Arhive etichetă | ghrelin

Efectele administrării de ghrelin în timpul chimioterapiei cu pacienți cu cancer esofagian avansat: un studiu prospectiv, randomizat, controlat cu placebo, de fază 2.

Abstract

FUNDAL:

Cisplatina reduce nivelul ghrelinelor plasmatice prin receptorul 5-hidroxitriptaminei (5-HT). Acest lucru poate determina tulburări gastro-intestinale induse de cisplatină și împiedică continuarea chimioterapiei. Autorii acestui raport au efectuat un studiu prospectiv, randomizat, de fază 2, pentru a evalua efectele ghrelinului exogen în timpul chimioterapiei pe bază de cisplatină.

METODE:

Patruzeci și doi de pacienți cu cancer esofagian care au primit chimioterapie neoadjuvantă pe bază de cisplatină au fost repartizați fie la un grup de ghrelin (n = 21), fie la un grup placebo (n = 21). Ei au primit fie perfuzii intravenoase de ghrelin uman sintetic (3 pg / kg), fie soluție salină de două ori pe zi, timp de o săptămână, cu administrare de cisplatină. Obiectivul primar a fost modificarea aportului caloric oral, iar obiectivele secundare au fost evenimentele adverse legate de chimioterapie; scorul vizual al scării vizuale analogice (VAS); modificări ale hormonilor gastro-intestinali și starea nutrițională, inclusiv proteine ​​rapide de rulare și calitatea vieții (QoL) estimate la chestionarul de bază QLQ-C30 al Organizației Europene pentru Cercetare și Tratament al Cancerului.

REZULTATE:

Doi pacienți au fost excluși din analiza finală: Un pacient a suspendat administrarea ghrelinului din cauza diaforezei excesive, iar un alt pacient din grupul placebo nu a reușit să monitorizeze chestionarul de auto-evaluare. Aportul alimentar și scorul de apetit VAS au fost semnificativ mai mari în grupul ghrelin decât în ​​grupul placebo (18,2 ± 5,2 kcal / kg / zi față de 12,7 ± 3,4 kcal / kg / zi [P = 0,001] și 6,2 ± 0,9 vs 4,1 ± 0,9 [P <.0001], respectiv). Pacienții din grupul ghrelin au avut mai puține evenimente adverse în timpul chimioterapiei legate de anorexie și greață decât pacienții din grupul martor. Deteriorarea semnificativă a fost observată după chimioterapia în grupul placebo în scorurile calitatea vietii QoL, apetitul, greața și vărsăturile și starea de sănătate globală.

CONCLUZII:

Administrarea pe termen scurt a ghrelinului exogen la începutul chimioterapiei pe bază de cisplatină a stimulat consumul de alimente și a redus efectele adverse.

Cancer. 2012 Oct 1; 118 (19): 4785-94. doi: 10.1002 / cncr.27430. Epub 2012 Jan 26.

Informatia autorului

1
Divizia Chirurgie Gastroenterologică, Departamentul de Chirurgie, Școala Universitară de Medicină, Universitatea Osaka, Osaka, Japonia.
PMID: 
22282373 
DOI: 
10.1002 / cncr.27430

Efectele provocate de furnizarea zilnică pe termen lung de ghrelin la pacienți cu cancer cu pierdere în greutate: un studiu randomizat dublu-orb.

Abstract

FUNDAL:

Furnizarea pe termen scurt a ghrelinului la pacienții cu cancer indică faptul că pot exista beneficii de la furnizarea pe termen lung a ghrelinului pentru tratamentul paliativ al pacienților cu cancer care suferă de pierdere în greutate. Această ipoteză a fost evaluată într-un studiu randomizat, dublu-orb, de fază 2.

METODE:

Pacienții cu cancer cu pierdere în greutate, cu tumori gastrointestinale solide, au fost randomizați să primească fie un tratament cu ghrelin în doză mare (13 micrograme / kg pe zi, n = 17 pacienți) sau un tratament cu doză mică de ghrelină (0,7 μg / kg pe zi, n = 14 pacienți) 8 săptămâni sub formă de injecții subcutanate o dată pe zi. Aperitatea a fost evaluată pe o scală analogică vizuală; și consumul de alimente, consumul de energie în repaus și compoziția corporală (absorbția cu dublă x-absorbție) au fost măsurate înainte de începerea tratamentului și în timpul urmăririi. Au fost măsurate nivelele serice ale ghrelinului, insulinei, factorului de creștere asemănător insulinei 1, hormonului de creștere (GH), trigliceridelor, acizilor grași liberi și glucozei. Calitatea vieții legate de sănătate, anxietatea și depresia au fost evaluate utilizând metode standardizate (Studiul de Sănătate pe Formulare de 36 de articole și Scala de anxietate și depresie). Activitatea fizică, odihna și somnul au fost măsurate prin utilizarea unui monitor cu corp multisenzor.

