Rezultatele căutări pentru: hepatic

Reovirusul oncolitic ca agent combinat antiviral și antitumoral pentru tratamentul cancerului hepatic

Adel Samson 1 ,Matthew J Bentham 1 ,Karen Scott 1 ,Gerard Nuovo 2 ,Abigail Bloy 1 ,Elizabeth Appleton 1 ,Robert A Adair 1 ,Rajiv Dave 1Adam Peckham-Cooper 1 ,Giles Toogood 1 ,Seishi Nagamori ,Matthew Coffey 3 , 4 ,Richard Vile 1 , 5 , 6 ,Kevin Harrington 6 ,Peter Selby 1 ,Fiona Errington-Mais 1 ,Alan Melcher 6 ,
http://orcid.org/0000-0002-7233-5243Stephen Griffin 1
Corespondență cu Dr. Stephen Griffin și Prof. Alan Melcher, Facultatea de Medicină și Sănătate, Institutul de Cancer și Patologie Leeds, Universitatea din Leeds, Clădirea Wellcome Trust Brenner, Spitalul Universitar St James, Leeds LS7 9TF, Marea Britanie; sdcgriffin@leeds.ac.uk și aamelcher@leeds.ac.uk

Abstract

Obiectiv Virușii oncolitici (OV) reprezintă tratamente proinflamatoare pentru cancer. Aici, am explorat dacă răspunsurile imune înnăscute induse de OV ar putea inhiba simultan HCV în timp ce suprimă carcinomul hepatocelular (HCC). În plus, am extins acest exemplu la alte modele de cancer asociat virusului.

Design și rezultate Ortoreovirusul oncolitic de grad clinic (Reo) a provocat activarea imună înnăscută în țesutul hepatic primar uman în absența citotoxicității și independent de replicarea genomului viral. Pe lângă realizarea terapiei în modelele preclinice de HCC prin activarea celulelor imune degranulante înnăscute, răspunsurile citokinelor induse de Reo au suprimat eficient replicarea HCV atât in vitro, cât și in vivo. În plus, răspunsurile înnăscute induse de Reo au fost, de asemenea, eficiente împotriva modelelor de HCC asociate VHB, precum și a unui model endogen alternativ de limfom asociat virusului Epstein-Barr. Interesant, Reo a părut superior majorității OV în capacitatea sa de a provoca răspunsuri inflamatorii înnăscute din țesutul hepatic primar.

Concluzii Propunem că Reo și alte OV proinflamatorii selectate pot fi utilizate în tratamentul cancerelor multiple asociate cu infecții cu virus oncogene, reducând simultan atât impulsul oncogen asociat virusului, cât și sarcina tumorală. În cazul HCC asociat cu HCV (HCV-HCC), Reo ar trebui să fie considerat un agent alternativ pentru a suplimenta și a sprijini terapiile actuale HCV-HCC, în special în acele țări în care accesul la noi tratamente antivirale HCV poate fi limitat.

Acesta este un articol cu acces deschis distribuit în conformitate cu termenii licenței Creative Commons Attribution (CC BY 4.0), care permite altora să distribuie, să remixe, să adapteze și să construiască pe această lucrare, pentru uz comercial, cu condiția ca lucrarea originală să fie citată corespunzător. . Consultați: http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

http://dx.doi.org/10.1136/gutjnl-2016-312009

permisiuni

Dacă doriți să refolosiți unul sau tot acest articol, vă rugăm să utilizați linkul de mai jos, care vă va duce la serviciul RightsLink al Centrului de clearance-ul drepturilor de autor. Veți putea obține un preț rapid și permisiunea instantanee de a reutiliza conținutul în multe moduri diferite.

Solicitați permisiuni

Semnificația acestui studiu

Ce se știe deja pe acest subiect?

Majoritatea carcinoamelor hepatocelulare (HCC) sunt legate de o infecție cu virus oncogen subiacent, și anume HBV (54%) sau HCV (31%), care determină oncogeneza atât prin mecanisme inflamatorii indirecte, cât și prin mecanisme carcinogene directe. În consecință, suprimarea infecțiilor cu VHB/VHC poate îmbunătăți rezultatele clinice ale HCC, dar puțini pacienți cu HCC din întreaga lume sunt vindecați de infecțiile cu hepatită din cauza costurilor, complianței și problemelor de toxicitate a tratamentului.
Terapia pentru pacienții cu HCC avansat este limitată; Sorafenib îmbunătățește supraviețuirea medie doar cu 2-3 luni, este asociat cu efecte secundare semnificative și nu a fost recomandat de Institutul Național pentru Excelență în Sănătate și Îngrijire din Marea Britanie.
Virușii oncolitici (OV) prezintă potențial ca terapii pentru cancer, ucigând celulele maligne prin mecanisme directe și mediate imun.

Care sunt noile descoperiri?

Ortoreovirusul oncolitic de grad clinic (Reo) a provocat secreția de interferon (IFN) și activarea imună înnăscută în țesutul hepatic primar uman în absența citotoxicității și independent de replicarea genomului viral.
Reo a realizat terapia în modele de linie celulară și murină de HCC pozitiv pentru virusul hepatitic/negativ pentru virusul hepatitic și a suprimat eficient replicarea HCV in vitro prin efectele replicării reprimate in vitro și in vivo, prin efectele IFN-urilor de tip I.
Efectele antivirale ale Reo au fost aplicabile și modelelor endogene in vitro de HBV-HCC și limfom asociat virusului Epstein-Barr. Dintre celelalte OV testate, doar tulpina Edmonston a virusului rujeolic a recapitulat efectele antivirale puternice ale Reo.

Cum ar putea avea impact asupra practicii clinice în viitorul apropiat?

Se preconizează că desfășurarea unor OV selecționate concentrate pe IFN la pacienții cu cancer care adăpostesc infecții subiacente cu virus oncogeni, fie ca agenți unici, fie în terapie combinată, va suprima infecțiile patogene, îmbunătățind sănătatea organelor și extinzând supraviețuirea specifică cancerului.

Introducere

Carcinomul hepatocelular (HCC) este printre cele mai mari cauze de mortalitate asociată cancerului și are opțiuni terapeutice limitate. Majoritatea HCC sunt legate de o infecție cu virus oncogen subiacent, și anume HBV (54%) sau HCV (31%). 1 HCC asociat VHC (HCV-HCC) are un risc deosebit de mare de recidivă în urma intervențiilor chirurgicale, în comparație fie cu HCC-VHB, fie cu alte tipuri de HCC. 2 , 3 Tratamentul antiviral de succes înainte de rezecția hepatică și/sau transplantul de ficat reduce semnificativ acest risc, 4totuși, toxicitatea asociată terapiei convenționale pentru VHC pe bază de interferon sistemic (IFN) a exclus din trecut mulți pacienți nou diagnosticați cu HCC-VHC de la un astfel de tratament. Noile antivirale cu acțiune directă (DAA) cu profiluri de siguranță îmbunătățite revoluționează terapia HCV, totuși problemele de conformitate sunt comune 5 , iar costul ridicat al AAD limitează profund utilizarea lor în țările mai sărace, unde prevalența HCV-HCC este cea mai mare.

Semnificația acestui studiu

Cum ar putea avea impact asupra practicii clinice în viitorul apropiat?
Se preconizează că desfășurarea unor OV selecționate concentrate pe IFN la pacienții cu cancer care adăpostesc infecții subiacente cu virus oncogeni, fie ca agenți unici, fie în terapie combinată, va suprima infecțiile patogene, îmbunătățind sănătatea organelor și extinzând supraviețuirea specifică cancerului.

Pentru pacienții cu HCC avansat, puține sunt cunoscute cu privire la impactul terapiei antivirale asupra tumorilor existente. Dogma atribuie apariția și progresia HCV-HCC unui fenomen observator, determinat de inflamația hepatică cronică. Cu toate acestea, dovezile tot mai mari indică faptul că VHC este, de asemenea, direct oncogen, susținând și mai mult necesitatea terapiei combinate antivirale și antitumorale. Mai exact, terapia antivirală îmbunătățește rezultatele pacientului în limfomul asociat VHC; 6 HCC este mai frecvent în ficatul VHC-pozitiv comparativ cu hepatita autoimună; 7 Proteinele VHC sunt direct oncogene în modelele preclinice 8iar HCV-HCC este mai probabil să mențină expresia miRNA122 supresor tumoral, un cofactor esențial al HCV, evidențiind un rol critic pentru HCV în oncogeneză. 9 Terapia pentru pacienții cu CHC avansat este limitată; Sorafenib îmbunătățește supraviețuirea medie doar cu 2-3 luni, este asociat cu efecte secundare semnificative și nu a fost recomandat de Institutul Național pentru Excelență în Sănătate și Îngrijire din Marea Britanie. 10–12 Chimioterapia trans -arterială este utilizată în mod obișnuit pentru pacienții cu boală avansată local/ca terapie de legătură cu transplant și a fost, de asemenea, testată ca tratament sistemic, dar este frecvent complicată de reactivarea/exacerbarea infecțiilor subiacente cu VHC/VHB. 13 , 14Astfel, având în vedere prognosticul prost pentru majoritatea pacienților cu HCC, o terapie combinată antiviral și antitumoral ar putea aduce beneficii semnificative pentru pacient.

Virușii oncolitici (OV) prezintă potențial ca terapii pentru cancer; în mod clasic, uciderea selectivă a tumorii apare din liza celulară directă accelerată de trăsăturile asociate virusului care favorizează replicarea în celulele maligne. Cu toate acestea, OV sunt, de asemenea, inductori puternici ai imunității gazdei, care este din ce în ce mai recunoscut ca fiind componenta majoră a eficacității lor antitumorale. 15 Răspunsuri încurajatoare au fost observate în testele clinice în stadiu avansat fără toxicitate semnificativă, primul OV recent licențiat pentru tratamentul melanomului 16 („T-Vec”, virusul herpes simplex tip 1 (HSV-1) care codifică colonia de macrofage granulocite umane. factor de stimulare (GM-CSF)). Ficatul și HCC au făcut obiectul mai multor studii clinice OV, 17inclusiv JX-594, un virus vaccinia modificat (VV) care codifică GM-CSF, 18 și propriile noastre investigații folosind Orthoreovirus oncolitic (Reo) în tratamentul cancerului colorectal metastatic (CRC). 19

Am emis ipoteza că natura proinflamatoare a imunoterapiei OV poate exercita beneficii concomitente atât asupra cancerului, cât și asupra infecției cu virus oncogen subiacent prin stimularea răspunsurilor înnăscute, și anume IFN. În consecință, răspunsurile imune înnăscute induse de Reo în țesutul hepatic primar au efectuat simultan distrugerea tumorii și suprimarea replicării HCV in vitro și in vivo. Aceste răspunsuri nu au necesitat replicare productivă Reo și au fost aplicabile altor modele de tumori asociate virusului. Propunem că acest mod dublu de acțiune, combinat cu un record de siguranță excelent, poate favoriza desfășurarea rapidă a OV, cum ar fi Reo, pentru pacienții dezavantajați cu HCC avansat, asociat virusului.

Rezultate

Răspunsurile imune înnăscute induse de reo apar atât în ficatul normal, cât și în ficatul canceros

Am confirmat anterior că Reo vizează eficient metastazele hepatice CRC după perfuzia intravenoasă, în ciuda anticorpilor de neutralizare a pacientului. 19 Transportul virusului mediat de celule a permis replicarea Reo în cadrul tumorilor și recuperarea virusului infecțios din explantele tumorale. Cu toate acestea, colorarea țesutului hepatic normal din jur a fost, de asemenea, demonstrată la un număr de pacienți, dar virusul infecțios nu a putut fi izolat. Acest lucru ne-a determinat să reexaminăm țesutul normal al pacientului cu ficat, confirmând expresia proteinei Reo la 5 din 10 subiecți ( figura 1 A).

figura 1

Reo ajunge la țesutul hepatic normal după injectarea intravenoasă și stimulează secreția de interferon (IFN) din celulele hepatice ex vivo. (A) Imunohistochimie (IHC) pentru proteina capsidei Reo σ3 (maro) din țesut hepatic normal derivat de la un pacient tratat intravenos cu Reo (stânga) sau un martor netratat (dreapta). Lamele sunt reprezentative pentru seria de studii clinice sau pentru șase martori netratate. (B) Test de viabilitate pentru hepatocite îmbogățite ex vivo tratate utilizând soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) sau 10 PFU/celulă Reo timp de 72 de ore și analizată pentru integritatea membranei prin colorare cu albastru tripan. (C) transcriptază inversă cantitativă (qRT)-PCR pentru Reo σ3. Hepatocitele umane primare au fost tratate folosind 1 PFU/celulă Reo sau uv-Reo și incubat timp de 24 sau 48 de ore înainte de extracția ARN. (D) Western blot pentru Reo σ3 și β-actină. Hepatocitele umane primare au fost tratate folosind 1 PFU/celulă Reo sau uv- Reo și incubate timp de 24 sau 48 de ore. Hepatocitele tratate cu simulare (M) și ARN purificat din stocurile de reolizină (+) au servit drept martori negativi și pozitivi. (E) Hepatocitele umane au fost infectate cu Reo sau uv -Reo ca mai sus și supuse analizei de imunofluorescență pentru proteina capsidei Reo σ3, cu colorant nuclear Hoechst. (F) ELISA pentru IFN-α, IFN-β, interleukină (IL)-28b/IL-29 și IFN-γ derivate din celule hepatice mixte ex vivo, hepatocite îmbogățite și celule mononucleare hepatice (LMC) după stimularea cu Reo sau PBS Control. * semnifică p<0,005.

Apoi, am examinat infecția cu Reo a țesutului hepatic uman ex vivo normal, generând suspensii unicelulare. Celulele hepatice mixte au fost fracționate în subpopulații de hepatocite și celule mononucleare hepatice (LMC) îmbogățite (a se vedea figura suplimentară online S1a ). Important, expunerea populațiilor de hepatocite primare îmbogățite la Reo nu a provocat toxicitate celulară ( figura 1 B), dar a dus la transcrierea limitată a ARN viral ( figura 1 C) și expresia proteinei la 24 de ore după infecție (figura 1 D, E) în absența producției de virion infecțios de novo (a se vedea figura suplimentară online S1b). Interesant, expresia ARN-ului și proteinei a scăzut între 24 și 48 de ore, ceea ce sugerează inducerea mecanismelor antivirale celulare ( figura 1 D, E). În schimb, Reo s-a replicat eficient într-o gamă largă de linii HCC in vitro, producând noi virioni infecțioși (vezi figura suplimentară online S1c ) și inducând citotoxicitate (vezi figura suplimentară online S1d ), în primul rând prin apoptoză (vezi figura suplimentară online S1e ). Foarte important, au fost observate răspunsuri puternice ale citokinelor la ex vivo la Reo a celulelor hepatice mixte, a fracțiilor îmbogățite cu hepatocite sau LMC la Reo ( figura 1).F). Toate tipurile de celule au exprimat IFN-β, în timp ce IFN-α și IFN-y s-au segregat în principal în fracția LMC, iar IFN-λ (interleukina (IL)-28b/IL-29) a fost mai proeminent în fracțiile îmbogățite cu hepatocite. Astfel, Reo are potențialul de a stimula imunitatea înnăscută într-o proporție semnificativă a ficatului, mai degrabă decât să fie limitat la celulele tumorale și/sau LMC asociate tumorii.

Material suplimentar

[gutjnl-2016-312009supp.pdf]

Răspunsurile imune înnăscute induse de reo mediază terapia anti-HCC

Pentru a evalua eficacitatea lui Reo împotriva modelelor de HCC cu/fără VHC, am folosit șoareci cu imunodeficiență combinată severă (SCID) imunocompromiși, purtând xenogrefe subcutanate de celule Huh7 sau Huh7-JFH1, purtând un replicon subgenomic de VHC (izolat de genotip 2a, JFH1). O singură injecție de Reo în tumorile palpabile (ziua 5 postimplantare) a întârziat creșterea tumorii pe parcursul unui experiment de 3-4 săptămâni, producând tumori mici, mai puțin vasculare macroscopic ( figura 2 A). Examenul histologic al tumorilor a confirmat expresia proteinei nestructurale (NS)5A a VHC și asocierea antigenului Reo cu necroza și caspaza 3 scindată ( figura 2 B). Cu toate acestea, șoarecii imunodeficienți tratați cu Reo au dezvoltat o toxicitate considerabilă evidențiată de pierderea în greutate (vezi figura suplimentară online S2a), necesitând sacrificii premature.

Figura 2

Răspunsurile imune înnăscute induse de reo sunt suficiente pentru terapia anti-carcinom hepatocelular (HCC). (A) Tumorile de flanc subcutanate excizate de la șoareci SCID după o singură injecție Itu de PBS sau 1 x 106 ^PFU Reo. (B) Colorare reprezentativă IHC (maro) pentru proteina nestructurală a VHC (NS) 5A, proteina capsidei Reo σ3 și caspaza 3 scindată în xenogrefe subcutanate Huh7 și Huh7-JFH1 la șoarecii SCID tratați cu o singură injecție Itu de 1 x ¹⁰⁶ PFU Reo în a 6-a zi după implantarea tumorii. (C) Volumul tumorii de xenogrefe subcutanate de flanc Huh7 (stânga) și Huh7-JFH1 (dreapta) la șoareci SCID tratați cu injecții Itu de 3 ori pe săptămână de PBS sau 1 x ¹⁰⁶PFU uv-Reo timp de 4 săptămâni începând cu a 6-a zi după implantarea tumorii. (D) ELISA pentru interferon (IFN)-α, IFN-p, IFN-y și interleukină (IL)-28b/IL-29 derivate din celule hepatice mixte ex vivo după stimularea cu control UV-Reo sau PBS. (E) Creșterea tumorii a tumorilor singeneice subcutanate 1MEA la șoareci BALB/c tratați cu Itu PBS de 3 ori pe săptămână, injecții 1 x 106 ^PFU Reo sau 1 x 106 ^PFU uv-Reo, începând cu a șasea zi după implantarea tumorii. * semnifică p<0,005.

Pentru a evita problemele de toxicitate și pentru a delimita terapia imună, mai degrabă decât terapia litică, am revizuit studiile anterioare în modele de melanom, în care Reo ( uv -Reo) inactivat cu UV (vezi figura suplimentară online S2b ) a amorsat răspunsurile imune antitumorale în comparație cu virusul viu. 20 În consecință, uv -Reo a provocat o întârziere semnificativă atât a creșterii tumorii HCV-pozitive, cât și a HCV-negative ( figura 2 C). uv -Reo a provocat, de asemenea, răspunsuri înnăscute de citokine din suspensiile primare de celule hepatice mixte umane, deși acest lucru a fost mai concentrat pe IFN-β ( figura 2).D). În cele din urmă, un model subcutanat de HCC imunocompetent (celule 1MEA la șoarecii Balb/c singenici) a evidențiat reduceri similare ale creșterii tumorii pentru Reo și uv -Reo, susținând un mecanism de acțiune condus de imun, mai degrabă decât un mecanism de acțiune oncolitic ( figura 2 E). Luată împreună, imunitatea înnăscută indusă de Reo pare suficientă pentru efectele anti-HCC în modelele preclinice, independent de replicarea genomică Reo, indicând un rol major pentru un astfel de mecanism la oamenii care urmează tratament cu virus viu de grad clinic.

Răspunsurile anti-HCC induse de reo necesită activarea mediată de IFN a limfocitelor ucigașe naturale

Examinarea histologică a tumorilor 1MEA tratate cu Reo a evidențiat o infiltrație semnificativă de celule natural killer (NK), indicând faptul că acestea pot reprezenta o componentă efectoră a răspunsului antitumoral ( figura 3 A), așa cum se observă pentru alte OV. 21 , 22 În consecință, tratamentul cu uv -Reo a fost ineficient împotriva xenogrefelor Huh7 în cadrul șoarecilor SCID/Beige cărora le lipsește degranularea funcțională a celulelor imune, în concordanță cu o cerință terapeutică pentru activitatea celulelor NK ( figura 3 B). Interesant, creșterea tumorală crescută nu a fost observată în SCID/Beige în comparație cu contextul SCID, sugerând că celulele degranulante nu ar putea controla eficient creșterea tumorii în absența stimulării exogene.

Figura 3

Interferonul reostimulat (IFN) conduce răspunsurile imune anti-carcinomului hepatocelular (HCC) prin activarea celulelor natural killer (NK). (A) Colorare reprezentativă IHC (maro) pentru celule NK în tumori singeneice subcutanate 1MEA la șoareci BALB/c tratați cu injecții Itu de 3 ori pe săptămână cu PBS sau 1 x 106 PFU ^Reo . (B) Creșterea tumorii a xenogrefelor subcutanate Huh7 la șoareci SCID/bej tratați cu injecții Itu de 3 ori pe săptămână cu PBS sau 1 x ¹⁰⁶PFU uv-Reo. (C) Diagrama de suprapunere a citometriei în flux (stânga) și cuantificarea (dreapta) a intensității mediane a fluorescenței (MFI) pentru expresia NK CD69 în celulele mononucleare hepatice (LMC) tratate folosind PBS, 1 PFU/celulă Reo, 1 PFU/celulă Reo și tip I Anticorpi blocanți IFN sau 1 PFU/celulă Reo și anticorpi izotip. (D) Similar cu (C), dar LMC-urile au fost tratate cu PBS, 1 PFU/celulă Reo sau 1 PFU/celulă uv-Reo. (E) Test de degranulare care arată procentul de celule NK hepatice CD107-pozitive. LMC-urile au fost pretratate cu PBS sau 1 PFU/celulă Reo timp de 24 de ore, apoi au fost coincubate cu ținte Huh7 sau Huh7-JFH1 timp de 4 ore. (F) Test de eliberare ^{a 51} Cr folosind LMC-uri pretratate cu PBS sau 1 PFU/celulă Reo timp de 24 de ore, apoi spălate și coincubate cu ținte Huh7 sau Huh7-JFH1 marcate cu ^{51 Cr timp de 4 ore.}Datele sunt ⁵¹Eliberarea de Cr ca procent din maximul potențial. *semnifica p<0,005.

În conformitate cu modelele murine și cu datele noastre anterioare, Reo a stimulat eficient celulele NK derivate din ficat uman ex vivo printr-un mecanism dependent de IFN de tip 1 (figura 3 C) , activând astfel o fracțiune majoră în cadrul populației LMC (a se vedea figura suplimentară online S1a ) . De asemenea, stimularea UV -Reo a LMC a dus, de asemenea, la activarea celulelor NK ( figura 3 D), la fel ca și Reo, ducând, de asemenea, la uciderea îmbunătățită a țintelor Huh7 HCV-pozitive și HCV-negative ( figura 3 E, F). Mai mult, epuizarea celulelor NK din celulele mononucleare din sângele periferic (PBMC) a prevenit uciderea HCC stimulată prin Reo (vezi figura suplimentară online S3a), susținând în continuare celulele NK ca efectori înnăscuți majori în terapia mediată de OV. Astfel, imunitatea anti-HCC indusă de Reo depinde de IFN de tip 1, care, la rândul său, activează celulele NK, permițându-le să recunoască și să omoare ținte tumorale.

Imunitatea indusă de reo exercită efecte anti-HCV puternice in vitro

Având în vedere inducerea puternică a citokinelor inflamatorii la ex vivo la Reo a celulelor hepatice umane ex vivo, am considerat că supernatanții de cultură condiționate rezultați ar trebui să exercite efecte antivirale. Mediile condiționate filtrate (CM) au fost preparate în urma stimulării controlului sau Reo (reovirus-CM (RCM)) a celulelor hepatice mixte, a populațiilor fracționate îmbogățite cu hepatocite și LMC sau a celulelor HCC primare mixte. Toate RCM au exercitat efecte inhibitoare dependente de doză asupra replicării HCV în celulele Huh7 ( figura 4 A). Comparația cu IFN-α, IFN-β sau IL-29 purificat, derivat din leucocite sau cu combinații ale acestora, a evidențiat un model compatibil cu un mecanism mediat în principal de IFN-β (vezi figura suplimentară online S4a); IFN-p a fost semnificativ mai puternic în capacitatea sa de a inhiba replicarea HCV comparativ cu IFN-a sau IL-29, iar combinațiile de citokine nu au inhibat replicarea HCV mai mult decât IFN-p singur. Blocarea IFN a atenuat în mod semnificativ efectul inhibitor al HCV al celulelor hepatice mixte RCM ( figura 4 B), fără efecte citotoxice sau de inhibiție a creșterii măsurabile asupra celulelor Huh7-JFH1 (a se vedea figura suplimentară online S4b ).

Figura 4

Interferonul reostimulat (IFN)-β inhibă puternic HCV in vitro. (A) Testul luciferazei folosind celule Huh7-JFH1 tratate timp de 24 de ore cu o serie de diluții de mediu condiționat (CM) sau reovirus-CM (RCM) derivat din celule hepatice mixte, celule mononucleare hepatice (LMC), hepatocite îmbogățite sau primare mixte celule de carcinom hepatocelular (HCC). Activitatea luciferazei a fost calculată ca procent din valorile mediului de control. (B) Testul luciferazei utilizând celule Huh7-JFH1 tratate timp de 4 ore cu RCM de celule hepatice mixte (diluție 1:16), RCM de celule hepatice mixte și anticorpi de blocare a IFN de tip I sau RCM de celule hepatice mixte și anticorpi izotip. Celulele au fost apoi incubate în mediu de creștere complet fără tratament timp de încă 20 de ore înainte de analiză. (C) ELISA pentru secreția de IFN-p (stânga) și interleukină (IL)-28b/IL-29 (dreapta) dintr-un panou de linii celulare HCC după tratament timp de 72 de ore cu PBS sau 1 PFU/celulă Reo. (D) Testul luciferazei folosind celule Huh7-JFH1 tratate timp de 24 de ore cu o gamă de diluții de CM sau RCM derivate din celule JHH1, HLE sau JHH2. Liniile roșii punctate reprezintă procentul estimat al activității luciferazei în funcție de concentrațiile RCM IFN-β, așa cum este prezis din ecuația liniei de tendință pentru inhibarea repliconului folosind IFN-β purificat (vezi onlinefigura suplimentară 4SA ). (E) Imunofluorescență reprezentativă pentru proteina nestructurală (NS)5A a VHC în celulele Huh7-JFH1 tratate timp de 24 de ore cu CM sau RCM la o diluție de 1:16 derivată din celule JHH1, HLE sau JHH2. (F) Testele luciferazei folosind celule Huh7 infectate cu HCV, tratate timp de 24 de ore cu CM sau RCM derivat din celule JHH1, HLE sau JHH2 la o diluție de 1:16. * semnifică p<0,005.

Expunerea mai multor linii de HCC la Reo a dus la modele variabile de inducție a citokinelor, lipsită de IFN-α, dar cu cantități semnificative de IFN-β și IFN-λ ( figura 4 C). Am definit RCM derivat din celulele stimulate JHH1, HLE și JHH2 ca reținând un conținut ridicat, mediu și, respectiv, scăzut de IFN-β. Efectele antivirale s-au corelat direct cu nivelurile RCM IFN-β, oglindând ecuația liniei de tendință pentru citokină purificată derivată din leucocite (corelația de rang Spearman de 0,929, p = 0,001) (figura 4 D, vezi figura suplimentară online S4a ) . Scăderea concomitentă a expresiei proteinei VHC a fost observată atât prin imunofluorescență ( figura 4 E), cât și prin western blot (vezi figura suplimentară online S4c).), din nou fără efecte citotoxice perceptibile (a se vedea figura suplimentară online S4d ). În mod critic, activitatea antivirală a RCM a fost aplicabilă și la VHC infecțios de lungime completă, din nou cu corelație directă cu nivelurile de IFN-β, măsurate prin reduceri ale activității reporterului NS5A-luciferazei (figura 4 F, vezi figura suplimentară online S4e), ARN genomic al VHC ( vezi figura suplimentară online S5a ) și fluorescența genei reporter NS5A-Green Fluorescent Protein (GFP) (vezi figura suplimentară online S5b, c ).

