan BH, Marstrand T, și colab. Folosind transcriptomics pentru a identifica si validarea biomarkerilor noi de cașexie cancerului de mușchi scheletici umane. Genome medicine.2010;2 : 1.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Li YP, Chen Y, John J, Moylan J, Jin B, Mann DL, și colab. TNF-alfa acționează prin intermediul p38 MAPK pentru a stimula exprimarea ligandului ubiquitin atrogin1 / MAFbx în mușchiul scheletic. FASEB J. 2005; 19 : 362-370.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Clavel S, Siffroi-Fernandez S, Coldefy AS, Boulukos K, Pisani DF, Derijard B. Reglarea localizării intracelulare a Foxo3a prin căi de semnalizare a protein kinazei activate în stres în celulele musculare scheletice. Mol Cell Biol.2010;30 : 470-480.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Cuadrado A, Nebreda AR. Mecanisme și funcții ale semnalizării p38 MAPK. Biochem J. 2010; 429 : 403-417.[ PubMed ]
McClung JM, judecător AR, Powers SK, Yan Z. p38 MAPK afectează stresul oxidativ la expresia genelor legate de autofagie în pierderea musculară cachectică. Am J Physiol Cell Physiol.2010;298: C542-C549.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Kim J, Won KJ, Lee HM, Hwang BY, Bae YM, Choi WS și colab. p38 MAPK participă la atrofia mediată de inelul 1 în inimă musculară în mușchiul gastrocnemius de șobolan imobiliar turnat. Jurnalul coreean de fiziologie și farmacologie: Jurnalul Oficial al Societății fiziologice coreene și Societatea coreeană de farmacologie.2009;13 : 491-496.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Filigheddu N, Gnocchi VF, Coscia M, Cappelli M, Porporato PE, Taulli R, și colab. Ghrelinul și glicina des-acilică favorizează diferențierea și fuziunea celulelor musculare scheletice C2C12. Mol Biol Cell.2007;18 : 986-994.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Morissette MR, Cook SA, Buranasombati C, Rosenberg MA, Rosenzweig A. Myostatin inhibă hipertrofia miotubă indusă de IGF-I prin Akt. Am J Physiol Cell Physiol.2009;297 : C1124-C1132.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Allen DL, Cleary AS, Hanson AM, Lindsay SF, Reed JM. Extracția proteinei-delta legată de CCAAT / amplificator este crescută în mușchiul scheletic rapid prin privarea alimentară și reglează transcripția miostatinei in vitro. Am J Physiol Regul Integral Comp Physiol.2010;299 : R1592-R1601.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Layne MD, agricultor SR. Factorul de necroză tumorală-alfa și factorul de creștere a fibroblastelor bazice inhibă diferențiat expresia miogeninei induse de factorul de creștere-I de insulină-I în mioblastele C2C12. Exp Cell Res.1999;249 : 177-187.[ PubMed ]
Penna F, Costamagna D, Fanzani A, Bonelli G, Baccino FM, Costelli P. Pierderea musculară și miogeneza afectată la șoarecii purtători de tumori sunt prevenite prin inhibarea ERK.Plus unu.2010;5 : e13604.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Zhang W, Zhao L, Mulholland MW. Ghrelin stimulează dezvoltarea miocitului. Fiziologie celulară și biochimie: jurnal internațional de fiziologie celulară experimentală, biochimie și farmacologie.2007;20 : 659-664.[ PubMed ]
Fanzani A, Zanola A, Rovetta F, Rossi S, Aleo MF. Cisplatina declanșează atrofia myotubelor scheletice C2C12 prin afectarea căii de semnalizare Akt și prin creșterea ulterioară a activității sistemelor de proteazom și autofagie. Toxicol Appl Pharmacol.2011;250 : 312-321.[ PubMed ]
Sakai H, Sagara A, Arakawa K, Sugiyama R, Hirosaki A, Takase K, și colab. Mecanisme de atrofie musculară indusă de cisplatină. Toxicol Appl Pharmacol.2014;278 : 190-199.[ PubMed ]
Sun Y, Garcia JM, Smith RG. Ghrelin și expresia receptorului secretor de hormon de creștere la șoareci în timpul îmbătrânirii. Endocrinologie.2007;148 : 1323-1329.[ PubMed ]
Sheriff S, Kadeer N, Joshi R, prietenul LA, James JH, Balasubramaniam A. Des-acil ghrelin prezintă efecte proanabolice și anti-catabolice asupra miotubelor C2C12 expuse la citokine și reduc proteoliza musculară indusă de arsură la șobolani. Mol Cell Endocrinol.2012;351 : 286-295.[ PubMed ]
Gershon E, Vale WW. Receptorii CRF de tip 2 mediază efectele metabolice ale ghrelinului în celulele C2C12. Obezitatea (primăvara de argint) 2014; 22 : 380-389.[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Cassoni P, Papotti M, Catapano F, Ghe C, Deghenghi R, Ghigo E, și colab. Locații specifice de legare pentru secretagogii sintetici ai hormonului de creștere sintetic în țesutul tiroidian uman ne-tumoral și neoplastic. J Endocrinol.2000;165 : 139-146.[ PubMed ]
Cassoni P, Papotti M, Ghe C, Catapano F, Sapino A, Graziani A, și colab. Identificarea, caracterizarea și activitatea biologică a receptorilor specifici pentru secretagogii naturali (ghrelin) și hormon de creștere sintetici și analogi în carcinoamele de sân umane și liniile celulare. J Clin Endocrinol Metab.2001;86 : 1738-1745.[ PubMed ]
Hanada T, Toshinai K, Kajimura N, Nara-Ashizawa N, Tsukada T, Hayashi Y, și colab. Efectul anti-cachectic al ghrelinului asupra șoarecilor goi care poartă celule de melanom umane.Biochem Biophys Res Commun.2003;301 : 275-279.[ PubMed ]
Wang W, Andersson M, Iresjo BM, Lonnroth C, Lundholm K. Efectele ghrelinului asupra anorexiei la șoarecii purtători de tumori cu cașexie legată de eicosanoid. Int J Oncol.2006;28 : 1393-1400.[ PubMed ]
Articolele din Jurnalul de Cachexia, Sarcopenia și Muscle sunt oferite aici prin amabilitatea lui Wiley-Blackwell
Sindromul de anorexie-cachexie se dezvoltă în stadiile avansate ale diferitelor boli cronice în care pacienții manifestă o scădere a consumului de alimente, scădere în greutate și pierderea țesutului muscular.Pentru acești pacienți, acest sindrom este o problemă critică care duce la o rată crescută de morbiditate și mortalitate.Terapiile farmacologice actuale pentru tratarea anorexiei-cașexiei au o eficacitate limitată.Medicamentul japonez pe bază de plante rikkunshito este adesea prescris pentru tratamentul anorexiei și tulburărilor gastrointestinale superioare (GI).Astfel, se așteaptă ca rikkunshito să fie benefic pentru tratamentul pacienților cu sindrom de anorexie-cașexie.În această revizuire, rezumăm efectele rikkunshito și mecanismele lor de acțiune asupra anorexiei-cașexiei.Pierderea persistentă a poftei de mâncare duce la o epuizare progresivă a stocurilor de energie corporală, care este frecvent asociată cu cașexia.În consecință, reglementarea apetitului și a homeostaziei energetice este extrem de importantă pentru tratarea cașexiei.Ghrelin este secretat în principal din stomac și joacă un rol important în inițierea hrănirii, controlul motilității GI și reglementarea cheltuielilor cu energia.Studiile clinice și științifice recente au demonstrat că mecanismul critic al rikkunshito stă la baza activității ghrelinului endogen.Interesant este faptul că mai multe componente ale site-ului rikkunshito țintesc multiple situsuri gastrice și centrale și reglementează secreția, sensibilizarea receptorilor și degradarea ghrelinului.Rikkunshito este eficient pentru tratamentul anorexiei, scăderea în greutate corporală, pierderea musculară și comportamentul asociat cu anxietatea.Mai mult, tratamentul cu rikkunshito a fost observat pentru a prelungi supraviețuirea într-un model animal de cașexie.Utilizarea unui potențiator de semnalizare ghrelină, cum ar fi rikkunshito, poate reprezenta o abordare nouă pentru tratamentul sindromului anorexie-cașexie.
INTRODUCERE
Sindromul anorexie-cachexie se caracterizează prin scăderea consumului de alimente, hipoalbuminemia, pierderea în greutate și pierderea țesutului muscular ( Tan și colab., 2014 ).Acest sindrom este observat la pacienții cu stadii avansate ale diferitelor boli cronice ( von Haehling și Anker, 2010 ) și este cauza morbidității și mortalității lor crescute ( Evans et al., 2008 ).Tratamentul anorexiei-cașexiei este, prin urmare, extrem de important pentru îmbunătățirea calității vieții (QOL) la pacienți.Debutul și dezvoltarea sindromului anorexie-cașexie este în mod obișnuit asociată cu o creștere a nivelurilor pro-inflamatorii ale citokinelor ( Plata-Salaman, 2000 ).Prin urmare, acetat de megestrol ( Ruiz Garcia et al., 2013 ) și glucocorticoizi sunt opțiuni pentru terapia farmacologică a anorexiei-cașexia;totuși, ele au o eficacitate limitată ( Nelson, 2000 ; Jatoi et al., 2002 ).Recent, ghrelinul, datorită activității sale orexigene, a fost sugerat ca fiind benefic pentru tratarea sindromului anorexie- cachexie ( Molfino et al., 2014 ).Ghrelin este implicat în stimularea hrănirii, controlul motilității gastrointestinale (GI) și reglarea consumului de energie și a greutății corporale.Astfel, studiile clinice ale analogilor de ghrelin în cazexia de cancer sunt în curs de desfășurare ( Currow și Abernethy, 2014 ; Pietra et al., 2014 ).
Medicina Kampo este medicina tradițională japoneză pe bază de plante standardizată în ceea ce privește calitatea și cantitatea de ingrediente din cadrul Ministerului Sănătății, Muncii și Bunăstării din Japonia.Acesta a fost dezvoltat prin studii clinice și de laborator, bazate pe abordări bazate pe experiment bazate pe occidentale ( Yu et al., 2006 ).Rikkunshito, un tip de medicament Kampo, este prescris pe scară largă ca remediu pentru diferite sindroame de GI superioare.Rapoartele adverse de reacție la medicament implică tulburări hepato-biliare, pseudoaldosteronism și miopatie.
Rikkunshito este fabricat prin uscarea prin pulverizare a unui extract de apă fierbinte dintr-un amestec de opt soiuri din următoarele plante medicinale brute: Atractylodis lanceae rhizoma (4,0 g), Ginseng radix (4,0 g), Pinelliae tuber (4,0 g), Poria (4,0 g) , Zizyphi fructus (2,0 g), Aurantii nobilis pericarpium (2,0 g), Glycyrrhizae radix (1,0 g) și Zingiberis rhizoma (0,5 g).Există dovezi științifice în creștere care susțin utilizarea clinică a rikkunshito ( Takeda et al., 2012 ).
plantele medicinale traditionale chinezesti TCM / CHM si koreene si formulele derivate cu si din acestea le cautati dupa nume pe
S-a demonstrat că rikkunshito îmbunătățește anorexia și cașexia, iar îmbunătățirea este mediată prin promovarea activității ghrelinului endogen ( Suzuki et al., 2012 ).O mai buna intelegere a mecanismului de actiune al rikkunshito si a componentelor sale active va contribui la dezvoltarea de noi terapii pentru imbunatatirea QOL si potential de prelungire a supravietuirii la pacientii cu sindrom de anorexie-cachexie.Prezentul articol analizează efectele farmacologice și beneficiile clinice ale rikkunshito în sindromul anorexie-cașexie.
APLICAȚII CLINICE ALE RIKKUNSHITO PENTRU TULBURĂRI GI
Dispepsia funcțională, care este clasificată ca o afecțiune GI funcțională (FGID), este definită ca o boală cu simptome dispeptice, cum ar fi plinătatea postprandială, saturația precoce și arsura epigastrică și nu există dovezi ale unei boli structurale care să explice simptomele ( Tack et al., 2006 ).Pacienții cu dispepsie funcțională prezintă dysmotilitate gastrică, cum ar fi golirea gastrică întârziată ( Stanghellini et al., 1996 ) și deprivarea gastrică ( Tack et al., 1998 ).
Mai multe studii clinice au demonstrat eficacitatea rikkunshito în tratamentul tulburărilor gastrointestinale, incluzând anorexia și dismotilitatea gastrică.Tatsuta și Iishi (1993) au raportat că administrarea rikkunshito, numită Liu-Jun-Zi-Tang în China, a accelerat timp de 7 zile golirea gastrică și simptomele GI reduse la 22 de pacienți cu dispepsie idiopatică cronică.Tratamentul cu placebo, administrat la 20 de pacienți, nu a produs efecte semnificative ( Tatsuta și Iishi, 1993 ).A fost efectuat un studiu clinic comparativ la scară largă la 235 de pacienți cu dispepsie asemănătoare dysmotilității ( Harasawa et al., 1998 ).Pacienții tratați cu Rikkunshito ( n = 118) au primit 2,5 g de rikkunshito de trei ori pe zi timp de 2 săptămâni, iar la pacienții tratați cu placebo ( n = 117) au fost administrate 2,5 g placebo, incluzând 2,5% rikkunshito.Ca rezultat, rata de ameliorare generalizată a dispepsiei dislexice (DDGI) a fost semnificativ mai mare în grupul tratat cu rikkunshito decât în grupul placebo.Mai mult decât atât, rikkunshito a fost eficace în ameliorarea anorexiei la pacienții cu simptome dispeptice severe sau moderate.Recent, a fost efectuat un studiu multicentric, randomizat, controlat cu placebo, paralel cu grupul rikkunshito la 247 pacienți cu dispepsie funcțională ( Suzuki et al., 2014 ).Administrarea a 2,5 g rikkunshito de trei ori pe zi timp de 8 săptămâni a redus dispepsia;durerea epigastrică a fost semnificativ îmbunătățită, iar plenitudinea postprandială a avut tendința de a se îmbunătăți în comparație cu grupul tratat cu placebo.Nu au existat evenimente adverse severe în nici un grup.
Boala de reflux gastroesofagian (GERD) este adesea asociată cu scăderea motilității GI superioare.Efectele terapeutice ale rikkunshito au fost raportate la pacienții cu refracție cu pompă de protoni (PPI) cu GERD sau boala de reflux non-eroziv (NERD).Tratamentul de patru săptămâni cu rikkunshito (7,5 g / zi) în asociere cu PPI rabeprazol (RPZ) a redus semnificativ scala de frecvență pentru simptomele GERD (scor FSSG) la 104 pacienți cu GERD, care este similar cu scăderea observată în răspuns la tratamentul cu o doză dublă de RPZ ( Tominaga et al., 2012 ).Într-un studiu clinic randomizat, controlat cu placebo, dublu-orb, pentru 242 de pacienți cu NERD refractar la PPI, tratamentul timp de 4 sau 8 săptămâni cu rikkunshito (7,5 g / zi) a îmbunătățit scorurile lor din rezumatul mental (MCS) Studiul de sănătate-8 (SF-8), care a fost deosebit de eficient la pacienții cu un indice de masă corporală scăzută (<22).Mai mult decât atât, rikkunshito a îmbunătățit semnificativ simptomele de dismoilitate asociate acidului FSSG la pacienții de sex feminin și vârstnici (≥65 ani, Sakata și colab., 2014 , Tominaga și colab., 2014 ).