REZULTATE:

Grupurile de tratament au fost comparabile la includere. Valorile apetitului au fost crescute în mod semnificativ de către ghrelinul cu doză mare, analizat atât pe bază de intenție de tratament, cât și în conformitate cu protocolul. Dozele mari de ghrelin au redus pierderea grăsimii corporale (P <.04) și a serului GH (P <.05). A existat o tendință pentru ghrelinul cu doză mare de a îmbunătăți echilibrul energetic (P <.07; per protocol). 

În caz contrar, nu s-au observat diferențe semnificative statistic în variabilele de rezultat între loturile cu doză mare și cele cu doză mică. 

Efectele adverse nu au fost observate de ghrelină cu doze mari, cum ar fi nivelurile serice ale markerilor tumorali (antigenul cancerului 125 [CA 125], antigenul carcinoembrionic și CA 19-9).

CONCLUZII:

Rezultatele actuale au sugerat că administrarea zilnică, pe termen lung a ghrelinului la pacienții cu cancer cu pierdere în greutate cu tumori solide susține metabolismul gazdei, îmbunătățește apetitul și atenuează catabolismul.

PMID: 
20186829 
DOI: 
10.1002 / cncr.24917
Cancer. 2010 Apr 15; 116 (8): 2044-52. doi: 10.1002 / cncr.24917.

Informatia autorului

1
Departamentul de Chirurgie, Laboratorul de Cercetări Metabolice Chirurgice la Laboratorul Lundberg pentru Cercetarea Cancerului, Academia Sahlgrenska și Spitalul Universitar, Gothenburg, Suedia. kent.lundholm@surgery.gu.se

Ghrelin crește aportul de energie la pacienții cu cancer cu apetit afectat: studiu acut, randomizat, controlat cu placebo.

Abstract

Există o nevoie stringentă de terapii mai eficiente pentru stimularea apetitului pentru multe grupuri de pacienți, inclusiv pentru cei cu cancer.Am demonstrat anterior că ghrelinul hormonal gastric mărește puternic apetitul la voluntari sănătoși. Aici, am efectuat un studiu clinic acut, randomizat, controlat cu placebo, încrucișat, pentru a determina dacă ghrelinul stimulează pofta de mâncare la pacienții cu cancer cu anorexie. Sapte pacienti cu cancer care au raportat pierderea apetitului au fost recrutati de la clinicile de oncologie la Charing Cross Hospital.Principalele măsuri privind rezultatul au fost consumul de energie dintr-o masă de bufet în timpul administrării de ghrelin sau perfuzie salină și aprecierea mesei, astfel cum a fost evaluată prin scala analogică vizuală. O creștere accentuată a consumului de energie (31 ± 7%, P = 0,005) a fost observată în cazul perfuziei cu ghrelin comparativ cu controlul salinei și fiecare pacient a mâncat mai mult. Scorul de apreciere a masei a fost mai mare cu 28 +/- 8% (P = 0,02) cu tratamentul cu ghrelin. Nu s-au observat efecte secundare. Efectele stimulative ale ghrelinului asupra aportului alimentar și aprecierii mâncării observate în acest studiu preliminar sugerează că ghrelinul ar putea fi un tratament eficace pentru anorexia cancerului și posibil pentru pierderea apetitului la alte grupuri de pacienți.

PMID: 
15181065 
DOI: 
10.1210 / jc.2003-031768
[Indexat pentru MEDLINE]
J Clin Endocrinol Metab. 2004 Jun; 89 (6): 2832-6.

Informatia autorului

1
Departamentul de Medicină Metabolică, Facultatea de Medicină, Colegiul Imperial Londra, Londra, Marea Britanie W12 0NN.

Anamorelin (ONO-7643) la pacienții japonezi cu cancer pulmonar fără celule mici și cașexie: rezultatele unui studiu randomizat de fază 2

Scop

Cachexia cailor este caracterizată de scăderea greutății corporale (în principal, masa corporală slabă [LBM]) și are un impact negativ asupra calității vieții (QOL) și asupra prognosticului. Anamorelin (ONO-7643) este un nou agonist selectiv al receptorilor de ghrelin în curs de dezvoltare pentru tratarea cașexiei cancerului.

metode

În acest studiu dublu-orb, de fază exploratorie, am examinat eficacitatea și siguranța anamorelinului la pacienții japonezi ( n = 181) cu cancer pulmonar fără celule mici (NSCLC) și cachexia cancerului (≥5% luni). Participantii au fost randomizati in trei grupuri si au fost administrate 50 sau 100 mg anamorelin, sau placebo, oral, in fiecare zi timp de 12 saptamani. Obiectivele co-primare au fost modificările de la valoarea inițială de peste 12 săptămâni în LBM și rezistența mânerului (HGS). Obiectivele secundare au inclus greutatea corporală, QOL, Scala de performanță Karnofsky (KPS) și biomarkeri serici.