Imunitatea indusă de reo eradică HCV din cultura celulară și exercită efecte antivirale in vivo

Apoi am examinat dacă expunerea la RCM ar putea vindeca în mod eficient celulele Huh7-JFH-1. Huh7-JFH-1 au fost expuși la RCM sau medii de control timp de 14 zile în absența selecției. Reprovocarea cu G418 a condus la o lipsă de colonii viabile în celulele tratate cu JHH1 RCM sau cu IFN-β, cu activitate luciferazei nedetectabilă în populațiile în vrac ( figura 5 A).

Figura 5

Răspunsurile inflamatorii induse de reo eradicează HCV din cultura celulară și exercită efecte antivirale in vivo. (A) Celulele Huh7-JFH1 au fost tratate timp de 14 zile cu reovirus-CM (RCM) sau mediu condiționat (CM) derivat din celule JHH1 la o diluție de 1:16 sau cu medii de control sau interferon purificat (IFN)-β la 50 pg/mL. Celulele au fost apoi fie cuantificate pentru activitatea luciferazei (dreapta jos), fie însămânțate la densitățile afișate în dreapta sus și cultivate în mediu care conține G418 timp de 4 zile înainte de fixare și colorare în albastru de metilen (stânga). (B) Imagini reprezentative ale sistemului de imagistică in vivo (IVIS) ale activității repliconului luciferazei HCV în xenogrefele subcutanate Huh7-JFH1 la șoarecii SCID. Șoarecii au fost tratați cu injecții Itu de două ori pe săptămână cu PBS sau 1× ¹⁰⁵ PFU uv-Reo, începând imediat după evaluarea inițială. (C) (stânga) Cuantificarea intensității luciferazei IVIS din (B). Graficul arată activitatea luciferazei procentuale în raport cu valorile inițiale din ziua 0 post-tratament. (Dreapta) Volumul tumorii xenogrefe prezentate în (B).

Apoi, am testat dacă imunitatea stimulată cu UV -Reo ar putea exercita un efect antiviral în modelul preclinic SCID Huh7-JFH-1. Xenogrefele subcutanate palpabile Huh7-JFH-1 au fost tratate intratumoral fie cu uv -Reo în doză mică, fie cu PBS pe o perioadă de 9 zile, măsurând creșterea tumorii, precum și luciferaza exprimată de HCV în tumori folosind un sistem de imagistică in vivo (IVIS). Tumorile au fost normalizate și separate în grupuri echivalente de control/tratament pe baza citirilor IVIS din ziua 0. În timp ce citirile luciferazei au scăzut în mod natural la controale din cauza lipsei de G418, tratamentul cu doze mici de UV-Reo a condus la o reducere suplimentară semnificativă a citirilor IVIS . , independent de creșterea tumorii ( figura 5B, C). Mai mult, examinarea histologică a tumorilor Huh7-JFH-1 suplimentare tratate cu o singură injecție de Reo viu a evidențiat reduceri marcate ale expresiei proteinei NS5A a VHC în zone ale tumorii distincte de cele care suferă modificări necrotice sau colorații pentru antigenul Reo, care susțin un trans- efect antiviral mediat de citokine (a se vedea figura suplimentară online S6a ). În consecință, RCM generată din expunerea la UV -Reo a celulelor hepatice de murină mixte a păstrat activitatea anti-HCV în celulele HUH7-JFH1 (a se vedea figura suplimentară online S6b), deși redus semnificativ în comparație cu RCM uman. Prin urmare, în timp ce RCM/IFN murin stimulează parțial receptorii IFN Huh7, modelele de xenogrefă murine subestimează probabil magnitudinea inhibării potențial realizabilă într-un context uman.

Răspunsurile antivirale induse de reo sunt realizabile în alte modele de cancer asociat virusului

Am motivat că o eficacitate antivirală similară poate fi obținută în alte modele de cancer asociat virusului. Am evaluat efectele imunității reostimulate împotriva celulelor PLC/PRF/5 care conțin HBV integrat și celulelor Daudi, care sunt derivate dintr-un limfom Burkitt pozitiv pentru virusul Epstein-Barr (EBV), cunoscut ca fiind rezistent la citotoxicul indus de Reo. efecte. 23

Secreția de antigen de suprafață PLC/PRF/5 HBV (HBsAg) servește ca un marker al expresiei genei virale. 24 RCM derivat atât din celulele LMC primare, cât și din celulele JHH-1 au obținut reduceri ale secreției de HBsAg comparabile cu IFN-β purificat pe o perioadă de 5 zile (figura 6 A, vezi figura suplimentară online S7a), fără efecte observabile de inhibare a creșterii (a se vedea figura suplimentară online S7b ). Apoi am testat capacitatea lui Reo de a suprima reactivarea EBV din celulele Daudi tratate cu tetradecanoilphorbol-13-acetat (TPA)/butirat. Atât tratamentul direct cu Reo al celulelor Daudi, cât și expunerea la RCM derivat din PBMC au condus la o reducere semnificativă a celulelor pozitive pentru antigenul timpuriu (EA) EBV ( figura 6).B, C). Deoarece celulele Daudi nu sunt gazde permisive, acest efect a fost probabil atribuit citokinelor induse de Reo.

Figura 6

Răspunsurile antivirale induse de reo inhibă HBV și virusul Epstein-Barr (EBV) in vitro. (A) ELISA pentru antigenul de suprafață al HBV (HBsAg) secretat din celulele PLC/PRF/5 tratate timp de 5 zile folosind o gamă de diluții de mediu condiționat (CM) sau reovirus-CM (RCM) derivat din celulele mononucleare hepatice (LMC) ( sus) sau celule JHH1 (jos). (B) Imunofluorescență reprezentativă (stânga) pentru antigenul timpuriu EBV (EA) și cuantificarea celulelor Daudi EA-pozitive (dreapta). Celulele au fost tratate folosind PBS timp de 48 de ore, 1 PFU/celulă Reo timp de 48 de ore, inhibitor de histon deacetilază (HDI) timp de 24 de ore sau 1 PFU/celulă Reo timp de 48 de ore, urmat de HDI timp de 24 de ore. (C) (stânga) ELISA pentru interferon (IFN)-α, IFN-p, IFN-y și interleukina (IL)-28b/IL-29 derivat din sângele periferic MC (PBMC) după stimularea cu control Reo sau PBS. (Dreapta) Cuantificarea celulelor Daudi pozitive EA tratate timp de 24 de ore folosind medii de control, PBMC CM, PBMC RCM, toate urmate de un tratament suplimentar de 24 de ore folosind fie PBS, fie HDI. (D) Testul luciferazei folosind celule Huh7-JFH1 tratate timp de 24 de ore cu o gamă de diluții de CM sau 10 PFU/celulă virus oncolitic (OV)-CM derivat din celule hepatice mixte. * semnifică p<0,005.

În cele din urmă, am evaluat dacă Reo a fost unic în capacitatea sa de a genera răspunsuri puternice de citokine anti-HCV din celulele hepatice mixte primare umane. Dintr-un grup de OV cercetate în mod obișnuit, numai CM generată de expunerea la virusul rujeolic tulpina Edmonston (MV-Edm) a recapitulat eficacitatea anti-HCV observată pentru Reo împotriva celulelor Huh7-JFH-1 (figura 6 D ) . Expunerea la concentrații foarte mari de HSV-1 CM a generat doar efecte modeste, în timp ce VV nu a provocat răspunsuri antivirale apreciabile. În plus, corelația dintre efectele antivirale și cele prezise a fi atribuibile inducerii IFN-β (vezi figura suplimentară online S7c) a fost semnificativ (p<0,05) pentru toate OV, cu excepția VV; niveluri scăzute de citokine au fost prezente în VV CM la concentrații similare cu cele eliberate din celulele hepatice tratate simulat, dar niciunul nu a exercitat efecte antivirale asupra celulelor Huh7-JFH-1. Prin urmare, alți factori prezenți în mediile de control pot ameliora efectele IFN de nivel scăzut sau aceste niveluri scăzute pot să nu corespundă cu ecuația predictivă (a se vedea figura suplimentară online S7c ). Luat împreună, Reo pare capabil să inducă răspunsuri antivirale puternice, conduse de IFN-β, care sunt eficiente atât împotriva virusurilor tumorale ARN, cât și împotriva ADN-ului, dar această capacitate nu este omniprezentă printre OV.

Discuţie

Aici, am furnizat primele dovezi că răspunsurile inflamatorii înnăscute induse de OV vizează simultan infecțiile cu virus oncogene, precum și tumorile asociate, folosind în primul rând exemplul de HCV-HCC, dar cu dovezi suplimentare de principiu pentru alte modele. Inducerea IFN de tip I a fost un mecanism cheie, unificator, care determină atât eficacitatea antivirală, cât și antitumorală în sistemele noastre model, iar eficacitatea obținută folosind uv -Reo pledează împotriva unui rol semnificativ pentru țintirea/liza directă a tumorii. În plus, astfel de calități nu erau omniprezente în rândul OV-urilor, făcând selecția agentului pentru aplicații viitoare o considerație importantă.

IFN-ul reo-indus a exercitat atât efecte antivirale directe asupra replicării virusului in vitro, cât și efecte antitumorale in vivo prin activarea celulelor imune înnăscute degranulante, cel mai probabil celule NK. Prin urmare, șoarecii SCID/bej nu au putut să răspundă la terapia UV- Reo, dar acest lucru nu a fost compromis de lipsa imunitații adaptive în contextul SCID. Celulele NK sunt activate indirect de IFN, 25 și probabil contribuie, de asemenea, la efecte antivirale in vivo prin uciderea celulelor tumorale/hepatocitelor infectate. 26

Efectele antivirale și antitumorale mediate de IFN-β în modelele preclinice nu au fost dependente de replicarea Reo, deoarece uv -Reo a generat răspunsuri similare din celulele hepatice umane. Acest lucru amintește de alte studii OV, în care capacitatea de a finaliza un ciclu infecțios complet este nelipsită pentru amorsarea imunității antitumorale mediată de IFN. 20 , 22 , 27 Cu toate acestea, este probabil ca virusul competent de replicare să ofere alte avantaje clinice atunci când se tratează pacienți umani preimuni, cum ar fi potențiala amplificare la situsurile tumorale, 19 și transportul mediat celular 28 pentru a atenua răspunsurile anticorpilor existente; dacă acesta din urmă apare pentru uv-virusul inactivat este necunoscut, iar acest lucru ar fi în prezent imposibil de testat in vivo, având în vedere absența reactivului de grad clinic. Genomii ortoreovirusului uman dsRNA sunt recunoscuți de receptorii de recunoaștere a modelelor, inclusiv RIG-I, 29 , deși nu este clar dacă acest lucru este valabil și pentru uv -Reo. Alți reovirusuri, cum ar fi reovirusul Carp, sunt, de asemenea, cunoscuți că declanșează răspunsuri prin căile receptorilor Toll-like, 30 totuși măsura în care acestea sunt activate de uv- Reo în celulele hepatice umane este necunoscută. Nu putem exclude o contribuție a imunității adaptive la terapie în modelele singeneice 1MEA, dar aceasta ar fi probabil în plus față de răspunsul anti-tumoral înnăscut esențial.

Acest studiu oferă o nouă dimensiune antivirală răspunsurilor înnăscute induse de OV, care, la rândul lor, mediază o mare parte din eficacitatea lor antitumorală. Acest lucru ar putea avea beneficii semnificative pentru cancerele precum HCC, pentru care opțiunile terapeutice sunt limitate și majoritatea apar ca urmare a infecției cu VHB sau VHC. Modelele preclinice disponibile pentru studiul infecției/replicației cu VHC sau într-adevăr cu VHB rămân sever limitate și toate sunt stabilite în medii genetice modificate sau imunocompromis indus. 31 , 32În plus, sistemele murine transgenice care dezvoltă spontan HCC într-un context HCV exprimă în mod necesar proteine virale sub promotori autologi, mai degrabă decât într-un context replicativ, făcându-le inadecvate pentru testarea terapiei mediate de OV. Modelele de xenogrefă Huh7-JFH1 folosite în studiul de față sunt, de asemenea, limitate, dar oferă avantajul de a replica HCV într-un context HCC, unde răspunsurile la semnalizarea imună înnăscută rămân intacte.

Noile AAD care vizează HCV s-au dovedit recent a fi bine tolerate la pacienții cu HCV-HCC. 33 În mod interesant, s-a demonstrat recent că răspunsurile DAA susținute la pacienții cu VHC cronic se corelează cu restabilirea homeostaziei de semnalizare a IFN hepatic de tip I și expresia crescută a unei serii definite de gene stimulate de IFN (ISG) la încetarea tratamentului. 34Tratamentul cu OV combinat cu DAA ar putea îmbunătăți rata la care are loc o astfel de expresie intrahepatică a ISG, îmbunătățind în mod eficient clearance-ul viral la pacienții cu HCC. Cu toate acestea, probabilitatea este ca majoritatea pacienților cu acces la AAD să aibă infecția cu VHC vindecată înainte de apariția HCC, iar dovezile acumulate că VHC este direct oncogen oferă o justificare solidă pentru adoptarea aceleiași practici pentru pacienții cu HCC avansat. . Astfel, Reo ar putea avea o relevanță deosebită în țările care nu sunt capabile să susțină administrarea pe scară largă a AAD, unde atât prevalența HCV, cât și deci și HCC pot fi mai mari. În plus, efectele Reo anti-HCC ar putea susține sau servi ca terapie de linia a doua la standardul de îngrijire Sorafenib sau să formeze combinații cu trans-chimioterapia arterială. Acest lucru poate deveni din ce în ce mai relevant în lumina recentelor studii controversate care susțin că terapia DAA poate să nu fie la fel de eficientă ca IFN în prevenirea reapariției HCV-HCC după intervenția chirurgicală, deși acest lucru așteaptă confirmarea în cohorte mult mai mari de pacienți. 35 , 36

Am demonstrat anterior că imunitatea indusă de Reo este aplicabilă unui număr de scenarii tumorale variate, iar aici arătăm că această activare imună înnăscută prezintă eficacitate antivirală. Cu toate acestea, această trăsătură nu a fost comună tuturor celorlalte OV testate, doar MV-Edm împărtășind capacitatea Reo de a induce puternic expresia IFN de tip I în celulele hepatice umane primare. Poate deloc surprinzător, acest lucru sugerează că OV provenind din diferite familii de virusuri pot varia în principalul mecanism prin care exercită efecte anti-tumorale. Interesant, VV, platforma pentru JX-594 modificat, a fost un activator slab al răspunsurilor înnăscute în țesutul hepatic primar; este posibil ca o gamă considerabilă de antagonişti imuni înnăscuţi codificaţi de VV să contribuie la acest rezultat. 37În mod interesant, terapia cu JX-594 a redus încărcările cu VHB la o cohortă mică de pacienți cu HCC într-un substudiu de probă, dar acest lucru nu a fost atribuit direct stimulării imune hepatice. 38

Potențialul clinic al Reo de a acționa ca terapie antivirală și antitumorală combinată în contextul HCV-HCC este susținut de descoperirea noastră că virusul poate accesa țesutul hepatic normal, precum și tumorile, după livrarea intravenoasă la pacienți. În consecință, ex vivo celulele hepatice primare ex vivo la Reo a dus atât la transcripția ARN viral, cât și la exprimarea proteinei, deși acest lucru nu a culminat cu secreția de particule infecțioase de novo. Aceasta s-a corelat cu inducerea puternică de IFN în celulele hepatice umane normale în absența toxicității evidente; prin urmare, deducem că astfel de răspunsuri limitează, mai degrabă decât previn, replicarea virală în țesutul normal in vivo, în timp ce acest lucru este mai puțin probabil să apară într-un context tumoral, modificând astfel subtil modelul clasic pentru specificitatea tumorii OV. Ca atare, profilul de siguranță favorabil al Reo este potrivit pentru starea avansată de boală hepatică la pacienții cu HCC, majoritatea având ciroză subiacentă. În mod încurajator, biopsiile HCC de la pacienții injectați cu OV în studiile clinice au arătat infiltrație difuză de limfocite,18 care susțin în continuare utilizarea OV ca imunoterapii combinate antivirale și anti-HCC. Pe baza înregistrărilor lor excelente de siguranță, propunem ca desfășurarea unor OV selectați la pacienții cu cancer care adăpostesc infecții subiacente cu virusul oncogen să fie explorată în studiile clinice. Cercetările viitoare ar trebui să combine OV concentrat pe IFN, cum ar fi Reo, cu alți agenți imunostimulatori, inclusiv inhibitori ai punctelor de control imune (CI). Interesant este că aplicarea inversă a CI ca antivirale este explorată pentru infecțiile cronice precum HIV, 39 sugerând că atât OV-uri asemănătoare Reo, cât și CI pot forma terapii combinate antivirale/antitumorale eficiente.

Materiale și metode

Standarde etice

Țesuturile hepatice normale și maligne ex vivo au fost obținute de la pacienții supuși unei intervenții chirurgicale de rutină planificate legate de cancer la Spitalul Universitar St. James, Leeds, Marea Britanie. Consimțământul informat scris a fost obținut în conformitate cu revizuirea și aprobarea etică instituțională locală.

Imunohistochimie

Am folosit un sistem automat Bond Max (Leica Biosystems) așa cum este descris. 40 anticorpi Reovirus σ3 și caspaza 3 scindați au fost diluați la 1:1000. Detectarea HCV NS5A a inclus extragerea antigenului și diluarea anticorpilor de 1:100. CD117 a reprezentat un marker specific celulei NK. 41

Microscopia cu fluorescență

Ser policlonal de oaie anti-NS5A (1:2000, de la Mark Harris, Leeds), 42 clone de șoarece anti-EBV EA-D (0261) (Santa Cruz, 1:100), anticorpi secundari conjugați Alexa Fluor (Invitrogen, 1: 200) sau fluorescența directă GFP a fost fotografiată folosind un sistem de imagistică celulară EVOS FL sau un zoom Incuyte. 4F2 (anticorp reovirus σ3) a fost depus pe DSHB de către Dermody, TS (DSHB Hybridoma Product 4F2 (reovirus)). Celulele Huh7-JFH1 au fost tratate cu CM sau RCM diluat 1:16 timp de 24 de ore. Celulele Daudi au fost tratate cu 20 ng/mL TPA și 3 mM butirat de sodiu.

Prepararea și cuantificarea ARN-ului VHC

ARN total a fost extras din celulele Huh7 care conțin HCV utilizând reactiv TRIzol (Ambion), urmând protocolul producătorului. Transcripția inversă a fost efectuată folosind un kit de sinteză SensiFAST cDNA (Bioline). Cuantificarea transcriptelor HCV a fost efectuată utilizând SYBR Green Real-Time PCR Master Mix (Applied Biosystems) pe un sistem Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System, folosind condiții standard, cu o temperatură de recoacere de 63°C. Secvențele primerului au fost specifice pentru 5′ UTR HCV; Fwd, 5′-agcgtctagccatggcgt-3′ și Rev, 5′-ggtgtactcaccggttccg-3′, rezultând un amplicon de 95 bp.

Generarea de (virus-)CM

CM și virus-CM (RCM) au fost derivate din celule hepatice mixte sau hepatocite îmbogățite tratate cu reovirus oncolitic, MV-Edm, VV sau HSV-1 la 10 PFU/celulă sau PBS, timp de 72 de ore. Liniile de hepatom, LMC și PBMC au fost tratate cu Reo la 1 PFU/celulă timp de 72 de ore. Supernatanții au fost clarificați la 400 x g timp de 5 minute, apoi au fost filtrati de două ori (2 µm (Corning) urmat de OptiScale 25 Capsule (Millipore) pentru a îndepărta virusul rezidual) și stocați la -80°C.

Blocarea IFN de tip I

Celulele Huh7-JFH1 au fost tratate cu 1,25% (v/v) lanțul receptorului IFN-α/β anti-uman sau 1,25% (v/v) izotip IgG2a, sisteme de cercetare și dezvoltare, iar RCM este amestecat cu 0,75% (v/v) antiuman IFN-a și 0,75% (v/v) IFN-p anti-uman, sisteme de cercetare și dezvoltare sau 1,5% (v/v) control ser de oaie inactivat la căldură, Sigma și incubat separat timp de 1 oră înainte de amestecare. După 4 ore, mediul a fost înlocuit fără tratament. Testele MTT/luciferazei au fost efectuate după încă 20 de ore. LMC-urile au fost tratate cu 1 oră înainte de stimularea Reo și incubate timp de 24 de ore înainte de citometria în flux.

Excluderea Trypan Blue

Hepatocitele primare îmbogățite au fost tratate cu PBS sau 10 PFU/celulă Reo timp de 72 de ore, diluate 1:1 cu 0,4% albastru tripan (Sigma) și viabilitatea a fost determinată din trei replici a 200 de celule numărate.

Citometrie în flux

Citometria în flux a fost efectuată folosind un citometru în flux BD LSRII și datele au fost analizate pe software-ul FACSDiva (BD Biosciences). Toți anticorpii au cuprins IgG1 monoclonal de șoarece conjugat fluorescent.

Celula NK hepatică CD69 : LMC-urile spălate au fost marcate cu anticorpi IgG1 PerCP-CD3 și PE-CD69 (toți BD Biosciences) cu izotiocianat de fluoresceină (FITC)-CD56. Martorii au fost marcați cu izotipul IgG1 conjugat cu PE.

Degranulare CD107 a/b : LMC-urile au fost incubate timp de 24 de ore cu 1 PFU/celulă reovirus sau PBS, spălate de două ori în soluție de sare echilibrată Hanks (HBSS) (Sigma) și coincubate cu celule țintă într-un raport de 5:1 timp de 4 ore . La 1 oră, celulele au fost marcate cu anticorpi FITC-CD107a, FITC-CD107b (BD Biosciences), PE-CD56 (AbD Serotec) și PerCP-CD3 (BD Biosciences), cu soluție de Brefeldin A (Biolegend).

ELISA

IFN-a (Mabtech), IFN-p (Verikine Human IFN Beta ELISA Kit (PBL)), IFN-y (BD Biosciences) și IL-28b/IL-29 (R&D Systems) au fost detectate folosind perechi de anticorpi HBsAg potrivite. Celulele PLC/PRF/5 au fost tratate cu RCM timp de 5 zile cu înlocuire zilnică, urmată de un tratament final de 3 ore evaluat pentru HBsAg folosind kitul Monolisa HBsAg ULTRA (Bio-Rad), conform instrucțiunilor producătorului.

Testul luciferazei

Sistemele de testare Luciferaza Firefly (VHC subgenomic) sau Renilla (VHC infecțios) (Promega) au fost evaluate conform protocoalelor producătorului utilizând un luminometru MITHRAS (Berthold Technologie).

⁵¹ Test de eliberare a cromului

⁵¹ Eliberarea de crom a fost măsurată conform descrierii. 43 Celulele efectoare (LMC sau PBMC) au fost preincubate timp de 24 de ore cu 1 PFU/celulă de reovirus sau PBS și distribuite în trei exemplare la raporturile efector/țintă stabilite.

Experimente in vivo

Șoarecii CB17-Prkdc ^SCID (SCID) au fost furnizați de Serviciul Biomedical St. James (SBS). Șoarecii BALB/c și CB17 (Prkdc ^SCID , Lyst ^bg „SCID/Beige”) au fost achiziționați de la Charles River Laboratories International. Șoarecii SCID și SCID/Beige au fost găzduiți în cuști izolatoare, în timp ce șoarecii BALB/c au fost găzduiți în cuști ventilate individual. S-au confirmat linii celulare lipsite de agenți patogeni murini (Charles River Laboratories). Șoarecii au fost examinați în mod regulat pentru semne de deteriorare a sănătății sau pierdere în greutate.

Liniile celulare au fost recoltate, spălate de două ori în PBS și resuspendate în 100 ui PBS pentru injectare subcutanată. Toate tratamentele au fost în 50 uL de fluid vehicul (PBS pentru Reo/ uv -Reo sau pentru Sorafenib prin gavaj oral în vehicul; PBS, 25% polietilen glicol 400 (Sigma), 5% Tween-20, 5% etanol).

Creșterea tumorii a fost măsurată în două dimensiuni folosind șublere și șoarecii au fost sacrificați în mod obișnuit când s-a atins 15 mm în orice dimensiune. Volumele tumorii au fost calculate conform formulei elipsoidale modificate. 44

Pentru IVIS (Caliper Life Sciences), șoarecii SCID au fost anesteziați prin inhalare de izofluoran 1,5% și injectați intraperitoneal cu 80 uL de 150 mg/mL Firefly D-luciferin sare de potasiu (Caliper Life Sciences) dizolvată în PBS. Activitatea luciferazei a fost măsurată după 10 minute. Datele au fost analizate folosind Living Image Software pentru IVIS (Perkin Elmer) prin cuantificarea luminiscenței totale emise într-o zonă circulară corespunzătoare locului de injectare a tumorii și scăzând emisia de fond.

Statistici

Valorile p au fost calculate prin testul t pereche pe două fețe pentru puncte sau grupuri unice, iar semnificația statistică este notată cu *p<0,05. Celulele sau supernatanții au fost testați în trei exemplare atunci când este posibil și datele reprezintă media și SEM între experimentele repetate sau probe de la diferiți donatori.

Mulțumiri

Recunoaștem sprijinul Consiliului European de Cercetare, Centrului de Medicină Experimentală a Cancerului Leeds și Institutul Național de Cercetare în Sănătate (NIHR) Leeds Clinical Research Facility. KH recunoaște sprijinul din partea Institutului de Cercetare a Cancerului (ICR)/RM NIHR Biomedical Research Facility. De asemenea, suntem recunoscători profesorului Graham Cook (Universitatea din Leeds) și Dr. Andrew Macdonald (Universitatea din Leeds) pentru discuțiile utile. De asemenea, mulțumim lui Teklu Egnuni, Martyna Michniewicz, Jan Bilton și Debra Evans de la serviciile biomedicale St James pentru asistență cu modelele preclinice.