STUDII DE BAZĂ ALE RIKKUNSHITO ÎN DOMENIUL ANOREXIEI ȘI DIFFACȚIUNII GI
Stresul fizic sau psihologic poate provoca anorexie și tulburări funcționale în tractul gastro-intestinal superior.Au fost raportate mai multe studii de bază ale rikkunshito privind anorexia asociată stresului la animale.Saegusa și colab.(2011) a construit un model de stres prin transferarea șoarecilor din cuștile grupate în grupuri în cuști individuale, care sunt medii noi pentru șoareci.Șoarecii subliniat de noul mediu au prezentat o scădere a consumului de alimente la 1 și 3 ore după stres, care a fost suprimată prin pre-tratament cu 500 mg / kg, po) 1 h înainte de stres ( Saegusa și colab., 2011 ) .Diferiți factori psihologici contribuie la reducerea consumului de alimente în rândul populației vârstnice.Nahata și colab.(2013) araportat că expunerea șoarecilor vârstnici (cu vârste cuprinse între 79 și 80 de săptămâni) la un mediu nou a redus semnificativ aportul alimentar comparativ cu cel al șoarecilor tineri (vârstă de 6 săptămâni).Administrarea Rikkunshito (1000 mg / kg, po) a atenuat scăderea aportului alimentar de 24 ore la șoarecii cu vârste stresate ( Nahata et al., 2013 ).
Urocortina 1 (UCN), un hormon de stres, actioneaza asupra receptorilor factorului de eliberare a corticotropinei (CRF) in creier si induce anorexia.Yakabi și colab.(2011) a raportat că rikkunshito (1000 mg / kg, po) a restabilit reducerea consumului de alimente la șobolani cu administrare intracerebroventriculară de UCN (300 pmol).În plus, următoarele studii au demonstrat că calea receptorului alfa-2 adrenergic contribuie la reducerea asociată a aportului alimentar ( Yakabi și colab., 2014).
Eficacitatea rikkunshito în tratamentul tulburărilor de GI a fost observată la pacienții cu dispepsie asemănătoare cu dismotilitatea ( Harasawa et al., 1998 ).Nahata și colab.(2014) a raportat, de asemenea, efectul rikkunshito asupra funcției gastrice într-un model de stres de reținere acută.Șoarecii expuși efortului de reținere timp de 60 de minute prezintă golirea gastrică întârziată.Motilitatea gastrică, care a fost măsurată fără fir utilizând un traductor de forță de măsurare a tensiunii, a fost de asemenea scăzută prin stresul de reținere.Administrarea Rikkunshito (250 mg / kg, po) a îmbunătățit golirea gastrică întârziată indusă de stresul de reținere și a scăzut contracțiile gastrice postprandiale ( Nahata et al., 2014 ).Aceste constatări sugerează că rikkunshito ameliorează mai multe tipuri de anorexie indusă de stres și dismotilitate gastrică.
MECANISMUL ACȚIUNII RIKKUNSHITO
Ghrelin
Ghrelin este o peptidă cu 28 de aminoacizi, care este în principal secretă din celulele de tip X / A din stomac și mai multe țesuturi, inclusiv creierul, au nivele mici de ghrelin.Acesta acționează ca un ligand natural pentru receptorul secretogenului hormonului de creștere (GHS-R).Acilarea Ser-3 prin adăugarea acidului n- octanoic prin intermediul enzimei ghrelin O- aciltransferazei legată de membrana poliopică (GOAT) este esențială pentru activitatea biologică a ghrelinului prin GHS-R ( Kojima și colab., 1999 ; Gnanapavan et al., 2002 ; Yang și colab., 2008 ).
Ghrelin joacă un rol nu numai în secreția hormonului de creștere ( Kojima et al., 1999 ), dar și în inițierea hrănirii ca stimulant al apetitului ( Nakazato et al., 2001 ).Nivelul de ghrelin din plasmă crește ca răspuns la postul prelungit și scade rapid după hrănire, sugerând că ghrelinul periferic este semnificativ pentru reglarea apetitului ( Cummings et al., 2001 ; Tschop et al., 2001 ).Semnalele ghrelin sunt transmise la nucleul tractului solitar prin intermediul căii aferente vagale și acționează neuronii neuropeptidici neuropeptidici Y (NPY) și neuroni ai peptidei agouti (AgRP) în nucleul arcuat hipotalamic (ARC), rezultând stimularea apetitului Date și colab., 2002 ; Chen și colab., 2004 ).În plus, ghrelin are funcții fiziologice mult mai largi ( Kojima și Kangawa, 2005 ), inclusiv controlul motilității GI ( Fujino et al., 2003 ), reglarea cheltuielilor cu energia ( Asakawa et al., 2001 ) și suprimarea inflamației ( Dixit și colab. 2004 ; Granado și colab., 2005 ).
Administrarea centrală sau periferică a ghrelinului stimulează puternic consumul de alimente și mărește masa de grăsime, ceea ce duce la creșterea în greutate a animalelor ( Tschop și colab., 2000 , Asakawa și colab., 2001 , Nakazato și colab., 2001 ).Administrarea intravenoasă a ghrelinului la oameni sănătoși a crescut scorurile vizuale analogice pentru pofta de mâncare și aportul de energie de la masa de prânz la bufet cu 28% ( Wren et al., 2001 ).Aceste rezultate sugerează posibilele aplicații clinice ale ghrelinului ca stimulator al poftei de mâncare.
PROMOVAREA ACTIVITĂȚII GHRELIN DE RIKKUNSHITO
Efectele inhibitoare ale rikkunshito asupra anorexiei și a dismotilității gastrice sunt considerate a fi implicate în promovarea activității ghrelinice endogene.
Takeda și colab.(2008) a demonstrat că rikkunshito a ameliorat anorexia la șobolanii tratați cu cisplatină prin inhibarea scăderii nivelurilor de ghrelină în plasmă.Acesta este primul raport care arată că rikkunshito stimulează secreția de ghrelin la șobolani ( Takeda et al., 2008 ).
Inhibitorii selectivi ai recaptării serotoninei (SSRI), inclusiv fenfluramină, au scăzut nivelele plasmatice de ghrelină și au modificat motilitățile GI la șobolani.
Administrarea orală a rikkunshito la șobolanii tratați cu fenfluramină a crescut nivelele de ghrelină din plasmă, consumul de alimente și viteza de golire gastrică și distrofiabilitatea GI îmbunătățită.
Efectele pozitive ale rikkunshito asupra simptomelor dispeptice au dispărut după tratamentul cu antagonistul GHS-R ( d- Lys3) -GHRP-6, sugerând că mediază semnalul ghrelinic ( Fujitsuka et al., 2009 ).
Efectul stimulativ asupra apetitului mediat de ghrelin al rikkunshito a fost observat, de asemenea, la șoarecii cu stres nou-înviat ( Saegusa et al., 2011 ) și la șobolanii tratați cu UCN ( Yakabi et al., 2011 ).
S-a raportat că administrarea intragastrică a rikkunshito (4 g) provoacă contracții fazice la nivelul duodenului și jejunului și accelerează golirea gastrică la câini.Nivelul ghrelinului plasmatic la 150 min după administrarea rikkunshito a fost semnificativ mai mare decât valoarea de control ( Yanai et al., 2013 ).
Wang și colab.(2014) a raportat că rikkunshito a îmbunătățit nivelele plasmatice de ghrelin în post și a ameliorat gastricul întârziat gol în șobolanii naivi și boala Parkinson tratați cu l- dopa / carbidopa, parțial prin mecanisme legate de ghrelin.
Ghrelinul este predominant produs în celulele gastrice de tip X / A și activează neuropeptide orexigenice NPY / AgRP în hipotalamus prin GHS-R în terminalul aferent vaginal din stomac ( Date et al., 2002 ).Șobolanii tratați cu Rikkunshito au prezentat expresie genetică crescută a ghrelinului gastric și NPY hipotalamic.Activitatea aferentă a nervului gastric a scăzut odată cu administrarea intravenoasă a ghrelinului.Un efect similar a fost observat la administrarea intraduodenală a rikkunshito (1000 mg / kg, Asakawa și colab., 2001 ; Fujitsuka și colab., 2011 ).Semnele ghrelinelor gastrice induse de administrarea de ghrelin (10 ng, iv) sau rikkunshito (1000 mg / kg, id) au stimulat activitățile eferente atât ale ramurilor gastrice, cât și celiace ale nervului vag, Fujino și colab., 2003).Aceste constatări sugerează că rikkunshito activează semnalul ghrelinic în nervul vag.În plus, vagotomia gastrică a eliminat efectul stimulativ al ghrelinului (10 ng, iv) asupra activităților eferente ale nervului gastric vag, dar nu a influențat efectele rikkunshito (1.000 mg / kg, id), sugerând că acțiunile lui rikkunshito parțial prin GHS -R în hipotalamus.
Studiile clinice au evidențiat o creștere semnificativă a concentrației ghrelinului circulant cu rikkunshito.
Matsumura și colab.(2010) a demonstrat că administrarea de rikkunshito (7,5 g pe zi) timp de 2 săptămâni a crescut nivelul ghrelinului plasmatic la 21 de voluntari sănătoși.
Takiguchi și colab.(2013) a demonstrat o atenuare semnificativă a simptomelor GI după tratamentul cu 2,5 g rikkunshito timp de 4 săptămâni la 25 de pacienți care au suferit gastrectomie.Raportul mediu al concentrației de glicină acil / total a crescut după administrarea de rikkunshito ( Takiguchi et al., 2013 ).
Arai și colab.(2012) a efectuat un studiu paralel, randomizat, controlat al rikkunshito sau domperidone timp de 4 săptămâni pentru 27 de pacienți cu dispepsie funcțională.Simptomele simptomelor gastrointestinale superioare bazate pe scorul de evaluare a simptomului gastrointestinal (GSRS) au fost ameliorate în ambele grupuri, dar eficacitatea rikkunshito a fost însoțită de o creștere a nivelului de ghrelină ( Arai et al., 2012 ).
MOLECULELE TARGET ȘI COMPONENTELE ACTIVE ale RIKKUNSHITO
Rikkunshito a raportat că reglementează secreția de ghrelin, sensibilizarea receptorilor de ghrelin și degradarea ghrelinelor, sugerând că rikkunshito promovează sinergic activitatea ghrelinică endogenă ( Uezono et al., 2012 ).După cum se arată în tabelul Tabelul1 , au fost identificate unele molecule țintă și componente active ale rikkunshito implicate în aceste efecte.Rezumatul mecanismului de acțiune al lui rikkunshito a fost prezentat în Figura 1 .
tabelul 1
Molecule țintă și componente active ale rikkunshito.
Molecule țintă
Componente active (medicament brut)
Structura
Referinţă
5-HT2B / 2CR
3,3,4,5,6,7,8-Heptametoxifenonă (Aurantii nobilis pericarpium)
Rezumatul mecanismului de acțiune al unor ingrediente ale rikkunshito.Rikkunshito promovează sinergic activitatea ghrelinică endogenă.Ingredientele de rikkunshito, cum ar fi heptametoxiflavona și hesperetin (o formă de aglycon de hesperidină), antagonizează receptorii 5-HT2b / 2c în stomac și hipotalamus, care au legătură cu secreția de ghrelină.Atractilodina activează receptorii de ghrelin în stomac și hipotalamus.10-Gingerol inhibă enzimele deacilatare de ghrelin în diferite țesuturi, inclusiv în stomac.Potențarea căilor de semnalizare ghrelin poate fi responsabilă de atenuarea anorexiei de către rikkunshito.POMC, pro-opiomelanocortin;Receptorul ghrelin GHS-R;NST, nucleu tractus solitarii;NPY, neuropeptidă Y;AgRP, peptidă legată de agouti.
SEROTONIN 2b / 2c RECEPTORI
Sistemul central al serotoninei (5-HT) este implicat în procesele de satietate și de sațietate ( Vickers et al., 2001 , 2003 ; Halford et al., 2007 ).Takeda și colab.(2008) a demonstrat că 5-HT produs în timpul tratamentului cu cisplatină stimulează receptorul 5-HT2b din stomac și receptorul 5-HT2c din sistemul nervos central, ducând la scăderea ghrelinului plasmatic.Heptametoxiflavona, isperetinul (o formă de aglycon de hesperidină) și isoliquiritigenina, care sunt componente ale rikkunshito, antagonizează receptorii 5-HT2b / 2c și stimulează secreția de ghrelină la șobolanii tratați cu cisplatină.Fenfluramine a redus ghrelinul plasmatic și a modificat activitățile motorii GI mediate de ghrelin prin receptorul central 5-HT2c.Administrarea orală a hepperidinei la șobolanii tratați cu fenfluramină a restabilit dismotilitatea GI ( Fujitsuka și colab., 2009 ).Aceste descoperiri sugerează că aceste componente ale rikkunshito augmentează secreția de ghrelin prin antagonizarea receptorilor 5-HT2b / c.
Nahata și colab.(2013) a demonstrat că expunerea șoarecilor în vârstă la o nouă expresie de mRNA a receptorului hipotalamic 5-HT2c în mediul înconjurător.Ameliorarea semnalizării receptorului 5-HT2c și activarea ulterioară a căii CRF-corticosteron au fost implicate în hipofagia indusă de noutate la șoarecii vârstnici.Antagonistul receptorului 5-HT2c SB242084 sau administrarea rikkunshito a atenuat scăderea aportului alimentar și creșterea nivelului de corticosteron la șoarecii cu vârste stresate ( Nahata și colab., 2013 ).
În plus, studiile in vitro utilizând microfluorometria fura-2 au arătat că rikkunshito influențează efectul 5-HT asupra neuronilor hipotalamici.Administrarea de 5-HT de 5-5 moli / l a crescut concentrația citocozică a Ca2 + în neuroni singulari izolați din nucleul paraventricular (PVN) al șobolanilor.Aceste modificări au fost inhibate prin administrarea de rikkunshito 100 ug / ml la neuronii PVN, 83% dintre aceștia demonstrând ulterior imunoreactivitatea la CRF ( Fujitsuka și colab., 2011 ).Administrarea 5-HT a determinat creșterea concentrației de Ca2 + citosolică în neuronii ARC, iar 80% dintre neuronii responsabili de 5-HT au fost imunoreactivi pentru pro-opiomelanocortin (POMC).Rikkunshito și isoliquiritigenin au contracționat semnalizarea Ca2 + mediată de receptorul 5-HT2c indusă de 5-HT2 în neuronii POMC ( Arai și colab., 2013 ).Aceste rezultate sugerează că inhibarea receptorilor 5-HT2c exprimată pe neuronii CRF ( Heisler et al., 2007 ) sau neuronii POMC ( Heisler et al., 2003 ) ar putea fi responsabilă de atenuarea anorexiei de către rikkunshito.