Rezultate

Schimbarea LBM pe 12 săptămâni a fost de 0,55 și 1,15 kg în grupul tratat cu placebo și 100 mg anamorelin, dar eficacitatea anamorelinului în HandGripStrength nu a fost detectată. Modificările în greutatea corporală au fost de -0,93, 0,54 și 1,77 kg în grupul placebo, 50 mg anamorelin și 100 mg anamorelin. Anamorelin (100 mg) a îmbunătățit semnificativ KPS și QOL-ACD în comparație cu placebo. Administrarea anamorelinului timp de 12 săptămâni a fost bine tolerată.

concluzii

Acest studiu din faza 2 a arătat că 100 mg anamorelin are rezultate promițătoare în îmbunătățirea masei musculare slabe, a statutului de performanță și, în special, a calitatii vietii QOL la pacienții cu cachexie de cancer.

Material suplimentar electronic

Versiunea online a acestui articol (doi: 10.1007 / s00520-016-3144-z) conține material suplimentar, care este disponibil pentru utilizatorii autorizați.

Introducere

Cachexia este frecvent asociată cu o varietate de trăsături relevante din punct de vedere clinic, incluzând anorexia, inflamația, rezistența la insulină și defalcarea proteinelor musculare, iar aceste caracteristici sunt conduse de pierderea musculară. Cu toate acestea, pre-cașexia poate apărea în absența pierderii în greutate, iar obezitatea sau pierderea în greutate anterioară poate masca simptomele sale la unii pacienți [ 1 ].Cachexia este o tulburare frecventă la pacienții cu cancer și este citată ca fiind cauza morții la aproximativ 20% dintre pacienții cu cancer [ 2 – 6 ]. În plus, cașexia cancerului poate fi, de asemenea, însoțită de o toxicitate crescută asociată cu chimioterapia [ 1 ], precum și de prognosticul și calitatea scăzută a vieții (QOL) [ 7 ].

Există mai multe opțiuni de tratament disponibile pentru administrarea pacienților cu cașexie. De exemplu, acetat de megestrol este disponibil pentru terapia de prima linie în casexia asociată SIDA în unele țări (dar nu în Japonia). Într-un studiu clinic privind casexia de cancer, acetatul de megestrol a îmbunătățit semnificativ pofta de mâncare și creșterea în greutate în comparație cu placebo [ 8 ]. Cu toate acestea, acetatul de megestrol tinde să mărească mai degrabă masa de grăsime decât masa musculară [ 9 ], iar într-un studiu clinic [ 8 ] nu a îmbunătățit QOL și a fost asociată cu o incidență mai mare a evenimentelor adverse comparativ cu placebo.

Ghrelin, un neuropeptide secretat de celulele ghrelinergice din tractul gastro-intestinal, este un regulator al semnalelor de foame care pregătesc, de asemenea, organismul pentru aportul de alimente. În plus, ghrelinul acționează ca un secretagog al hormonului de creștere (GH) [ 10 , 11 ]. La om, ghrelinul are efecte antagoniste asupra semnalizării leptinei și crește semnificativ aportul de alimente [ 12-14 ]. Prin urmare, mimeticele ghrelin au fost postulate ca tratamente posibile pentru cașexie prin creșterea secreției de GH și promovarea aportului alimentar și a câștigului în greutate.

Studiile de relație structură-funcție au arătat că partea C-terminală a ghrelinului joacă un rol important în legarea receptorului și activitatea biologică [ 15 ]. În consecință, structura acestei regiuni a fost utilizată ca bază pentru dezvoltarea de anamorelin (ONO-7643), un agonist ghrelin cu greutate moleculară mică, administrat oral, cu structura chimică a 3 – {( 2R ) -3- { ( 3R ) -3-benzil-3 – [(trimetilhidrazino) carbonil] piperidin-1 -il} -2 – [(2-metilalanil) amino] -3-oxopropil} -1H  indol [ 16,17 ]. Studiile preclinice au demonstrat că anamorelinul este un agonist puternic al receptorilor de ghrelin care crește semnificativ aportul alimentar și greutatea corporală la șobolani [ 18 ] și nu favorizează creșterea tumorală, ceea ce reprezintă o potențială preocupare pentru moleculele care cresc GH și factorul de creștere asemănător insulinei – 1 (IGF-1) [ 19 ]. Următoarele studii de fază 1 și fază 2 ale anamorelinului au fost finalizate la voluntari sănătoși și la pacienți cu cașexie de cancer în SUA [ 20-22 ]. Aceste studii au confirmat faptul că anamorelin a crescut semnificativ greutatea corporală și consumul alimentar în comparație cu placebo. Mai recent, două studii clinice de fază 3 efectuate cu anamorelin au arătat că anamorelinul timp de 12 săptămâni a fost bine tolerat și a îmbunătățit semnificativ masa corporală slabă (LBM), greutatea corporală și anorexia-cachexia simptome / preocupări în cancerul pulmonar fără celule mici (NSCLC) pacienți cu cașexie; aceste studii multinaționale au fost efectuate în America de Nord, Europa și Australia [ 23 ]. Cu toate acestea, niciun studiu nu a examinat efectele anamorelinului la pacienții japonezi cu casexie de cancer. Prin urmare, scopul acestui studiu a fost de a examina eficacitatea și siguranța anamorelinului la pacienții japonezi cu cașexie de cancer ca parte a dezvoltării clinice a anamorelinului pentru tratamentul cașexiei.