Referințe

↵
1. Boyle P ,
2. Levin B
. Raportul mondial asupra cancerului 2008 . Lyon : Agenţia Internaţională de Cercetare a Cancerului , 2008 .Google Academic
↵
1. Franssen B ,
2. Alshebeeb K ,
3. Tabrizian P , şi colab
. Diferențele de rezultate chirurgicale între carcinomul hepatocelular legat de hepatita B și hepatita C: o analiză retrospectivă a unui singur centru nord-american . Ann Surg 2014 ; 260 : 650 – 6 ; discuție 656–8 . doi:10.1097/SLA.0000000000000917Google Academic
↵
1. Utsunomiya T ,
2. Shimada M. _
3. Kudo M , şi colab.
. O comparație a rezultatelor chirurgicale la pacienții cu carcinom hepatocelular HBV-pozitiv, HCV-pozitiv și non-B non-C: un studiu la nivel național pe 11.950 de pacienți . Ann Surg 2015 ; 261 : 513 – 20 . doi:10.1097/SLA.0000000000000821Google Academic
↵
1. Hsu CS ,
2. Chao YC ,
3. Lin HH , şi colab
. Revizuire sistematică: impactul terapiei pe bază de interferon asupra carcinomului hepatocelular legat de VHC . Sci Rep 2015 ; 5 : 9954 . doi:10.1038/srep09954Google Academic
↵
1. Hagan H ,
2. Campbell J ,
3. Thiede H , şi colab
. Starea anticorpilor împotriva virusului hepatitei C auto-raportate și comportamentul de risc la tinerii injectați . Public Health Rep 2016 ; 121 : 710 – 19 .Google Academic
↵
1. Viswanatha DS ,
2. Dogan A
. Virusul hepatitei C și limfomul . J Clin Pathol 2007 ; 60 : 1378 – 83 . doi:10.1136/jcp.2007.051870Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. diavolul A ,
2. Weinmann A ,
3. Centner C , şi colab
. Carcinom hepatocelular la pacienții cu hepatită autoimună . World J Gastroenterol 2009 ; 15 : 578 – 82 .CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Wang AG ,
2. Lee DS ,
3. Moon HB și colab.
. Proteina nestructurală 5A a virusului hepatitei C induce o serie de patologii hepatice la șoarecii transgenici . J Pathol 2009 ; 219 : 253 – 62 . doi:10.1002/path.2592CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Bandiera S. _
2. Pfeffer S ,
3. Baumert TF , şi colab
. miR-122 – un factor cheie și țintă terapeutică în boala hepatică . J Hepatol 2015 ; 62 : 448 – 57 . doi:10.1016/j.jhep.2014.10.004CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Llovet JM ,
2. Ricci S ,
3. Mazzaferro V , şi colab
. Sorafenib în carcinomul hepatocelular avansat . N Engl J Med 2008 ; 359 : 378 – 90 . doi:10.1056/NEJMoa0708857CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵
1. Cheng AL ,
2. Kang YK ,
3. Chen Z , şi colab
. Eficacitatea și siguranța sorafenibului la pacienții din regiunea Asia-Pacific cu carcinom hepatocelular avansat: un studiu de fază III randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo . Lancet Oncol 2009 ; 10 : 25 – 34 . doi:10.1016/S1470-2045(08)70285-7CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵FRUMOS . Sorafenib pentru tratamentul carcinomului hepatocelular avansat | Îndrumări și orientări | GROZAV. Publicat online primul: 2010. http://www.nice.org.uk/guidance/TA189 (accesat la 6 iulie 2014 ).Google Academic
↵
1. Lao XM ,
2. Luo G ,
3. Ye LT , și colab.
. Efectele terapiei antivirale asupra reactivării virusului hepatitei B și asupra funcției hepatice după rezecție sau chemoembolizare pentru carcinomul hepatocelular . Liver Int 2013 ; 33 : 595 – 604 . doi:10.1111/liv.12112Google Academic
↵
1. Mahale P_ _
2. Kontoyiannis DP ,
3. Chemaly RF , şi colab
. Acute exacerbation and reactivation of chronic hepatitis C virus infection in cancer patients. J Hepatol 2012;57:1177–85. doi:10.1016/j.jhep.2012.07.031CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Scholar
↵
1. Melcher A,
2. Parato K,
3. Rooney CM, et al
. Thunder and lightning: immunotherapy and oncolytic viruses collide. Mol Ther 2011;19:1008–16. doi:10.1038/mt.2011.65CrossRefPubMedGoogle Scholar
↵
1. Andtbacka RHI,
2. Kaufman HL,
3. Collichio F , şi colab
. Talimogene laherparepvec îmbunătățește rata de răspuns durabil la pacienții cu melanom avansat . J Clin Oncol 2015 ; 33 : 2780 – 8 . doi:10.1200/JCO.2014.58.3377Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Jebar A.H. _
2. Errington-Mais F ,
3. Vile RG , şi colab
. Progrese în terapia clinică pe bază de virus oncolitic pentru carcinomul hepatocelular . J Gen Virol 2015 ; 96 (Pt 7 ): 1533 – 50 . doi:10.1099/vir.0.000098Google Academic
↵
1. Hei J ,
2. Reid T ,
3. Ruo L și colab
. Studiu clinic randomizat de determinare a dozei de vaccinia imunoterapeutică oncolitică JX-594 în cancerul hepatic . Nat Med 2013 ; 19 : 329 – 36 . doi:10.1038/nm.3089CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Air UK ,
2. Roulstone V ,
3. Scott KJ , şi colab
. Transportul celular, livrarea și replicarea selectivă a unui virus oncolitic în tumoare la pacienți . Sci Transl Med 2012 ; 4 : 138ra77 . doi:10.1126/scitranslmed.3003578Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Prestwich RJ ,
2. Ilett EJ ,
3. Errington F , şi colab
. Activitatea antitumorală mediată imun a reovirusului este necesară pentru terapie și este independentă de oncoliza și replicarea virală directă . Clin Cancer Res 2009 ; 15 : 4374 – 81 . doi:10.1158/1078-0432.CCR-09-0334Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Prestwich RJ ,
2. Errington F ,
3. Steele LP , şi colab
. Interacțiunile reciproce dintre celulele dendritice umane și celulele ucigașe naturale induc activitate antitumorală în urma infecției celulelor tumorale cu reovirusul oncolitic . J Immunol 2009 ; 183 : 4312 – 21 . doi:10.4049/jimmunol.0901074Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Zhang J ,
2. Tai LH _
3. Ilkow CS , şi colab
. Virusul Maraba MG1 îmbunătățește funcția celulelor ucigașe naturale prin intermediul celulelor dendritice convenționale pentru a reduce boala metastatică postoperatorie . Mol Ther 2014 ; 22 : 1320 – 32 . doi:10.1038/mt.2014.60CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Alain T_ _
2. Hirasawa K ,
3. Pon KJ , şi colab
. Terapia cu reovirus a tumorilor maligne limfoide . Blood 2002 ; 100 : 4146 – 53 . doi:10.1182/blood-2002-02-0503Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Yamashita Y ,
2. Koike K ,
3. Takaoki M , şi colab
. Suprimarea producției de HBsAg în linia celulară de hepatom uman PLC/PRF/5 de către interferoni . Microbiol Immunol 1988 ; 32 : 1119 – 26 . doi:10.1111/j.1348-0421.1988.tb01476.xPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵
1. Tu Z ,
2. Bozorgzadeh A. _
3. Pierce RH , şi colab
. Discuție încrucișată dependentă de TLR între celulele Kupffer umane și celulele NK . J Exp Med 2008 ; 205 : 233 – 44 . doi:10.1084/jem.20072195Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Creme B ,
2. boabe C ,
3. Kebschull M , şi colab.
. Expresia ridicată a natural killer p46 definește un subset de celule natural killer care este potențial implicat în controlul replicării virusului hepatitei C și în modularea fibrozei hepatice . Hepatologie 2012 ; 56 : 1201 – 13 . doi:10.1002/hep.25804CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵
1. Wongthida P ,
2. Diaz RM ,
3. Galivo F și colab
. Viroterapia oncolitică VSV în modelul B16 depinde de semnalizarea MyD88 intactă . Mol Ther 2011 ; 19 : 150 – 8 . doi:10.1038/mt.2010.225CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Illett E ,
2. Kottke T ,
3. Donnelly O , şi colab
. Condiționarea cu citokine îmbunătățește livrarea sistemică și terapia unui virus oncolitic . Mol Ther 2014 ; 22 : 1851 – 63 . doi:10.1038/mt.2014.118CrossRefGoogle Academic
↵
1. Loo YM ,
2. Fornek J ,
3. Crochet N , şi colab
. Semnalizarea distinctă RIG-I și MDA5 de către virusurile ARN în imunitatea înnăscută . J Virol 2008 ; 82 : 335 – 45 . doi:10.1128/JVI.01080-07Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Rao Y. _
2. Su J
. Perspective asupra imunității antivirale împotriva reovirusului crapului ierb (Ctenopharyngodon idella) (GCRV) la crapul ierb . J Immunol Res 2015 ; 2015 : 670437 . doi:10.1155/2015/670437CrossRefGoogle Academic
↵
1. Dorner M ,
2. Horwitz JA ,
3. Robbins JB , şi colab.
. Un model de șoarece umanizat genetic pentru infecția cu virusul hepatitei C. Natura 2011 ; 474 : 208 – 11 . doi:10.1038/nature10168CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵
1. Mercer DF ,
2. Schiller DE ,
3. Elliott JF , şi colab
. Replicarea virusului hepatitei C la șoareci cu ficat uman himeric . Nat Med 2001 ; 7 : 927 – 33 . doi:10.1038/90968CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵
1. Curry MP ,
2. Forns X ,
3. Chung RT , şi colab
. Sofosbuvir și ribavirina previn reapariția infecției cu VHC după transplantul de ficat: un studiu deschis . Gastroenterologie 2015 ; 148 : 100 – 7.e1 . doi:10.1053/j.gastro.2014.09.023CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Meissner EG ,
2. Wu D ,
3. Osinus A , şi colab
. IFN-uri intrahepatice endogene și asocierea cu rezultatul tratamentului VHC fără IFN . J Clin Invest 2014 ; 124 : 3352 – 63 . doi:10.1172/JCI75938CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵
1. Reig M ,
2. Marino Z ,
3. Perelló C și colab
. Rată ridicată neașteptată de recidivă tumorală precoce la pacienții cu HCC legat de VHC, supuși terapiei fără interferon . J Hepatol 2016 ; 65 : 719 – 26 . doi:10.1016/j.jhep.2016.04.008Google Academic
↵
1. Conti F ,
2. Buonfiglioli F ,
3. Scuteri A, et al
. Apariția precoce și reapariția carcinomului hepatocelular în ciroza legată de VHC tratată cu antivirale cu acțiune directă . J Hepatol 2016 ; 65 : 727 – 33 . doi:10.1016/j.jhep.2016.06.015CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Smith GL ,
2. CTO Benfield ,
3. Maluquer de Motes C , et al
. Evaziunea imună a virusului Vaccinia: mecanisme, virulență și imunogenitate . J Gen Virol 2013 ; 94 : 2367 – 92 . doi:10.1099/vir.0.055921-0CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic
↵
1. Liu TC ,
2. Hwang T ,
3. Park BH , și colab
. Poxvirusul oncolitic țintit JX-594 demonstrează activități antitumorale, antivasculare și anti-HBV la pacienții cu carcinom hepatocelular . Mol Ther 2008 ; 16 : 1637 – 42 . doi:10.1038/mt.2008.143CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. om de afaceri DE ,
2. Walker BD
. Căile de cosemnalizare inhibitoare PD-1 și CTLA-4 în infecția cu HIV și potențialul de intervenție terapeutică . J Immunol 2009 ; 182 : 5891 – 7 . doi:10.4049/jimmunol.0803771Abstract/FREE Full TextGoogle Scholar
↵
1. Nuovo GJ,
2. Garofalo M,
3. Valeri N, et al
. Reovirus-associated reduction of microRNA-let-7d is related to the increased apoptotic death of cancer cells in clinical samples. Mod Pathol 2012;25:1333–44. doi:10.1038/modpathol.2012.95CrossRefPubMedGoogle Scholar
↵
1. Hughes T,
2. Becknell B,
3. McClory S, et al
. Celulele ucigașe naturale umane imature din stadiul 3 găsite în țesutul limfoid secundar exprimă constitutiv și selectiv citokina TH17 interleukina-22 . Sânge 2009 ; 113 : 4008 – 10 . doi:10.1182/blood-2008-12-192443Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Macdonald A ,
2. Crowder K ,
3. Strada A , și colab
. Proteina nestructurală NS5A a virusului hepatitei C inhibă activarea funcției proteinei-1 prin perturbarea semnalizării căii ras-ERK . J Biol Chem 2003 ; 278 : 17775 – 84 . doi:10.1074/jbc.M210900200Rezumat / Text complet GRATUITGoogle Academic
↵
1. Errington F ,
2. Jones , J.
3. Merrick A , şi colab
. Fuziunea celulelor tumorale mediată de glicoproteină membranară fuzogenă activează celulele dendritice umane pentru producția îmbunătățită de IL-12 și amorsarea celulelor T. Gene Ther 2006 ; 13 : 138 – 49 . doi:10.1038/sj.gt.3302609CrossRefPubMedGoogle Academic
↵
1. Tomayko MM ,
2. Reynolds CP
. Determinarea dimensiunii tumorii subcutanate la șoarecii atimici (nuzi) . Cancer Chemother Pharmacol 1989 ; 24 : 148 – 54 . doi:10.1007/BF00300234CrossRefPubMedWeb of ScienceGoogle Academic

Note de subsol

AM și SG au contribuit în mod egal.
Contributori Experimente concepute și planificate: SG, AM, FE-M și AS; experimente efectuate: AS, MJB, KS, GN, AB, EA, RAA, RD și AP-C; au furnizat reactivi cheie: GT, SN și MC; manuscris revizuit: RV, KH, PS și FE-M; a scris manuscrisul: SG, AM și AS.
Finanțarea AS a fost beneficiarul unei burse clinice Cancer Research UK acordată de Cancer Research UK Leeds Center către SG/AM.
Interese concurente MC este angajat al Oncolytics Biotech, Calgary, Canada. SG și AM au primit granturi de cercetare de la Oncolytics.
Aprobare etică Comitetul de etică din North East Leeds, Spitalul Universitar St. James, Leeds, Marea Britanie. Modelele animale in vivo au fost aprobate de comitetul local de evaluare etică al Universității din Leeds.
Proveniență și evaluare inter pares Nu este comisionat; revizuit extern.

Coriolus versicolor (Yunzhi) Utilizare ca terapie la pacienții cu carcinom hepatocelular avansat cu funcție hepatică deficitară sau care nu sunt apți pentru terapia standard

oct.3

Abstract

Context: Majoritatea pacienților cu carcinom hepatocelular (HCC) sunt inoperabili și rezultatele chimioterapiei convenționale sunt sumbre. Mulți ajung să nu aibă opțiuni de tratament și recurg la medicina alternativă. Autorii raportează utilizarea Coriolus versicolor (CV) la pacienții cu HCC avansat cu funcție hepatică slabă sau care nu erau apți pentru a primi terapia standard.

Metode: Cincisprezece cazuri eligibile au fost randomizate 2:1 fie la CV, fie la placebo. Obiectivul principal a fost timpul median până la progresie (TTP) între ambele brațe. Obiectivele secundare includ evaluarea ratelor de răspuns, toxicitatea, calitatea vieții (QOL), supraviețuirea fără progresie (PFS) și supraviețuirea globală (OS). Au fost efectuate studii corelative suplimentare privind efectul CV asupra sistemului imunitar.

Rezultate: Durata mediană a tratamentului a fost de 1,5 cicluri și, respectiv, 3 cicluri la brațul placebo și, respectiv, CV. Mediana TTP a fost de 2,5 (1,4-5,3) luni, comparativ cu 4,2 (0,4-4,2) luni în brațul CV și, respectiv, placebo, hazard ratio (HR) 0,70 (0,16-3,05 p = 0,634). Mediana PFS a fost de 2,5 (1,4-5,3) luni în CV și 1,1 (0,4-4,2) luni în brațul placebo, HR 0,42 (0,13-1,34, p = 0,144). OS mediană a fost de 6,5 (3,3-24,1) și, respectiv, 2,2 (0,8-23,3) luni, HR 0,35 (0,10-1,25, p = 0,105). Scorurile de funcționare socială și emoțională au fost mai mari în grupul CV comparativ cu grupul placebo la tratament. Subiecții CV au avut mai puține simptome de pierdere a poftei de mâncare și de durere în comparație cu subiecții placebo în timpul tratamentului.

Concluzii: Nu a existat nicio diferență în TTP cu utilizarea CV comparativ cu placebo. Subiecții CV au avut în general o calitate mai bună la tratament, comparativ cu subiecții placebo. Utilitatea acestui supliment la pacienții al căror obiectiv principal de tratament este paliația ar trebui explorată în continuare.

Studiu controlat randomizatJ Complement Altern Med.2017 Aug;23(8):648-652.

doi: 10.1089/acm.2016.0136. Epub 2017 4 aprilie.

Wen Yee Chay¹, Chee Kian Tham¹, Han Chong Toh¹, Hwee Yong Lim², Chee Kiat Tan³, Cindy Lim⁴, Cine-Whong Wang¹, Su-Pin Choo¹Afilieri extinde

PMID: 28375640
DOI: 10.1089/acm.2016.0136

Studiu pilot dublu-orb randomizat de fază I a resveratrolului micronizat (SRT501) la pacienții cu metastaze hepatice – siguranță, farmacocinetică și farmacodinamică

sept.1

Cancer Prev Res (Phila). Manuscris de autor; disponibil în PMC 2012 1 mar.

Publicat în forma finală editată ca:Cancer Prev Res (Phila). Septembrie 2011; 4 (9): 1419-1425.

Publicat online 2011 16 iun.

Doi: 10.1158 / 1940-6207.CAPR-11-0148 PMCID: PMC3173869 EMSID: UKMS35696 PMID: 21680702

Studiu pilot dublu-orb randomizat de fază I a resveratrolului micronizat (SRT501) la pacienții cu metastaze hepatice – siguranță, farmacocinetică și farmacodinamică

LM Howells , ^1, *DP Berry , ¹P.J. Elliott , ²E. W. Jacobson , ²E. Hoffmann , ²B. Hegarty , K. Brown , ¹W. P. Steward , ¹ și AJ Gescher ^1,

^*Informații despre autor

Informații privind drepturile de autor și licență

Ultima versiune editată a editorului a acestui articol este disponibilă gratuit la Cancer Prev Res (Phila

Abstract

Resveratrolul fitochimic a fost supus unei ample investigații preclinice pentru proprietățile sale chimiopreventive. Disponibilitatea sistemică scăzută a compusului părinte datorită metabolismului rapid și extins poate confunda utilitatea acestuia ca agent potențial pentru a preveni malignitățile în organele aflate la distanță de locul absorbției. Micronizarea permite absorbția crescută a medicamentului, crescând astfel disponibilitatea. Aici descriem un studiu pilot al SRT501, resveratrol micronizat, administrat zilnic la 5,0 g timp de 14 zile, pacienților cu cancer colorectal și metastaze hepatice programate să facă hepatectomie. Scopul studiului a fost de a evalua siguranța, farmacocinetica și farmacodinamica formulării. SRT501 sa dovedit a fi bine tolerat. Nivelurile medii de resveratrol plasmatic după o singură doză de administrare SRT501 au fost 1942 ± 1422 ng / ml,depășind cele publicate pentru doze echivalente de resveratrol non-micronizat de 3,6 ori. Resveratrolul a fost detectabil în țesutul hepatic după administrarea SRT501 (până la 2287 ng / g). Caspaza-3 scindată, un marker al apoptozei, a fost semnificativ crescută cu 39% în țesutul hepatic malign după tratamentul cu SRT501, comparativ cu țesutul de la pacienții tratați cu placebo. SRT501 justifică explorarea clinică suplimentară pentru a evalua utilitatea sa clinică potențială.SRT501 garantează explorarea clinică suplimentară pentru a evalua utilitatea sa clinică potențială.SRT501 garantează explorarea clinică suplimentară pentru a evalua utilitatea sa clinică potențială.

Introducere

Resveratrolul (3,5,4′-trihidroxi- trans -stilben ) este o fitoalexină produsă de anumite plante atunci când este afectată de agenți patogeni precum bacteriile sau ciupercile. Apare în pielea strugurilor roșii și în arahide și a fost investigată pe larg în ceea ce privește proprietățile sale chimiopreventive. Se consideră că resveratrolul mediază, cel puțin parțial, acțiunile presupuse de prevenire a bolilor vinului roșu și este, de asemenea, considerat a preveni bolile cardiovasculare și morbiditatea asociate cu obezitatea și bătrânețea [ 1 – 3 ]. Numeroasele proprietăți farmacologice ale resveratrolului și sugestia că acesta poate fi un mimetic cu restricție de calorii care poate prelungi viața, a generat un interes considerabil de către presa laică. O abundență de date obținute în celulein vitro și în modelele preclinice a evidențiat o mulțime de mecanisme potențiale prin care resveratrolul poate preveni afecțiunile maligne, predominant cele germane până la supraviețuirea și proliferarea celulară [ 4 ], inclusiv apoptoza dependentă de p53 [ 5 ] și oprirea ciclului celular [ 6 ]. Cu toate acestea, datele clinice solide rămân rare. Recente studii pilot clinice de resveratrol, in care a fost administrat în doze unice sau repetate de până la 5,0 g pe zi, axat pe siguranța sa, farmacocinetica (PK) proprietăți și analiza biomarkeri potential de eficacitate [ 4 , 7 – 13 ]. Profilurile PK ale resveratrolului la voluntari sănătoși au dezvăluit un metabolism rapid și extins la resveratrol-4′- O-glucuronid, resveratrol-3′- O -glucuronid și resveratrol-3- O- sulfat după administrarea orală a unei singure [ 8 ] sau a unor doze zilnice repetate [ 9 ] de 0,5 până la 5,0 g. În ciuda detectării concentrațiilor relativ mari de resveratrol în țesutul colorectal al pacienților, disponibilitatea sa sistemică este sever redusă prin metabolismul său avid. În consecință, deși resveratrolul a demonstrat activitate împotriva unei largi varietăți de tumori maligne in vitro (inclusiv intestin, sân, vezică, prostată, ficat și tiroidă) și in vivo (revizuite în [ 3 , 14 – 16]), este probabil ca o biodisponibilitate slabă să limiteze eficacitatea la locurile îndepărtate de tractul GI. În ciuda acestui fapt, există dovezi care sugerează că resveratrolul produce efecte chimiopreventive și terapeutice în modelele preclinice de cancer hepatic (revizuite în [ 17 ]), făcând aluzie la potențialul de eficacitate împotriva hepatocarcinogenezei și a tumorilor maligne care metastazează preferențial ficatul.

Datorită solubilității apoase slabe prezentate de resveratrol, absorbția digestivă este foarte influențată de rata de dizolvare a medicamentului. Într-un efort de a crește absorbția în tractul gastro-intestinal și, astfel, compusul părinte disponibil sistemic, a existat un interes considerabil în manipularea farmaceutică a resveratrolului. Scăderea dimensiunii particulelor acestor substanțe chimice poate îmbunătăți rata de dizolvare a acestora și, astfel, absorbția lor [ 18]. Prin urmare, scopul acestui studiu clinic a fost să investigheze dacă consumul de SRT501, o formulare micronizată de resveratrol proiectată de Sirtris, o companie GSK (Cambridge, MA, SUA) este sigur și generează niveluri măsurabile și farmacologic active ale agentului părinte în circulație și în ficat. În prezent, nu există date clinice disponibile care să determine concentrațiile de resveratrol în țesuturile umane, altele decât colonul. În acest scop, pacienții cu cancer colorectal destinat să fie supuși rezecției metastazelor hepatice au fost recrutați într-un studiu pilot. Au ingerat fie placebo, fie SRT501 în 14 zile consecutive înainte de operație, iar nivelurile de resveratrol au fost cuantificate în sânge și în țesutul de rezecție hepatică.Efectele farmacodinamice potențiale ale SRT501 au fost investigate prin compararea expresiei / activării biomarkerilor proteici candidați asociați intrinsec cu supraviețuirea celulară și apoptoza în circulația și țesutul pacienților care au primit medicamentul și a celor care au fost tratați cu placebo.Mergi la:

Metode

Formulare de resveratrol

Resveratrolul microparticular cu dimensiunea particulelor <5 μm (SRT501) a fost fabricat de Sirtris Pharmaceuticals, o companie GSK. Se consideră că reducerea dimensiunii particulelor îmbunătățește biodisponibilitatea resveratrolului, în principal datorită creșterii suprafeței și a proprietăților îmbunătățite ale suspensiei. Un plic conținând SRT501 (5,0 g) a fost amestecat cu o alicotă (4 ml) de soluție de docusat de sodiu (docusat de sodiu, acid citric, colorant, glicerină, aromatizant, citrat de sodiu, zaharină sodică și sorbitol) formată până la 20 ml în apă distilată formând o suspensie uniformă și ingerată de pacienți.

Pacienți

Studiul pilot, proiectat și sponsorizat de Sirtris, a fost realizat la Spitalele Universitare din Leicester (UHL) NHS-Trust (UHL 10507, registru de probă: NCT00920803). Acesta a fost revizuit și aprobat de Leicestershire, Northamptonshire și Rutland Research Ethics Committee (UK) și desfășurat în conformitate cu liniile directoare aplicabile privind bunele practici clinice. Nouă subiecți (cu vârsta de 18 ani sau peste) care prezentau cancer colorectal confirmat în stadiul IV și metastaze hepatice, care nu primiseră intervenție terapeutică pentru cancerul lor în decurs de 6 săptămâni de la începerea studiului și aveau o speranță de viață> 3 luni, au fost recrutați în studiu. Toți pacienții urmau să fie supuși rezecției metastazelor hepatice. Participanții trebuiau să fie capabili fizic să respecte protocolul și aveau un ECG normal și nu aveau antecedente de HIV sau hepatită B / C.

Pacientul a fost rugat să se abțină de la cantități mari de alimente și băuturi care conțin resveratrol, cum ar fi arahide, struguri, dud și alcool, în 48 de ore de la zilele programate de colectare a PK și în ziua rezecției chirurgicale.

Design de studiu

Studiul a fost un studiu clinic de fază I, randomizat (2: 1), dublu-orb. Șase subiecți au fost randomizați pentru a primi SRT501 și trei placebo (dioxid de titan). Au fost furnizate intervenții în truse clinice sub formă de pulbere și reconstituite așa cum s-a descris mai sus. Pacienții au ingerat formularea preoperatorie zilnic timp de minimum 10 și maximum 21 de zile, în funcție de programarea chirurgicală. Probele de plasmă pentru evaluarea PK au fost obținute în zilele 1 și 2 și în ziua rezecției chirurgicale. Plasma pentru evaluarea PD a fost obținută pre-doză, imediat înainte și în timpul intervenției chirurgicale. Țesutul hepatic adiacent bolnav și normal a fost rezecat la 6-7 ore după ultima doză. Participanții au completat un jurnal de evenimente adverse zilnic (AE) care a fost evaluat folosind criteriile de toxicitate comună NCI v3. Dintre cei nouă pacienți recrutați, șapte au finalizat studiul,unul a murit din cauza complicațiilor postoperatorii și unul a încetat administrarea devreme din cauza EA (diaree). Probele PK au fost obținute de la toți cei nouă subiecți. Obiectivele principale ale studiului au fost determinarea siguranței și tolerabilității SRT501 și farmacocineticii resveratrolului. Obiectivele secundare au fost explorarea potențialelor modificări farmacodinamice provocate de SRT501 în sânge și țesuturi.

Colectie de mostre

Probele de sânge au fost colectate înainte de administrare în ziua 1, pentru PK la 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 24 de ore după prima doză și înainte și în timpul intervenției chirurgicale. Plasma (tuburile de heparină de sodiu) și serul au fost obținute și depozitate la -80 ° C până la analiză. Țesuturile au fost recoltate din materialul rezecat, o parte din care a fost fixată în formalină și încorporată în parafină și o parte a fost înghețată imediat și depozitată la -80 ° C până la analiză.

Pregătirea și analiza probelor

Cuantificarea resveratrolului în plasmă și țesuturi a fost efectuată de Laboratoarele Charles River, Montreal, Canada. Metodologia a fost conformă cu reglementările de bună practică de laborator ale Administrației SUA pentru Alimente și Medicamente (21CFR partea 58), utilizând o metodă internă validată de cromatografie lichidă validată în tandem-spectrometrie de masă (LC-MS / MS). Pe scurt, 50 μL probe de plasmă au fost extrase folosind metanol acidificat (acid ascorbic: metanol: acid formic, 50: 50: 0,025) (5 μL) conținând resveratrol – ¹³ C ₆ca standard intern. Probele au fost apoi centrifugate (14000 rpm / 0 ° C / 10 min) și supernatantul a fost alicotat într-o placă de colectare cu 96 de godeuri pentru analiză. Separarea, cuantificarea și caracterizarea resveratrolului au fost realizate folosind un sistem Symbiosis Pharma (metoda XLC) împreună cu un spectrometru de masă MDS Sciex API 3000. O coloană Waters YMC ODS-AQ (3 μm, 4,6 × 50 mm) a fost legată de un filtru de precolumnă Peek 0,5 μm. Eluantul a constat dintr-o fază mobilă binară (A; apă: acid formic, 100: 0,025 (v / v), B; metanol: acetonitril: acid formic, 20: 80: 0,025 (v / v / v)). Gradientul de eluare a fost A85% B15% până la A5% B95% timp de 4 minute. Resveratrolul a fost caracterizat prin spectrometrie de masă cu electrospray (modul de ionizare negativă) cu tensiune de pulverizare ionică -4500 V, potențial de declustrare -25 V, potențial de focalizare -30 V, potențial de intrare -12 V,energie de coliziune −27 V, potențial de ieșire de coliziune 40 V și temperatură 550 ° C. Limita inferioară de cuantificare (LLOQ) a fost de 5 ng / ml și limita superioară de cuantificare (ULOQ) 1000 ng / ml.