GHRELIN RECEPTOR
Receptorii secretorogonului hormonului de creștere sunt localizați în mai multe țesuturi periferice și neuroni centrali, incluzând neuronii NPY.Ghrelin crește concentrația de Ca 2+ citosolic în neuronii NPY ai ARC hipotalamic ( Kohno et al., 2003 ), iar acest efect este legat de stimularea apetitului ( Kohno et al., 2007 ).În comparație cu administrarea de ghrelin 10-12 mg / l, pretratarea cu rikkunshito a îmbunătățit creșterea indusă de ghrelină a nivelurilor de Ca2 + citosolice în neuronii ARC de șobolan, încărcați cu fura-2, care s-au dovedit ulterior a fi neuroni NPY prin imunocitochimie ( Fujitsuka et al., 2011 ).În plus, analiza imagistică a Ca2 + utilizând fluorescența G-CAMP2 a arătat că rikkunshito (100 μg / ml) nu a avut niciun efect asupra concentrației de Ca2 + citozolic;cu toate acestea, a crescut durata de concentrație a citobolului Ca2 + crescută cu ghrelină 10-7 mol / l în celulele COS care exprimă GHS-R.Rikkunshito a crescut, de asemenea, activitatea de legare a [ 125 I] -ghrelinului la GHS-R.
Pentru a identifica componenta activă a rikkunshito, s-au testat 43 de compuși (100 pmol / l) conținute în rikkunshito.Ca rezultat, atractilodina a arătat o creștere semnificativă a activității de legare a ghrelinului / GHS-R.Atractilodina a susținut, de asemenea, creșterea Ca2 + indusă de ghrelin în celulele care exprimă GHS-R ( Fujitsuka și colab., 2011 ).Aceste rezultate sugerează că atractilodina este o componentă activă a rikkunshito, care potențează acțiunea ghrelinului prin sensibilizarea receptorului ghrelin.
Nahata și colab.(2012) a demonstrat că ghrelinul a crescut motilitatea antrală la șobolanii operați în mod fals, dar nu la șobolanii GERD.Cu toate acestea, la șobolanii GERD tratați cu rikkunshito, sa observat o creștere semnificativă a motilității antralului de către ghrelin ( Nahata et al., 2012 ).Aceste constatări sugerează că funcțiile fiziologice ale ghrelinului endogen sunt potențate de rikkunshito care acționează asupra semnalizării GHS-R, care poate fi mediată de atractylodin, o componentă activă a rikkunshito.
ENZIMA DE DEZVOLTARE GHRELIN
Sadakane și colab.(2011) a raportat că rikkunshito a crescut raportul acil-la desacil-ghrelin (A / D) în plasmă de la șobolanii tratați cu cisplatină.Mai multe componente ale rikkunshito au activități inhibitoare împotriva enzimelor de decilare a ghrelinului.10 gingerol, o componentă activă a rikkunshito, a inhibat deacylarea ghrelinelor exogene la șobolani.Aceste rezultate sugerează că creșterea nivelului ghrelinului plasmatic de către rikkunshito este mediată, cel puțin parțial, prin inhibarea enzimei de degradare a ghrelinului ( Sadakane și colab., 2011 ).
cașexie
PATOGENIZA SINDROMULUI ANOREXIA-CACHEXIA
Sindromul anorexie-cașexie se dezvoltă în stadiile avansate ale diferitelor boli cronice, cum ar fi cancerul malign, insuficiența cardiacă cronică, boala renală cronică și boala pulmonară obstructivă cronică ( von Haehling și Anker, 2010 ).Acest sindrom conduce la scăderea QOL și la creșterea morbidității și mortalității.Cachexia este diagnosticată de prezența unei pierderi în greutate care depășește 5% în anii precedenți 3-12 luni, anorexia, pierderea mușchilor scheletici și anomaliile biochimice, cum ar fi markerii inflamatorii crescute, anemia și hipoalbuminemia ( Evans et al., 2008 ).În special, anorexia este foarte importantă în diagnosticul și tratamentul pierderii în greutate asociată cu cașexia, deoarece pierderea persistentă a poftei de mâncare duce la o epuizare progresivă a stocurilor de energie corporală ( Argiles et al., 2010 ).
Citokinele participă la dezvoltarea și / sau progresia anorexiei-cașexiei ( Plata-Salaman, 2000 ).Cancerul de animale cachectice prezintă valori crescute ale citokinelor plasmatice, cum ar fi interleukina-1β (IL-1β), interleukina-6 (IL-6), factorul de necroză tumorală-α (TNF-α) și factorul inhibitor al leucemiei fie sunt produse de celulele canceroase, fie sunt eliberate de sistemul imunitar gazdă ca răspuns la cancer ( Mori și colab., 1991 , Inui, 2002 , Ebrahimi și colab., 2004 , Perboni și Inui, 2006 , Tisdale, 2009 ).Aceste citokine din creier sau din circulație sporesc eliberarea hormonilor anorexigeni, incluzând 5-HT, leptina, colecistocinina (CCK), peptidele derivate din precursorul glucagonului și insulina ( Shintani și colab., 1993; Laviano și colab., 2000 ) .Creșterea concentrației de 5-HT în hipotalamus este demonstrată la animalele cu cancer ( Wang et al., 2003 ).Acetat de megestrol și glucocorticoizi sunt opțiuni pentru terapia farmacologică a anorexiei – cașexia, dar au o eficacitate limitată ( Nelson, 2000 ; Jatoi și colab., 2002 ).
ROLUL GHRELINULUI PE CACHEXIA
Nivelurile ghrelinului circulante sunt raportate a crește la pacienții subponderali cu cașexie asociată malignității ( Shimizu et al., 2003 ; Garcia și colab., 2005 ) și animalele care poartă tumori ( Terawaki et al., 2014 ), sugerând un eșec al adaptivului ( Schwartz și colab., 1995 ; Schwartz și Seeley, 1997 ; Flier, 1998 ).Nivelurile plasmatice de ghrelină au fost mai mari la șobolanii care purtau tumori decât la șobolanii normali hrăniți liber, dar au fost semnificativ mai mici decât la șobolanii normali hrăniți cu perechi.Scăderea expresiei hipotalamice a NPY și AgRP a fost observată, de asemenea, la șobolanii care sufereau de tumori, comparativ cu controalele hrănite cu perechi.De aceea, anorexia cancerului – cachexia este caracterizată ca o scădere a semnalizării ghrelinelor atât cu insuficiența ghrelinică, cât și cu rezistența, care este mediată de interacțiunile hipotalamice excesive ale 5-HT și CRF prin receptorul 5-HT2c ( Fujitsuka et al., 2011 ).Administrarea ghrelinului ( Hanada și colab., 2003 ) sau agonistul GHS-R ( Currow și Abernethy, 2014 ; Pietra și colab., 2014 ) poate depăși rezistența la efecte stimulatoare a apetitului ghrelinului endogen și îmbunătățește aportul alimentar și creșterea în greutate la subiecții umani și animale cu cașexie.
În plus, ghrelinul inhibă producția citokinelor proinflamatorii anorectice, incluzând IL-1 (3, IL-6 și TNF-a ( Dixit și colab., 2004 ).DeBoer și colab.(2007) a demonstrat că animalele tratate cu ghrelin cu cașexie de cancer au o creștere semnificativă a expresiei AgRP și NPY cu scăderea expresiei transcripției IL-1 receptor-I în hipotalamus.Boala cronică de rinichi este asociată cu o creștere a citokinelor inflamatorii, având ca rezultat cachexia cu pierderea mușchiului.Ghrelinul tratat cu animale nefrectomizate a avut o scădere a citokinelor inflamatorii în circulație și a expresiei receptorului IL-1 în trunchiul cerebral.Tratamentul cu ghrelin în uremie are ca rezultat îmbunătățirea accrualității masei slabe, care se datorează în parte proteolizei musculare suprimate și posibil legate de efectele antiinflamatorii ( Deboer et al., 2008 , Suzuki și colab., 2013 ).Administrarea ghrelinului a redus inflamația pulmonară, celulele epiteliale alveolare protejate și fibroza pulmonară ameliorată într-un model de leziuni acute pulmonare induse de bleomicină (BLM) la șoareci ( Imazu și colab., 2011 ).Combinația dintre acțiunea orexigenică și cea antiinflamatoare sugerează că ghrelinul are beneficii în tratamentul cașexiei.
EFECTUL ANTI-CACHECTIC AL RIKKUNSHITO
Creșterea dovezilor din modele experimentale pe animale a arătat că rikkunshito, care promovează sinergie activitatea ghrelinică endogenă, ameliorează mai multe tipuri de cașexie.Aceste constatări sugerează că rikkunshito poate fi mai eficient pentru rezistența la ghrelină, cum ar fi anorexia cancerului – cachexia decât tratamentul ghrelinului sau agoniștilor GHS-R.
Rikkunshito a îmbunătățit anorexia, dismotilitatea gastrointesitinală, pierderea musculară și comportamentul asociat cu anxietatea la șobolanii care poartă hematom AH-130 ( Fujitsuka și colab., 2011).Autorii au observat anorexie la 5 zile după injectarea intraperitoneală a tumorii la șobolani, dar administrarea de rikkunshito (1000 mg / kg, po) a crescut aportul alimentar timp de 6 ore la șobolanii care purtau tumori.Efectul stimulant al apetitului al rikkunshito a fost blocat de antagonistul receptorului ghrelin ( d- Lys3) -GHRP-6 (2 μmol / kg, iv), sugerând că ghrelinul endogen joacă un rol în efectele lui rikkunshito.Frecvența contracțiilor asemănătoare fazei a III-a la nivelul antrumului și al duodenului, care este activitate motorie la repaus mediată de semnalizarea ghrelinelor, a scăzut în cazul șobolanilor care poartă tumori.Rikkunshito (1000 mg / kg) a restaurat treptat contracțiile asemănătoare fazei III.Suplimentar, rikkunshito (500 mg / kg, po de două ori pe zi) a prelungit supraviețuirea la șobolanii care suferă de tumori și acest efect a fost sporit de administrarea concomitentă de cisplatină (CDDP; 1 mg / kg, ip, de două ori pe săptămână, de la 6 zile).
Pacienții cu cancer de stomac au cea mai mare incidență de cașexie.Terawaki și colab.(2014) a examinat efectele rikkunshito într-un nou model de cașexie de cancer de stomac prin implantarea șobolanilor nudi cu celule 85As2.Linia de celule 85As2 este derivată din metastazarea peritoneală a liniei celulare MKN45cl85 a cancerului de stomac uman implantat ortotopic și produce LIF, care este un factor cachectic cunoscut.Acest model de cașexie implică anorexie semnificativă, scăderea în greutate, modificări ale compoziției corporale, niveluri crescute ale markerului inflamator și niveluri scăzute de albumină serică, îndeplinind criteriile de diagnostic de cașexie.Rikkunshito (administrat pe cale orală de două ori pe zi la 1000 mg / kg și zi timp de 7 zile, începând cu 14 zile după implantarea celulelor 85As2 la șobolani) a determinat creșterea ratei de alimentație și a apei.Mai mult, rikkunshito a ușurat substanțial scăderea în greutate corporală și reducerea compozițiilor corporale, cum ar fi masa fără grăsimi, apa corporală totală și greutatea totală a musculaturii la șobolanul de cașexie indus de 85As2.Efectele anti-cachectice ale rikkunshito nu sunt legate de regresia tumorii sau de nivelul LIF al plasmei.Prin urmare, aceste efecte ale rikkunshito sunt probabil mediate prin activarea căii de semnalizare orexigenică GHS-R-NPY / AgRP.
Tsubouchi și colab.(2014a) a examinat impactul rikkunshito asupra fibrozei pulmonare induse de BLM la șoareci ca model de cașexie pulmonară.La șoarecii BLM, administrarea de rikkunshito (1000 mg / kg, po) timp de 14 zile a ameliorat scăderea greutății corporale și a aportului alimentar, precum și inflamația pulmonară și fibroza.La șoarecii ghrelin – / – și Ghsr – / – tratați cu BLM, rikkunshito a îmbunătățit inflamația pulmonară, în timp ce nu a inhibat scăderea asociată cu BLM în aportul alimentar și greutatea corporală ( Tsubouchi et al., 2014b ).Prin urmare, efectele rikkunshito asupra anorexiei și a pierderii în greutate au fost presupuse a fi mediate prin semnalizarea ghrelinelor.
Efectul benefic al rikkunshito asupra supraviețuirii a fost demonstrat, de asemenea, la pacienții umani printr-o analiză retrospectivă.Pacienții cu cancer de pancreatic cu ascită (stadiul III și IV) au primit gemcitabină sau gemcitabină plus rikkunshito.Supraviețuirea mediană a pacienților cu cancer de pancreatic cu ascite care au fost tratați cu gemcitabină a fost semnificativ prelungită prin administrarea rikkunshito ( Fujitsuka și colab., 2011 ).
Viitoarele studii clinice pe scară largă sunt necesare pentru a determina eficacitatea și siguranța rikkunshito în casexiei cancerului.
CONCLUZIE
Sindromul de cachexie se dezvoltă în stadiile avansate ale diferitelor boli cronice și duce la scăderea QOL și la creșterea ratei de morbiditate și mortalitate la pacienți.Medicamentul Kampk rikkunshito este prescris pentru diferite sindroame GI superioare, cum ar fi anorexia și este foarte important în tratamentul scăderii în greutate asociată cu cașexia.Studiile clinice și de bază demonstrează că rikkunshito ameliorează anorexia și cașexia, care pot fi mediate prin promovarea sinergică a activității ghrelinice endogene prin mai multe componente ale rikkunshito.Utilizarea unui potențator de ghrelin, cum ar fi rikkunshito, este de așteptat să reprezinte o abordare nouă pentru tratamentul sindromului anorexie-cașexie, care este caracterizat ca o scădere a semnalizării ghrelinelor atât cu insuficiență de ghrelină, cât și prin rezistență.
Acest articol a fost citat de alte articole din PMC.
Declarația privind conflictele de interese
Editorul asociat de invitat Akio Inui declară că, în ciuda colaborării cu autorii Naoki Fujitsuka și Yasuhito Uezono, procesul de examinare a fost abordat în mod obiectiv și nu există un conflict de interese.Yasuhito Uezono a primit sprijin de la Tsumura & Co. Naoki Fujitsuka este angajat de Tsumura & Co.
REFERINȚE
Arai M., Matsumura T., Tsuchiya N., Sadakane C., Inami R., Suzuki T., și colab.(2012).Rikkunshito îmbunătățește simptomele la pacienții cu dispepsie funcțională, însoțită de o creștere a nivelului de ghrelină plasmatică.Hepatogastroenterologie59 62-66 10.5754 / hge11246 [ PubMed ][ Ref.cross ]
Arai T., Maejima Y., Muroya S., Yada T. (2013).Rikkunshito și isoliquiritigeninul contractează activarea mediată de receptorul 2C indusă de receptorul 2C a neuronilor pro-opiomelanocortin în nucleul arcuat hipotalamic.Neuropeptide47 225-230 10.1016 / j.npep.2013.05.004 [ PubMed ][ Cross Ref ]
Argiles JM, Olivan M., Busquets S., Lopez-Soriano FJ (2010).Gestionarea optimă a sindromului de anorexie-cachexie a cancerului.Cancer Manag.Res.2 27-38 10.2147 / CMAR.S7101 [ articol gratuit PMC ][ PubMed ][ Cru ]
Asakawa A., Inui A., Kaga T., Yuzuriha H., Nagata T., Ueno N., și colab.(2001).Ghrelin este un semnal stimulator al apetitului din stomac, cu o asemănare structurală cu motilina.Gastroenterologie120 337-345 10.1053 / gast.2001.22158 [ PubMed ][ Ref.cross ]
Chen HY, Trumbauer ME, Chen AS, Weingarth DT, Adams JR, Frazier EG, și colab.(2004).Acțiunea orexigenică a ghrelinului periferic este mediată de neuropeptida Y și proteina asociată cu agouti.Endocrinologie145 2607-2612 10.1210 / ro.2003-1596 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Cummings DE, Purnell JQ, Frayo RS, Schmidova K., Wisse BE, Weigle DS (2001). Creșterea preprandială a nivelurilor de ghrelină plasmatică sugerează un rol în inițierea meselor la om. Diabetulde 50 1714-1719 10.2337 / diabetes.50.8.1714 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Currow DC, Abernethy AP (2014). Anamorelin clorhidrat în tratamentul sindromului anorexie-cachexie a cancerului. Viitorul Oncol. 10 789-802 10.2217 / fon.14.14 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Date Y., Murakami N., Toshinai K., Matsukura S., Niijima A., Matsuo H., și colab. (2002). Rolul nervului vagal aferent gastric asociat hranei induse de ghrelin și secreției de hormon de creștere la șobolani. Gastroenterologie123 1120-1128 10.1053 / gast.2002.35954 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Deboer MD, Zhu X., Levasseur PR, Inui A., Hu Z., Han G., și colab.(2008).Tratamentul cu ghrelin al bolii renale cronice: îmbunătățiri ale masei corporale slabe și a profilului citokinelor. Endocrinology149 827-835 10.1210 / en.2007-1046 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
DeBoer MD, Zhu XX, Levasseur P., Meguid MM, Suzuki S., Inui A., și colab.(2007).Tratamentul cu ghrelin determină creșterea consumului de alimente și reținerea masei corporale slabe într-un model de șobolan de cașexie de cancer. Endocrinologie148 3004-3012 10.1210 / ro.2007-0016 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Dixit VD, Schaffer EM, Pyle RS, Collins GD, Sakthivel SK, Palaniappan R., și colab.(2004).Ghrelinul inhibă exprimarea citokinelor proinflamatorii induse de leptină și activare de către monocitele umane și celulele T.J. Clin.Investi.114 57-66 10.1172 / JCI200421134 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Ebrahimi B., Tucker SL, Li D., Abbruzzese JL, Kurzrock R. (2004). Citokinele în carcinomul pancreatic: corelarea cu caracteristicile și prognosticul fenotipic. Cancer101 2727-2736 10.1002 / cncr.20672 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Evans WJ, Morley JE, Argiles J., Bales C., Baracos V., Guttridge D., și colab.(2008).Cachexia: o nouă definiție.Clin.Nutr. 27 793-799 10.1016 / j.clnu.2008.06.013 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Flier JS (1998). Revizuirea clinică 94: ce este într-un nume? În căutarea rolului fiziologic al leptinei.J. Clin.Endocrinol.Metab.83 1407-1413.[ PubMed ]
Fujino K., Inui A., Asakawa A., Kihara N., Fujimura M., Fujimiya M. (2003). Ghrelin induce o activitate motrică nemișcată a tractului gastrointestinal la șobolani hrăniți conștient. J. Physiol. 550227-240 10.1113 / jphysiol.2003.040600 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Fujitsuka N., Asakawa A., Hayashi M., Sameshima M., Amitani H., Kojima S., și colab. (2009). Inhibitorii selectivi ai recaptării serotoninei modifică activitățile motorii gastrointestinale fiziologice prin receptorul 5-HT2c și acil ghrelinul. Biol. Psychiatry65 748-759 10.1016 / j.biopsych.2008.10.031 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Fujitsuka N., Asakawa A., Uezono Y., Minami K., Yamaguchi T., Niijima A., și colab.(2011).Potențarea semnalizării ghrelinului atenuează anorexia cancerului – cașexia și prelungește supraviețuirea. Transl. Psihiatrie1 : e23 10.1038 / tp.2011.25 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Garcia JM, Garcia-Touza M., Hijazi RA, Taffet G., Epner D., Mann D., și colab.(2005).Nivelurile active de ghrelin și raportul total de ghrelin activ în cazexia indusă de cancer.J. Clin.Endocrinol.Metab.90 la 2920-2926 10.1210 / jc.2004-1788 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Gnanapavan S., Kola B., Bustin SA, Morris DG, Mcgee P., Fairclough P., și colab. (2002). Distribuția țesutului mRNA de ghrelin și subtipurile receptorului său, GHS-R, la om.J. Clin.Endocrinol.Metab.87 : 2988 10.1210 / jcem.87.6.8739 [ PubMed ] [ Cruc Ref ]
Granado M., Priego T., Martin AI, Villanua MA, Lopez-Calderon A. (2005). Efectul antiinflamator al peptidei-2 care eliberează hormonul de creștere al agonistului ghrelin (GHRP-2) la șobolanii artritici.A.m.J. Physiol.Endocrinol.Metab.288 E486-E492 10.1152 / ajpendo.00196.2004 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Gunji S., Ueda S., Yoshida M., Kanai M., Terajima H., Takabayashi A. (2013). Efectele rikkunshito, un medicament campo, asupra calității vieții după gastrectomie proximală. J. Surg. Res. 185 575-580 10.1016 / j.jss.2013.06.010 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Halford JC, Harrold JA, Boyland EJ, Lawton CL, Blundell JE (2007). Medicamente serotoninergice: efecte asupra expresiei poftei de mâncare și utilizării în tratamentul obezității. Medicamente67 27-55 10.2165 / 00003495-200767010-00004 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Hanada T., Toshinai K., Kajimura N., Nara-Ashizawa N., Tsukada T., Hayashi Y., și colab.(2003).Efectul anti-cachectic al ghrelinului asupra șoarecilor goi care poartă celule de melanom umane. Biochem. Biophys. Res. Commun. 301 275-279 10.1016 / S0006-291X (02) 03028-0 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Harasawa S., Miyoshi A., Miwa T., Masamune O., Matsuo Y., Mori H., și colab.(1998).Studiul clinic multicentric dublu-orb după punerea pe piață a medicamentului TJ-43 TSUMURA Rikkunshi pentru tratamentul dispepsiei asemănătoare cu dismotilitatea.J. Clin.Exp. Med. 187 207-229.
Heisler LK, Cowley MA, Kishi T., Tecott LH, Fan W., Low MJ, și colab.(2003).Serotonina centrală și căile melanocortinei care reglează homeostazia energetică. Ann. NY Acad.Sci.994 169-174 10.1111 / j.1749-6632.2003.tb03177.x [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Heisler LK, Pronchuk N., Nonogaki K., Zhou L., Raber J., Tung L., și colab.(2007).Serotonina activează axa hipotalamo-pituitar-suprarenale prin stimularea receptorilor serotoninei 2C. J. Neurosci. De 27 6956 la 6,964 10.1523 / JNEUROSCI.2584-06.2007 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Imazu Y., Yanagi S., Miyoshi K., Tsubouchi H., Yamashita S., Matsumoto N., și colab.(2011).Ghrelin ameliorează leziunea pulmonară acută indusă de bleomic prin protejarea celulelor epiteliale alveolare și suprimarea inflamației pulmonare.EURO.J. Pharmacol. 672 153-158 10.1016 / j.ejphar.2011.09.183 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Inui A. (2002). Sindromul anorexie-cachexie a cancerului: probleme actuale în cercetare și management. CA Cancer J. Clin. 52 72-91 10.3322 / canjclin.52.2.72 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Jatoi A., Yamashita J., Sloan JA, Novotny PJ, Windschitl HE, Loprinzi CL (2002). Oare acetatul megestrol reglează în mod regulat interleukina-6 la pacienții cu anorexie asociată cancerului și pierderea în greutate? O investigație a Grupului Nord Central de Tratament pentru Cancer. Îngrijire de cancer de sprijin10 71-75 10.1007 / s00520-001-0310-7 [ PubMed ] [ Crucea Ref ]
Kohno D., Gao HZ, Muroya S., Kikuyama S., Yada T. (2003). Ghrelin interacționează direct cu neuronii care conțin neuropeptidă-Y în nucleul arcului de șobolan: semnalarea Ca2 + prin mecanisme dependente de canalul protein-kinazei A și N și conversația încrucișată cu leptina și orexina. Diabet52 948-956 10.2337 / diabetes.52.4.948 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Kohno D., Nakata M., Maekawa F., Fujiwara K., Maejima Y., Kuramochi M., și colab.(2007).Leptina suprimă activarea indusă de ghrelin a neuronilor neuropeptidului Y în nucleul arcuat prin intermediul căii mediate de fosfatidilinozitol 3-kinază și fosfodiesteraza 3. Endocrinologie148 2251-2263 10.1210 / ro.2006-1240 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Kojima M., Hosoda H., Date Y., Nakazato M., Matsuo H., Kangawa K. (1999). Ghrelinul este o peptidă acilată eliberată de hormon de creștere din stomac. Nature402 656-660 10.1038 / 45230 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Kojima M., Kangawa K. (2005). Ghrelin: structură și funcție.Physiol.Rev.85 495-522 10.1152 / physrev.00012.2004 [ PubMed ] [ Crucea Ref ]
Kusunoki H., Haruma K., Hata J., Ishii M., Kamada T., Yamashita N., și colab.(2010).Eficacitatea rikkunshito, un medicament tradițional japonez (Kampo), în tratarea dispepsiei funcționale. Intern. Med. 49 2195-2202 10.2169 / internalmedicine.49.3803 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Laviano A., Gleason JR, Meguid MM, Yang ZJ, Cangiano C., Rossi Fanelli F. (2000). Efectele intra-VMN mianserin și IL-1ra asupra numărului de masă la șobolani anorectici care poartă tumori. J. Investig. Med. 48 40-48.[ PubMed ]
Matsumura T., Arai M., Yonemitsu Y., Maruoka D., Tanaka T., Suzuki T., și colab.(2010).Medicamentul tradițional japonez rikkunshito crește nivelul plasmatic al ghrelinului la oameni și la șoareci. J. Gastroenterol. 45 300-307 10.1007 / s00535-009-0166-z [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Molfino A., Formiconi A., Rossi Fanelli F., Muscaritoli M. (2014). Ghrelin: de la descoperire până la tratamentul cu cașexie împotriva cancerului. Curr. Opin.Clin.Nutr.Metab.Îngrijire17 471-476 10.1097 / MCO.0000000000000075 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Mori M., Yamaguchi K., Honda S., Nagasaki K., Ueda M., Abe O., și colab.(1991).Sindromul de cașexie a cancerului sa dezvoltat la șoareci nud care poartă celule de melanom care produc factor de inhibiție a leucemiei.Cancer Res.51 6656 -6659.[ PubMed ]
Morita T., Furuta K., Adachi K., Ohara S., Tanimura T., Koshino K., și colab.(2012).Efectele rikkunshito (TJ-43) asupra funcției motorii esofagiene și a refluxului gastroesofagian. J. Neurogastroenterol. Motil. 18 181-186 10.5056 / jnm.2012.18.2.181 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Nahata M., Muto S., Nakagawa K., Ohnishi S., Sadakane C., Saegusa Y., și colab.(2013).Antagonismul receptorilor serotoninei 2C ameliorează hipofagia indusă de noutate la șoarecii vârstnici. Psychoneuroendocrinology38 2051-2064 10.1016 / j.psyneuen.2013.03.014 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Nahata M., Muto S., Oridate N., Ohnishi S., Nakagawa K., Sadakane C. și colab.(2012).Semnalarea ghrelină afectată este asociată cu dismotilitate gastrointestinală la șobolani cu boală de reflux gastroesofagian.A.m.J. Physiol. Gastrointest. Fiziologia ficatului. 303 G42-G53 10.1152 / ajpgi.00462.2011 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Nahata M., Saegusa Y., Sadakane C., Yamada C., Nakagawa K., Okubo N., și colab.(2014).Administrarea ghrelinului acilat exogen sau a rikkunshito, un enhancer endotelic de ghrelină, îmbunătățește scăderea motilității gastrice postprandiale într-un model de șoareci cu stres de reținere acută. Neurogastroenterol. Motil. 26 821-831 10.1111 / nmo.12336 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Nakazato M., Murakami N., Date Y., Kojima M., Matsuo H., Kangawa K., și colab.(2001).Un rol pentru ghrelin în reglementarea centrală a hrănirii. Nature409 194-198 10.1038 / 35051587 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Nelson KA (2000). Sindromul de anorexie-cachexie a cancerului. Semin. Oncol. 27 64-68.[ PubMed ]
Perboni S., Inui A. (2006). Anorexia în cancer: rolul peptidelor de hrănire-reglare. Philos. Trans.R. Soc.Lond. B Biol.Sci.361 1281-1289 10.1098 / rstb.2006.1863 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Pietra C., Takeda Y., Tazawa-Ogata N., Minami M., Yuanfeng X., Duus EM, și colab.(2014).Anamorelin HCl (ONO-7643), un nou agonist al receptorilor de ghrelin, pentru tratamentul sindromului de anorexie-cachexie a cancerului: profil preclinic. J. Cachexia Sarcopenia Muscle[Epub înainte de imprimare].[ Articol gratuit PMC ][ PubMed ]
Plata-Salaman CR (2000). Mecanismele sistemului nervos central contribuie la sindromul de cașexie-anorexie. Nutrițiede 16 1009-1012 10.1016 / S0899-9007 (00) 00413-5 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Ruiz Garcia V., Lopez-Briz E., Carbonell Sanchis R., Gonzalvez Perales JL, Bort-Marti S. (2013). Acetat de megestrol pentru tratamentul sindromului anorexie-cașexie. Baza de date Cochrane. Syst. Apoc3 : CD004310 10.1002 / 14651858.CD004310.pub3 [ PubMed ] [ Crucea Ref ]
Sadakane C., Muto S., Nakagawa K., Ohnishi S., Saegusa Y., Nahata M., și colab.(2011).10-Gingerol, o componentă a rikkunshito, îmbunătățește anorexia indusă de cisplatină prin inhibarea degradării acide a ghrelinelor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 412 506-511 10.1016 / j.bbrc.2011.08.002 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Saegusa Y., Takeda H., Muto S., Nakagawa K., Ohnishi S., Sadakane C., și colab.(2011).Scăderea ghrelinului cu plasmă contribuie la anorexia după stresul de noutate.A.m.J. Physiol.Endocrinol.Metab.301 E685-E696 10.1152 / ajpendo.00121.2011 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Sakata Y., Tominaga K., Kato M., Takeda H., Shimoyama Y., Takeuchi T., și colab.(2014).Caracteristicile clinice ale pacienților vârstnici cu boală de reflux non-eroziv refractar la pompa de protoni din studiul G-PRIDE care a răspuns la rikkunshito. BMC Gastroenterol. 14 : 116 10.1186 / 1471-230X-14-116 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Schwartz MW, Dallman MF, Woods SC (1995). Răspunsul hipotalamic la înfometare: implicații pentru studiul tulburărilor de risipă.A.m.J. Physiol. 269 R949-R957.[ PubMed ]