Probele de țesut au fost tocate pe gheață și s-au folosit ~ 100 mg pentru analiză. Metanol acidificat (acid ascorbic: metanol: acid formic, 50: 50: 0,025) (5 μL) conținând resveratrol – ¹³ C ₆ca un standard intern, s-au adăugat la fiecare probă matricele de 100 μL matrice verzi și 500 μL etanol, amestecul a fost rotit și lăsat pe gheață (10 min). Probele au fost omogenizate (Fastprep, 2,4-5,5 m / s, 20 sec), lăsate pe gheață (10 min) și omogenizarea repetată înainte de centrifugare (14000 rpm / 0 ° C / 10 min). O alicotă (100 μL) de supernatant a fost adăugată la 100 μL apă: acid formic (100: 0,25). Separarea, cuantificarea și caracterizarea resveratrolului au fost realizate folosind un cromatograf Agilent 1100 cu un spectrometru de masă MDX Sciex API 5000. O coloană Waters YMC ODS-AQ (3 μm, 4,6 × 50 mm) a fost legată de un filtru de precolumnă Peek de 0,5 μm. Eluantul a fost ca pentru analiza plasmatică; eluarea în gradient a fost de peste 6,5 minute de la A70% B30% la A0% B100%, apoi înapoi la A70% B30%. Condițiile MS au fost cele de mai sus, cu excepția: tensiunea de pulverizare ionică -4500 V,potențial de decliniere −120 V, potențial de intrare −10 V, energie de coliziune −27 V, potențial de ieșire de coliziune −10 V și temperatură 700 ° C. Pentru probele de țesut, LLOQ a fost stabilit la 2,5 ng / g și ULOQ la 500 ng / g. Colectarea datelor a fost efectuată utilizând versiunea Analyst 1.4.2. (MDX Sciex).

Analiza proliferării celulare și a apoptozei

Țesuturile fixate pe formalină au fost analizate pentru markeri de proliferare și apoptoză folosind sistemul NovoLink Polymer Detection (Novocastra Laboratories, Newcastle-upon-Tyne, Marea Britanie) împreună cu anti-Ki-67 (Dako, Cambridgeshire, Marea Britanie) și anti-clivat- anticorpii caspase-3 (Cell Signaling Technology, MA, SUA). Pe scurt, secțiunile încorporate în parafină au fost decerate la 65 ° C și rehidratate printr-o serie de spălări cu alcool. Recuperarea antigenului a fost realizată prin microunde fie în Tris-EDTA (pH 9,0) pentru Ki-67, fie tampon citrat (pH 6,0) pentru caspaza-3 scindată. Secțiunile au fost vizualizate la mărire x40 folosind un microscop cu lumină inversată Leica DC300 și un sistem de cameră. Imaginile au fost procesate utilizând Adobe Photoshop v7.0.1. Celulele de colorare pozitive au fost marcate pe 10 câmpuri vizuale aleatorii pe fiecare lamă și au fost exprimate ca procente de celule colorate pozitiv.Toate analizele au fost efectuate orbite.

Analiza PGE2, VEGF și IGF-1

Testele ELISA au fost întreprinse pentru a evalua nivelurile de VEGF (Invitrogen, Paisley, Marea Britanie) în ser, nivelurile PGE2 (Cayman Chemicals, Cambridge Marea Britanie) în plasmă și nivelurile IGF-1 (R&D Systems, Oxford, Marea Britanie) în extractele de țesut hepatic. Testele au fost efectuate conform instrucțiunilor producătorilor și plăcile ELISA analizate folosind un cititor de plăci Fluostar Optima (BMG Labtech, Aylesbury, Marea Britanie)

analize statistice

Analizele statistice pentru datele farmacocinetice au inclus regresia liniară cu 1 / ponderarea concentrației și statistici descriptive; mijloacele aritmetice și abaterile standard, acuratețea și precizia au fost calculate folosind Watson Laboratory Information Management System (LIMS) (versiunea 7.2.0.02) și Microsoft Excel (versiunea 2000/2003).

Analizele statistice pentru datele farmacodinamice au fost efectuate folosind SPSS 16.0 pentru Windows. Mijloacele au fost comparate printr- un singur sens, ANOVA unilateral, urmat de testul post hoc al lui Tukey. O valoare p mai mică de 0,05 a fost considerată semnificativă.Mergi la:

Rezultate

Siguranța SRT-501

Nouă pacienți au fost recrutați în studiu (vezi datele demografice tabelul 1). Șase persoane au ingerat 5,0 g de SRT501 și trei au primit placebo, zilnic, timp de aproximativ 14 zile înainte de operație. Un pacient cu SRT501 a încetat administrarea în ziua 13. AE posibil sau probabil atribuibile aportului de agenți sunt prezentate înmasa 2. Au fost în primul rând de natură gastro-intestinală, incluzând greață și diaree, și de grad ușor (gradul 1 NCI CTC v3.0). Alte EA au inclus frisoane, letargie, erupții cutanate, iritații ale pielii și înroșirea vasculară, care s-au rezolvat fără sechele, cu excepția unui caz de letargie în grupul placebo, care era în curs la urmărire. Un pacient a dezvoltat peritonită postoperatorie și insuficiență hepatică și a murit în timpul urmăririi. Investigatorul principal a considerat că acest eveniment advers grav (SAE) nu are legătură cu studiul medicamentului.

tabelul 1

Date demografice pentru pacienții randomizați la 5,0 g / zi SRT501 și placebo

	SRT501 (n = 6)	Placebo (n = 3)
Vârsta (ani)	68,5 (± 10,8)	64,3 (± 6,35)
Gen	M: 5	M: 1
	F: 1	F: 2
IMC	28,10 (± 4,35)	26,87 (± 1,61)
Cursa (100%)	Caucazian (100%)	caucazian
Zile de studiu	13,3 (± 1,03)	14,0 (± 0,00)
Doza cumulativă pe subiect (g)	66,7 (± 5,16)	70,0 (± 0,00)

IMC: indicele de masă corporală; F: femeie; M: bărbat.

masa 2

Listări de evenimente adverse considerate posibil sau probabil legate de intervenția SRT501 / placebo.

Eveniment advers	SRT501	Placebo
	(n = 6)	(n = 3)
	Nr de evenimente Nr de pacienți	Nr de evenimente Nr de pacienți
Tulburări gastrointestinale:	12	5	2	1
Prurit anal	1	1	0	0
Diaree	7	5	2	1
Greaţă	4	1	0	0
Tulburări generale:	1	1	0	0
Frisoane	1	1	0	0
Tulburări ale sistemului nervos:	1	1	1	1
Letargie	0	0	1	1
Neuropatie periferica	1	1	0	0
Tulburări cutanate / tisulare:	2	2	0	0
Eczemă	1	1	0	0
Iritatie de piele	1	1	0	0
Tulburări vasculare:	1	1	0	0
Flushing	1	1	0	0

Farmacocinetica resveratrolului și concentrația în țesutul hepatic

Plasma pacienților a fost analizată prin HPLC-MS / MS pentru resveratrol. Concentrațiile de resveratrol au fost sub limitele inferioare de cuantificare (LLOQ) pentru toate probele de la subiecții cărora li s-a administrat placebo și măsurabile la pacienții care au primit SRT501. Parametrii farmacocinetici pentru resveratrol sunt indicați întabelul 3, și concentrațiile plasmatice versus curbele de timp pentru subiecții individuali dinfigura 1. Nivelurile C _max au fost atinse 2,8 ore după administrarea dozei, iar concentrația plasmatică maximă medie a fost de 1942 ng / ml (8,51 nmol / ml). Timpul mediu de înjumătățire plasmatică prin eliminare a plasmei a fost de puțin peste 1 oră.figura 1

Concentrația plasmatică a resveratrolului la pacienții individuali care au primit o doză (5,0 g) de SRT501. Analiza a fost efectuată prin HPLC / MS-MS, pentru detalii vezi Metode.

Tabelul 3

Statistici descriptive pentru farmacocinetica resveratrolului din plasma pacienților cărora li se administrează SRT501. Toate probele de la pacienții randomizați la grupul placebo au fost sub limita de cuantificare în toate momentele (datele nu sunt prezentate).

	Cmax (ng / mL)	tmax (hr)	t _1/2 (oră)	ASC (0-24 ore) (ng / oră / ml)
n	6	6	3	3
Media geometrică	1942.00	2,80	1,06	6327,40
SD	1422,62	1.10	0,39	2247,20
Gamă	896 – 4890	2.0 – 4.0	0,81 – 1,54	5030 – 9140

Cmax: concentrația plasmatică maximă; tmax: timpul de concentrație plasmatică maximă; t _1/2 : timpul de înjumătățire plasmatică prin eliminare aparent; ASC: zona sub curba concentrației plasmatice față de timp de la 0 la 24 de ore.

Resveratrolul a fost cuantificat în țesuturile hepatice tumorale și adiacente normale. Nivelurile de resveratrol au fost sub LLOQ la toți subiecții tratați cu placebo și la unul dintre cei șase pacienți cu SRT501. Nivelurile medii de resveratrol la restul de cinci pacienți cărora li s-a administrat SRT501 au fost 1098 ± 1393 ng / g (4,81 nmol / g, interval 52-2834 ng / g) și 420 ± 341 ng / g (1,84 nmol / g, interval 46-914 ng / g) în tumoră și, respectiv, în țesutul normal.

Efectul SRT501 asupra farmacodinamicii

Efectele potențiale ale SRT501 asupra proceselor relevante pentru supraviețuirea celulară și apoptoză au fost măsurate în plasmă și țesut. Nu a existat nicio diferență între pacienții cărora li s-a administrat placebo sau SRT501 în ceea ce privește nivelurile plasmatice / serice de prostaglandină E2 (PGE-2) și factorul de creștere endotelial vascular (VEGF) (nereprezentat). Probele de țesut au fost analizate prin imunohistochimie, ELISA sau western blot pentru modificările induse de SRT501 la nivelurile de IGF-1, Ki67, phospho Akt (ser473), Akt1, phospho-GSK3, GSK3, phospho ERK, ERK, phospho-JNK, JNK, beta-catenin, survivin, BCL2, Bax sau PARP. În toate cazurile nu au existat diferențe semnificative între placebo și SRT501 (datele nu sunt prezentate). Apoptoza, reflectată de imunohistochimie pentru caspaza 3 clivată în țesutul tumoral, a crescut semnificativ cu 39% (până la 1,44% celule apoptotice totale, p = 0.038) la pacienții cu SRT501 comparativ cu cei care au luat placebo (figura 2).Figura 2

Apoptoza reflectată de caspaza-3 scindată (A, fotomicrografii reprezentative, B, cuantificarea fotomicrografiilor) în țesuturile hepatice normale și tumorale ale pacienților care au consumat SRT501 ( N = 6, bare negre) sau placebo ( N = 3, bare albe) zilnic pentru 14 zile. Valorile sunt media +/− SD. (a) reprezintă o diferență semnificativă între țesutul normal și țesutul tumoral pentru grupul SRT501. (b) reprezintă o diferență semnificativă între țesutul normal și cel tumoral pentru grupul placebo. (c) reprezintă o diferență semnificativă între SRT501 și țesutul tumoral placebo. ( P = <0,05, ANOVA, urmată de testul post hoc al lui Tukey).Mergi la:

Discuţie

Acest studiu reprezintă prima descriere a parametrilor farmacocinetici pentru resveratrol după ingestia SRT501, resveratrol micronizat, la subiecții cu cancer colorectal. Doza de resveratrol utilizată (5,0 g) este echivalentă cu unul dintre nivelurile de doză la care resveratrolul non-micronizat a fost administrat recent voluntarilor sănătoși [ 9]]. În studiul voluntar sănătos, zece subiecți pe 5,0 g de resveratrol non-micronizat au raportat douăzeci de AE posibil sau probabil legate de ingestia de capsule de resveratrol, care se compară cu șaptesprezece AE raportate pentru șase pacienți care au primit SRT501. Prin urmare, cele două formulări par să provoace o incidență similară a EA, deși în studiul anterior resveratrolul non-micronizat a fost administrat pe o durată mai lungă (29 de zile) decât SRT501. Toate AE raportate după administrarea SRT501 au fost ușoare, în timp ce doi dintre cei zece voluntari sănătoși pe resveratrol non-micronizat, au prezentat moderat și unul cu AE gastrointestinale severe [ 9]]. Această comparație oferă posibilitatea ca SRT501 formulat ca suspensie să fie mai bine tolerat decât resveratrolul nemicronizat administrat ca zece capsule de 0,5 g pe zi. Deoarece se aștepta ca resveratrolul micronizat să permită concentrații sistemice mai ridicate [ 19 ], această constatare sugerează, de asemenea, că ingestia unui număr mare de capsule sau prezența resveratrolului neabsorbit în tractul gastro-intestinal poate fi responsabilă pentru efectele adverse, mai degrabă decât pentru efectul real. concentrațiile plasmatice atinse.

Analiza farmacocinetică a relevat că media _Cmax plasmatică medie pentru resveratrol măsurată după ingestia SRT501 (medie 1942 ng / ml, CV: 73,3%) a fost de 3,6 ori mai mare decât cea obținută în urma unei doze unice de resveratrol non-micronizat la voluntarii sănătoși ( medie 538.8 ng / ml (CV: 72,5%) [ 8 ] . , în concordanță cu biodisponibilitatea superioară a resveratrol atunci când este administrat ca SRT501 comparativ cu agentul non-micronizate timpul necesar pentru a ajunge la C _max pentru resveratrolul a fost de 2,8 ore în cazul SRT501 în comparație cu 1,5 h pentru resveratrol non-micronizat [ 8 ].

Concentrațiile de resveratrol obținute în metastazele hepatice după administrarea SRT501 (0,22-12,4 μM) au fost de ordinul mărimii observate pentru a provoca efect farmacologic în celulele cancerului colorectal uman in vitro și în modelele preclinice in vivo . Această interpretare este coroborată de constatarea că SRT501 a cauzat o creștere mică, dar semnificativă, a imunoractivității caspazei-3 clivate în țesutul tumoral, în comparație cu țesutul echivalent de la subiecții tratați cu placebo. Deși nu am putut confirma aceste efecte prin intermediul altor markeri farmacodinamici, acest lucru se poate datora sensibilității scăzute a tehnicilor utilizate. Mecanisme prin care au fost observate concentrații scăzute de resveratrol pentru a induce efectul apoptotic și anti-proliferativ in vitroinclud inducerea redistribuirii Fas și asocierea acestuia cu complexul de semnalizare inducătoare de moarte (DISC) [ 20 ] și prin inhibarea semnalizării wnt și scăderea ulterioară a localizării nucleare a β-cateninei [ 21 ]. Într-un model preclinic de hepatocarcinogeneză inițiată de dietilnitrosamină, apoptoza semnificativă mediată de resveratrol a rezultat probabil din creșterea expresiei Bax și, prin urmare, din creșterea raportului Bax: Bcl2 [ 22 ]. În timp ce nivelurile de resveratrol tisular nu au fost determinate în acest studiu, extrapolarea datelor din studiile PK pe rozătoare [ 23 , 24] ar sugera concentrațiile hepatice de resveratrol necesare pentru inducerea apoptozei, să fie doar moderat mai mari decât maximul realizat în studiul SRT501 descris aici.

Aceasta este prima demonstrație că resveratrolul poate atinge concentrații potențial active în țesuturile umane care sunt îndepărtate de tractul GI.

În rezumat, rezultatele acestui studiu pilot al SRT501 permit trei concluzii: i. consumul său zilnic timp de 14 zile pare a fi bine tolerat la pacienții cu cancer colorectal, ii. C _max pentru SRT501 a fost mai mare decât cel raportat pentru doza echivalentă de resveratrol non-micronizat, iii. ingestia sa a furnizat niveluri de resveratrol măsurabile într-un țesut îndepărtat de tractul gastro-intestinal (în special ficatul), iar aceste concentrații au fost însoțite de un efect farmacologic semnificativ.

Resveratrolul micronizat, după cum este exemplificat de SRT501, justifică explorarea clinică suplimentară în cohorte mai mari de subiecți, pentru a testa ipoteza că resveratrolul poate fi util ca agent chimiopreventiv sau chimioterapeutic al cancerului.Mergi la:

Mulțumiri

Sprijinul acordat : Această lucrare a fost susținută de Cancer Research UK în cadrul unui program de finanțare [C325 / A6691], de Cancer Research UK în colaborare cu Departamentul de Sănătate din Marea Britanie pentru o subvenție a Centrului de Medicină a Cancerului Experimental [C325 / A7241] și de Sirtris, A Compania GSK.

Sprijin financiar : Această lucrare a fost susținută de Cancer Research UK pe o subvenție de program [C325 / A6691], de Cancer Research UK în colaborare cu Departamentul de Sănătate din Marea Britanie cu privire la o subvenție experimentală a Centrului de Medicină a Cancerului [C325 / A7241] și de Sirtris, A Compania GSK.Mergi la:

Note de subsol

Conflict de interese: Acest studiu a fost sponsorizat și parțial finanțat de Sirtris, o companie GSK.Mergi la:

Referințe

[1] Barger JL, Kayo T, Vann JM, Arias EB, Wang J, Hacker TA și colab. O doză mică de resveratrol alimentar imită parțial restricția calorică și întârzie parametrii de îmbătrânire la șoareci. Plus unu. 2008; 3 : e2264. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ][2] Baur JA, Sinclair DA. Potențialul terapeutic al resveratrolului: dovezi in vivo. Nat Rev Drug Discov. 2006; 5 : 493-506. [ PubMed ] [ Google Scholar ][3] Un Bishayee. Prevenirea cancerului și tratamentul cu resveratrol: de la studii de rozătoare la studii clinice. Cancer Prev Res (Phila) 2009; 2 : 409-18. [ PubMed ] [ Google Scholar ][4] Shankar S, Singh G, Srivastava RK. Chimioprevenție prin resveratrol: mecanisme moleculare și potențial terapeutic. Biosci din față. 2007; 12 : 4839–54. [ PubMed ] [ Google Scholar ][5] Ea QB, Bode AM, Ma WY, Chen NY, Dong Z. Activarea p53 și apoptoza indusă de resveratrol este mediată de protein kinaze și p38 kinază reglate de semnal extracelular. Cancer Res. 2001; 61 : 1604–10. [ PubMed ] [ Google Scholar ][6] Joe AK, Liu H, Suzui M, Vural ME, Xiao D, Weinstein IB. Resveratrolul induce inhibarea creșterii, stoparea fazei S, apoptoza și modificări ale expresiei biomarkerului în mai multe linii celulare de cancer uman. Clin Cancer Res. 2002; 8 : 893–903. [ PubMed ] [ Google Scholar ][7] Almeida L, Vaz-da-Silva M, Falcao A, Soares E, Costa R, Loureiro AI, și colab. Profilul farmacocinetic și de siguranță al trans-resveratrolului într-un studiu în creștere cu doze multiple la voluntari sănătoși. Mol Nutr Food Res. 2009; 53 (Supliment 1): S7-15. [ PubMed ] [ Google Scholar ][8] Boocock DJ, Faust GE, Patel KR, Schinas AM, Brown VA, Ducharme MP și colab. Studiu farmacocinetic de creștere a dozei de fază I la voluntari sănătoși ai resveratrolului, un potențial agent chimiopreventiv al cancerului. Biomarkeri de epidemiol pentru cancer Prev. 2007; 16 : 1246–52. [ PubMed ] [ Google Scholar ][9] Brown VA, Patel KR, Viskaduraki M, Crowell JA, Perloff M, Booth TD și colab. Studiul repetat al dozei de agent chimiopreventiv al cancerului Resveratrol la voluntari sănătoși: siguranță, farmacocinetică și efect asupra axei factorului de creștere asemănător insulinei. Cancer Res. 2010; 70 : 9003-11. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ][10] la Porte C, Voduc N, Zhang G, Seguin I, Tardiff D, Singhal N și colab. Farmacocinetica stării de echilibru și tolerabilitatea trans-resveratrolului 2000 mg de două ori pe zi cu alimente, quercetină și alcool (etanol) la subiecți umani sănătoși. Clin Pharmacokinet. 2009; 49 : 449–54. [ PubMed ] [ Google Scholar ][11] Nunes T, Almeida L, Rocha JF, Falcao A, Fernandes-Lopes C, Loureiro AI și colab. Farmacocinetica trans-resveratrolului după administrarea repetată la subiecți vârstnici și tineri sănătoși. J Clin Pharmacol. 2009; 49 : 1477–82. [ PubMed ] [ Google Scholar ][12] Patel KR, Brown VA, Jones DJ, Britton RG, Hemingway D, Miller AS și colab. Farmacologia clinică a resveratrolului și a metaboliților săi la pacienții cu cancer colorectal. Cancer Res. 2010; 70 : 7392–9. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ][13] Walle T, Hsieh F, DeLegge MH, Oatis JE, Jr., Walle UK. Absorbție ridicată, dar biodisponibilitate foarte scăzută a resveratrolului oral la om. Eliminarea de droguri Metab. 2004; 32 : 1377–82. [ PubMed ] [ Google Scholar ][14] Aggarwal BB, Bhardwaj A, Aggarwal RS, Seeram NP, Shishodia S, Takada Y. Rolul resveratrolului în prevenirea și terapia cancerului: studii preclinice și clinice. Anticancer Res. 2004; 24 : 2783–840. [ PubMed ] [ Google Scholar ][15] Athar M, Back JH, Tang X, Kim KH, Kopelovich L, Bickers DR și colab. Resveratrol: o revizuire a studiilor preclinice pentru prevenirea cancerului uman. Toxicol Appl Pharmacol. 2007; 224 : 274–83. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ][16] Aziz MH, Kumar R, Ahmad N. Chimioprevenția cancerului prin resveratrol: studii in vitro și in vivo și mecanismele de bază (revizuire) Int J Oncol. 2003; 23 : 17–28. [ PubMed ] [ Google Scholar ][17] Bishayee A, Polita T, Darvesh AS. Resveratrol în chimioprevenția și tratamentul carcinomului hepatocelular. Cancer Treat Rev. 36 : 43-53. [ PubMed ] [ Google Scholar ][18] Hintz R, Johnson K. Efectul distribuției mărimii particulelor asupra vitezei de dizolvare și absorbției orale. Jurnalul Internațional de Farmacie. 1989; 51 : 8. [ Google Scholar ][19] Elliott PJ, Jirousek M. Sirtuins: ținte noi pentru bolile metabolice. Curr Opin Investig Droguri. 2008; 9 : 371–8. [ PubMed ] [ Google Scholar ][20] Delmas D, Rebe C, Lacour S, Filomenko R, Athias A, Gambert P, și colab. Apoptoza indusă de resveratrol este asociată cu redistribuirea Fas în plute și formarea unui complex de semnalizare care induce moartea în celulele cancerului de colon. J Biol Chem. 2003; 278 : 41482–90. [ PubMed ] [ Google Scholar ][21] Hope C, Planutis K, Planutiene M, Moyer MP, Johal KS, Woo J, și colab. Concentrațiile scăzute de resveratrol inhibă fluxul semnalului Wnt în celulele derivate din colon: implicații pentru prevenirea cancerului de colon. Mol Nutr Food Res. 2008; 52 (Supliment 1): S52–61. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ][22] Bishayee A, Dhir N. Chimioprevenția mediată de resveratrol a hepatocarcinogenezei inițiate de dietilnitrosamină: inhibarea proliferării celulare și inducerea apoptozei. Chem Biol Interact. 2009; 179 : 131–44. [ PubMed ] [ Google Scholar ][23] Sale S, Verschoyle RD, Boocock D, Jones DJ, Wilsher N, Ruparelia KC și colab. Farmacocinetica la șoareci și proprietățile inhibitoare ale creșterii agentului chemopreventiv al cancerului putativ resveratrol și analogul sintetic trans 3,4,5,4′-tetrametoxistilbene. Br J Rac. 2004; 90 : 736-44. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ][24] Vitrac X, Desmouliere A, Brouillaud B, Krisa S, Deffieux G, Barthe N și colab. Distribuția [14C] -trans-resveratrolului, un polifenol chemopreventiv al cancerului, în țesuturile șoarecilor după administrare orală. Life Science. 2003; 72 : 2219–33. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

Metformina îmbunătățește supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic diabetic

aug.28

Abstract

Metformina a câștigat un interes considerabil ca agent chimioterapic și chimioterapeutic, având în vedere riscul crescut de cancer hepatic la pacienții diabetici. Această lucrare a fost efectuată pentru a ilustra asocierea dintre utilizarea metforminei și supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic diabetic. Am efectuat o căutare cuprinzătoare în literatură a PubMed, Web of Science, Embase, BIOSIS Previews, Cochrane Library de la începuturi până la 12 mai 2016. Meta-analizele au fost efectuate folosind Stata (versiunea 12.0), cu rapoarte de risc (HR) și o încredere corespunzătoare de 95% intervale (IC) ca măsuri de efect. Unsprezece studii de cohortă care au implicat 3452 de pacienți cu cancer hepatic au îndeplinit criteriile de includere.

Metaanalizele au arătat că utilizarea metforminei a fost asociată cu o supraviețuire mai bună (HR = 0,59; IC 95%, 0,42-0,83; p= 0,002) dintre pacienții cu cancer hepatic și efectul benefic a persistat (HR = 0,64; IC 95%, 0,42-0,97; p = 0,035) atunci când populația era limitată la pacienții cu cancer hepatic diabetic. După ajustarea în funcție de vârstă, etiologie, indicele de severitate a tumorii și tratamentul cancerului hepatic, asocierea dintre utilizarea metforminei și supraviețuirea mai bună a pacienților cu cancer hepatic a fost stabilă, HR combinată a variat între 0,47 și 0,57.

Rezultatele au indicat faptul că utilizarea metforminei a îmbunătățit supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic diabetic. Cu toate acestea, rezultatele ar trebui interpretate cu prudență, având în vedere posibilitatea confuziei reziduale. Sunt încă necesare studii prospective suplimentare pentru a confirma beneficiul prognostic al utilizării metforminei.

Oncotarget. 2016 4 octombrie; 7 (40): 66202–66211.Publicat online 2016 Aug 2.

doi: 10.18632 / oncotarget.11033

PMCID: PMC5323227

PMID: 27494848

Utilizarea metforminei îmbunătățește supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic diabetic: revizuire sistematică și meta-analiză

Shu-Juan Ma , ¹Yi-Xiang Zheng , ²Peng-Cheng Zhou , ²Yan-Ni Xiao , ¹ și Hong-Zhuan Tan ¹

Informații despre autor

Note despre articol

Informații privind drepturile de autor și licență

Disclaimer

¹ Catedra de epidemiologie și statistici sanitare, Școala de sănătate publică Xiangya, Universitatea Centrală de Sud, Changsha, China

² Departamentul de boli infecțioase, Laboratorul cheie pentru hepatită virală din provincia Hunan, Spitalul Xiangya, Universitatea Centrală de Sud, Changsha, China

Corespondență către:Hong-Zhuan Tan, e-mail: moc.qq@99zhnat

INTRODUCERE

Cancerul de ficat este unul dintre cele mai importante tumori maligne la nivel mondial, cu o rată de supraviețuire generală de 5 ani mai mică de 15% [ 1 ]. Diabetul zaharat (DM), o boală cronică din ce în ce mai frecventă, se întâlnește frecvent cu cancer la ficat în practica clinică, probabil din cauza factorilor de risc împărtășite [ 2 ]. Dovezile epidemiologice și clinice au legat DM de prognosticul slab al multor tipuri de cancer prin mecanisme multifactoriale [ 3 – 5 ]. Cu toate acestea, acest efect poate fi atenuat de medicamentele antidiabetice (ADM) [ 6 , 7]]. Metformina, unul dintre ADM-urile cele mai frecvent prescrise, a primit o mare atenție pentru activitatea sa antitumorală. Studiile acumulate au cercetat rolul metforminei atât în prevenirea cât și în tratamentul cancerului. Beneficiile de supravietuire ale metforminei au fost demonstrate într – o gamă largă de afecțiuni maligne , inclusiv cancerul de san, cancerul de prostată, cancer pancreatic, cancer colorectal și cancer pulmonar, prin meta-analize [corespunzătoare 8 – 12 ]. Cu toate acestea, doar o meta-analiză anterioară care implică două studii conexe a rezumat dovezi privind efectul de supraviețuire al metforminei la pacienții cu cancer hepatic [ 13 ]. Încă nu este sigur dacă utilizarea metforminei ar putea genera, de asemenea, rezultate clinice mai bune la pacienții cu cancer hepatic.