Schwartz MW, Seeley RJ (1997). Seminarii în medicina Centrului Medical Beth Israel Deaconess. Răspunsuri neuroendocrine la înfometare și la scăderea în greutate .N. Engl.J. Med. 336 1802-1811 10.1056 / NEJM199706193362507 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Shimizu Y., Nagaya N., Isobe T., Imazu M., Okumura H., Hosoda H., și colab.(2003).Nivel crescut de ghrelină plasmatică în cazexia cancerului pulmonar.Clin.Cancer Res.9 774-778.[ PubMed ]
Shintani F., Kanba S., Nakaki T., Nibuya M., Kinoshita N., Suzuki E., și colab.(1993).Interleukina-1 beta sporește eliberarea norepinefrinei, dopaminei și serotoninei în hipotalamusul anterior al șobolanului. J. Neurosci. 13 3574-3581.[ PubMed ]
Stanghellini V., Tosetti C., Paternico A., Barbara G., Morselli-Labate AM, Monetti N., și colab.(1996).Indicatorii de risc privind golirea gastrică întârziată a substanțelor solide la pacienții cu dispepsie funcțională. Gastroenterologiela 110 1036-1042 10.1053 / gast.1996.v110.pm8612991 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Suzuki H., Asakawa A., Amitani H., Nakamura N., Inui A. (2012). Caxexia și medicina pe bază de plante: perspectivă. Curr. Pharm. Des. 18 ani 4865-4,888 10.2174 / 138161212803216960 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Suzuki H., Asakawa A., Amitani H., Nakamura N., Inui A. (2013). Ghrelin și cașexia în boala cronică de rinichi.Pediatr.Nephrol. 28 521-526 10.1007 / s00467-012-2241-6 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Suzuki H., Matsuzaki J., Fukushima Y., Suzaki F., Kasugai K., Nishizawa T., și colab.(2014).Studiu clinic randomizat: rikkunshito în tratamentul dispepsiei funcționale – un studiu multicentric, dublu-orb, randomizat, controlat cu placebo. Neurogastroenterol. Motil. 26 950-961 10.1111 / nmo.12348 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tack J., Piessevaux H., Coulie B., Caenepeel P., Janssens J. (1998). Rolul distrugerii gastrice la o masă în dispepsia funcțională. Gastroenterologie115 alineatul 1346-1352 10.1016 / S0016-5085 (98) 70012-5 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tack J., Talley NJ, Camilleri M., Holtmann G., Hu P., Malagelada JR, și colab.(2006).Tulburări gastroduodenale funcționale. Gastroenterologiela 130 1466-1479 10.1053 / j.gastro.2005.11.059 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Takeda H., Muto S., Nakagawa K., Ohnishi S., Asaka M. (2012). Rikkunshito și secreția de ghrelină. Curr. Pharm. Des. 18 4827-4838 10.2174 / 138161212803216933 [ PubMed ] [ Ref .: Cross ]
Takeda H., Sadakane C., Hattori T., Katsurada T., Ohkawara T., Nagai K., și colab.(2008).Rikkunshito, un medicament pe bază de plante, suprimă anorexia indusă de cisplatină la șobolani prin antagonismul receptorului 5-HT2. Gastroenterologie134 2004-2013 , Pe 10.1053 / j.gastro.2008.02.078 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Takiguchi S., Hiura Y., Takahashi T., Kurokawa Y., Yamasaki M., Nakajima K., și colab.(2013).Efectul rikkunshito, un medicament japonez pe bază de plante, asupra simptomelor gastrointestinale și a nivelurilor de ghrelină la pacienții cu cancer gastric după gastrectomie. Cancerul gastric16 167-174 10.1007 / s10120-012-0164-3 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tan CR, Yaffee PM, Jamil LH, Lo SK, Nissen N., Pandol SJ și colab.(2014).Pancreatic cancer cahesxia: o revizuire a mecanismelor și terapeutică. Față.Physiol.5 : 88 10.3389 / fphys.2014.00088 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tatsuta M., Iishi H. (1993). Efectul tratamentului cu liu-jun-zi-tang (TJ-43) asupra golării gastrice și a simptomelor gastrointestinale la pacienții cu dispepție. Aliment.Pharmacol.Ther. 7 459-462 10.1111 / j.1365-2036.1993.tb00120.x [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Terawaki K., Sawada Y., Kashiwase Y., Hashimoto H., Yoshimura M., Suzuki M., și colab.(2014).Nou model de cancer de cașexie de șobolan, generat prin implantarea unei linii celulare de cancer de stomac uman derivată din peritoneală.A.m.J. Physiol.Endocrinol.Metab.306 E373-E387 10.1152 / ajpendo.00116.2013 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tokashiki R., Okamoto I., Funato N., Suzuki M. (2013). Rikkunshito îmbunătățește senzația globului la pacienții cu reflux laryngopharyngeal refractar inhibitor al pompei de protoni. Lumea J. Gastroenterol. 19 5118-5124 10.3748 / wjg.v19.i31.5118 [ articolul gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tominaga K., Iwakiri R., Fujimoto K., Fujiwara Y., Tanaka M., Shimoyama Y., și colab.(2012).Rikkunshito îmbunătățește simptomele pacienților cu GERD refractari PPI: un studiu prospectiv, randomizat, multicentric în Japonia. J. Gastroenterol. 47 284-292 10.1007 / s00535-011-0488-5 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tominaga K., Kato M., Takeda H., Shimoyama Y., Umegaki E., Iwakiri R., și colab.(2014).Un studiu clinic randomizat, controlat cu placebo, dublu-orb, clinic de rikkunshito pentru pacienții cu boală de reflux non-eroziv refractar la inhibitorul pompei de protoni: studiul G-PRIDE. J. Gastroenterol . 49 1392-1405 10.1007 / s00535-013-0896-9 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tschop M., Smiley DL, Heiman ML (2000). Ghrelin induce adipozitatea la rozătoare. Nature407908-913 10.1038 / 35038090 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tschop M., Wawarta R., Riepl RL, Friedrich S., Bidlingmaier M., Landgraf R., și colab.(2001).Reducerea postprandială a nivelurilor de ghrelin uman care circulă. J. Endocrinol.Investi.24 RC19-RC21. 10.1007 / BF03351037 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tsubouchi H., Yanagi S., Miura A., Iizuka S., Mogami S., Yamada C., și colab. (2014a). Rikkunshito ameliorează leziunea pulmonară acută indusă de bleomicină într-o manieră independentă de ghrelină.A.m.J. Physiol. Lung. Cell Mol.Physiol.306 L233-L245 10.1152 / ajplung.00096.2013 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Tsubouchi H., Yanagi S., Miura A., Mogami S., Yamada C., Iizuka S., și colab. (2014b). Rikkunshito ameliorează cașexia asociată cu fibroza pulmonară indusă de bleomicină la șoareci prin stimularea secreției de ghrelină. Nutr. Res. 10.1016 / j.nutres.2014.08.014 [Epub înainte de imprimare].[ PubMed ][ Cross Ref ]
Uehara R., Isomoto H., Minami H., Yamaguchi N., Ohnita K., Ichikawa T., și colab.(2013).Caracteristicile simptomelor și funcțiilor gastrointestinale după disecția endoscopică submucoasă și tratamentul simptomelor gastro-intestinale utilizând rikkunshito. Exp. Ther. Med. 6 1083-1088 10.3892 / etm.2013.1299 [ articolul gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Uezono Y., Miyano K., Sudo Y., Suzuki M., Shiraishi S., Terawaki K. (2012). O revizuire a medicamentelor tradiționale japoneze și a mecanismului de acțiune potențial al acestora. Curr. Pharm. Des. 18 ani 4839 – 4853 10.2174 / 138161212803216924 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Vickers SP, Dourish CT, Kennett GA (2001). Dovada că hipofagia indusă de d-fenfluramină și d-norfenfluramină la șobolan este mediată de receptorii 5-HT2C. Neuropharmacology41 200-209 10.1016 / S0028-3908 (01) 00063-6 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Vickers SP, Easton N., Webster LJ, Wyatt A., Bickerdike MJ, Dourish CT, și colab.(2003).Administrarea orală a agonistului receptorului 5-HT2, mCPP, reduce creșterea în greutate corporală la șobolani în decurs de 28 de zile ca urmare a hipofagiei menținute. Psychopharmacology ( Beri ) 167 274-280 10.1007 / s00213-002-1378-6 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
von Haehling S., Anker SD (2010). Cachexia ca o necesitate medicală majoră subestimată și nesatisfăcută: fapte și cifre. J. Cașexia Sarcopenia musculare1 este 1-5 10.1007 / s13539-010-0002-6 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Wang L., Mogami S., Karasawa H., Yamada C., Yakabi S., Yakabi K., și colab.(2014).Efectul preventiv al rikkunshito asupra funcției motorii gastrice inhibată de L-dopa la șobolani. Peptide55136-144 10.1016 / j.peptides.2014.02.011 [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Wang W., Danielsson A., Svanberg E., Lundholm K. (2003). Lipsa efectelor inhibitorilor triciclice antidepresive și serotoninei asupra anorexiei la șoarecii care poartă tumori MCG 101 cu cașexie asociată cu eicosanoid. Nutrition19 47-53 10.1016 / S0899-9007 (02) 00921-8 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG și colab.(2001).Ghrelin sporește apetitul și mărește aportul de alimente la om.J. Clin.Endocrinol.Metab.86 : 5992 10.1210 / jcem.86.12.8111 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Yakabi K., Harada Y., Takayama K., Ro S., Ochiai M., Iizuka S., și colab.(2014).Interacțiunile alfa-beta adrenergice periferice mediază răspunsul ghrelin la urocortina 1 din creier la șobolani. Psychoneuroendocrinology 50C, 300-310 10.1016 / j.psyneuen.2014.09.003 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Yakabi K., Noguchi M., Ohno S., Ro S., Onouchi T., Ochiai M., și colab.(2011).Urocortina 1 reduce aportul de alimente și secreția de ghrelin prin intermediul receptorilor CRF (2).A.m.J. Physiol.Endocrinol.Metab.301 E72-E82 10.1152 / ajpendo.00695.2010 [ PMC articol liber ] [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Yanai M., Mochiki E., Ogawa A., Morita H., Toyomasu Y., Ogata K., și colab.(2013).Administrarea intragastrică a rikkunshito stimulează motilitatea gastrointestinală superioară și golirea gastrică la câinii conștienți. J. Gastroenterol. 48 611-619 10.1007 / s00535-012-0687-8 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Yang J., Brown MS, Liang G., Grishin NV, Goldstein JL (2008). Identificarea aciltransferazei care octanolează ghrelinul, un hormon peptidic stimulant al apetitului. Cell132 387-396 10.1016 / j.cell.2008.01.017 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Yu F., Takahashi T., Moriya J., Kawaura K., Yamakawa J., Kusaka K., și colab.(2006).Medicina tradițională chineză și Kampo: o revizuire din trecutul îndepărtat pentru viitor. J. Int. Med. Res. 34231-239 10.1177 / 147323000603400301 [ PubMed ] [ Cross Ref ]
Articolele de la Frontiers in Pharmacology sunt oferite aici prin amabilitatea Frontiers Media SA
Am investigat asocierile indicelui glicemic alimentar (GI) post-diagnostic, încărcăturii glicemice (GL), indicelui de insulină (II) și încărcăturii de insulină (IL) cu mortalitatea specifică cancerului de sân și de toate cauzele.
Metode:
Printre 8.932 de femei cu cancer de sân în stadiul I-III identificate în Nurses’ Health Study (NHS) (1980-2010) și NHSII (1991-2011), am evaluat prospectiv asocierile dintre GI, GL, II și IL post-diagnostic. și mortalitatea specifică cancerului de sân și de toate cauzele. Participanții au completat un chestionar validat privind frecvența alimentelor la fiecare patru ani după diagnostic.
Rezultate:
În timpul urmăririi până în 2014 în NHS și 2015 în NHSII, au fost documentate 2.523 de decese, inclusiv 1.071 din cauza cancerului de sân. GL post-diagnostic mai mare a fost asociat cu un risc mai mare de mortalitate atât pentru cancerul de sân [raportul de risc (HR) Q5vsQ1 = 1,33, interval de încredere (IC) 95% = 1,09–1,63; Tendința P = 0,008] și mortalitatea de orice cauză (HR Q5vsQ1 = 1,26, IC 95% = 1,10–1,45; tendința P = 0,0006). O mortalitate mai mare de toate cauzele a fost observată și cu GI post-diagnostic mai mare (HR Q5vsQ1 =1,23, 95%CI=1,08–1,40; tendința P =0,001), II (HR Q5vsQ1 =1,20, 95%CI=1,04–1,38; P tendință = 0,005) și IL (HR Q5vsQ1=1,23, CI 95%=1,07–1,42; Tendința P = 0,0003). Asociațiile nu au fost modificate de receptorul de insulină sau de statutul receptorului de estrogen al tumorii sau de indicele de masă corporală.
Concluzii:
Am descoperit că GL alimentar mai mare, care reflectă răspunsul la glucoză postprandial, după un diagnostic de cancer de sân a fost asociat cu un risc mai mare de mortalitate specifică cancerului de sân. Dieta GI, GL, II și IL mai mare după un diagnostic de cancer de sân au fost asociate cu un risc mai mare de deces din orice cauză.
Impact:
Aceste rezultate sugerează că cantitatea și calitatea carbohidraților pot fi importante în prognosticul cancerului de sân.
Insulina este un factor de creștere puternic ( 1 ) și dovezi substanțiale sugerează că nivelurile circulante ridicate de insulină pot contribui la un prognostic mai prost al cancerului de sân ( 2 ). Printre supraviețuitorii cancerului de sân cu diabet, utilizarea insulinei a fost asociată cu un risc mai mare atât de recidivă a cancerului de sân, cât și de mortalitate de orice cauză ( 3 , 4 ). În plus, tumorile sunt adesea constrânse din punct de vedere nutrițional din cauza creșterii lor rapide, iar nivelurile ridicate de glucoză din sânge pot promova progresia. Tipul, cantitatea și digestibilitatea carbohidraților ingerați sunt determinanți majori ai nivelului de glucoză din sânge postprandial și, prin urmare, a nivelurilor circulante de insulină ( 5 , 6 ) .), care ridică posibilitatea ca aceste tipuri de diete să fie dăunătoare celor 3,8 milioane de femei care trăiesc în Statele Unite cu cancer de sân ( 7 ). Indicele glicemic (IG) este o clasare a alimentelor specifice sau a dietelor totale bazată pe creșterea glucozei postprandiale pentru o cantitate fixă de carbohidrați totali și este, prin urmare, o măsură a calității carbohidraților. Încărcarea glicemică (GL) combină cantitatea de carbohidrați din alimente sau dietă și IG-ul acestuia, calculată ca produs, și, astfel, se leagă cel mai puternic de răspunsurile postprandiale la glucoză și insulină ( 6 , 8 ). Unele dovezi indică faptul că GI poate influența probabilitatea de a dezvolta cancer de sân ( 9). Într-o analiză anterioară din Nurses’ Health Study (NHS) în rândul participanților sănătoși, un GL alimentar ridicat a fost asociat cu o mortalitate mai mare de toate cauzele ( 10 ), dar dacă aceste aspecte ale dietei după diagnosticarea cancerului de sân influențează supraviețuirea rămâne necunoscut ( 11 ) . Având în vedere că majoritatea femeilor cu cancer de sân mor din alte cauze, atât supraviețuirea specifică cancerului de sân, cât și cea generală sunt importante.
Pe lângă carbohidrați, aportul alimentar de proteine și grăsimi poate induce secreția de insulină ( 12 ). Indicele de insulină alimentară (II) și scorurile încărcăturii de insulină (IL) clasifică alimentele care conțin energie în funcție de răspunsurile postprandiale la insulină ( 12 ). Prin urmare, utilizarea acestor măsuri poate indica mai direct rolul insulinei în supraviețuirea cancerului de sân. Studiile privind impactul II și IL asupra supraviețuirii cancerului de sân lipsesc însă.