Studiile preclinice au demonstrat efecte benefice indirecte și directe ale metforminei asupra liniilor celulare umane cultivate carcinomul hepatocelular (HCC), in modelul tumorile xenograft in vivo și pe ficatul animal [ 14 – 17 ]. În același timp, un număr tot mai mare de studii observaționale au comparat metformina cu tratamentul non-metformină cu privire la rezultatele prognostice ale pacienților cu cancer hepatic, prezentând rezultate oarecum inconsistente [ 18 – 20 ]. Având în vedere că înțelegerea eficacității metforminei în tratamentul cancerului hepatic poate duce la un management clinic mai bun, am lansat o revizuire sistematică și meta-analiză pentru a ilustra asocierea utilizării metforminei cu supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic.Mergi la:

REZULTATE

Descrierea studiilor incluse

Diagrama de flux pentru selecția studiului este prezentată în figura Figura 1.1. Din cele 2294 de titluri identificate, au fost revizuite 1362 de rezumate și 102 studii de text complet rezultate pentru a determina eligibilitatea lor. Pentru a evita suprapunerea populațiilor de pacienți, au fost excluse două studii suprapuse [ 21 , 22 ]. În cele din urmă, 11 studii de cohortă [ 18 – 20 , 23 – 30 ] și 3452 pacienți cu cancer hepatic au fost incluse în analiza noastră generală a efectului metforminei asupra supraviețuirii pacienților cu cancer hepatic.figura 1Diagrama de flux a selecției studiului

Caracteristicile studiilor de cohortă incluse sunt enumerate în tabel Tabelul 1.1. Majoritatea studiilor au fost proiectarea retrospectivă, stabilirea clinică și efectuate în țările occidentale. Calitatea a 7 studii a fost ridicată pe baza Scării Newcastle-Ottawa (NOS) [ 18 – 20 , 24 , 27 , 28 , 30 ]. Populațiile de cancer hepatic din 8 studii [ 18 – 20 , 23 , 25 , 26 , 29 , 30 ] au fost limitate la pacienții cu DM, iar alții [ 24 , 27 , 28 ] au fost fără această restricție. Între timp, 3 studii [ 18 – 20] au comparat, de asemenea, supraviețuirea utilizatorilor de metformină diabetică cu utilizatorii non-diabetici non-metformină. Șapte studii [ 18 , 19 , 24 , 27 – 30 ] au raportat estimări care definesc expunerea la metformină ca luând metformină după diagnosticul de cancer hepatic, inclusiv cele [ 18 , 19 , 29 ] care au luat metformină la data diagnosticului și au continuat în timpul următorului -perioada de sus. Între timp, 4 studii [ 20 , 23 , 24 , 30 ] au raportat estimări care definesc ca luând metformină înainte de diagnosticarea cancerului. Pe lângă vârsta [ 18 – 20, 23 – 25 , 27 – 30 ], majoritatea studiilor ajustate pentru etiologie [ 18 – 20 , 23 , 25 , 28 , 30 ], indicele de severitate a tumorii [ 18 , 19 , 23 , 25 , 27 – 29 ] și tratamentul ficatului cancer [ 18 , 20 , 23 , 25 , 28 , 30 ].Caracteristicile studiilor incluse în meta-analiză

Studiu (an)	Proiecta	Locație	Scorul NOS	Sursă de date	Perioada de timp	Populația de studiu	Definiția expunerii la metformină	Subiect total	Urmărire medie	Variabile de ajustare
Chen 2011 [ 18 ]	Cohorta retrospectivă	China	7	Spitalul de metrou Taichung din Tungs	2003.07-2010.09	Etapa incipientă (BCLC stadiul 0 sau A) Pacienții cu HCC cu DM după RFA	La data apariției HCC și perioadelor în timpul urmăririi	53	32,2 luni	Vârstă, sex, IMC, HbA _1c , anticorp anti-VHC și dimensiunea tumorii (limită la 2,5 cm)
Akmal 2012 [ 23 ]	Cohortă	Statele Unite ale Americii	3	NR	2001-2010	Pacienți cu HCC cu DM	Cu mai mult de 1 an înainte de diagnosticul HCC	130	NR	Vârsta, infecția cu VHC, consumul de alcool, tratamentul HCC, istoricul cirozei, scorul de stadializare a programului Italian Liver
Currie 2012 [ 24 ]	Cohorta retrospectivă	Regatul Unit	9	Practici de îngrijire primară	1990-2009.12	Pacienții cu cancer la ficat	În cele 90 de zile anterioare diagnosticului de cancer hepatic	1460	1,6 ani	Vârstă, sex, istoricul fumatului, indicele de lipsă Townsend, indicele de comorbiditate Charlson, numărul contactelor pentru asistența primară, anul diagnosticului
Hassabo 2012 [ 25 ]	Cohortă	Statele Unite ale Americii	3	NR	2000-2012	Pacienți cu HCC induși de VHC cu DM	NR	56	NR	Vârstă, sex, rasă, ciroză, AFP, tratament anterior, stadializare
Graef 2013 [ 26 ]	Cohorta prospectivă	Regatul Unit	3	NR	2007-2012	Pacienți cu HCC cu DM	NR	282	NR	NR
Ampuero 2014 [ 27 ]	Cohortă	Spania	5	Program de supraveghere	2005-2013	Pacienți cirotici cu HCC	După diagnosticul HCC	125	1,8 ani	Vârstă, HCC difuz, HCC multinodular, utilizarea statinelor, nodul> 5 cm, invazie vasculară, metastază
Bhat 2014 [ 19 ]	Cohorta retrospectivă	Statele Unite ale Americii	6	Clinica Mayo	2005.01-2011.06	Pacienți cu HCC cu DM	At time of HCC diagnosis and continued beyond 90 days following diagnosis	263	NR	Age, sex, caucasian, etiologies of liver disease, BCLC stage
Casadei 2015 [20]	Retrospectiva cohorta	Italia	6	rapoarte Medicale si baze de date IRST IRCCS	2008.03-2014.08	HCC patienti cu DM consecutiv tratati cu sorafenib 2 / zi	1 metformin pt minim 5 ani cand HCC diagnosticat	42	NR	Age, sex, smoking habits and etiology
Jang 2015 [28]	Retrospectiv cohorta	Korea	7	4 institutii	2003.03-2012.12	HCC patients who were treated with SBRT or HypoRT	metformin minim 1 an cu radioterapie	76	15 months	Age, sex, diabetic status, ECOG PS, etiology, number of TACE, PVTT, BED, tumor size, Child-Pugh class, AFP level, multiple tumor lesions
Yang 2015 [29]	Retrospectiva cohorta	USA	4	Mayo Clinic	2001.01-2012.12	Newly diagnosed CCA patients with DM	de la data CCA diagnostic si continuat dupa	214	24.7 months	Age, sex, smoking, PSC, ECOG, CA19-9, tumor size, vascular encasement, metastasis
Seo 2016 [30]	Retrospectiv cohorta	Sud Korea	9	NHIS & KCCR	2005.01-2011.12	HCC patients with DM who undergone curative hepatic resection	a primit aceeasi clasa ≥ 90 zile pe perioada de urmarire	751	NR	Age, sex, hepatitis type, antiviral medication, and Charlson comorbidity index

Deschideți într-o fereastră separată

NOTĂ: Abrevieri: AFP, α-fetoproteină; BCLC, clinica Barcelona, cancer la ficat; DOR, doză echivalentă biologic; IMC, indicele de masă corporală; CA19-9, antigenul cancerului 19-9; CCA, colangiocarcinom; DM, diabet zaharat; ECOG PS, statutul de performanță al Grupului de Oncologie Cooperativă din Est; HbA _1c , hemoglobină A _1c ; VHB, virusul hepatitei B; HCC, cancer hepatocelular; VHC, virusul hepatitei C; HipoRT, radioterapie hipofracționată; KCCR, Korea Center Cancer Registry; NHIS, Serviciul Național de Asigurări de Sănătate; NOS, Newcastle-Ottawa Scale; NR, neraportat; AINS, medicamente antiinflamatorii nesteroidiene; PSC, colangită sclerozantă primară; PVTT, trombul tumorii venei porte; RFA, ablație prin radiofrecvență; SBRT, radioterapie corporală stereotactică; TACE, chemoembolizare transarterială.

Analiza generală

Raporturile de pericol combinate (HR) și intervalele de încredere (IC) corespunzătoare de 95% sunt prezentate în figura Figura 2.2. Metaanaliza a 11 studii [ 18 – 20 , 23 – 30 ] a arătat că utilizarea metforminei a fost asociată cu o scădere semnificativă a mortalității cu 41% la 3452 pacienți cu cancer hepatic (HR = 0,59; IC 95%, 0,42-0,83; p = 0,002) , cu eterogenitate ridicată (I ² = 82,9%). Analiza de sensibilitate a constatat că eterogenitatea ridicată nu s-a datorat nici unui studiu unic, rezultatul sumar s-a dovedit a fi robust prin metoda de excludere. Analiza meta-regresiei a constatat că anul publicării ( p = 0,279), locația ( p = 0,168), scorul NOS ( p = 0,744) și numărul subiectului total ( p= 0,671) nu a reușit să țină cont de eterogenitate în niciuna dintre comparațiile preplanificate. Nu a fost găsită nicio prejudecată semnificativă a publicației, nici din testul Begg ( p = 0,276), nici din testul lui Egger ( p = 0,676).Figura 2Complot forestier al asocierii dintre utilizarea metforminei și supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic

Analize subgrup

Au fost efectuate analize de subgrup pentru a explora în continuare sursele potențiale ale eterogenității ridicate dintre studii și pentru a valida rezultatul din analiza generală (Tabelul (Masa 2).2). Analizele stratificate prin calitatea studiului au constatat că mortalitatea scăzută la utilizatorii de metformină a pierdut semnificație în 7 studii de înaltă calitate (HR = 0,61; IC 95%, 0,35-1,05; p = 0,072). Analiza subgrupului a 3 studii asiatice a arătat o exagerare a efectului metforminei (HR = 0,37; IC 95%, 0,30-0,47; p <0,001). Când s-a definit expunerea ca luând metformină înainte de diagnosticarea cancerului, efectul benefic asupra supraviețuirii a pierdut semnificația (HR = 0,69; IC 95%, 0,37-1,29; p = 0,249). Atunci când utilizatorii controlați fără metformină au fost limitați la pacienții cu cancer hepatic cu DM, efectul benefic pentru utilizarea metforminei a fost stabil (HR = 0,64; IC 95%, 0,42-0,97; p= 0,035) și a persistat în populația controlată fără această restricție (HR = 0,47; IC 95%, 0,31-0,71; p <0,001). Cu toate acestea, în comparație cu utilizatorii non-diabetici non-metformină, utilizatorii diabetici de metformină au prezentat o supraviețuire mai slabă (HR = 1,35; IC 95%, 0,99-1,82; p = 0,054). După ajustarea în funcție de vârstă, etiologie, indicele de severitate a tumorii și tratamentul cancerului hepatic, asocierea dintre utilizarea metforminei și supraviețuirea mai bună a pacienților cu cancer hepatic a fost stabilă, HR-urile combinate (IC 95%) au fost de 0,57 (0,38-0,85), 0,55 (0,31) -0,96), 0,54 (0,35-0,82) și respectiv 0,47 (0,27-0,84).

tabel 2

Rezumatul rezultatelor analizelor subgrupurilor de asociere între utilizarea metforminei și supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic

Subgrup	Nr. De studii	Subiect total	Rezumat rezumat	I ² (%)
HR (IC 95%)	Valoarea P
Calitate
Înalt	7	2770	0,61 (0,35-1,05)	0,072	87,0
Scăzut	4	682	0,59 (0,38-0,91)	0,018	74.1
Locație
asiatic	3	880	0,37 (0,30-0,47)	<0,001	0
Occidental	8	2572	0,70 (0,49-0,98)	0,041	76,9
Definiția metformin
Înainte de diagnosticarea cancerului	4	2084	0,69 (0,37-1,29)	0,249	79,8
După diagnosticul de cancer ^#	7	2301	0,60 (0,39-0,93)	0,023	84,4
Populația controlată
DM	8	1791	0,64 (0,42-0,97)	0,035	87,5
DM + Non-DM	3	1661	0,47 (0,31-0,71)	<0,001	0
Non-DM	3	679	1,35 (0,99-1,82)	0,054	20.4
Ajustare
Vârstă	10	3170	0,57 (0,38-0,85)	0,007	84.2
Etiologie	7	1371	0,55 (0,31-0,96)	0,037	88.6
Indicele severității tumorii	7	917	0,54 (0,35-0,82)	0,004	75,7
Tratamentul cancerului de ficat	6	1108	0,47 (0,27-0,84)	0,011	77,6

Notă: Abrevieri: CI, interval de încredere; DM, diabet zaharat; Non-DM, non-diabet zaharat; HR, raport de pericol.^{# a} inclus cei care au luat metformin la data diagnosticului și au continuat în timpul perioadei de urmărire.

Eterogenitatea semnificativă a fost prezentă în aproape toate subgrupurile, I ² (> 50%) variind de la 74,1% la 88,6% (Tabel(Masa 2).2). Nu a fost găsită nicio eterogenitate în analiza subgrupului a 3 studii asiatice ( I ² = 0). Mai mult, atunci când populația controlată nu s-a limitat la pacienții cu DM, eterogenitatea a dispărut ( I ² = 0). Și atunci când populația controlată s-a limitat la pacienții non-DM, eterogenitatea a fost limitată ( I ² = 20,4%).Mergi la:

DISCUŢIE

În această meta-analiză a 11 studii de cohortă și 3452 de pacienți cu cancer hepatic, am constatat că, în raport cu neutilizarea, utilizarea metforminei a redus semnificativ mortalitatea (HR = 0,59; IC 95%, 0,42-0,83; p = 0,002). Acest efect semnificativ a fost validat în majoritatea analizelor subgrupurilor. Cu toate acestea, analizele stratificate prin calitatea studiului au obținut un rezultat contradictoriu că scăderea mortalității la utilizatorii de metformină a pierdut semnificație în 7 studii de înaltă calitate (HR = 0,61; IC 95%, 0,35-1,05; p = 0,072). Referindu-ne la studiile inițiale, un studiu realizat de Casadei și colab. [ 20 ] ar putea fi valoarea anterioară, care a raportat un efect nefavorabil semnificativ al metforminei la pacienții cu DM cu HCC avansat care primeau sorafenib (HR = 5,16; IC 95%, 1,53-17,63; p= 0,008). A fost foarte diferit de efectele benefice raportate în majoritatea celorlalte studii. După excluderea acestei valori anormale suspecte, rezultatul combinat al celor șase studii de înaltă calitate a validat efectul benefic semnificativ al metforminei (HR = 0,49; IC 95%, 0,29-0,81; p = 0,006). Mai precis din punct de vedere clinic, acest studiu a sugerat că metformina nu a îmbunătățit activitatea sorafenibului în timpul dezvoltării HCC. Cu toate acestea, s-a găsit un efect sinergic împotriva HCC între metformină și radioterapie [ 18 , 28 ]. S-au găsit beneficii sinergice între metformină și chimioterapie / radioterapie împotriva anumitor tipuri de cancer [ 31 – 35]. Interacțiunile pot fi legate de mecanismele lor moleculare.

Deși acțiunea antitumorală a metforminei a fost raportată prin acumularea de studii preclinice in vitro și in vivo [ 16 ], mecanismul molecular potențial nu a fost încă complet elucidat [ 36 ]. Mecanismele sunt împărțite în principal în efecte indirecte prin reducerea nivelului de glucoză sau insulină în circulație și efecte directe asupra celulelor tumorale prin intermediul mecanismelor dependente și independente de AMPK ale adenozinei monofosfat activate (AMPK) [ 37 , 38 ]. Sorafenib a acționat prin aceeași cale de activare AMPK ca metformina [ 39]. Astfel, o posibilă explicație pentru rezistența la sorafenib este că tumorile sunt mai susceptibile de a avea mecanisme intrinseci de rezistență la metformină în timpul tratamentului cronic cu aceasta, ceea ce poate duce și la rezistență la sorafenib, pentru mecanismele lor similare [ 20 ]. Cu toate acestea, ipoteza justifică o investigație suplimentară. Având în vedere că activitatea antitumorală a metforminei ca agent unic este limitată, investigarea siguranței și eficacității metforminei care acționează ca terapii adjuvante sau neoadjuvante este o sarcină esențială. Studiile ulterioare ar trebui să ia în considerare interacțiunile complexe în proiectare și progres.

Virusul hepatitei B este factorul de risc dominant pentru HCC în majoritatea zonelor din Asia, în timp ce reprezintă doar 23% din HCC în țările occidentale dezvoltate [ 7 ], unde ciroză asociată cu alcoolul, virusul hepatitei C și ficatul gras nealcoolic se crede că boala reprezintă cea mai mare parte a HCC [ 40 ]. Analizele subgrupurilor noastre au constatat un efect mai puternic al metforminei în populația asiatică cu cancer hepatic (HR = 0,37; IC 95%, 0,30-0,47; p <0,001), a sugerat că metformina ar putea fi doar sensibilă la anumite tipuri etiologice de cancer hepatic, care trebuie să fie confirmat în continuare. Analiza stratificată prin definiția metforminei a sugerat că efectul benefic asupra supraviețuirii a pierdut semnificația (HR = 0,69; IC 95%, 0,37-1,29; p= 0,249) când se definește expunerea ca luând metformină înainte de diagnosticarea cancerului. În plus față de motivul statistic, constatarea ar putea fi explicată prin rezistența potențială la metformină rezultată din utilizarea pe termen lung înainte de diagnosticarea cancerului hepatic, precum și absența beneficiilor sinergice între metformină și tratamentele convenționale împotriva cancerului înainte de diagnostic.

DM nu este doar un factor de risc important pentru apariția HCC, ci și un predictor nefavorabil pentru supraviețuire [ 41 ]. Analizele subgrupurilor au validat efectul benefic al utilizării metforminei atunci când populația era limitată la pacienții cu cancer hepatic cu DM (HR = 0,64; IC 95%, 0,42-0,97; p = 0,035). Teoretic, efectele adverse ale DM în sine ar putea acoperi efectul curativ al metforminei atunci când se compară pacienții cu DM cu pacienții care nu sunt cu DM. De fapt, analiza subgrupului nostru a constatat o supraviețuire mai slabă (HR = 1,35; IC 95%, 0,99-1,82; p = 0,054) la utilizatorii de metformină diabetică în comparație cu non-utilizatorii non-diabetici, în timp ce rezultatul ar putea fi explicat și parțial populația de pacienți (n = 679).

O mulțime de factori pot afecta supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic, cum ar fi vârsta, stilul de viață personal, etiologia, stadializarea clinică, dimensiunea tumorii, noduli multipli, rezerva funcției hepatice, tratamentul inițial și așa mai departe [ 42 – 45]. Pentru a evita aceste prejudecăți, am efectuat analize de subgrup ale HR-urilor ajustate care controlează anumiți factori de prognostic pe baza informațiilor limitate. După ajustarea în funcție de vârstă, etiologie, indicele severității tumorii și tratamentul cancerului hepatic, efectele benefice asupra supraviețuirii globale pentru utilizarea metforminei au fost semnificative și stabile (HR combinată a variat între 0,47 și 0,57). Cu toate acestea, pe lângă prezența unei eterogenități ridicate și a unor populații limitate de pacienți, confuzii incomensurabili au fost, de asemenea, inevitabili, rezultând că asocierile observate ar putea să nu fie neapărat cauzale [ 46 ]. Astfel, sunt necesare mai multe studii cu informații suficiente pentru a clarifica aceste confuzii.

În ciuda efectelor noastre de a oferi o analiză cuprinzătoare și precisă, mai multe limitări ale meta-analizei noastre trebuiau abordate și meritau discuții suplimentare. În primul rând, deși am folosit termeni de căutare largi și strategie sistematică în mai multe baze de date pentru a identifica cât mai multe studii potențiale posibil, doar 11 studii de cohortă au îndeplinit criteriile de includere și au fost incluse în analiza finală. Studiile limitate incluse și populația mică de pacienți contribuie parțial la eterogenitatea ridicată între studii. Din păcate, sensibilitatea, meta-regresia și analizele subgrupurilor nu au reușit să exploreze sursele definite de eterogenitate. În al doilea rând, pacienții cu cancer hepatic incluși în meta-analiza noastră se aflau în diferite stări de sănătate, iar tratamentele lor anterioare erau, de asemenea, diferite.Deși am constatat că efectul benefic pentru utilizarea metforminei a persistat la pacienții cu DM și la analize după ajustarea pentru severitatea tumorii și tratament, dacă beneficiul observat ar putea fi extins la o gamă mai largă de populații, inclusiv pacienții non-DM și cei care au primit anumite tipuri de tratamentul cancerului, trebuia determinat. În al treilea rând, majoritatea pacienților cu cancer hepatic diabetic din aceste studii au fost simultan pe ADM multiple, cu modificări ale farmacoterapiei în timp. Comparația pentru utilizatorii de metformină și non-utilizatori a avut efecte dopate ale altor ADM (au avut propriile lor efecte inerente de modificare a cancerului), a condus la o asociere părtinitoare între metformină și rezultat. Cu toate acestea, a fost dificil să se efectueze analize stratificate prin ADM-uri controlate sau să se adapteze pentru alte ADM-uri, deoarece datele aferente lipseau. Al patrulea,ajustările studiilor incluse au fost inconsistente și incomplete. Deși am efectuat analize de subgrup ale HR ajustate care controlează mai mulți factori prognostici importanți pe baza informațiilor limitate, cum ar fi vârsta, etiologia, indicele de severitate a tumorii și tratamentul cancerului hepatic. Unii alți agenți de confuzie nu au reușit să controleze, cum ar fi ciroza, severitatea și durata DM, doza cumulativă, continuitatea consumului de droguri, prejudecată legată de timp, utilizarea medicamentelor concomitente (de exemplu, statine și medicamente antiinflamatoare nesteroidiene), care ar să fie important să se adapteze pentru confuzii reziduale și să ofere o înțelegere mai profundă a naturii utilizării metforminei [indicele severității tumorii și tratamentul cancerului hepatic. Unii alți agenți de confuzie nu au reușit să controleze, cum ar fi ciroza, severitatea și durata DM, doza cumulativă, continuitatea consumului de droguri, prejudecată legată de timp, utilizarea medicamentelor concomitente (de exemplu, statine și medicamente antiinflamatoare nesteroidiene), care ar să fie important să se adapteze pentru confuzii reziduale și să ofere o înțelegere mai profundă a naturii utilizării metforminei [indicele severității tumorii și tratamentul cancerului hepatic. Unii alți agenți de confuzie nu au reușit să controleze, cum ar fi ciroza, severitatea și durata DM, doza cumulativă, continuitatea consumului de droguri, prejudecată legată de timp, utilizarea medicamentelor concomitente (de exemplu, statine și medicamente antiinflamatoare nesteroidiene), care ar să fie important să se adapteze pentru confuzii reziduale și să ofere o înțelegere mai profundă a naturii utilizării metforminei [care ar fi important să se adapteze pentru confuzia reziduală și să ofere o înțelegere mai profundă a naturii utilizării metforminei [ceea ce ar fi important să se adapteze pentru confuzii reziduale și să ofere o înțelegere mai profundă a naturii utilizării metforminei [47 ], în timp ce majoritatea studiilor nu au reușit să furnizeze aceste informații cuprinzătoare.

Pe scurt, metaanaliza noastră a studiilor observaționale implică faptul că utilizarea metforminei aduce beneficii semnificative supraviețuirii pacienților cu cancer hepatic diabetic. Studiul întărește oarecum rolul metforminei ca potențial candidat la chimioterapie la pacienții cu cancer hepatic diabetic. Cu toate acestea, limitat de designul studiului observațional și de limitările de mai sus, nu poate fi trasată o cauzalitate. Sunt necesare studii prospective suplimentare pentru a confirma beneficiile prognostice și pentru a evalua posibilitatea metforminei ca regim antidiabetic în tratamentul pentru o gamă mai largă de populații de cancer.Mergi la:

MATERIALE ȘI METODE

Căutare literatură

Am căutat în baza de date PubMed, Web of Science, Embase, BIOSIS Previews, Cochrane Library și National Institutes of Health de la începuturile lor până la 12 mai 2016. Pentru a include mai multă literatură potențială, strategia noastră generală de căutare a inclus doar termeni pentru metformină (de exemplu, „ metformină ”și„ biguanidă ”) și cancer la ficat (de exemplu,„ ficat sau cancer hepatic / carcinom / tumoră / neoplasm ”,„ carcinom hepatocelular ”,„ HCC ”și„ colangiocarcinom ”). Cei doi termeni erau conectați prin cuvântul logic „și”, între timp sinonimele erau conectate prin „sau”. De asemenea, am analizat bibliografii ale unor studii originale selectate și articole de recenzie. Nu au existat restricții de limbă sau tip de publicație. Au fost făcute încercări de a contacta autorii corespunzători pentru date suplimentare.

Selectarea studiului

Referințele au fost combinate împreună în Endnote, versiunea X7 pentru a facilita gestionarea. Selecția studiului a fost efectuată de doi autori în mod independent, evaluați după titlu, abstract și text integral. Articolele noastre de căutare generală au fost incluse dacă (i) au evaluat o populație de pacienți cu cancer hepatic, (ii) au raportat expunerea la metformină sau biguanidă și au furnizat grupuri eficiente de comparație, (iii) au evaluat rezultatul mortalității sau supraviețuirii, (iv) au raportat HR și IC corespunzătoare de 95% sau au furnizat date suficiente pentru estimările lor. Am comparat studii privind sursa de date, populația studiată, localizarea geografică și informațiile autorilor, pentru a încerca să evităm suprapunerea populațiilor de pacienți. Cel mai cuprinzător sau cel mai recent raport a primit prioritate dacă au existat mai multe publicații din aceeași populație.

Extragerea datelor

Pentru fiecare dintre studiile eligibile, informațiile primului autor, anul publicării, proiectarea studiului, locația, sursa datelor, perioada de timp, populația studiată, definiția expunerii la metformină, urmărirea medie, grupurile de comparație, vârsta medie, sexul, subiectul total, rezultatele, HR și IC 95% și variabilele de ajustare au fost extrase selectiv pe forme structurate pilotate independent de doi autori. Orice dezacord în timpul selecției studiului sau al colectării datelor a fost rezolvat prin consens, referindu-se la articolul original. Ținând concordanță cu majoritatea studiilor incluse, am folosit un punct de reducere pentru dihotomizarea pacienților cu cancer hepatic în utilizatori și neutilizatori de metformină în analiza finală a expunerii. Dacă au fost raportate mai multe estimări de risc în același articol, cea mai complet ajustată a fost aleasă pentru analiza generală (de exemplu,cohorta potrivită a fost selectată peste cohorta neegalată, regresia multivariată a fost selectată peste regresia univariată), între timp, celelalte ar putea fi incluse în analizele subgrupurilor în funcție de condițiile concrete.

Evaluarea calitatii

Calitatea metodologică a studiilor observaționale incluse a fost evaluată utilizând NOS [ 48 ]. În această scară, studiile au fost evaluate din trei categorii: selecția (4 stele) și comparabilitatea (2 stele) a grupurilor de studiu și evaluarea rezultatului interesului (3 stele). Sistemul de evaluare a stelelor a fost utilizat pentru a indica calitatea, cu un scor de la 0 la 9: 0-5 stele la calitate scăzută și 6-9 stele la calitate ridicată.

analize statistice

Estimarea ajustată a primit prioritate pentru analiza cantitativă, în timp ce estimarea brută a servit ca alternativă în cazul în care cea ajustată nu a fost disponibilă. Estimările lipsă sau incomplete și IC 95% au fost încercate să se calculeze utilizând statistici rezumative adecvate sau curbe Kaplan-Meier pe baza metodelor publicate [ 49 ]. Am exprimat rezultatele sumare ca HR și IC 95% corespunzătoare în această lucrare pentru a păstra consecvența cu estimările raportate în toate studiile incluse. Eterogenitatea dintre studii a fost evaluată utilizând testul Cochrane Q cu un nivel de semnificație p ≤ 0,1, între timp cuantificat prin I² estimat cu o valoare> 50% ca standard al eterogenității semnificative [ 50]. Când nu s-a arătat nicio eterogenitate semnificativă statistic, a fost utilizat modelul cu efecte fixe de Varianță inversă, altfel s-a folosit un model de efecte aleatorii DerSimonian-Laird pentru a calcula estimările cumulate [ 51 ]. Au fost efectuate analize de sensibilitate pentru a evalua soliditatea rezultatelor. Ulterior, s-au efectuat analize de meta-regresie pentru a evalua următorii factori eterogeni potențiali: anul publicării, locația, scorul NOS și numărul subiectului total. Variabile semnificative ( p ≤ 0,1) selectate prin analiza univariata de meta-regresie precedentă au intrat apoi în modelul multivariabil.