Prin urmare, am examinat asocierile dintre GI, GL, II și IL dietetice post-diagnostic cu supraviețuirea cancerului de sân, utilizând evaluări alimentare repetate în NHS și în Studiul de sănătate al asistentelor II (NHSII). Disponibilitatea datelor dietetice pre-diagnostic a permis evaluarea asocierilor independente de diete înainte și după diagnosticul cu supraviețuirea. În plus, am examinat aceste asocieri în funcție de statutul receptorului de insulină (IR) și al receptorului de estrogen (ER) al tumorii.
Pentru această analiză, am folosit date din două studii de cohortă în curs: NHS, care a fost înființat în 1976, cu o înscriere de 121.700 de asistente medicale înregistrate din SUA, cu vârsta cuprinsă între 30 și 55 de ani, și NHSII, care a fost inițiat în 1989, cu o înscriere de 116.429 de asistente medicale înregistrate. în vârstă de 25-42 de ani. Femeile au fost incluse în analizele de supraviețuire dacă am confirmat diagnosticul de cancer de sân din 1980 până în 2010 în NHS și din 1991 până în 2011 în NHSII. Am exclus femeile din cauza lipsei informațiilor legate de dietă la cel puțin 12 luni de la diagnostic, aportului total de energie neplauzibil (<600 sau >3500 kcal/zi), lăsând necompletat mai mult de 70 de alimente, un diagnostic de cancer (cu excepția cancerului de piele non-melanom) înainte cancer de sân, boală în stadiul IV la diagnostic și informații lipsă despre stadiul bolii. Astfel, am inclus în analiză 8.932 de femei cu cancer de sân.
Sa considerat că completarea chestionarului implică consimțământ informat atunci când protocolul de studiu a fost aprobat în 1976 (NHS) și 1989 (NHSII) de către consiliile de revizuire instituționale ale Spitalului Brigham și Femei (Boston, MA) și Harvard TH Chan School of Public Health (Boston, MA) și cele ale registrelor participante, după caz. Studiile au fost efectuate în conformitate cu liniile directoare etice recunoscute (Declarația de la Helsinki).
Evaluarea aportului alimentar
În 1980, un chestionar semi-cantitativ de frecvență a alimentelor (FFQ) cu 61 de articole a fost administrat pentru prima dată participanților la NHS. Ulterior, un FFQ extins cu 116–130 de itemi a fost administrat în 1984, 1986 și ulterior la fiecare patru ani până în 2010. În NHSII, un FFQ similar cu aproximativ 130 de itemi a fost administrat în 1991 și la fiecare patru ani după aceea, până în 2011 chestionare disponibile ( la http://www.nurseshealthstudy.org/participants/questionnaires ). În toate aceste chestionare, s-a cerut frecvența consumului în ultimul an pentru o porție specifică din fiecare produs alimentar; răspunsurile cu variante multiple au variat de la „niciodată sau mai puțin de o dată/lună” la „de 6 sau de mai multe ori/zi”.
Valorile IG pentru alimentele care conțin carbohidrați, care reflectă creșterea nivelului de glucoză în plasmă postprandială în raport cu creșterea după ingestia aceleiași cantități de carbohidrați ca și glucoza, au fost obținute dintr-o bază de date publicată ( 6 ), suplimentată cu valori derivate din testarea directă a alimente pe chestionarul nostru de la Centrul de Nutriție al Universității din Toronto (Prof. David J. Jenkins). Valorile GL pentru alimente au fost calculate prin înmulțirea IG a acestora cu cantitatea de carbohidrați în grame. GL alimentar total pentru fiecare persoană a fost calculat prin însumarea contribuțiilor tuturor alimentelor consumate ( 6 , 13 ). IG dietetic global a fost determinat prin împărțirea GL dietetică medie la cantitatea totală de aport de carbohidrați ( 14 ).
Valorile II pentru alimentele care conțin energie au fost obținute din baza de date publicată (31 de alimente) ( 12 ), suplimentată cu valori derivate din testarea directă a alimentelor pe chestionarul nostru (73 de alimente) de la Universitatea din Sydney (Prof. Jennie Brand-Miller). II a fost determinat prin împărțirea ariei de sub curba de răspuns la insulină pentru 1000 KJ a fiecărui produs alimentar la aria de sub curba de răspuns la insulină pentru 1000 KJ de glucoză (aliment de referință) (15 ) . Pentru produsele alimentare rămase din FFQ, valorile II au fost derivate din rețetă, imputate și calculate. IL pentru alimente au fost determinate prin înmulțirea valorilor lor II cu cantitățile lor de energie, iar IL total pentru fiecare persoană a fost calculat prin însumarea contribuțiilor tuturor alimentelor consumate.
IL = ∑ [ insulinaindexdealimente×energieconţinutdealimente( kcal / porție )×frecvențădealimenteadmisie( porție / zi ) ]/100
Dieta totală II a fost determinată prin împărțirea IL dietei medii la aportul total de energie al acelei persoane.
II = IL × 100/ [ ∑ ( energieconţinutdealimente( kcal / porție )×frecvențădealimenteadmisie( portii / zi ) ]
Valorile nutritive (carbohidrați, proteine, grăsimi și fibre), alcool și energie din alimente și băuturi au fost obținute din baza de date despre compoziția alimentelor de la Universitatea Harvard. Baza de date privind compoziția alimentelor a fost actualizată la fiecare patru ani pentru a ține seama de schimbările în aprovizionarea cu alimente. IG dietetic, GL, II, IL, carbohidrați, proteine, grăsimi și fibre au fost ajustate energetic prin utilizarea reziduurilor din regresia factorilor dietetici asupra aportului total de energie proteine, grăsimi și fibre au fost ajustate energetic prin utilizarea reziduurilor din regresia indicilor dietei asupra aportului total de energie ( 16). Primele aporturi post-diagnostic ajustate de energie GI, GL, II, IL, carbohidrați, proteine, grăsimi și fibre au fost colectate din FFQ-uri finalizate la 12 luni sau mai mult după diagnostic pentru a evita evaluarea în timpul tratamentului activ. Pentru a reduce eroarea de măsurare și variația în interiorul persoanei și pentru a captura aportul alimentar pe o perioadă lungă de timp după diagnostic, mediile cumulate ale scorurilor alimentare și nutrienților au fost calculate folosind toate FFQ-urile disponibile returnate după diagnostic.
Determinarea cancerului de sân și a morții
Diagnosticele de cancer de sân au fost auto-raportate pe chestionarele bienale. După obținerea permisiunii participanților, dosarele medicale și rapoartele de patologie au fost revizuite pentru a confirma diagnosticul și informațiile abstracte despre caracteristicile tumorii, stadiul bolii, starea ER și a receptorului de progesteron (PR) și alte informații relevante. Țesutul cancerului de sân a fost colectat pentru aproximativ 70% dintre femeile cu cancer de sân. Micromatricele tumorale (TMA) au fost construite pentru a evalua caracteristicile tumorii prin imunohistochimie ( 17 – 20). Colorația imunohistochimică, citită manual de un patolog de studiu, a fost efectuată pentru a determina starea ER, PR, receptorul 2 al factorului de creștere epidermică uman (HER2), citokeratina 5/6 (CK5/6) și receptorul factorului de creștere epidermal (EGFR) în țesutul tumoral. Dacă TMA-urile nu au fost evaluate, am extras statusul ER și PR al tumorii din dosarele medicale. Expresia IR în citoplasmă și membrană a fost determinată folosind software-ul de analiză a imaginii Definiens (Tissue Studio) în NHS ( 21). După raportarea deceselor de către membrii familiei sau serviciul poștal, sau căutarea în Indexul Național al Decesului, cauza decesului a fost atribuită prin examinarea de către medic a certificatului de deces și a fișei medicale. Clasificarea Internațională a Bolilor Ediția a opta (ICD-8) au fost utilizate pentru a clasifica mortalitatea specifică cancerului de sân (ICD-8, 174.0–174.9) și mortalitatea prin boli cardiovasculare (CVD) (ICD-8 390–458 și 795).
Covariabile
Pentru acest studiu, am colectat date despre indicele de masă corporală (IMC), statutul de fumat, activitatea fizică și consumul de aspirină pe care femeile le-au raportat în chestionarele bienale de urmărire la cel puțin 12 luni după diagnosticul de cancer de sân. Pentru a scădea posibilitatea de cauzalitate inversă, au fost calculate mediile cumulate ale IMC post-diagnostic și ale activității fizice folosind date întârziate de 4 ani. De asemenea, am colectat date despre IMC pe care pacienții cu cancer de sân le-au raportat în ultimul chestionar de urmărire bienal înainte de diagnostic și am calculat modificarea IMC de la pre-la post-diagnostic. Datele privind vârsta la menopauză, starea menopauzei, utilizarea hormonilor în postmenopauză și utilizarea contraceptivelor orale au fost colectate din chestionarele bienale de urmărire returnate înainte de diagnosticarea cancerului de sân. În plus, am obținut informații despre caracteristicile cancerului de sân,
analize statistice
Timpul de urmărire a fost calculat de la data de întoarcere a primului FFQ evaluat după diagnosticul de cancer de sân până la sfârșitul perioadei de studiu (1 iunie 2014, pentru NHS și 1 iunie 2015, pentru NHSII) sau deces , oricare a avut loc primul. Obiectivele au fost mortalitatea specifică cancerului de sân (a fost cenzurată urmărirea decesului din alte cauze), mortalitatea pentru toate cauzele și mortalitatea prin BCV.
Datele din NHS și NHSII au fost combinate și au fost utilizate modele de regresie a riscurilor proporționale Cox pentru a estima rapoartele de risc (HR) și intervalele de încredere (IC) de 95%. Femeile cu cancer de sân au fost grupate în chintile ale mediilor cumulate post-diagnostic ale GI, GL, II și IL, precum și aportul de carbohidrați, proteine, grăsimi, fibre și energie. Valoarea mediană a chintilei a fiecărui factor alimentar a fost utilizată pentru teste pentru tendință, modelată ca o variabilă continuă. Modelele au fost stratificate în funcție de cohortă și ajustate pentru vârsta la diagnostic și anul calendaristic al diagnosticului. În modelele multivariabile (modelul 2), am ajustat suplimentar pentru timpul dintre diagnostic și primul FFQ după diagnostic, anul calendaristic la începutul urmăririi fiecărui ciclu de chestionare de 2 ani, IMC prediagnostic (<20, 20 până la <22,5). , 22,5 până la <25, 25,0 până la <30, 30 până la <35, ≥35 kg/m2 , lipsă), modificarea IMC după diagnostic [fără modificare (≥−0,5 până la ≤0,5 kg/m 2 ), scădere (<−0,5 kg/m 2 ), creștere (>0,5–2 kg/m 2 ), creștere ( >2 kg/ m2), lipsă], fumat post-diagnostic (niciodată, trecut, curent 1-14 țigări/zi, curent 15-24 țigări/zi, curent ≥25 țigări/zi, lipsă), activitate fizică post-diagnostic (<5, 5 până la <11,5, 11,5 până la <22, ≥22 MET-h/săptămână, lipsă), utilizarea contraceptivelor orale pre-diagnostic (niciodată, niciodată), consumul de alcool post-diagnostic (<0,15, 0,15 până la <2,0, 2,0 până la 7,5, ≥7,5 g/zi), aportul total de energie post-diagnostic (quintile, kcal/zi), starea pre-diagnostic de menopauză, vârsta la menopauză și utilizarea hormonilor în postmenopauză (premenopauză, postmenopauză și vârsta la menopauză <50 de ani și niciodată hormon postmenopauză) utilizarea, postmenopauză și vârsta la menopauză <50 de ani și utilizarea hormonilor postmenopauză în trecut, postmenopauză și vârsta la menopauză <50 de ani și utilizarea actuală a hormonilor postmenopauză;postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și niciodată utilizarea hormonilor postmenopauză, postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și utilizarea anterioare a hormonilor postmenopauzei, postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și utilizarea actuală a hormonilor postmenopauză, lipsă), utilizarea aspirinei post-diagnostic (niciodată, trecut, actual, dispărut), rasă (alb non-hispanic, altul), stadiul bolii (I, II, III), statut ER/PR (ER/PR pozitiv, ER pozitiv și PR negativ, ER/PR negativ, lipsește), radioterapie (da, nu, lipsește), chimioterapie (da, nu, lipsește) și tratament hormonal (da, nu, lipsește).Femeile cu status de menopauză necunoscut la momentul diagnosticului au fost considerate premenopauză dacă aveau mai puțin de 46 de ani pentru fumători sau 48 de ani pentru cei care nu au fumat și erau considerate postmenopauză dacă aveau mai mult de 54 de ani pentru fumători sau 56 de ani pentru cei care nu au fumat niciodată (22 ). Am înlocuit datele covariabile lipsă cu ultima valoare reportată pentru variabilele continue și indicatorii lipsă pentru variabilele categoriale. Pentru a ține seama de un rol potențial al GI, GL, II și IL dietetic pre-diagnostic în supraviețuirea cancerului de sân, am controlat suplimentar indicii pre-diagnostici, calculați din ultimul FFQ raportat înainte de diagnosticarea cancerului de sân, în modelele multivariabile. De asemenea, am evaluat asocierile după ajustarea suplimentară pentru aportul total de fructe și legume post-diagnostic și aportul de fibre. De asemenea, am efectuat analize de risc concurente pentru cauzele de deces: mortalitatea specifică cancerului de sân versus mortalitatea prin BCV, precum și alte cauze de deces utilizând metoda Fine-Gray ( 23 , 24 ).
În analizele de sensibilitate, am folosit timpul de trunchiere stânga de la modelul de diagnostic din cauza variațiilor între participanți în momentul returnării primului lor FFQ după diagnostic. În plus, am efectuat metoda completă a cazului și am exclus femeile cu informații covariabile lipsă care au cuprins mai puțin de 1% din totalul anilor persoane pentru statutul de fumat post-diagnostic și IMC înainte de diagnostic, 1,4% pentru IMC după diagnostic, 7,0% pentru starea de menopauză, vârsta la menopauză și utilizarea hormonilor în postmenopauză înainte de diagnosticare, 5,8% pentru utilizarea aspirinei post-diagnostic, 9,3% pentru activitatea fizică post-diagnostic, 9,9% pentru starea ER/PR, 10,2% pentru tratament hormonal, 11,6% pentru radioterapie și 12,6% pentru chimioterapie.
Pentru a examina potențiala modificare a efectului, am evaluat asocierile dintre GI, GL, II și IL cu mortalitatea specifică cancerului de sân și de toate cauzele în rândul femeilor, pe baza statusului IR al tumorii (IR-pozitiv vs. IR-negativ) și a statusului ER ( ER-pozitiv vs. ER-negativ), precum și IMC post-diagnostic (<25 vs. ≥ 25 kg/m2 ) și starea de menopauză la diagnostic (premenopauză vs. postmenopauză). Valoarea P pentru interacțiune a fost calculată utilizând testul Wald și toate analizele au fost efectuate utilizând software-ul SAS versiunea 9.4 (SAS Institute, Cary, NC) cu o valoare p pe două fețe de 0,05.
Printre 8.932 de femei eligibile diagnosticate cu cancer de sân (8.621 alb non-hispanici și 311 de altă rasă/etnie), am documentat 2.523 de decese (2.443 decese în rândul femeilor albe non-hispanice și 80 de decese printre alte populații de rasă/etnie), dintre care 1.071 din cauza cancerului de sân, peste o medie de 11,5 ani de urmărire de la revenirea primului FFQ după diagnostic (până la 30 de ani de urmărire). În medie, femeile au raportat 3,6 FFQ după diagnostic (interval 1-8). Participanții cu GL sau IL mai mare au avut tendința de a fuma mai puțin, de a bea mai puțin alcool, de a consuma mai puține grăsimi și proteine de origine animală și de a lua mai puțină aspirină. Participanții cu GL sau IL dietetic mai mari au fost, de asemenea, mai puțin probabil să fi folosit contraceptive orale și hormon de postmenopauză înainte de diagnostic. Femeile cu IL alimentar mai mare după diagnostic au fost mai tinere la diagnostic și mai puțin probabil să fie active fizic (tabelul 1).
Tabelul 1.
Vârsta și caracteristicile standardizate în funcție de vârstă a 8.932 de femei cu cancer de sân în Studiul de sănătate a asistentelor medicale și Studiul de sănătate a asistentelor medicale II după diagnosticul de cancer de sân, conform încărcăturii glicemice dietetice ajustate în funcție de energie și încărcăturii de insulină post-diagnostic
Încărcare glicemică
Încărcătura de insulină
Quintila 1
Quintila 2
Quintila 3
Quintila 4
Quintila 5
Quintila 1
Quintila 2
Quintila 3
Quintila 4
Quintila 5
Numărul de participanți
1.792
1.750
1.832
1.804
1.754
1.963
1.730
1.696
1.757
1.786
Rău
Consumul de alcool, g/zi
12.6
6.4
4.3
3.1
2.0
13.6
5.6
3.7
2.8
1.9
Aportul de grăsimi animale, g/zi
33
29
26
24
19
29
28
27
25
23
Aportul total de carbohidrați, g/zi
163
196
213
231
260
174
201
214
228
249
Aportul total de proteine, g/zi
78
76
74
72
65
74
75
74
73
69
Aportul total de energie, kcal/zi
1.688
1.754
1.766
1.701
1.677
1.680
1.731
1.760
1.717
1.693
Aport total de fructe, porții/zi
1.1
1.5
1.6
1.7
1.9
1.4
1.6
1.7
1.7
1.6
Aportul total de legume, portii/zi
3.2
3.2
3.2
3.0
2.9
3.6
3.3
3.1
2.9
2.5
Aport de cereale integrale, porții/zi
0,7
1.0
1.1
1.2
1.3
0,9
1.0
1.1
1.1
1.2
Aportul de cereale rafinate, portii/zi
1.4
1.7
1.9
1.9
2.1
1.4
1.7
1.9
2.0
2.1
Aport total de carne roșie și procesată, porții/zi
După ajustarea pentru variabilele potențial confuze, mortalitatea de orice cauză a fost semnificativ mai mare în rândul femeilor cu IG alimentar post-diagnostic mai mare: HR Q5vsQ1 = 1,23, 95% CI = 1,08–1,40; Tendința P = 0,001 (masa 2). Cu toate acestea, IG alimentar post-diagnostic nu a fost asociat semnificativ cu un risc mai mare de cancer de sân specific (masa 2) sau mortalitatea prin BCV ( Tabelul S1 ).
Masa 2.
Indicele glicemic alimentar post-diagnostic, încărcarea glicemică, indicele de insulină și încărcarea cu insulină în raport cu mortalitatea după diagnosticul de cancer de sân (n=8932 femei) în Studiul de sănătate a asistentelor și Studiul de sănătate a asistentelor II.
Modelul 1 stratificat pe cohortă și ajustat pentru vârsta la diagnostic (an) și anul calendaristic al diagnosticului.
Modelul 2 stratificat pe cohortă și ajustat pentru vârsta la diagnostic (an), anul calendaristic al diagnosticului, timpul dintre diagnostic și primul FFQ (an), an calendaristic la începutul urmăririi fiecărui ciclu de chestionar de 2 ani, pre-diagnostic IMC (<20, 20 până la <22,5, 22,5 până la <25, 25,0 până la <30, 30 până la <35, ≥35 kg/m 2 , lipsă ), modificarea IMC după diagnostic (nicio modificare (≥-0,5 până la ≤0,5 kg) /m 2 ), scădere (<-0,5 kg/m 2 ), creștere (>0,5–2 kg/m 2 ), creștere (>2 kg/m 2 )), lipsă), fumat post-diagnostic (niciodată, trecut, curent 1-14/zi, curent 15-24/zi, curent ≥25/zi, lipsă), activitate fizică post-diagnostic (<5, 5 până la <11,5 , 11,5 până la <22, ≥22 MET-h/săptămână, lipsă), utilizarea contraceptivelor orale (niciodată, niciodată), consumul de alcool post-diagnostic (<0,15, 0,15 până la <2,0, 2,0 până la 7,5, ≥7,5 g/zi) , aportul total de energie post-diagnostic (quintile, kcal/zi), starea pre-diagnostic de menopauză, vârsta la menopauză și utilizarea hormonilor în postmenopauză (premenopauză, postmenopauză și vârstă la menopauză <50 ani și niciodată utilizarea hormonilor în postmenopauză, postmenopauză și vârstă la menopauză < 50 de ani și utilizarea hormonilor postmenopauză în trecut, postmenopauză și vârsta la menopauză < 50 de ani și utilizarea actuală a hormonilor postmenopauză, postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și niciodată utilizarea hormonilor în postmenopauză,postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și consumul de hormoni postmenopauză în trecut, postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și consumul actual de hormoni postmenopauză, lipsă), consumul de aspirină post-diagnostic (niciodată, trecut, actual, lipsă), rasă (non- hispanic alb, altul), stadiul bolii (I, II, III), stare ER/PR (ER/PR pozitiv, ER pozitiv și PR negativ, ER/PR negativ, lipsă), radioterapie (da, nu, lipsă), chimioterapie (da, nu, lipsește) și tratament hormonal (da, nu, lipsește).radioterapie (da, nu, lipsește), chimioterapie (da, nu, lipsește) și tratament hormonal (da, nu, lipsește).radioterapie (da, nu, lipsește), chimioterapie (da, nu, lipsește) și tratament hormonal (da, nu, lipsește).
GL post-diagnostic a fost asociat pozitiv cu mortalitatea specifică cancerului de sân și de toate cauzele (masa 2). Comparând cea mai mare și cea mai mică chintilă, GL a fost asociată cu o mortalitate prin cancer de sân cu 33% mai mare (HR Q5vsQ1 = 1,33, 95% CI = 1,09–1,63; tendința P = 0,008) și cu o mortalitate de toate cauzele cu 26% mai mare (HR Q5vsQ1 ) = 1,26, 95% CI = 1,10–1,45; tendința P = 0,0006). Asociațiile dintre GL și mortalitatea specifică cancerului de sân au rămas semnificative după ajustarea suplimentară pentru GL pre-diagnostic (HR Q5vsQ1 = 1,34, 95% CI, 1,08–1,66, tendința P = 0,01), consumul de fructe și legume post-diagnostic (HR Q5vsQ1 ) = 1,32, IC 95%, 1,07–1,63, tendința P = 0,01) și aportul de fibre post-diagnostic (HRQ5vsQ1 =1,38, 95% CI, 1,12–1,70, tendința P =0,004). Rezultate similare au fost observate pentru mortalitatea de orice cauză. GL alimentar a fost, de asemenea, asociat cu un risc mai mare de mortalitate prin BCV, deși această constatare nu a atins semnificație statistică ( Tabelul S1 ). Am găsit rezultate similare utilizând modele de risc concurente.
Deși nici II și nici IL după diagnostic nu au fost asociate semnificativ cu mortalitatea specifică cancerului de sân, acestea au fost asociate cu un risc mai mare de mortalitate de orice cauză (HR Q5vsQ1 = 1,20, 95% CI = 1,04–1,38; tendința P = 0,005 și HR Q5vsQ1 = 1,23, 95% CI = 1,07–1,42; tendința P = 0,0003, respectiv) (masa 2). Mortalitatea prin BCV a fost, de asemenea, mai mare în rândul femeilor cu dietă II și IL mai mari ( Tabelul S1 ).
Pentru a înțelege mai bine asocierile observate cu GI/GL și II/IL dietetice, am examinat relația nutrienților care contribuie la acești indici la supraviețuire (Tabelul 3). Aportul total de carbohidrați post-diagnostic a fost asociat cu mai mare specificitate pentru cancerul de sân (HR Q5vsQ1 = 1,24, 95% CI = 1,01–1,52; tendința P = 0,06) și toate cauzele (HR Q5vsQ1 = 1,20, 95% CI = 1,04–1,38). Tendința P = 0,009 ) mortalitate. Aportul mai mare de proteine post-diagnostic a fost asociat cu un risc mai mic de cancer de sân specific (HR Q5vsQ1 = 0,68, 95% CI = 0,56–0,83; tendința P = 0,0002) și toate cauzele (HR Q5vsQ1 = 0,80, 95% CI = 0,70–0,91; tendința P = 0,0009) mortalitate, în timp ce aportul de proteine animale post-diagnostic a fost asociat cu un risc mai scăzut de mortalitate specifică cancerului de sân (HR Q5vsQ1=0,73, CI 95%=0,60–0,89; Tendința P = 0,001) și aportul de proteine vegetale post-diagnostic a fost asociat cu un risc mai scăzut de mortalitate de toate cauzele (HR Q5vsQ1 = 0,86, IC 95% = 0,75–0,98; tendința P = 0,03). Grăsimea totală și grăsimea vegetală post-diagnostic au fost asociate cu un risc mai scăzut de mortalitate de orice cauză (HR Q5vsQ1 = 0,85, 95% CI = 0,74–0,97; tendința P = 0,02 și HR Q5vsQ1 = 0,73, 95% CI = 0,63–0,84; Tendința P <0,0001, respectiv). În plus, aportul ridicat de fibre alimentare după diagnostic a fost asociat cu un risc mai scăzut de mortalitate de orice cauză (HR Q5vsQ1 = 0,85, 95% CI = 0,75–0,97; tendința P=0,004).
Tabelul 3:
Aportul de carbohidrați, proteine, grăsimi și fibre ajustat post-diagnostic în funcție de mortalitatea după diagnosticul de cancer de sân (n=8932 femei) în Studiul de sănătate a asistentelor și Studiul de sănătate a asistentelor II.
Nu am observat diferențe semnificative în asocierile dintre GI, GL, II și IL cu mortalitatea pe baza statusului IR (Tabelul 4). Deși tendințele nu au fost semnificative pentru cancerul de sân ER-negativ și s-au observat asocieri semnificative între GL și un risc mai mare de mortalitate specifică cancerului de sân în rândul femeilor cu cancer de sân ER-pozitiv, nu a existat nicio interacțiune semnificativă (Tabelul 4).
Tabelul 4.
Indicele glicemic alimentar ajustat în funcție de energie post-diagnostic, încărcătura glicemică, indicele de insulină și încărcătura de insulină în relație cu mortalitatea specifică cancerului de sân după diagnosticul de cancer de sân în Studiul de sănătate a asistentelor și Studiul de sănătate a asistentelor II, stratificat după receptorul de insulină (n =2501 femei, n=392 decese prin cancer de sân) și statutul receptorilor de estrogen (n=8384 femei, n=982 decese prin cancer de sân).
Modelele au fost stratificate în funcție de cohortă și ajustate pentru vârsta la diagnostic (an), anul calendaristic al diagnosticului, timpul dintre diagnostic și primul FFQ (an), anul calendaristic la începutul urmăririi fiecărui ciclu de chestionar de 2 ani, pre-diagnostic. IMC (<20, 20 până la <22,5, 22,5 până la <25, 25,0 până la <30, 30 până la <35, ≥35 kg/m 2 , lipsă ), modificarea IMC după diagnostic (nicio modificare (≥−0,5 până la ≤0,5 kg) /m 2 ), scădere (<−0,5 kg/m 2 ), creștere (>0,5–2 kg/m 2 ), creștere (>2 kg/m 2 )postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și consumul de hormoni postmenopauză în trecut, postmenopauză și vârsta la menopauză ≥ 50 de ani și consumul actual de hormoni postmenopauză, lipsă), consumul de aspirină post-diagnostic (niciodată, trecut, actual, lipsă), rasă (non- hispanic alb, altul), stadiul bolii (I, II, III), stare ER/PR (ER/PR pozitiv, ER pozitiv și PR negativ, ER/PR negativ, lipsă), radioterapie (da, nu, lipsă), chimioterapie (da, nu, lipsește) și tratament hormonal (da, nu, lipsește). În analiza stării ER, nu am ajustat pentru starea ER/PR. Starea ER/PR (ER/PR pozitivă, ER pozitivă și PR negativă, ER/PR negativă, lipsă), radioterapie (da, nu, lipsă), chimioterapie (da, nu, lipsă) și tratament hormonal (da, nu, dispărut). În analiza stării ER, nu am ajustat pentru starea ER/PR. Starea ER/PR (ER/PR pozitivă, ER pozitivă și PR negativă, ER/PR negativă, lipsă), radioterapie (da, nu, lipsă), chimioterapie (da, nu, lipsă) și tratament hormonal (da, nu, dispărut). În analiza stării ER, nu am ajustat pentru starea ER/PR.
Cu excepția riscului mai mare de mortalitate specifică cancerului de sân în rândul femeilor cu IG alimentar mai mare înainte de diagnostic, nu am observat asocieri semnificative de GL, II și IL pre-diagnostic din ultimul FFQ înainte de diagnostic și mortalitatea specifică cancerului de sân sau de toate cauzele ( Tabelul S2 ). De asemenea, am examinat GI, GL, II și IL doar din primul FFQ după diagnostic. Toate asocierile au fost mai slabe, dar asocierea pozitivă dintre IG ridicat și mortalitatea de orice cauză a rămas semnificativă statistic ( Tabelul S3 ).
Am observat un risc mai mare de mortalitate specifică cancerului de sân pentru GL și IL în rândul femeilor cu IMC ≥25 kg/m 2 . Cu toate acestea, nu au existat interacțiuni semnificative ( Tabelul S4 ). În plus, am observat asocieri pozitive cu mortalitatea specifică cancerului de sân pentru GI post-diagnostic în rândul femeilor în postmenopauză și pentru GL post-diagnostic în rândul femeilor în premenopauză. Cu toate acestea, nu au existat interacțiuni semnificative ( Tabelul S5 ).
În analizele de sensibilitate, am luat în considerare timpul de trunchiere stânga de la diagnostic. Constatările au fost similare ( Tabelul S6 ).
Constatările din metodele de caz complete sunt prezentate în Tabelul S7 . Acestea au fost similare cu cele observate după înlocuirea datelor covariabile lipsă cu utilizarea indicatorilor lipsă pentru variabilele categoriale.
În această analiză care combină două cohorte mari prospective, GL alimentar mai mare după diagnosticul de cancer de sân a fost asociat cu un risc mai mare de mortalitate specifică cancerului de sân. După cum era de așteptat din descoperirile anterioare în rândul femeilor fără cancer de sân ( 10 ), am observat, de asemenea, un risc mai mare de mortalitate de toate cauzele cu o dietă bogată în GL după diagnostic. GI, II și IL mai mare post-diagnostic a fost, de asemenea, asociat cu un risc mai mare de mortalitate de toate cauzele. Risc mai mare de mortalitate prin BCV a fost observat, de asemenea, în rândul femeilor cu GI, GL, II și IL mai ridicate după diagnostic, cu toate acestea, acestea nu au atins semnificație statistică. Aportul mai mare postdiagnostic de carbohidrați totali a fost asociat cu un risc mai mare de mortalitate specifică cancerului de sân și de toate cauzele și, așa cum am observat anterior ( 25) .), aportul mai mare de proteine totale post-diagnostic a fost asociat cu un risc mai mic de mortalitate specifică cancerului de sân și de toate cauzele. Aportul mai mare de fibre alimentare după diagnostic a fost asociat cu un risc mai scăzut de mortalitate de toate cauzele. IG dietetic per-diagnostic a fost asociat cu un risc mai mare de mortalitate specifică cancerului de sân; cu toate acestea, nu am observat nicio asociere semnificativă de GL, II și IL pre-diagnostic din ultimul FFQ înainte de diagnostic și mortalitate specifică cancerului de sân sau de toate cauzele.