Pentru a explora în continuare sursele potențiale de eterogenitate între studii și pentru a valida rezultatul analizei generale, am efectuat analize de subgrupuri prin stratificarea studiilor originale în funcție de calitatea studiului, localizarea, definiția expunerii la metformină și diferite populații controlate. Analizele HR-urilor ajustate au fost accentuate pe studii care controlează vârsta, etiologia (de exemplu, infectate cu virusul hepatitei B / C, bolile hepatice grase alcoolice și nealcoolice), indicele de severitate a tumorii (de exemplu, dimensiunea tumorii, tumorile multiple, stadiul cancerului și metastaze) și tratamentul cancerului hepatic (de exemplu, ablația prin radiofrecvență, radioterapia, sorafenibul, chemoembolizarea transarterială, rezecția ficatului), având în vedere efectele lor modificatoare asupra activității metforminei asupra rezultatelor prognostice ale pacienților cu cancer hepatic. Bias de publicare (considerat prezent dacă p≤ 0,1) a fost detectat pentru analiza generală folosind testul Begg și testul Egger [ 52 , 53 ]. Toate valorile p au fost pe două fețe și toate analizele statistice au fost efectuate utilizând software-ul versiunea 12.0 Stata (StataCorp, College Station, TX, SUA).Mergi la:

Note de subsol

CONFLICTE DE INTERES

Autorii nu au conflicte de interese de dezvăluit.

SPRIJINUL DE ACHIZIȚIE

Autorii nu au sprijin sau finanțare de raportat.Contribuit de

Declarație de autorGarant al articolului: Hong-Zhuan Tan

Contribuțiile autorului: Shu-Juan Ma a contribuit la începerea și proiectarea studiului, căutarea și selecția literaturii, achiziționarea datelor, analiza și scrierea manuscrisului. Yi-Xiang Zheng a contribuit la începerea studiului, căutarea și selecția literaturii, achiziția și analiza datelor. Peng-Cheng Zhou a contribuit la evaluarea calității, la discuții și la revizuirea manuscriselor. Yan-Ni Xiao a contribuit la evaluarea calității și la revizuirea manuscriselor. Hong-Zhuan Tan a contribuit la proiectarea studiului, la revizuirea manuscriselor și la supravegherea studiului. Toți autorii au aprobat versiunea finală a manuscrisului.Mergi la:

REFERINȚE

1. El-Serag HB, Mason AC, Key C. Tendințe în supraviețuirea pacienților cu carcinom hepatocelular între 1977 și 1996 în Statele Unite. Hepatologie (Baltimore, Md) 2001; 33 : 62–65. [ PubMed ] [ Google Scholar ]2. Richardson LC, Pollack LA. Perspective terapeutice: Influența diabetului de tip 2 asupra dezvoltării, tratamentului și rezultatelor cancerului. Natură practică clinică Oncologie. 2005; 2 : 48-53. [ PubMed ] [ Google Scholar ]3. Barone BB, Yeh HC, Snyder CF, Peairs KS, Stein KB, Derr RL, Wolff AC, Brancati FL. Mortalitatea pe termen lung pentru toate cauzele la pacienții cu cancer cu diabet zaharat preexistent: o revizuire sistematică și meta-analiză. Jama. 2008; 300 : 2754-2764. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]4. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 2015; 65 : 5–29. [ PubMed ] [ Google Scholar ]5. Giovannucci E, Harlan DM, Archer MC, Bergenstal RM, Gapstur SM, Habel LA, Pollak M, Regensteiner JG, Yee D. Diabet și cancer: un raport de consens. Îngrijirea diabetului. 2010; 33 : 1674–1685. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]6. Tseng CH. Metformina poate reduce riscul de cancer oral la pacienții cu diabet zaharat de tip 2. Oncotarget. 2016; 7 : 2000–2008. doi: 10.18632 / oncotarget.6626. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]7. Singh S, Singh PP, Singh AG, Murad MH, Sanchez W. Medicamente anti-diabetice și riscul de cancer hepatocelular: o revizuire sistematică și meta-analiză. Revista americană de gastroenterologie. 2013; 108 : 881–891. [ PubMed ] [ Google Scholar ]8. Yin M, Zhou J, Gorak EJ, Quddus F. Metformina este asociată cu beneficiul supraviețuirii la pacienții cu cancer cu diabet de tip 2 concomitent: o revizuire sistematică și meta-analiză. Oncologul. 2013; 18 : 1248–1255. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]9. He XK, Su TT, Si JM, Sun LM. Metformina este asociată cu un risc ușor redus de cancer colorectal și beneficii moderate de supraviețuire în diabetul zaharat: o meta-analiză. Medicament. 2016; 95 : e2749. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]10. Stopsack KH, Ziehr DR, Rider JR, Giovannucci EL. Metformina și mortalitatea prin cancer de prostată: o meta-analiză. Cauze și control al cancerului. 2016; 27 : 105–113. [ PubMed ] [ Google Scholar ]11. Xu H, Chen K, Jia X, Tian Y, Dai Y, Li D, Xie J, Tao M, Mao Y. Utilizarea metforminei este asociată cu o supraviețuire mai bună a pacienților cu cancer mamar cu diabet: o meta-analiză. Oncologul. 2015; 20 : 1236–1244. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]12. Wan G, Yu X, Chen P, Wang X, Pan D, Wang X, Li L, Cai X, Cao F. Terapia cu metformină asociată cu beneficiul supraviețuirii la pacienții cu cancer pulmonar cu diabet. Oncotarget. 2016 doi: 10.18632 / oncotarget.8881. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]13. Zhang P, Li H, Tan X, Chen L, Wang S. Asociația utilizării metforminei cu incidența și mortalitatea cancerului: o meta-analiză. Epidemiologia cancerului. 2013; 37 : 207–218. [ PubMed ] [ Google Scholar ]14. Zheng L, Yang W, Wu F, Wang C, Yu L, Tang L, Qiu B, Li Y, Guo L, Wu M, Feng G, Zou D, Wang H. Semnificația pronostică a activării AMPK și efectele terapeutice ale metformina în carcinomul hepatocelular. Cercetarea clinică a cancerului. 2013; 19 : 5372–5380. [ PubMed ] [ Google Scholar ]15. Nerstedt A, Cansby E, Amrutkar M, Smith U, Mahlapuu M. Activarea farmacologică a AMPK suprimă răspunsul inflamator evocat de semnalizarea IL-6 în ficatul șoarecelui și în hepatocitele umane. Endocrinologie moleculară și celulară. 2013; 375 : 68–78. [ PubMed ] [ Google Scholar ]16. Sui X, Xu Y, Wang X, Han W, Pan H, Xiao M. Metformin: un medicament nou, dar controversat în prevenirea și tratamentul cancerului. Farmacie moleculară. 2015; 12 : 3783–3791. [ PubMed ] [ Google Scholar ]17. Qu Z, Zhang Y, Liao M, Chen Y, Zhao J, Pan Y. Acțiunea antitumorală in vitro și in vivo a metforminei asupra carcinomului hepatocelular. Cercetarea hepatologiei. 2012; 42 : 922–933. [ PubMed ] [ Google Scholar ]18. Chen TM, Lin CC, Huang PT, Wen CF. Metformina s-a asociat cu o mortalitate mai mică la pacienții diabetici cu carcinom hepatocelular în stadiu incipient după ablația prin radiofrecvență. Jurnal de gastroenterologie și hepatologie. 2011; 26 : 858–865. [ PubMed ] [ Google Scholar ]19. Bhat M, Chaiteerakij R, Harmsen WS, Schleck CD, Yang JD, Giama NH, Therneau TM, Gores GJ, Roberts LR. Metformina nu îmbunătățește supraviețuirea la pacienții cu carcinom hepatocelular. Revista mondială de gastroenterologie. 2014; 20 : 15750–15755. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]20. Casadei Gardini A, Marisi G, Scarpi E, Scartozzi M, Faloppi L, Silvestris N, Masi G, Vivaldi C, Brunetti O, Tamberi S, Foschi FG, Tamburini E, Tenti E, și colab. Efectele metforminei asupra rezultatului clinic la pacienții diabetici cu HCC avansat care primesc sorafenib. Avizul experților privind farmacoterapia. 2015; 16 : 2719–2725. [ PubMed ] [ Google Scholar ]21. Yang Z, Zhang X, Roberts LR, Chaiteerakij R. Utilizarea metforminei reduce riscul de colangiocarcinom intrahepatic la pacienții cu diabet, dar nu îmbunătățește supraviețuirea colangiocarcinomului. Gastroenterologie. 2015; 148 : 1029–1030. [ Google Scholar ]22. Chaiteerakij R, Baichoo E, Roberts LR. Utilizarea metforminei îmbunătățește supraviețuirea pacienților cu colangiocarcinom (CC) cu diabet de tip II (DM) Hepatologie (Baltimore, Md) 2013; 58 : 331–332. [ Google Scholar ]23. Akmal K, Hassabo H, Botrus G, Shah N, Soliman K, Khalaf R, Li D, Kaseb A, Hassan M. Impactul metforminei asupra prognosticului HCC. Asociația Americană pentru Cercetarea Cancerului. 2012: 72. [ Google Scholar ]24. Currie CJ, Poole CD, Jenkins-Jones S, Gale EA, Johnson JA, Morgan CL. Mortalitatea după cancer incident la persoanele cu sau fără diabet de tip 2: impactul metforminei asupra supraviețuirii. Îngrijirea diabetului. 2012; 35 : 299–304. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]25. Hassabo HM, Iwasaki M, Soliman K, Abaza Y, Kaseb AO, Torres HA, Li D, Xiao L, Morris JS, Hassan M. Impactul metforminei asupra prognosticului HCC în prezența și absența infecției cu VHC. Hepatologie (Baltimore, Md) 2012; 56 : 457–458. [ Google Scholar ]26. Graef S, Berhane S, Joey Teng M, Skowronska A, Johnson PJ. Impactul diabetului asupra CHC. Societatea Americană de Oncologie Clinică. 2013: 31. [ Google Scholar ]27. Ampuero J, Calle R, Figueruela B, Ferrero P, Suarez E, Romero-Gomez M. Statinele și utilizarea metforminei îmbunătățesc prognosticul după diagnosticul de carcinom hepatocelular. Hepatologie (Baltimore, Md) 2014; 60 : 877–877. [ Google Scholar ]28. Jang WI, Kim MS, Lim JS, Yoo HJ, Seo YS, Han CJ, Park SC, Kay CS, Kim M, Jang HS, Lee DS, Chang AR, Park HJ. Avantajul supraviețuirii asociat cu utilizarea metforminei la pacienții cu carcinom hepatocelular care primesc radioterapie: o analiză de potrivire a scorului de tendință. 2015; 35 : 5047–5054. [ PubMed ] [ Google Scholar ]29. Yang Z, Zhang X, Roberts RO, Roberts LR, Chaiteerakij R. Metformin nu îmbunătățește supraviețuirea colangiocarcinomului la persoanele cu diabet. Hepatologie (Baltimore, Md) 2015; 63 : 667–668. [ PubMed ] [ Google Scholar ]30. Seo YS, Kim YJ, Kim MS, Suh KS, Kim SB, Han CJ, Kim YJ, Jang WI, Kang SH, Tchoe HJ, Park CM, Jo AJ, Kim HJ și colab. Asocierea utilizării metforminei cu mortalitatea specifică cancerului în carcinomul hepatocelular după rezecția curativă: un studiu la nivel național bazat pe populație. Medicament. 2016; 95 : e3527. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]31. Sadeghi N, Abbruzzese JL, Yeung SC, Hassan M, Li D. Utilizarea metforminei este asociată cu o supraviețuire mai bună a pacienților diabetici cu cancer pancreatic. Cercetarea clinică a cancerului. 2012; 18 : 2905–2912. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]32. Spillane S, Bennett K, Sharp L, Barron TI. Un studiu de cohortă privind expunerea și supraviețuirea la metformină la pacienții cu cancer colorectal în stadiul I-III. Epidemiologia cancerului, biomarkeri și prevenire. 2013; 22 : 1364–1373. [ PubMed ] [ Google Scholar ]33. Margel D, Urbach DR, Lipscombe LL, Bell CM, Kulkarni G, Austin PC, Fleshner N. Utilizarea metforminei și mortalitatea specifică pentru toate cauzele și cancerul de prostată la bărbații cu diabet. Jurnal de oncologie clinică. 2013; 31 : 3069–3075. [ PubMed ] [ Google Scholar ]34. Kumar S, Meuter A, Thapa P, Langstraat C, Giri S, Chien J, Rattan R, Cliby W, Shridhar V. Aportul de metformină este asociat cu o supraviețuire mai bună în cancerul ovarian: un studiu caz-control. Cancer. 2013; 119 : 555-562. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]35. Skinner HD, Crane CH, Garrett CR, Eng C, Chang GJ, Skibber JM, Rodriguez-Bigas MA, Kelly P, Sandulache VC, Delclos ME, Krishnan S, Das P. Utilizarea metforminei și răspuns îmbunătățit la terapia în cancerul rectal . Medicamentul pentru cancer. 2013; 2 : 99–107. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]36. Pawlyk AC, Giacomini KM, McKeon C, Shuldiner AR, Florez JC. Farmacogenomica metforminei: starea actuală și direcțiile viitoare. Diabet. 2014; 63 : 2590–2599. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]37. Pollak M. Insulina și familia receptorilor factorilor de creștere asemănători insulinei în neoplazie: o actualizare. Natura analizează Racul. 2012; 12 : 159–169. [ PubMed ] [ Google Scholar ]38. Martin-Castillo B, Vazquez-Martin A, Oliveras-Ferraros C, Menendez JA. Metformina și cancerul: doze, mecanisme și păpădie și fenomene hormetice. Ciclul celular (Georgetown, Tex) 2010; 9 : 1057–1064. [ PubMed ] [ Google Scholar ]39. Groenendijk FH, Mellema WW, van der Burg E, Schut E, Hauptmann M, Horlings HM, Willems SM, van den Heuvel MM, Jonkers J, Smit EF, Bernards R. Sorafenib se sinergizează cu metformina în NSCLC prin activarea căii AMPK. Jurnal internațional de cancer. 2015; 136 : 1434–1444. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]40. Baffy G, Brunt EM, Caldwell SH. Carcinomul hepatocelular în boala hepatică grasă nealcoolică: o amenințare emergentă. Jurnal de hepatologie. 2012; 56 : 1384–1391. [ PubMed ] [ Google Scholar ]41. Wang YG, Wang P, Wang B, Fu ZJ, Zhao WJ, Yan SL. Diabet zaharat și prognostic mai slab în carcinomul hepatocelular: o analiză sistematică și meta-analiză. Plus unu. 2014; 9 : e95485. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]42. Ng KK, Poon RT, Lo CM, Yuen J, Tso WK, Fan ST. Analiza tiparului de recurență și a influenței sale asupra rezultatului supraviețuirii după ablația prin radiofrecvență a carcinomului hepatocelular. Jurnal de chirurgie gastrointestinală. 2008; 12 : 183–191. [ PubMed ] [ Google Scholar ]43. Lencioni R, Cioni D, Crocetti L, Franchini C, Pina CD, Lera J, Bartolozzi C. Carcinom hepatocelular în stadiu incipient la pacienții cu ciroză: rezultate pe termen lung ale ablației prin radiofrecvență percutanată. Radiologie. 2005; 234 : 961–967. [ PubMed ] [ Google Scholar ]44. Takahashi S, Kudo M, Chung H, Inoue T, Ishikawa E, Kitai S, Tatsumi C, Ueda T, Minami Y, Ueshima K, Haji S. Răspunsul inițial la tratament este esențial pentru îmbunătățirea supraviețuirii la pacienții cu carcinom hepatocelular care au suferit terapie curativă de ablație prin radiofrecvență. Oncologie. 2007; 72 : 98–103. [ PubMed ] [ Google Scholar ]45. Chen TM, Chang TM, Huang PT, Tsai MH, Lin LF, Liu CC, Ho KS, Siauw CP, Chao PL, Tung JN. Managementul și supraviețuirea pacientului în carcinomul hepatocelular: contează nivelul de experiență al medicului? Jurnal de gastroenterologie și hepatologie. 2008; 23 : e179–188. [ PubMed ] [ Google Scholar ]46. Johnson JA, Gale EA. Diabetul, utilizarea insulinei și riscul de cancer: studiile observaționale sunt o parte a soluției sau o parte a problemei? Diabet. 2010; 59 : 1129–1131. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]47. Walker JJ, Johnson JA, Wild SH. Tratamente pentru diabet și riscul de cancer: importanța luării în considerare a aspectelor expunerii la medicamente. Lanceta Diabet și endocrinologie. 2013; 1 : 132–139. [ PubMed ] [ Google Scholar ]48. Stang A. Evaluarea critică a scării Newcastle-Ottawa pentru evaluarea calității studiilor non-randomizate în meta-analize. Revista europeană de epidemiologie. 2010; 25 : 603-605. [ PubMed ] [ Google Scholar ]49. Guyot P, Ades AE, Ouwens MJ, Welton NJ. Analiza secundară îmbunătățită a datelor de supraviețuire: reconstituirea datelor din curbele de supraviețuire Kaplan-Meier publicate. Metodologia cercetării medicale BMC. 2012; 12 : 9. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]50. Higgins JP, Thompson SG, Deeks JJ, Altman DG. Măsurarea inconsecvenței în metaanalize. BMJ (ed. Cercetare clinică) 2003; 327 : 557-560. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]51. Mantel N, Haenszel W. Aspecte statistice ale analizei datelor din studiile retrospective ale bolii. Jurnalul Institutului Național al Cancerului. 1959; 22 : 719–748. [ PubMed ] [ Google Scholar ]52. Egger M, Davey Smith G, Schneider M, Minder C. Bias în meta-analiză detectată printr-un test simplu, grafic. BMJ (Clinical research ed) 1997; 315 : 629-634. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]53. Begg CB, Mazumdar M. Caracteristicile operaționale ale unui test de corelare a rangului pentru prejudecățile publicării. Biometrie. 1994; 50 : 1088–1101. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

Articolele de la Oncotarget sunt furnizate aici prin amabilitatea Impact Journals, LLC

Vitamina K: o modalitate potențială de tratament al cancerului hepatic

aug.20

Sofia Dahlberg ¹ și Ulf Schött ^{1,2 *}

Informații despre autor și articol

Abstract

Textul articolului principal

Introducere

Carcinomul hepatocelular (HCC) este cea mai frecventă formă de cancer hepatic primar și aproximativ 75% din cazuri sunt atribuite infecțiilor virale cu hepatită B sau C [1]. Mai mult, HCC este a doua cauză principală de deces prin cancer depășită doar de tumori maligne pulmonare [2] și este adesea de nerezecat la diagnostic. Cel mai frecvent utilizat marker tumoral pentru HCC este alfa-fetoproteina (AFP), dar eficiența sa de diagnostic este slabă, în special la persoanele infectate cu hepatită [3]. Prin urmare, mai buni markeri de diagnostic și prognostic ar ajuta la detectarea timpurie și tratamentul HCC.

Vitamina K este cunoscută mai ales pentru implicarea sa în hemostază, unde funcționează ca un cofactor în γ-carboxilarea factorilor de coagulare hepatică II, VII, IX și X, precum și a proteinelor C, S, Z și M. Această modificare post-traductivă induce o schimbare conformațională care permite proteinei să lege ionii de calciu, un pas crucial pentru implicarea lor în hemostază [4]. În plus față de factorii de coagulare menționați anterior, au fost identificate mai multe proteine dependente de vitamina K provenite din țesuturi hepatice suplimentare și sunt denumite în mod colectiv proteine Gla. Dovezile acumulate din studiile preclinice sugerează că vitamina K și proteinele Gla sunt implicate într-o gamă largă de boli, cum ar fi bolile cardiovasculare, osteoporoza și cancerul [5].

Proteinele induse de absența vitaminei K pentru factorul II (PIVKA-II sau protrombină des-gamma-carboxi, DCP) este o măsură a protrombinei hipocarboxilate și s-a sugerat că funcționează ca un marker tumoral pentru HCC. În secțiunile următoare, sunt discutate eficacitatea PIVKA-II ca marker tumoral și rolul vitaminei K în tratamentul HCC.

Performanța PIVKA-II ca marker tumoral HCC

Studii multiple au arătat creșterea PIVKA-II la pacienții cu HCC, iar PIVKA-II este considerat un complement valoros al AFP. În timp ce măsura AFP reflectă sarcina tumorală intrahepatică, PIVKA-II se corelează cu invazia vasculară și cu boala extrahepatică [6]. Un mecanism de acțiune sugerat al PIVKA-II este acela că facilitează secreția metaloproteinazei matriciale (MMP) 9 și MMP-2 prin calea ERK1 / 2MAPK [7]. Aceste enzime proteolitice au capacitatea de a degrada matricea extracelulară și de a facilita metastaza [8]. PIVKA-II a fost, de asemenea, sugerat să funcționeze ca un mitogen autocrin / paracrin pentru celulele HCC prin stimularea căii Met-JAK-STAT [9]. Mecanismul care stă la baza creșterii PIVKA-II nu este înțeles complet, dar au fost propuse mai multe explicații. De exemplu,experimentele pe animale au arătat o activitate gamma-carboxilază scăzută în țesutul tumoral hepatic [10]. Alte sugestii sunt insuficiența vitaminei K în celulele tumorale [11], absorbția defectuoasă a vitaminei K [12] și sinteza excesivă a precursorilor protrombinei [13].

Există mai multe studii care compară capacitatea de diagnostic a diferiților biomarkeri pentru HCC. S-a raportat că utilizarea PIVKA-II în combinație cu AFP îmbunătățește precizia [14]. Alte studii privind exclusiv persoanele infectate cu hepatita B sugerează că PIVKA-II este superior AFP și că combinația ambelor măsuri poate spori detectarea precoce [15]. Un studiu recent cuprinzând aproximativ 2 000 de participanți a concluzionat că 230 de cazuri de HCC ar fi fost neglijate dacă se utilizează AFP singură și că nivelurile de PIVKA-II au crescut cu peste un an înainte de descoperirea imaginii [16]. De asemenea, nivelurile ridicate de PIVKA-II au fost asociate cu un risc mai mare de a dezvolta HCC într-o perioadă de 2 ani la populațiile cu risc ridicat cu hepatită cronică B.care este un factor de prognostic major în HCC [18]. În plus față de PIVKA-II și AFP, au fost propuși și alți câțiva biomarkeri HCC. Datorită eterogenității HCC, se pare că o combinație de biomarkeri este favorabilă, dar în prezent nu au fost efectuate studii la scară largă care să investigheze combinația optimă de biomarkeri [19].

În plus față de hepatita virală, afectarea hepatică indusă de alcool este un factor major de risc pentru dezvoltarea CHC [20]. Într-un studiu care a investigat nivelurile de PIVKA-II la pacienții cu boală hepatică alcoolică benignă (ALD), 21% din cazuri au avut niveluri de PIVKA-II peste valoarea limită utilizată în mod obișnuit pentru markerul tumoral [21]. Rezultate similare au fost demonstrate într-un studiu mai recent [22]. Mecanismul cauzal al creșterii PIVKA-II este necunoscut. S-a sugerat deficitul de vitamina K [23], dar nu a fost demonstrată nicio corelație între nivelurile plasmatice de vitamina K și PIVKA-II [21, 24]. Efectul confuz al ALD asupra nivelurilor PIVKA-II ar trebui să fie luat în considerare la interpretarea nivelurilor PIVKA-II și ar putea fi necesară o valoare diferită pentru a evita rezultatele fals pozitive la pacienții cu ALD.

Tratamentul HCC cu vitamina K

Datorită efectelor menționate mai sus ale PIVKA-II asupra celulelor tumorale HCC și că PIVKA-II pare să predispună la boli mai agresive [25], studiile au investigat dacă administrarea vitaminei K ar putea afecta evoluția bolii. Vitamina K apare în mod natural în două forme, vitamina K1 și vitamina K2, care se subdivizează în funcție de lungimea și saturația lanțului său lateral [26]. În plus, există forme sintetice de vitamina K3-K5. Vitamina K2 subspecie MK-4 este un ligand la receptorul de steroizi și xenobiotice (SXR) care reglează creșterea celulară. Studiile in vitro au demonstrat suprimarea proliferării și motilității celulelor HCC dependente de vitamina K2 [27]. Mai mult, administrarea de vitamina K la pacienții cu HCC a scăzut ulterior nivelurile plasmatice de PIVKA-II [28].Acest studiu a demonstrat, de asemenea, că nivelurile PIVKA-II nu au fost corelate cu nivelurile plasmatice ale derivaților de vitamina K, sugerând că creșterea nu se datorează deficitului de vitamina K, ci mai degrabă legată de metabolismul tumorii.

În 2004, s-a raportat că suplimentarea cu vitamina K2 previne HCC la femeile cu ciroză virală [29]. De atunci, s-au efectuat mai multe studii de suplimentare cu MK-4 la pacienții cu HCC, cu rezultate mixte. Deși câteva studii mai mici au demonstrat o reducere a recurenței HCC la administrarea MK-4 [30], acest efect nu a fost confirmat la populațiile mai mari de studiu care utilizează MK-4 [31]. Într-o meta-analiză recentă a cinci studii randomizate de control care au evaluat efectul vitaminei K2 asupra recurenței HCC după rezecție, supraviețuirea nu a fost îmbunătățită [32]. Cu toate acestea, s-au observat efecte sinergice atunci când MK-4 și inhibitorul multikinazei sorafenib au fost administrate împreună [33]. Derivatul de vitamina K2 MK-7 are un timp de înjumătățire mai lung și o biodisponibilitate mai bună atât pentru proteinele Gla hepatice, cât și pentru cele extrahepatice [34].Mai multe studii clinice care investighează efectele MK-7 asupra bolilor vasculare sunt în curs de desfășurare [35], dar efectele sale asupra HCC nu au fost investigate.

Vitamina K3 a fost investigată în mai multe studii datorită capacității sale raportate de a genera ROS. Într-un studiu clinic în care vitamina K3 a fost administrată pacienților cu reducere avansată a HCC a dimensiunii tumorii a fost demonstrată la 17% din populația de pacienți. Acești pacienți au demonstrat, de asemenea, un timp mediu de supraviețuire crescut, dar mortalitatea generală nu a fost afectată [36]. Vitamina K3 a fost, de asemenea, utilizată ca radio-sensibilizant, iar studiile mai vechi au demonstrat un timp de supraviețuire crescut comparativ cu radioterapia singură la pacienții cu carcinom bronșic [37]. Potențierea similară a fost demonstrată în experimentele pe animale [38, 39], dar dacă acest lucru poate fi utilizat ca terapie adjuvantă la oameni nu a fost studiat în ultimii ani.Vitamina K3 nu a fost studiată pe larg la om din cauza toxicităților sale hematologice legate de metabolismul glutationului eritrocitar [40]. Cu toate acestea, dacă se administrează concomitent cu vitamina C, doza necesară scade din cauza efectelor sinergice. Un mic studiu clinic care a investigat efectul vitaminei K3 și vitaminei C asupra cancerului de prostată rezistent la terapie a demonstrat o scădere a ratei de creștere a antigenului specific prostatei (PSA) după 12 săptămâni [41],

Figura 1:

Referințe

Drepturi de autor

Vizualizați articole similare

Împărtășiți-vă gândurile și experiențele

https://www.peertechzpublications.com/articles/AHR-3-117.php

marturie cancer metastaze hepatice si pulmonare , in ultima faza , cu ascita,casexie

mart.13

Buna ziua, tuturor.