Dietele cu IG/GL ridicat cresc nivelul de glucoză din sânge și de insulină postprandială mai mult decât dietele cu IG/GL scăzut. Dovezile tot mai mari sugerează că hiperglicemia și hiperinsulinemia pot afecta negativ prognosticul cancerului de sân ( 26 – 28 ). Niveluri crescute de insulină înainte de tratament au fost sugerate ca un predictor de prognostic slab la femeile nediabetice cu cancer de sân ( 2 ). Nivelurile crescute de HbA1C au prezis, de asemenea, o mortalitate mai mare la supraviețuitorii cancerului de sân ( 29 ). În schimb, postul de 13 sau mai multe ore pe noapte a fost asociat cu un risc redus de recidivă a cancerului de sân ( 30). Cu toate acestea, GI și GL din dietă nu au fost asociate cu prognosticul cancerului de sân în rândul celor 688 de supraviețuitori ai cancerului de sân în studiul Healthy Eating Activity and Lifestyle (HEAL) cu 6,7 ani de urmărire după diagnostic și n=106 decese totale (11 ) . Limitările acestor analize includ faptul că dieta a fost evaluată cu un singur chestionar la momentul inițial, au fost incluse un număr mic de femei cu cancer de sân, iar urmărirea a fost relativ scurtă. Numărul mult mai mare de femei cu cancer de sân (n=8.932) și decese (n=2.523) cu evaluări repetate ale dietei (până la opt) după diagnosticarea cancerului de sân pe parcursul a până la 30 de ani de urmărire, acest studiu a oferit mult putere mai mare de a evalua efectul dietelor post-diagnostic asupra supraviețuirii în rândul femeilor cu cancer de sân.
Rolul scorurilor insulinei alimentare în relație cu progresia cancerului de sân nu a fost evaluat în alte studii. În NHSII, nu am observat asocieri semnificative între adolescent sau adultul timpuriu alimentar II sau IL și riscul de cancer de sân ( 31 ). În acest studiu, o dietă bogată în IL și II după diagnostic a fost asociată cu o supraviețuire globală mai slabă, dar nu au fost observate asocieri cu mortalitatea specifică cancerului de sân.
Există cel puțin două mecanisme generale care ar putea explica asocierea cu GL și mortalitatea specifică cancerului de sân: 1) că nivelurile mai ridicate de glucoză oferă o nutriție mai mare tumorilor, care sunt de obicei constrânse din punct de vedere nutrițional din cauza creșterii lor rapide și 2) acea glucoză mai mare. nivelurile stimulează secreția de insulină, iar insulina în sine este un factor de creștere. Observația noastră că GL, dar nu IL a fost asociată cu o mortalitate mai mare specifică cancerului de sân, sugerează că primul mecanism poate fi cel mai important. Mai mult, II și IL sunt variabile complexe: sunt corelate cu GI și GL, deoarece carbohidrații cu glicemie mai mare contribuie la ambele, dar II și IL reflectă, de asemenea, răspunsurile insulinemice la grăsimi și proteine. Dacă de fapt nivelul ridicat de glucoză stimulează tumorile, atunci componentele insulinemice non-carbohidrate ale dietelor bogate în II și IL ar putea reduce efectiv răspunsurile glicemice. Asocierea inversă observată cu aportul de proteine tind să susțină această ipoteză mecanicistă.
Supraviețuitorii cancerului de sân sunt, de asemenea, expuși unui risc mai mare de BCV din cauza factorilor de risc obișnuiți ( 32 ), precum și a efectelor secundare ale terapiei adjuvante pentru cancerul de sân ( 33 – 35 ) care pot contribui la prognosticul pe termen lung a cancerului de sân. Având în vedere mortalitatea mai mare prin BCV cu diete bogate în GI, GL, II, IL (deși nu este destul de semnificativă statistic în studiul actual), o dietă săracă în GI, GL, II și IL poate fi o strategie importantă pentru a îmbunătăți supraviețuirea globală în rândul femeile cu cancer mamar.
Avantajele studiului actual includ proiectarea prospectivă, colectarea prospectivă detaliată și repetată de informații despre dieta și stilul de viață pre și post-diagnostic, revizuirea fișei medicale standardizate a cancerului de sân raportat și durata lungă de urmărire. Mai mult, disponibilitatea datelor detaliate despre mulți factori stabiliți ai stilului de viață, în paralel cu evaluarea aportului alimentar, a permis un control cuprinzător pentru potențialii predictori ai supraviețuirii cancerului de sân.
Potențialele limitări ale studiului nostru trebuie de asemenea remarcate. Deși am făcut eforturi pentru a exclude efectele confuze ale factorilor de prognostic al cancerului și ale stilului de viață, confuzia reziduală este încă posibilă datorită utilizării datelor observaționale. Nu am putut controla primirea unui tratament complet, ceea ce poate contribui la supraviețuirea cancerului. Deoarece este un studiu nerandomizat, posibilitatea extinderii timpurii a bolii/recurenței ar putea influența atât riscul de deces, cât și alegerile alimentare. Studiul a fost limitat la femeile albe educate care ar putea avea un acces mai bun la servicii de îngrijire medicală și o nutriție de înaltă calitate decât multe altele din populația SUA. Deci, este posibil ca concluziile să nu fie generalizabile la alte grupuri rasiale/etnice. Femeile cu GL mai mare au avut tendința de a avea profiluri mai sănătoase ale factorilor de risc, astfel, aceste ajustări au avut un impact minim asupra sau au avut tendința de a consolida asocierile cu indicii glicemici. În plus, răspunsurile la glucoză și insulină la un produs alimentar sunt influențate de potențialele interacțiuni între alimentele ingerate, precum și de alți factori, cum ar fi procedura de gătit, astfel încât IG sau II de la alimente individuale ar putea să nu prezică răspunsul insulinei la mesele mixte. Cu toate acestea, Bao et al (36 ) au arătat că II și GL ale alimentelor individuale pot capta răspunsurile la insulină la mesele mixte.
În concluzie, am constatat că GL alimentar mai mare, dar nu GI, IL sau II, după un diagnostic de cancer de sân, a fost asociat cu o mortalitate mai mare specifică cancerului de sân. În plus, dietele mai mari în GI, GL, II și IL după un diagnostic de cancer de sân au fost asociate cu decese mai mari din orice cauză. Femeile cu cancer de sân pot beneficia de consumul unei diete care reduce răspunsul postprandial la glucoză, ceea ce ar implica limitarea carbohidraților și accentuarea celor care sunt digerați mai puțin rapid, cum ar fi cerealele integrale, legumele fără amidon, nucile și leguminoasele.
Autorii le mulțumesc participanților și personalului NHS și NHSII pentru contribuțiile lor valoroase, precum și următoarelor registre de cancer de stat pentru ajutorul lor: AL, AZ, AR, CA, CO, CT, DE, FL, GA, ID, IL, ÎN, IA, KY, LA, ME, MD, MA, MI, NE, NH, NJ, NY, NC, ND, OH, OK, SAU, PA, RI, SC, TN, TX, VA, WA, WY.
Sprijin financiar: Studiul a fost susținut de National Institutes of Health Grants (U01 CA176726 [WC Willett și AH Eliassen], UM1 CA186107 [M. Stampfer și AH Eliassen], P01 CA087969 [RM Tamimi și AH Eliassen], R01 CA050385 [M. Stampfer și AH Eliassen] Willett și AH Eliassen]), Institutul American pentru Cercetarea Cancerului (MS Farvid) și Susan G. Komen (SGK) (RM Tamimi). Sponsorii studiului nu au fost implicați în proiectarea și colectarea studiului, analiza și interpretarea datelor, sau scrierea articolului sau decizia de a-l trimite spre publicare. Autorii au fost independenți de sponsorii studiului.
Toți autorii au furnizat contribuții critice în scrierea manuscrisului și au citit și au aprobat manuscrisul final. Autorii își asumă întreaga responsabilitate pentru analizele și interpretarea acestor date. MD Holmes și AH Eliassen au contribuit în mod egal la acest articol.
Interese concurente: Michelle D. Holmes a raportat sprijin nefinanciar din partea Bayer AG (Bayer furnizează aspirina și placebo pentru studiul Aspirina după cancerul de sân) și taxe personale de la Arla Foods (a participat la o revizuire sistematică a aportului alimentar la copiii nigerieni pentru această companie) în afara acesteia. lucrarea depusă. Elizabeth M. Poole era angajată a Sanofi Genzyme la momentul depunerii acestei lucrări și este angajată a Bluebird Bio. Ceilalți autori nu au făcut dezvăluiri.
Gupta K, Krishnaswamy G, Karnad A, Peiris AN. Insulina: un nou factor în carcinogeneză . Am J Med Sci . 2002; 323 ( 3 ): 140–5. [ PubMed ] [ Google Scholar ]2.
Ferroni P, Riondino S, Laudisi A, Portarena I, Formica V, Alessandroni J, et al. Nivelurile de insulină pre-tratament ca factor de prognostic pentru progresia cancerului de sân . Oncolog . 2016; 21 ( 9 ):1041–9. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]3.
Wintrob ZA, Hammel JP, Khoury T, Nimako GK, Fu HW, Fayazi ZS și colab. Utilizarea insulinei, profilurile adipokinelor și prognosticul cancerului de sân . Citokină . 2017; 89 :45–61. [ PubMed ] [ Google Scholar ]4.
Calip GS, Yu O, Hoskins KF, Boudreau DM. Asocieri între utilizarea medicamentelor pentru diabet și riscul de apariție a unui al doilea cancer de sân și mortalitate . Controlul cauzelor cancerului . 2015; 26 ( 8 ):1065–77. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]5.
Jenkins DJ, Wolever TM, Taylor RH, Barker H, Fielden H, Baldwin JM și colab. Indicele glicemic al alimentelor: o bază fiziologică pentru schimbul de carbohidrați . Am J Clin Nutr . 1981; 34 ( 3 ): 362–6. [ PubMed ] [ Google Scholar ]6.
Foster-Powell K, Holt SH, Brand-Miller JC. Tabelul internațional al indicelui glicemic și al valorilor încărcăturii glicemice: 2002 . Am J Clin Nutr . 2002; 76 ( 1 ): 5–56. [ PubMed ] [ Google Scholar ]7.
Brownley KA, Heymen S, Hinderliter AL, Galanko J, Macintosh B. Sarcina glicemică scăzută scade insulina și glucoza postprandială și crește grelina postprandială la femeile albe, dar nu la femeile de culoare . J Nutr . 2012; 142 ( 7 ):1240–5. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]9.
Schlesinger S, Chan DSM, Vingeliene S, Vieira AR, Abar L, Polemiti E, et al. Carbohidrați, indice glicemic, încărcare glicemică și risc de cancer de sân: o revizuire sistematică și o meta-analiză doză-răspuns a studiilor prospective . Nutr Rev. 2017; 75 ( 6 ): 420–41. [ PubMed ] [ Google Scholar ]10.
Baer HJ, Glynn RJ, Hu FB, Hankinson SE, Willett WC, Colditz GA și colab. Factorii de risc pentru mortalitate în studiul de sănătate a asistenților medicali: o analiză a riscurilor concurente . Am J Epidemiol . 2011; 173 ( 3 ): 319–29. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]11.
Belle FN, Kampman E, McTiernan A, Bernstein L, Baumgartner K, Baumgartner R, et al. Fibrele alimentare, carbohidrații, indicele glicemic și încărcarea glicemică în relație cu prognosticul cancerului de sân în cohorta HEAL . Biomarkeri de epidemiol de cancer Prev . 2011; 20 ( 5 ): 890–9. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]12.
Holt SH, Miller JC, Petocz P. Un indice de insulină al alimentelor: cererea de insulină generată de porțiuni de 1000 kJ ale alimentelor comune . Am J Clin Nutr . 1997; 66 ( 5 ): 1264–76. [ PubMed ] [ Google Scholar ]13.
Miller JB, Pang E, Broomhead L. Indicele glicemic al alimentelor care conțin zaharuri: comparația alimentelor cu zaharurile care apar în mod natural și zaharurile adăugate . Br J Nutr . 1995; 73 ( 4 ): 613–23. [ PubMed ] [ Google Scholar ]14.
Bao J, Atkinson F, Petocz P, Willett WC, Brand-Miller JC. Predicția glicemiei postprandiale și a insulinemiei la adulții slabi, tineri și sănătoși: încărcarea glicemică în comparație cu conținutul de carbohidrați singur . Am J Clin Nutr . 2011; 93 :984–96. [ PubMed ] [ Google Scholar ]16.
Willett W. Implicațiile consumului total de energie pentru analizele epidemiologice. În: Epidemiologie nutrițională . a 3-a ed. New York: Oxford University Press; 2013. p. 261–83. [ Google Scholar ]17.
Hirko KA, Willett WC, Hankinson SE, Rosner BA, Beck AH, Tamimi RM, et al. Modele alimentare sănătoase și risc de cancer de sân în funcție de subtipul molecular . Tratament pentru cancerul de sân . 2016; 155 ( 3 ): 579–88. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]18.
Tamimi RM, Baer HJ, Marotti J, Galan M, Galaburda L, Fu Y, et al. Compararea fenotipurilor moleculare ale carcinomului ductal in situ și cancerului mamar invaziv . Cancer mamar Res . 2008; 10 ( 4 ): R67. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]19.
Collins LC, Marotti JD, Baer HJ, Tamimi RM. Compararea rezultatelor receptorilor de estrogeni din rapoartele patologice cu rezultatele testelor de laborator central . J Natl Cancer Inst . 2008; 100 ( 3 ): 218–21. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]20.
Kinsel LB, Szabo E, Greene GL, Konrath J, Leight GS, McCarty KS, Jr. Analiza imunocitochimică a receptorilor de estrogen ca predictor al prognosticului la pacienții cu cancer de sân: comparație cu metode biochimice cantitative . Cancer Res . 1989; 49 ( 4 ): 1052–6. [ PubMed ] [ Google Scholar ]21.
Wang J, Zhang X, Beck AH, Collins LC, Chen WY, Tamimi RM și colab. Consumul de alcool și riscul de cancer de sân prin expresia receptorilor tumorali . Horm Cancer . 2015; 6 ( 5–6 ):237–46. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]22.
Colditz GA, Stampfer MJ, Willett WC, Stason WB, Rosner B, Hennekens CH, et al. Reproductibilitatea și validitatea statusului de menopauză auto-raportat într-un studiu de cohortă prospectiv . Am J Epidemiol . 1987; 126 ( 2 ): 319–25. [ PubMed ] [ Google Scholar ]23.
Fine JP, Grey RJ. Un model de pericole proporționale pentru subdistribuția unui risc concurent . J Am Stat Asoc . 1999; 94 ( 446 ):496–509. [