Asa cum am spus in cateva comentarii o sa va povestesc experienta mea cu mama diagnosticata cu metastaze hepatice si pulmonare.

Atașez mai jos diagnosticele cu care am scos-o din spital, mentionez ca nu a facut chimioterapie intrucat era foarte slabita, doctorul afirmând că viața ei se poate termina oricand. La externare nu era deplasabila, nu putea inghiti decat 5-6 lingurite de supa, avea greata continua insotita de o sputa spumoasa si o tuse seaca, scaun de culoare negru vascos, dormea mai tot timpul iar durerea de ficat era apăsătoare, urmatoarele 2 luni petrecandu-le doar pe partea dreapta. Am vrut să îi dau hidrazina imediat insa ptr faptul că nu manca era in pericol de hipoglicemie asa ca pentru inceput a facut timp de 2 săptămâni Aminosteril N-hepa, vit. C si B6 IV. In timpul acesta a reușit să înghită cate 2 capsule/zi de ciuperci medicinale, magneziu L-threonate, cate un galbenus de gaina crud de a 2-a zi amestecat cu o lingura de bors crud si cate 100 ml colostru seara. Starea ei s-a îmbunătățit usor dar tot nu putea manca. I-am dat apoi hidrazina, începând cu o capsulă pe zi, am crescut progresiv pana la 3 cap/zi. Dupa 5 zile, greata a dispărut, sputa la fel dar si tusea. In total i-am dat hidrazina timp de 9 zile, după care am hotarat sa nu ii mai dau deoarece am considerat scopul hidrazinei atins si vroiam sa o scot din ascita întrucât era un pericol ptr viata ei iar tensiunea cu greu se tinea in frau plus ca a necesitat de cateva ori aparatul de oxigen. Furosemidul, spironolactona si tot ce are medicina alopata ptr ascita, insuficienta renala n-au niciun efect in stadiul acela grav, ci mai mult complica. Deci fara ele, fără ser fiziologic (sodiu) si fara saruri Ringer. Cu citratul de potasiu picioarele mamei s-au dezumflat dupa 1 zi de administrare iar la o saptamana era dezumflat tot corpul mai putin palma stanga care a cedat dupa a 2-a saptamana. De asemenea ii faceam masaj al intregului corp cu ulei esential de tamaie (cateva pic in ulei de cocos). Atunci am constat cu durere cat era mama de slaba, avea 49.5 kg.. In perioada aceea i-am refacut analizele facute in spital plus altele pe care le vroiam eu pentru a-mi face o idee de necesarul corpului ei. Rezultatele au iesit foarte proaste iar cunoscutii tot nu ii dadeau vreo sansa. De exemplu calprotectina era 1500. Au urmat apoi clisme cu cafea care s-au dovedit miraculoase pentru ficatul mamei, acesta relaxandu-se dupa fiecare procedură (se dezumfla cate putin) si unul cate unul a inceput sa ia toate suplimentele pe care le-am considerat necesare ptr ea plus ceai verde, bicarbonat de sodiu, lamaie, verdeturi, condimente pentru a alcaliniza corpul. Pentru sucuri de legume nu era pregătit corpul datorita instabilității glicemiei asa ca m-am rezumat pe fiert si salate. Si cand începusem să adaug nucile si semințele, mama s-a hotărât ca nu mai vrea sa manance legume ci vrea brânză, carne, gratare. Ea nu știa atunci ce are. In toata aceasta perioada toata lumea ma îndemna să nu o mai chinui si sa ii dau ce pofteste dar nu am putut să renunț sa incerc sa o salvez. Totusi cand ea mi-a zis ca nu mai vrea legume am fost de acord ca timp de o lună sa ii fac tot ce poftește cu condiția să ia în continuare tot protocolul de suplimente. Asa ca timp de o lună s-a bucurat de proteina animală iar seara i se facea insulina insa nimic nu s-a schimbat în starea ei, nu se putea ridica din pat. Nimic!! Dupa o lună m-a întrebat ce are si i-am spus. Nu a fost mirată, cica ii spuseseră din spital…După acel moment mama a vrut tot ce i-am dat cu mare bucurie. După 2 săptămâni mergea singurica in jurul patului. La 3 starea afara in curte, la masa. A urmat bai de bicarbonat de sodiu si sulfat de magneziu, miscare pe stepper, masaj, o dieta low carb, legume fierte, coapte, in salate, germeni, cu condimente (chimen, turmeric, oregano, cimbru), ardei iute la fiecare masa, ghimbir, cure de detox cu usturoi, ” oil pulling”, in cure toamna si primavara consuma lapte batut de bivolita, diverse nuci si seminte hidratate in prealabil ( 12 buc de samburi amari de caisa/zi, chia, in, susan, chimen negru, pudră de roscove, cuisoare, scorțișoara), ulei de masline, cocos, avocado, unt clarifiat sau ghee. Carbohidrati consuma doar naut, quinoa, amarant, si ocazional, in prezent cand glicemia este stabilă mananca mămăligă si cartof copt. Ocazional ou proaspăt, aproape crud. Carne deloc. Am omis sa va spun ca escarele cu care a venit din spital s-au vindecat foarte repede cu crema de smirna de la Laur med iar una dintre ele formată pe cartilajul urechii drepte a trecut in 3-4 zile cu propolis si suc proaspăt de rostopasca. Cicatridina mult recomandată, poate ca ati vazut ca are aluminiu si alte prostii care nu ii trebuiesc omului in acel moment. La sfârșitul lunii martie mama face 1 an de când s-a externat. Mai are doar o singură tumoare pe ficat, si ea redusă, toate analizele au revenit la normal, tensiunea este normala, glicemia stabila, si totul fara niciun medicament. Doctorul ecograf care i-a urmărit evolutia a rămas blocat, neputandu-si ascunde uimirea. Sper ca povestea mea sa ofere o imagine pozitivă celor aflați în stadii terminale iar apartinatorilor sa nu renunțe la cei aflați în suferință. Am vrut să scot în evidență ca suplimentele singure nu pot face minuni daca nu sunt susținute de ceea ce mâncăm si ca rezolvarea se poate gasi in lucruri simple. Trebuie doar sa ne cunoastem pe noi înșine și să spunem „da” atunci când trebuie.

Acesta este protocolul pe care il urmeaza mama:

Magneziu L-threonate

Ciuperci medicinale(turkey tail, sun Mushroom, maitake, cordyceps, lion’s mane, reishi, shitake)+astragalus

N-acetil-cisteina

acid alfa lipoic

omega 3

coenzima q10

L-glutathione

Antioxivita

vit E + seleniu b6 ( pyridoxal 5′ phosphate)

zinc bisglycinate

b3 (niacin)

citrat de potasiu

vit D3 +k2

vit C(liposomal sodium ascorbate)

resveratrol

milk tristle armurariu

MSM+turmeric+boswelia

artemisin

In perioadele critice ale mamei Dumnezeu mi-a scos în cale oameni frumosi care mi-au oferit info prețioase și cărora le mulțumesc! (Cristian Gologan si Katy Parvou)

am sters analizele si scanarile din motive de confidentialitate- le regasiti partial in linkul de mai jos

https://www.facebook.com/groups/1632008830432228/permalink/2610324389267329/?comment_id=2611024915863943&notif_id=1615571275678190&ref=notif&notif_t=group_comment_follow

Un caz de carcinom hepatocelular rezistent la doxorubicină după transplantul hepatic care arată răspuns la produsul medicamentos din plante, extract de Rhus verniciflua Stokes

iul.30

Abstract

Nu există un protocol stabilit dovedit a fi benefic pentru tratamentul recurenței carcinomului hepatocelular după transplant hepatic. Doar câteva rapoarte au arătat ca tratamentul direct prin operație sau ablație să fie predictori independenți de supraviețuire pentru recurența localizată. Mai mult, necesitatea imunosupresiei pentru a preveni respingerea alografei îi face pe mulți medici să ezite să administreze chimioterapia sistemică. Acest raport de caz documentează un caz în care administrarea unui produs pe bază de plante, un extract din arborele de lac, Rhus verniciflua Stokes, a fost asociată cu o scădere a dimensiunii metastazelor pulmonare la un pacient cu carcinom recurent hepatocelular după transplantul hepatic refractar la doxorubicină . Acest pacient a prezentat o supraviețuire prelungită în comparație cu timpii de supraviețuire medii și o toxicitate mică.

PMID:: 20308087
DOI:: 10.1177 / 1534735409359772

[Indexat pentru MEDLINE]

2010 mar; 9 (1): 100-4. doi: 10.1177 / 1534735409359772.

Kim KS ¹ , Jung HS , Choi WC , Eo WK , Cheon SH .

Informatia autorului

1: Colegiul de Medicină Orientală Kyunghee, Seul, Coreea.

Erratum în

Integr Cancer Ther. 2010 mar; 9 (1) doi: 10.1177 / 1534735411416420. Kim, Hye Ryun [eliminat].
Integr Cancer Ther. 2011 septembrie; 10 (3): 299.

Administrarea de silibinină îmbunătățește insuficiența hepatică datorită infiltrării hepatice extinse la pacient cu cancer de sân

ian.8

1111111111111111

Abstract

FUNDAL:

Silibinina exercită efecte hepatoprotectoare, antiinflamatorii și antifibrotice. Mai multe studii preclinice au arătat activitate antitumorală a silibininei în liniile celulare de cancer mamar.

RAPORT DE CAZ:

Prezentăm cazul unui pacient cu cancer de sân puternic pre-tratat, cu infiltrație hepatică extensivă. Pacientul prezentat cu insuficiență hepatică progresivă în ciuda mai multor tratamente chimioterapice, incluzând paclitaxel, capecitabină și vinorelbină. După patru cicluri de tratament cu chimioterapie de linia a patra, constând din carboplatină și gemcitabină, rezultatele testelor de sânge hepatice ale pacientului s-au deteriorat până la niveluri care amenință viața. Utilizarea compasională a medicamentului Legasil®, un nou produs nutrițional disponibil în comerț, care conține o nouă formulă de silibinină(armurariu), a fost oferit pacientului, în conformitate cu articolul 37 din Declarația din 2013 de la Helsinki. După inițierea tratamentului, pacientul a prezentat o îmbunătățire clinică și hepatică, care a permis pacientului să continue chimioterapia paliativă.

CONCLUZIE:

Acesta este primul raport de caz al unui beneficiu clinic al administrării silibininei la un pacient cu cancer de sân.

2014 Aug; 34 (8): 4323-7.

Bosch-Barrera J ¹ , Corominas-Faja B ² , Cuyàs E ² , Martin-Castillo B ³ , Brunet J ⁴ , Menendez JA ² .

Informatia autorului

1: Oncologie Oncologică, Institutul Catalan de Oncologie, Girona, Catalonia, Spania Institutul de Cercetare Biomedicală din Girona (IDIBGi), Girona, Catalonia, Spania jbosch@iconcologia.net.
2: Girona Institutul de Cercetări Biomedicale (IDIBGi), Girona, Catalonia, Spania Grupul Metabolism și Cancer, Laboratorul de Cercetare Transferală, Institutul Catalan de Oncologie, Girona, Catalonia, Spania.
3: Girona Institutul de Cercetare Biomedicală (IDIBGi), Girona, Catalonia, Spania Unitatea de Cercetare Clinică, Institutul Catalan de Oncologie, Girona, Catalonia, Spania.
4: Oncologie Oncologică, Institutul Catalan de Oncologie, Girona, Catalonia, Spania Girona Institutul de Cercetare Biomedicală (IDIBGi), Girona, Catalonia, Spania.

PMID:: 25075066

Suplimentarea de plante medicină chineză îmbunătățește supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic.

aug.19

Abstract

FUNDAL:

Medicina tradițională chineză (TCM) este un tratament alternativ pentru cancer cu efectul său prin stimularea răspunsului imun gazdă pentru activitatea citotoxică împotriva cancerului hepatic. Niciun studiu nu a evaluat tratamentul TCM privind supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic.

PACIENȚI ȘI METODE:

Acest studiu a determinat dacă combinația TCM și tratamentul convențional al cancerului afectează supraviețuirea pacienților cu cancer hepatic. Un studiu de cohortă retrospectiv a fost efectuat la 127 237 de pacienți nou diagnosticați cu cancer de ficat din 2000 până în 2009 în baza de date a Programului Național de Asigurări de Sănătate.

REZULTATE:

Dintre acești pacienți, 30 992 (24,36%) au utilizat TCM pentru tratamentul cancerului de ficat. Toți pacienții au fost urmăriți până în anul 2011. Urmărirea medie a fost de 5,67 ani (SD 1,47) pentru utilizatorii TCM și 5,49 ani (SD 3,64) pentru utilizatorii non-TCM.

În comparație cu pacienții fără utilizarea TCM, pacienții cu TCM au fost semnificativ asociați cu un risc scăzut de deces [raport hazard (HR) = 0,65, interval de încredere 95% (CI) = 0,64-0,66], cu ajustare multivariată.

A fost observat, de asemenea, un efect semnificativ semnificativ de protecție a utilizării TCM în diferite subgrupuri de boli hepatice cronice.

Jia Wei Xiao Yao San(

Radix Bupleuri Chinensis
Radix Angelicae Sinensis
Radix Paeoniae Lactiflorae
Rhizoma Atractylodis Macrocephalae
Sclerotium Poriae Cocos
Radix Glycyrrhizae Uralensis
Cortex Moutan Radicis
Fructus Gardeniae Jasminoidis
Herba Menthae Haplocalycis
Rhizoma Zingiberis Recens

(Chai Hu)
(Dang Gui)
(Bai Shao)
(Bai Zhu)
(Fu Ling)
(Gan Cao)
(Mu Dan Pi)
(Zhi Zi)
(Bo He)
(Sheng Jiang)

) (HR = 0,89, CI 95% = 0,81-0,96) și Chai Hu Shu Gan Tang[

Radix Bupleuri Chinensis
Pericarpium Citri Reticulatae
Radix Paeoniae Lactiflorae
Fructus Aurantii
Rhizoma Ligustici Chuanxiong
Rhizoma Cyperi Rotundi
Radix Glycyrrhizae Uralensis] (HR = 0,86, CI 95% = 0,78-0,95) au fost cei mai eficienți agenți plante TCM care au îmbunătățit supraviețuirea.

CONCLUZII:

Acest studiu de cohortă a furnizat informații că terapia adjuvantă cu TCM poate îmbunătăți supraviețuirea la pacienții cu cancer hepatic. Sunt necesare studii suplimentare pentru a confirma rolul potențial al TCM în HCC.

PMID:: 25875878
DOI:: 10.1111 / liv.12847

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25875878

2015 Dec; 35 (12): 2595-602. doi: 10.1111 / liv.12847. Epub 2015 29 aprilie.

Liao YH ^1, ² , Lin CC ^3, ^4, ⁵ , Lai HC ^4, ⁶ , Chiang JH ^7, ^8, ⁹ , Lin JG ¹ , Li TC ^8, ^9, ¹⁰ .

Informatia autorului

1: Scoala de Medicina Chineza, China Medical University, Taichung, Taiwan.
2: Școala de medicină chineză pentru post-bacalaureat, Universitatea I-Shou, Kaohsiung, Taiwan.
3: Departamentul de Medicina de Familie, China Medical University Hospital, Taichung, Taiwan.
4: Scoala de Medicina, Colegiul de Medicina, Universitatea de Medicina din China, Taichung, Taiwan.
5: Departamentul de Cercetări Medicale, China Medical University Hospital, Taichung, Taiwan.
6: Divizia de Hepatogastroenterologie, Departamentul de Medicina Interna, Spitalul Universitar Medical din China, Taichung, Taiwan.
7: Biroul de Management pentru Date de Sănătate, China Medical University Hospital, Taichung, Taiwan.
8: Centrul de Cercetare pentru Medicina Chineza si Acupunctura, China Medical University, Taichung, Taiwan.
9: Institutul de Biostatistică, Universitatea de Medicină din China, Taichung, Taiwan.
10: Departamentul de Administrare a Sănătății, Colegiul de Științe Medicale și Sănătate, Universitatea Asia, Taichung, Taiwan.

Medicină tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic

aug.16

https://patents.google.com/patent/CN101041043A/zh

https://patents.google.com/patent/CN101041043A/en

abstract

Un medicament tradițional chinez pentru tratarea cancerului hepatic, care implică un medicament tradițional chinezesc. Obiectul prezentei invenții este de a rezolva problema că chirurgia, radioterapia și chimioterapia pacienților cu cancer hepatic provoacă leziuni ale corpului. Medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului hepatic în prezenta invenție cuprinde 10-20 părți de acarieni de sol, 10-20 părți de viermi întregi, 10-20 părți de arme, 5-15 părți gandaci, 10-20 părți de stupoare, 10 – 20 părți Corydalis, 10-15 părți ghimbir, 5-15 părți trigonal, 5-15 părți Pampas, 15-20 părți Scrophularia, 15-20 părți Prunella, 10-20 părți spută, 10-15 părți Saponin, 10-15 părți de piele verde, 10-20 părți de efectiv, 10-15 părți din uter, 0,5-2 părți variegata, 10-20 părți Fritillaria, 20-30 părți notoginseng, 15-30 părți bujor alb 10-20 părți de iarbă de gheare, 5-15 părți salvie de munte, 15-20 părți de lipitori, 10-20 părți de sânge, 20-30 părți de armură, 10-20 părți tulpini, 10-20 părți de crustă uscată 20-30 părți astragalus, 20-30 părți capilare, 10-20 părți Bupleurum, 15-20 părți Solanum nigrum L. și 15-20 părți Baiying. Prezenta invenție poate elimina tumora și anticancerul, iar rata efectivă totală poate ajunge la 96,7%, iar rata de vindecare totală poate ajunge la 63,4% sau mai mult.

wood louse 10-20, buthus martensi kirsch 10-20, pangolin scales 10-20, centipede 5-15, wasp’s nest 10-20, corydalis tuber 10-20, burred tuber 5-15, rhizoma zedoariae 5-15, scrophularia root 15-20, selfheal 15-20, Chinese honey locust 10-15, green tangerine orange peel 10-15, blister bug 0.5-2, Sichuan fritillary bulb 10-20, notoginseng 20-30, bletilla striata 15-30, pleione rhizome 10-20, leech 15-20, dragon’s blood resin 10-20, turtle shell 20-30, astragalus root 20-30, capilary Artemisia 20-30, bupleurum root 10-20 and black nightshade 15-20.

plantele medicinale traditionale chinezesti TCM / CHM si koreene si formulele derivate cu si din acestea le cautati dupa nume pe

http://www.activeherb.com/

http://www.activeherb.com/chineseherbs

descriere

Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepaticDomeniul tehnic

Invenția se referă la o medicină tradițională chineză.

Tehnologie de fundal

Cu poluarea crescândă a mediului, oamenii sunt afectați de factori chimici, fizici, biologici și alți factori (cum ar fi fumatul, alcoolul, radiațiile ionizante, radiațiile ultraviolete și radiațiile ultraviolete, poluarea aerului), incidența cancerului devine tot mai mare. Printre acestea, cancerul hepatic este unul dintre tumorile comune maligne din China. Rata mortalității este ridicată, clasându-se pe locul trei în clasa de decese tumorale maligne după cancerul gastric și cancerul esofagian, iar al doilea în zonele rurale în unele zone. Rata anuală a morții din China de la cancer la ficat este de aproximativ 110.000, reprezentând 45% din numărul de decese cauzate de cancer la ficat. Medicina moderna trateaza cancerul in principal prin interventii chirurgicale, radioterapie si chimioterapie, dar aceste metode sunt defecte, numai pacientii in varsta pot fi supusi unei interventii chirurgicale. Tratamentul chirurgical este un mijloc de tratament local pentru celulele tumorale transferate in sange sau alte tesuturi. Nici un efect, radioterapia și chimioterapia nu pot ucide în mod eficient celulele canceroase, dar, în același timp, va distruge celulele normale și va determina inhibarea funcției imune a pacientului și vor apărea mai multe complicații, provocând mari daune corpului pacientului. În prezent, există și câteva medicamente tradiționale chinezești pentru tratarea cancerului la ficat, dar toate acestea sunt utilizate în principal pentru ameliorarea durerii și ameliorarea simptomelor și nu pot juca un rol în lupta împotriva cancerului și a eliminării tumorilor.

Rezumatul invenției

Scopul prezentei invenții este de a rezolva problema că metodele existente de chirurgie, radioterapie și chimioterapie dăunează organismului uman în timpul tratamentului cancerului hepatic și oferă un medicament tradițional chinez pentru tratarea cancerului hepatic. Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic este 10-20 părți acarieni de sol, 10-20 părți de viermi întregi, 10-20 părți gunsam, 5-15 părți gandacii, 10-20 părți apicole, 10-20 părți Corydalis. 10-15 părți vierme de ghimbir, 5-15 părți trigonal, 5-15 părți scutellaria, 15-20 părți Scrophulariaceae, 15-20 părți Prunella vulgaris, 10-20 părți spută, 10-15 părți saponină 10-15 părți de piele verde, 10-20 părți de pășunat, 10-15 părți de gardian, 0,5-2 părți variegata, 10-20 părți Fritillaria, 20-30 părți de notoginseng, 15-30 părți de bujor alb, 10- 20 părți din iarba ghearelor, 5-15 părți din salvie de munte, 15-20 părți de lipitori, 10-20 părți de sânge, 20-30 părți de armură, 10-20 părți de tulpini, 10-20 părți de sable uscate, 30 părți Astragalus, 20-30 părți capilare, 10-20 părți Bupleurum, 15-20 părți Solanum nigrum L. și 15-20 părți Baiying. Invenția este un medicament pur natural chinezesc, nu are efecte secundare și nu dăunează corpului uman. Prin utilizarea clinică, invenția are un efect curativ semnificativ asupra tratamentului cancerului de ficat și a cirozei hepatice, iar efectul este bun, rata efectivă totală fiind de 96,7%, iar rata de vindecare totală este mai mare de 63,4%.

Medicamentul tradițional chinezesc al invenției este preparat conform teoriei de rupere a flegmei, ameliorarea durerii și reducerea inflamației și generarea de sânge și qi. Utilizarea este după cum urmează: măcinarea pe suprafața fină, amestecarea prin 90-120 ochiuri, sterilizarea sterilă și umplerea în capsule. Oral, de trei ori pe zi, 3-5 capsule de fiecare dată, fiecare greutate fiind de 0,5g. 1 lună este un curs de tratament.

Invenția este aplicabilă în special pacienților care nu sunt potriviți pentru intervenții chirurgicale și recurențe după chimioterapie, chimioterapie sau chirurgie.

Acarienii chinezi din soluri medicinale (lăcuste de pământ, elemente de pământ) – funcție și indicații: spargerea sângelui, continuarea oaselor. Pentru fracturi de fascie, stază de sânge și spută.

Întregul vierme (spută completă) – funcția și indicațiile: stingeți vântul și sputa, antiinflamatorii și otrăvirea, durerea Tongluo.

Gunshan A (conține pangolină) – Indicații: prin laptele inferior, umflarea și drenajul, căutați vântul și rețeaua. Pentru simptomele menstruației, laptele matern, răni umflate, dureri articulare, amorțeală și reținere.

蜈蚣 – Indicații mecanice: Uraganul, Soluția, Atacul, Dispersia.

Procesul de rouă – funcția principală: uraganul, atacul otrăvurilor, uciderea insectelor.

Yan Husuo (Yuan Hu) – Indicații: sânge, dilatat, qi, durere. Tratamentul inimii, abdomenului, durerii genunchiului, menstruație neregulată, simptome, colaps, halou de sânge postpartum, rouă nesfârșită, vânătăi.

Viermele de mătase – funcția principală: uraganul este fix, flegma este împrăștiată. Pentru convulsii convulsive, dureri în gât, limfadenită submandibulară, paralizie nervoasă facială, piele toracică.

Trei margini – indicații: ruperea sângelui și eliminarea qi. Pentru simptomele sputei, stagnarea sângelui, mâncarea și umflarea.

Chirurgie Puffy – funcția principală: qi și sânge, elimina durerea.

Scrophulariaceae – Indicații: hranirea yinului, reducerea incendiului, eliminarea problemelor, detoxifierea.

Prunella – indicații: foc limpede, vedere, împrăștiate, umflături. Pentru ochi roșii și umflături, dureri de cap ale oaselor, dureri de cap, amețeli, convulsii, spută, umflarea chilotoraxului, goiter, tuberculoză a nodului limfatic, hiperplazie mamară, hipertensiune arterială.

蚤休 – Indicații mecanice: Îndepărtarea căldurii și detoxifierea, ameliorarea astmului și ameliorarea tusei, oprirea vântului și șocul.

Saponin ghimpe – funcție Indicatii: căutați vânt, trageți otravă, reduceți umflarea, puroi de evacuare.

Piele verde – principala funcție: Shugan gaz spart, noduri împrăștiate pentru a elimina flegma.

Stridii – Indicații: Concentrația Yin, Qianyang, antiperspirant, flegma, flegma, moale și fermă. Tratamentul vertijului, transpirației spontane, transpirațiilor nocturne, emisiei nocturne, turbidității, sângerării uterine, centurii, sputei, tumorii.

Indicarea funcției palatului gardian (gecko): uragan, șoc fix, risipit, detoxifiere. Tratând un accident vascular cerebral, vântul este dureros, spută și durere.

Spotted 蝥功功功 virtu

Chuan Fritillaria – Indicații: Runfei Sanjie, opriți flegma și flegma. Tratamentul oboselii, tusei, vărsăturilor și hemoptiziei, stagnarea inimii și a pieptului, sputa pulmonară, sputa pulmonară, spută, spută, gât, chila.

Sanqi – indicații: opriți sângerarea, dilatarea, umflarea și durerea. Tratamentul sângelui vărsături, hemoptizie, stază de sânge, sânge în scaun, stază de sânge, sângerare uterină, halou de sânge postpartum, lochie, stază de sânge, sângerare traumatică, dureri umflate.

Bujor alb (alb și) – Indicații: umpleți plămânii, opriți sângerarea, reduceți umflarea, mușchi, durere. Tratamentul leziunilor pulmonare, hemoptizia, starea sângelui, sângerarea la nivelul aurului, otrăvirea umflată, durerea ulcerală, arsurile din focul supei, fisurile la nivelul mâinilor și picioarelor.

Pisica cu gheare de pisică – principalele indicații: flegma vindecătoare, tuberculoză, malarie.

Shan Ci Gu – Funcție și indicații: umflare, dispersare, flegm, detoxificare. Tratamentul tumefacției, inflamației, durerilor în gât, șerpi, insecte, răniți de rabie.

Ottere – Indicații: sânge, spută, treci. Tratamentul stării de sânge, simptome, dureri abdominale, acumulare, amenoree la femei, sânge uscat în spută, cădere și dăunătoare, ochi roșii, du-te la spută.

Epuizare – funcția principală: sputa dilatativă, stoparea sângerării și a mușchilor. Tratamentul căderilor și pauzelor, leziuni interne și dureri, sângerarea traumatică nu este limitată, hemoroizii, colapsul hemoroizilor pentru o lungă perioadă de timp.

Armor – Indicații: Yin hrănit și căldură de curățare, Pinggan Xifeng, moale și fermă. Tratamentul de abur de muncă și de căldură în oase, deficit de yin și vânt, malarie malarie, scurgeri menstruale, șoc pediatric.

Lobelia (jumătate din lotus) – Indicații: Lishui, umflare, detoxificare. Tratamentul icterului, bronșitei, cirozei, ascitei, edemului, umflăturilor, diareei, dizenteriei, rănilor de șarpe, intepăturilor de albine, hemoroizilor umflați, otrăvii umflate, eczeme, dizenterie, vânătăi și entorse.

Nurca uscată – principalele indicații: căldură și detoxifiere, apă și umflături. Tratamentul flegmului, otravă umflată, flegm, tumoare, hărțuire, bronșită, bronșită cronică.

Astragalus (Huang Wei) – Indicații: Sănătate: masă solidă Yiwei, diureză, umflare, otrăvire și mușchi. Tratamentul transpirației, transpirații nocturne, staza de sânge, edem, spută nu se prăbușesc sau se prăbușesc pentru o lungă perioadă de timp.Utilizare: Buzhong Yiqi. Tratamentul leziunilor interne și a oboselii, deficiența splinei, diaree, prolaps rectal, deficit de qi și pierderi de sânge, colaps și toate bolile de deficit de qi și deficit de sânge.

Yin Chen (Yin Chen Artemisia) – Indicații: curățarea căldurii și amestecarea. Tratamentul icterului cu căldură umedă, feței urinare, mancarimii vântului.

Bupleurum – Indicații: Reconciliere, ficat, soare. Tratamentul de frig și fierbinte, piept plin de durere hipocondrică, amărăciune în gură, dureri de cap, amețeli, malarie, inferior anal, menstruație neregulată, ptoză uterină.

Solanum nigrum – Indicații: indicații: căldură, detoxifiere, circulația sângelui, umflături. Tratamentul hemoroizilor, carbuncilor, erizipetelor, vânătăi, bronșite cronice, nefritei acute.

Bai Ying (Bai Mao Teng) – Indicații: căldură, umezeală, uragan, detoxifiere. Tratamentul malariei, icterului, edemului, gonoreei, artralgiei reumatoide, erizipetelor, hemoroizilor.

Implementare detaliată

Particulară de realizare 1: Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic conform prezentei variante cuprinde 10-20 părți de acarieni de sol, 10-20 părți de viermi întregi, 10-20 părți de arme, 5-15 părți de gândaci, 10-20 în greutate. Stoc ascuns, 10-20 părți Corydalis, 10-15 părți ghimbir, 5-15 părți trigonal, 5-15 părți Poncho, 15-20 părți Scrophularia, 15-20 părți Prunella, 10-20 părți Hugh, 10-15 părți saponin, 10-15 părți de piele verde, 10-20 părți pășunat, 10-15 părți Guardian, 0,5-2 părți variegata, 10-20 părți Fritillaria, 20-30 părți notoginseng 15-30 părți de bujor alb, 10-20 părți de iarbă de gheare, 5-15 părți de salvie, 15-20 părți de lipitori, 10-20 părți de sânge, 20-30 părți de armură, 10-20 părți tulpini, 10 -20 părți de nurca uscată, 20-30 părți astragalus, 20-30 părți capillaris, 10-20 părți Bupleurum, 15-20 părți Solanum nigrum L. și 15-20 părți Baiying.

Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic conform prezentei variante se bazează pe teoria ruperii flegmei, ameliorarea durerii și reducerea inflamației și producerea de sânge și qi. Medicamentul tradițional chinez din prezenta variantă de realizare poate fi pulverizat într-o pulbere mai mică de 90 … 120 mesh și apoi amestecat uniform. După dezinfecția sterilă, capsula este luată într-o capsulă de 0,5 g pulbere de cereale.

Dozaj: oral, de trei ori pe zi, câte 3-5 capsule de fiecare dată. 3 luni este un curs de tratament. Femeile gravide sunt spânzurate.

Implementare detaliată

Două: Medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului conform prezentei variante cuprinde 11-19 părți de acarieni de sol, 11-19 părți de viermi întregi, 11-19 părți de arme, 6-14 părți de gândaci, 11-19 părți din stup, în raport greutate. 11,19 părți Corydalis, 10,5-14,5 părți ghimbir, 6-14 părți triunghiulare, 6-14 părți Pampas, 15,5-19,5 părți Scrophularia, 15,5-19,5 bucăți de Prunella, 11-19 părți spută, 10,5- 14,5 părți saponin, 10,5-14,5 părți de piele verde, 11-19 părți pășunat, 10,5-14,5 părți Guardian, 0,7-1,9 părți variegata, 11-19 bucăți Fritillaria, 21-29 părți notoginseng, 18-28 Bujor alb, 11-19 părți de iarbă de gheare, 6-14 părți salvie de munte, 15,5-19,5 părți de lipitori, 11-19 părți de sânge, 21-29 părți de armură, 11-19 părți tulpini, 11-19 părți uscate Suede, 21-29 părți Astragalus, 21-29 părți Yinchen, 11-19 părți Bupleurum, 16,5-19,5 bucăți de Solanum nigrum L. și 16,5-19,5 părți Baiying.

Implementare detaliată

3: Medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului conform prezentei variante cuprinde 12-18 părți de acarieni de sol, 12-18 părți de viermi întregi, 12-18 părți de arme, 7-13 părți de gândaci, 12-18 părți de stupină, în funcție de raportul în greutate. 12-18 părți de Corydalis, 11-14 părți de ghimbir, 7-13 părți trigonometrice, 7-13 părți Pampas, 16-19 părți Scrophularia, 16-19 bucăți de Prunella, 12-18 părți, 11- 14 părți saponin, 11-14 părți de piele verde, 12-18 părți de pășunat, 11-14 părți Guardian, 0,9-1,8 părți variegata, 12-18 părți Fritillaria, 22-28 părți notoginseng, 19-27 părți Bujorul alb, 12-18 părți de iarbă de gheare, 7-13 părți de salvie de munte, 16-19 părți de lipitori, 12-18 părți de sânge, 22-28 părți de armură, 12-18 părți de tulpini, 12-18 părți de coniac Fabricat din 22-28 părți astragalus, 22-28 părți capillaris, 12-18 părți Bupleurum, 16-19 bucăți de Solanum nigrum L. și 16-19 părți din Baiying.

Implementare detaliată

Patru: Medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului conform prezentei variante cuprinde 13-17 părți de acarieni de sol, 13-17 părți de viermi întregi, 13-17 părți de arme, 8-12 părți gandaci, 13-17 părți ale stupului, în funcție de raportul în greutate. 13-17 părți Corydalis, 11,5-13,5 părți ghimbir, 8-12 părți trigonal, 8-12 părți Pleurotus ostreatus, 16,5-18,5 părți Scrophulariae, 16,5-18,5 părți Prunella vulgaris, 13-17 părți spută, 11,5- 13,5 părți de saponină, 11,5-13,5 părți de piele verde, 13-17 părți de pășunat, 11,5-13,5 părți Guardian, 1-1,7 părți variegata, 13-17 bucăți de Fritillaria, 23-27 părți de notoginseng, 20-26 Bujorul alb, 13-17 părți de iarbă de gheare, 8-12 părți de salvie de munte, 16,5-18,5 părți de lipitori, 13-17 părți de sânge, 23-27 părți de armură, 13-17 părți tulpini, 13-17 părți Suede, 23-27 părți Astragalus, 23-27 părți Yinchen, 13-17 părți Bupleurum, 16,5-18,5 părți Solanum nigrum L. și 6,5-18,5 părți Baiying.

Implementare detaliată

V: Medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului conform prezentei variante cuprinde 14-16 părți de acarieni de sol, 14-16 părți de viermi întregi, 14-16 părți de arme, 9-13 părți gandaci, 14-16 părți din stup, în funcție de raportul în greutate. 14-16 părți Corydalis, 12-13 părți ghimbir, 9-11 părți trigonal, 9-11 părți Pampas, 17-18 părți Scrophularia, 17-18 bucăți de Prunella, 14-16 părți, 12- 13 părți de saponină, 12-13 părți de piele verde, 14-16 părți de pășunat, 12-13 părți din gardian, 1,2-1,6 părți plăci, 14-16 bucăți de Fritillaria, 24-26 părți din cele șapte, 21-25 Bujor alb, 14-16 părți de iarbă de gheare, 8-11 părți de salvie de munte, 17-18 părți de lipitori, 14-16 părți de sânge, 24-26 părți de armură, 14-16 părți tulpini, 14-16 părți Suede, 24-26 părți Astragalus, 24-26 părți Yinchen, 14-16 părți Bupleurum, 17-18 bucăți de Solanum nigrum L. și 17-18 părți Baiying.

Implementare detaliată

Șase: Medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului conform prezentei variante cuprinde 15 părți de acarieni de sol, 15 părți de viermi întregi, 15 părți de arme, 10 părți de gandaci, 15 părți de gândac, 15 părți de Corydalis, 12 părți de viermi de ghimbir, 10 părți în greutate. Trigeminal, 10 părți Pompon, 17,5 părți Scrophulariaceae, 17 părți Prunella vulgaris, 15 părți scorpion, 12,5 părți saponin, 12,5 părți pielii verzi, 15 părți pășunat, 12,5 părți Guardian, 1,5 părți pestrițe, 15 părți Chuan Fritillaria, 25 părți din Sanqi, 23 părți de bujor alb, 15 părți de iarbă de gheare, 10 părți de salvie de munte, 17,5 părți de lipitori, 15 părți de sânge, 25 de părți de armură, 15 bucăți de tulpini, 15 părți de sable uscate, 25 Astragalus, 25 părți Yinchen, 15 părți Bupleurum, 17,5 părți Solanum nigrum L. și 17,5 părți Baiying.

Rezumatul experimentelor farmacodinamice: 1. Criterii pentru selectarea cazurilor: Un total de 30 de pacienți cu cancer și pacienți cu ciroză cu manifestări clinice au fost selectați aleatoriu, incluzând cei mai tineri 36 de ani, cei mai mari 73 de ani, iar vârsta medie a fost de 54 de ani. Cel mai mic diametru al tumorii este de 10 cm, cel mai mic este de 5 cm, iar media este de 7,7 cm. Cursul cel mai scurt este de 1 an, cel mai lung este de 5 ani, iar cursul mediu al bolii este stadiul mediu și tardiv al cancerului hepatic. 28 dintre acestea au un istoric de tratament.

2, criteriile de diagnostic ale bolii: manifestate în principal ca dureri în zona ficatului, anorexie, oboseală, scădere în greutate, distensie abdominală, masă abdominală, febră, simptome comune ale icterului.

3, medicamente: oral, de trei ori pe zi, câte patru comprimate de fiecare dată, luați apă caldă. 1 lună este un curs de tratament.

4 ingrediente de medicamente: 15 acarieni de sol, 15 viermi întregi, 15 arme, 10 gandacii, 15 părți ale stupului, 15 părți Corydalis, 12 bucăți de ghimbir, 10 părți din cele trei margini, 10 părți ale sputei, 17,5 Scrophulariaceae, 17 prunella vulgaris L., 15 calamari, 12,5 saponine, 12,5 calmar, 15 calmar, 12,5 sacru sacru, 1,5 scorpion, 15 Fritillaria, 25 s. Bujorul alb, 15 părți din iarba ghearelor, 10 părți de salvie, 17,5 părți de lipitori, 15 părți de sânge, 25 de părți de armură, 15 bucăți de tulpini, 15 părți de sable uscate, 25 de părți din scutellaria, 25 de părți de salvie, Bupleurum, 17,5 părți Solanum nigrum L. și 17,5 părți Baiying.

5, criteriile de evaluare a eficacității: 1 vindecare: simptomele și examinarea obiectivă a semnelor pozitive au dispărut, observația continuă timp de șase luni până la un an fără recurență, 2 semnificativ: tumora este semnificativ redusă, alte simptome sunt clar disparute, durata vieții este prelungită; Îmbunătățirea, leziunile canceroase au fost reduse cu mai mult de jumătate, iar alte examinări obiective s-au îmbunătățit în mod semnificativ; 4 invalid: nu sa înregistrat o ameliorare a simptomelor și a examinării obiective sau doar o îmbunătățire pe termen scurt, dar sa agravat rapid.

6, manifestările clinice ale pacienților cu cancer hepatic sunt împărțite în cinci tipuri (propuse de Berman în 1958): 1 tip tumoră evidentă, 2 tip abdomen acut, 3 tip ocult, 4 tip febră, 5 tip transfer.

7. Analiza rezultatelor efectului curativ: Tabelul 1 tratează 30 de pacienți cu cancer hepatic și ciroză hepatică în vârstă de 36-73 ani și diagnostichează raportul bolii eliberat de spitalul obișnuit.

Tabelul 1 (unitate: persoană)

Dupa 2-5 cursuri, 19 persoane au fost vindecate, reprezentand 63,4%, 4 au fost foarte eficiente, reprezentand 13,3%, 6 au fost eficiente, reprezentand 20%, 1 ineficient, reprezentand 3,3%, rata efectiva totala a fost de 96,7%, rata totala de vindecare a fost de 63,4% %.

Dovezile clinice ale invenției demonstrează că luarea preparatului poate îmbunătăți în mod evident constituția pacientului, în mod evident crește pofta de mâncare, previne cancerul și elimină tumora, iar utilizarea pe termen lung poate inhiba și preveni efectele citopatice, îmbunătăți funcția imunitară umană și nu are efecte secundare.

Revendicări ( 6 )

1. Un medicament tradițional chinez pentru tratarea cancerului hepatic, caracterizat prin aceea că medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului hepatic este 10-20 părți în greutate de afide, 10-20 părți insecte întregi, 10-20 părți de arme, 5-15 părți spute, 10- 20 părți din stup, 10-20 părți Corydalis, 10-15 bucăți de ghimbir, 5-15 părți triunghiulare, 5-15 părți Poncho, 15-20 părți Scrophularia, 15-20 părți Prunella, 10-20 părți蚤休, 10-15 părți saponin, 10-15 părți de piele verde, 10-20 părți de pășunat, 10-15 părți gardian, 0,5-2 părți variegata, 10-20 părți Fritillaria, 20-30 părți din trei Șapte, 15-30 părți de bujor alb, 10-20 părți de iarbă de gheare, 5-15 părți de salvie, 15-20 părți de lipitori, 10-20 părți de sânge, 20-30 părți de armură, 10-20 părți tulpini, 10-20 părți de nurca uscată, 20-30 părți astragalus, 20-30 părți capilare, 10-20 părți Bupleurum, 15-20 părți Solanum nigrum L. și 15-20 părți Baiying.

2. Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului de ficat conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic este de 11-19 părți în greutate de afide, 11-19 părți insecte întregi, 11-19 părți de arme, 6 -14 părți de gandaci, 11-19 părți ale stupului, 11-19 părți de Corydalis, 10,5-14,5 bucăți de ghimbir, 6-14 părți de triunghiuri, 6-14 părți de scoici, 15,5-19,5 părți Scrophularia, 15,5-19,5 părți Prunella vulgaris, 11-19 părți spută, 10,5-14,5 părți saponin, 10,5-14,5 părți de piele verde, 11-19 părți de pășunat, 10,5-14,5 părți Guardian, 0,7-1,9 părți pestrițe, 11-19 bucăți de chuanbei Mama, 21-29 părți Sanqi, 18-28 părți de bujor alb, 11-19 părți de iarbă de gheare, 6-14 părți de salvie de munte, 15,5-19,5 părți de lipitori, 11-19 părți de sânge, 21-29 bucăți de armură, 11-19 părți de tulpini, 11-19 părți de scallions uscate, 21-29 părți scutellaria, 21-29 părți Yinchen, 11-19 părți Bupleurum, 16,5-19,5 bucăți de Solanum nigrum L. și 16,5-19,5 părți din Baiying .

2. Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic este de 12-18 părți în greutate de afide, 12-18 părți insecte întregi, 12-18 părți de arme, 7 -13 părți, 12-18 părți ale stupului, 12-18 părți Corydalis, 11-14 bucăți de ghimbir, 7-13 părți triunghiulare, 7-13 părți Poncho, 16-19 părți Scrophularia, 16-19 părți Prunella vulgaris, 12-18 părți spută, 11-14 părți saponin, 11-14 părți de piele verde, 12-18 părți de pășunat, 11-14 părți Guardian, 0,9-1,8 părți scorpion, 12-18 bucăți de Chuanbei Mamă, 22-28 părți Sanqi, 19-27 părți de bujor alb, 12-18 părți de iarbă de gheare, 7-13 părți de salvie de munte, 16-19 părți de lipitori, 12-18 părți de sânge, 22-28 bucăți de armură, 12-18 părți de tulpini, 12-18 părți de nurca uscată, 22-28 părți astragalus, 22-28 părți capillaris, 12-18 părți Bupleurum, 16-19 bucăți de Solanum nigrum L. și 16-19 părți din Baiying .

2. Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic este 13-17 părți în greutate de afide, 13-17 părți insecte întregi, 13-17 părți arme, 8 – 12 părți 蜈蚣, 13-17 părți ale stupului, 13-17 părți Corydalis, 11,5-13,5 părți ghimbir, 8-12 părți trigonal, 8-12 părți Pleurotus ostreatus, 16,5-18,5 părți Scrophulariae, 16,5-18,5 părți Prunella vulgaris, 13-17 părți spută, 11,5-13,5 părți saponină, 11,5-13,5 părți pielii verzi, 13-17 părți pășunat, 11,5-13,5 părți Guardian, 1-1,7 părți scorpion, 13-17 bucăți de Chuanbei Mamă, 23-27 părți Sanqi, 20-26 părți bujor alb, 13-17 părți de iarbă de gheare, 8-12 părți Shanzi, 16,5-18,5 părți de lipitori, 13-17 părți de sânge, 23-27 bucăți de armură, 13-17 părți tulpini, 13-17 părți scallions uscate, 23-27 părți scutellaria, 23-27 părți Yinchen, 13-17 părți Bupleurum, 16,5-18,5 bucăți de Solanum nigrum L. și 6,5-18,5 părți din Baiying .

2. Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului de ficat conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că medicamentul tradițional chinez pentru tratarea cancerului hepatic cuprinde 14-16 părți de acarieni de sol, 14-16 părți de viermi întregi, 14-16 părți de arme și 9 părți în greutate. – 13 părți, 14-16 părți ale stupului, 14-16 părți de Corydalis, 12-13 bucăți de ghimbir, 9-11 părți ale triunghiului, 9-11 părți scorpion, 17-18 părți scrophularia, 17-18 părți Prunella vulgaris, 14-16 porții de spută, 12-13 părți saponină, 12-13 părți de piele verde, 14-16 părți pășunat, 12-13 părți Guardian, 1,2-1,6 părți scorpion, 14-16 bucăți de Chuanbei Mama, 24-26 părți de notoginseng, 21-25 părți de bujor alb, 14-16 părți de iarbă de gheare, 8-11 părți de salvie de munte, 17-18 părți de lipitori, 14-16 părți de sânge, 24-26 părți de armură, 14-16 părți de tulpină, 14-16 părți de sable uscate, 24-26 părți scutellaria, 24-26 părți Yinchen, 14-16 părți Bupleurum, 17-18 bucăți de Solanum nigrum L. și 17-18 părți din Baiying .

2. Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului de ficat conform revendicării 1, caracterizată prin aceea că medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic cuprinde 15 părți de acarieni de sol, 15 părți de viermi întregi, 15 părți de arme, 10 părți de gândaci, 15 părți de rouă. Stup, 15 părți Corydalis, 12 bucăți de ghimbir, 10 părți trigonal, 10 părți Pampas, 17,5 părți Scrophularia, 17 bucăți de Prunella, 15 părți scorpion, 12,5 părți saponin, 12,5 părți pielii verzi, 15 părți pășunat 12,5 exemplare ale uterului, 1,5 bucăți de scoici, 15 bucăți de Fritillaria, 25 de părți de notoginseng, 23 de părți de bujor alb, 15 părți din iarba ghearelor, 10 părți din salvia de munte, 17,5 părți din lipitori, 15 părți din sânge, 25 de părți din armură, 15 părți de tulpină, 15 părți sorg uscat, 25 părți scutelare, 25 părți capilare, 15 părți Bupleurum, 17,5 părți Solanum nigrum L. și 17,5 părți Baiying.

CN 200710072056 2007-04-19 2007-04-19 Medicina traditionala chineza pentru tratarea cancerului hepatic CN100556446C ( zh )

Aplicații prioritare (1)

Numărul de aplicație	Data priorității	Data de depozit	titlu
CN 200710072056 CN100556446C ( ro )	2007-04-19	2007-04-19	Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic

Aplicații care solicită prioritate (1)

Numărul de aplicație	Data priorității	Data de depozit	titlu
CN 200710072056 CN100556446C ( ro )	2007-04-19	2007-04-19	Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic

Publicații (2)

Numărul publicării	Data publicării
CN101041043A true true CN101041043A ( ro )	2007-09-26
CN100556446C CN100556446C ( ro )	2009-11-04

familie

ID = 38806972

Aplicații pentru familie (1)

Numărul de aplicație	titlu	Data priorității	Data de depozit
CN 200710072056 CN100556446C ( ro )	2007-04-19	2007-04-19	Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic

Statutul țării (1)

țară	legătură
CN ( 1 )	CN100556446C ( zh )

Citat de (7)

* Citată de examinator, † Citată de terță parte
Numărul de publicare	Data priorității	Data publicării	cesionar	titlu
CN101342338B ( zh )	2008-08-29	2011-01-26	Shao Lihong	Medicină pentru tratarea bolilor hepatice
CN101411744B ( zh )	2007-10-19	2011-04-27	Li Tingshu	Un medicament pentru tratarea bolilor tumorale
CN102228504A ( zh ) *	2011-06-12	2011-11-02	Li Xianhua	Formulă de medicamente tradiționale chinezești împotriva cancerului și procesul de preparare a acestora
CN102302567A ( zh ) *	2011-08-11	2012-01-04	Mao Shunqing	Descompunerea medicinei chinezești
CN102389559A ( zh ) *	2011-11-21	2012-03-28	Xu Congyu	Compoziția tradițională a medicinii chinezești și aplicarea acesteia ca radiosensibilizator
CN103505500A ( zh ) *	2013-07-17	2014-01-15	Guangzhou Sishunshan Medicina Chineza de Cercetare și Dezvoltare Co, Ltd.	Compoziție medicamentoasă tradițională chineză pentru tratarea hepatitei B și metodă de preparare a acesteia
CN104000910A ( zh ) *	2014-05-30	2014-08-27	Jin Xin	Compoziția anti-hepatocarcinom și aplicarea acesteia

Familii Citând această familie (1)

* Citată de examinator, † Citată de terță parte
Numărul de publicare	Data priorității	Data publicării	cesionar	titlu
CN103977351A ( zh ) *	2014-05-23	2014-08-13	Li Shaoli	Compoziție farmaceutică pentru tratarea cancerului hepatic

Familie Citeste Familii (3)

* Citată de examinator, † Citată de terță parte
Numărul de publicare	Data priorității	Data publicării	cesionar	titlu
CN100460008C ( zh ) *	2003-08-28	2009-02-11	Xiao Houjie	Compoziția tradițională de medicină chineză pentru tratarea cancerului
CN1323711C ( zh ) *	2005-09-27	2007-07-04	Han Yunchao	Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului de ficat și a cancerului pancreatic
CN1323710C ( zh ) *	2005-09-27	2007-07-04	Han Yunchao	Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului pulmonar

Citat de (7)

* Citată de examinator, † Citată de terță parte
Numărul de publicare	Data priorității	Data publicării	cesionar	titlu
CN101411744B ( zh )	2007-10-19	2011-04-27	Li Tingshu	Un medicament pentru tratarea bolilor tumorale
CN101342338B ( zh )	2008-08-29	2011-01-26	Shao Lihong	Medicină pentru tratarea bolilor hepatice
CN102228504A ( zh ) *	2011-06-12	2011-11-02	Li Xianhua	Formulă de medicamente tradiționale chinezești împotriva cancerului și procesul de preparare a acestora
CN102302567A ( zh ) *	2011-08-11	2012-01-04	Mao Shunqing	Descompunerea medicinei chinezești
CN102389559A ( zh ) *	2011-11-21	2012-03-28	Xu Congyu	Compoziția tradițională a medicinii chinezești și aplicarea acesteia ca radiosensibilizator
CN103505500A ( zh ) *	2013-07-17	2014-01-15	Guangzhou Sishunshan Medicina Chineza de Cercetare și Dezvoltare Co, Ltd.	Compoziție medicamentoasă tradițională chineză pentru tratarea hepatitei B și metodă de preparare a acesteia
CN104000910A ( zh ) *	2014-05-30	2014-08-27	Jin Xin	Compoziția anti-hepatocarcinom și aplicarea acesteia

De asemenea, publicat ca

Numărul de publicare	Data publicării	tip
CN100556446C ( zh )	2009-11-04	acorda

Documente similare

publicare	Data publicării	titlu
CN101366919A ( zh )	2009-02-18	Medicament tradițional chinezesc pentru tratarea bolilor reumatice
CN101041033A ( zh )	2007-09-26	Medicină tradițională chineză pentru tratarea hepatitei B
CN1911340A ( zh )	2007-02-14	Medicină tradițională chineză pentru tratarea cancerului
CN101721658A ( zh )	2010-06-09	Chineză pilula pentru medicamente pe bază de plante pentru tratarea infertilității și a afecțiunilor ginecologice
CN102319314A ( zh )	2012-01-18	Medicina tradițională chineză pentru tratarea eczemelor
CN102258627A ( zh )	2011-11-30	Vinul de sănătate pentru bărbați și metoda de preparare a acestuia
CN101085308A ( zh )	2007-12-12	Medicina tradițională chineză decoction pentru tratamentul oral al cancerului de sân
CN101168036A ( zh )	2008-04-30	Compoziția tradițională de medicină chineză pentru tratamentul orală a migrenei
CN101085332A ( zh )	2007-12-12	Aplicarea externă a sacului medicamentos pentru tratarea bolii inflamatorii pelviene cronice
CN101129927A ( zh )	2008-02-27	Compoziție tradițională de medicină chineză pentru tratarea bolii pelvine inflamatorii
CN101773585A ( zh )	2010-07-14	Medicina chineza traditionala pentru tratarea paraliziei faciale
CN101190310A ( zh )	2008-06-04	Compoziția tradițională de medicină chineză pentru tratarea bolilor mamare
CN102657795A ( zh )	2012-09-12	Preparate tradiționale chinezești pentru promovarea vindecării postoperatorii
CN102357155A ( zh )	2012-02-22	Compoziție tradițională de medicină chineză pentru tratarea herpesului zoster
CN104324217A ( zh )	2015-02-04	Huayu, Zhike lichid oral
CN101530516A ( zh )	2009-09-16	Medicina tradițională chineză pentru tratarea apendicitei
CN101085143A ( zh )	2007-12-12	Chimioterapie tradițională chineză pentru tratarea dismenoreei
CN103007191A ( zh )	2013-04-03	Compoziția tradițională de medicină chineză pentru tratarea icterului
CN102716295A ( zh )	2012-10-10	Pulbere albă Preparatul chinezesc pentru tratarea durerii hipocondriale și metoda de preparare a acesteia
CN101953930A ( zh )	2011-01-26	Medicina chineza externa pentru tratarea paduchilor de cap
CN1820773A ( zh )	2006-08-23	Compoziție tradițională de medicină chineză pentru tratarea inflamației orale și prepararea acesteia
CN101590187A ( zh )	2009-12-02	Capsule de medicină tradițională chineză pentru tratarea sinuzitei frontale, sinuzitei etmoide și sinuzitei maxilare
CN104258066A ( zh )	2015-01-07	Preparate de medicină tradițională chineză pentru tratarea sângerării uterine disfuncționale tip yin și a metodei de preparare a acesteia
CN103550439A ( zh )	2014-02-05	Medicament pentru tratamentul herpesului zoster și metoda de preparare a acestuia
CN103263642A ( zh )	2013-08-28	Medicină pentru tratarea tulburărilor și metoda de preparare a acestora

CN101041043A – – brevete Google

Medicina tradițională chineză pentru tratarea cancerului hepatic Descărcați PDF

Info

Numărul de publicare: CN101041043A

CN101041043A CN 200710072056 CN200710072056A CN101041043A CN 101041043 A CN101041043 A CN 101041043A CN 200710072056 CN200710072056 CN 200710072056 CN 200710072056 A CN200710072056 A CN 200710072056A CN 101041043 A CN101041043 A CN 101041043A

autoritate: CN
Statutul de acordare: cerere
Tip de brevet
Cuvinte cheie anterioare: Piese; Cancer la ficat; insecte; parte; sânge
Data artei anterioare: 2007-04-19

Numărul de aplicațieCN 200710072056Alte limbiRomână ( ro )Alte versiuniCN100556446C ( ro )inventatorHan ShuguangCesionarul originalHan ShuguangData priorității (Data priorității este o ipoteză și nu este o concluzie legală. Google nu a efectuat o analiză juridică și nu face nicio reprezentare cu privire la exactitatea datei menționate.)2007-04-19Data depunerii2007-04-19Data publicării2007-09-26