Acest studiu a inclus pacienți cu NSCLC, deoarece acești pacienți prezintă în mod tipic scădere în greutate și sunt mai puțin susceptibili de a scăpa din cauza progresiei bolii decât pacienții cu alte tipuri de cancer. În plus, acești pacienți urmau să tolereze aportul alimentar și administrarea de anamorelin. Mai mult, pentru a minimiza orice potențial efect confuz al cancerului în sine, numai pacienții cu NSCLC au fost aleși să participe.

metode

Design de studiu

Acest studiu multicentric, randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, a inclus o perioadă de observare / înjumătățire de 2 săptămâni, o perioadă de tratament de 12 săptămâni și o perioadă de urmărire de 4 săptămâni și a fost efectuată pe 32 de site-uri în Japonia. Vizitele în timpul perioadei de tratament au fost programate în săptămâna 0 (valoare inițială / randomizare), 4, 8 și 12. Studiul a fost realizat în conformitate cu Declarația de la Helsinki, protocolul de studiu, articolul 14 alineatul (3) și articolul 80 alineatul (2) ) din Legea privind afacerile farmaceutice din Japonia și Ghidul bunelor practici clinice (Ministerul Sănătății și Bunăstării nr. 28). Studiul a fost aprobat de comitetele de etică la toate instituțiile participante. Inregistrarea studiului clinic: JapicCTI-111415 (Japonia, Centrul de Informare din Centrul de Informare din Farmaceutic).

pacienţii

Bărbații sau femeile cu NSCLC etapa III sau IV inoperabilă sau NSCLC recidivate indicate pentru chimioterapie au fost eligibile dacă îndeplinesc următoarele criterii de includere: vârsta ≥20 ani în momentul consimțământului informat; au avut o pierdere involuntară de greutate de ≥5% observată în ultimele 6 luni; cel puțin trei dintre anorexie, oboseală, stare de rău, scăderea puterii musculare generale, circumferința mușchiului brațului (în cm) <10 percentilă și cel puțin una din proteina C reactivă> 5,0 mg / l, hemoglobina <12 g / dl sau albumină <3,2 g / dl; un stat de cooperare orientală de performanță stat de 1 sau 2; și o speranță de viață estimată de ≥ 4 luni. Anorexia, oboseala, stare generală de rău și scăderea puterii musculare au fost de grad ≥ 1 în conformitate cu Versiunea japoneză a criteriilor comune de terminologie NCI pentru evenimente adverse (CTCAE), versiunea 4.0. AMC a fost calculată folosind formula: AMC (cm) = circumferința brațului (AC) (cm) – 3,14 × triceps grosime pliantă a pielii (TSF) (mm) / 10.

Pacienții cu metastaze cerebrale cunoscute sau diabet necontrolat au fost excluși din studiu. Toți pacienții au prezentat un consimțământ scris în cunoștință de cauză și, după înregistrare, pacienții eligibili au fost randomizați de un centru central de alocare, cu stratificarea pe locul de studiu și pierderea în greutate în ultimele 6 luni (5-15% și> 15%). Randomizarea a fost efectuată utilizând un tabel de randomizare și metoda plicului sigilat.

Intervenții și terapie concomitentă

Pacienții au fost randomizați să primească 50 sau 100 mg de anamorelin sau placebo o dată pe zi în timpul perioadei de tratament. Pentru a menține orbirea, toți pacienții au luat două comprimate (două comprimate de 50 mg, un comprimat de 50 mg plus comprimat placebo sau două comprimate placebo). Tabletele active și placebo au fost identice în aspect și ambalare. Dozele de anamorelin și durata administrării au fost alese pe baza studiilor anterioare [ 24 ].

Chimioterapia cu risc crescut de emetică (clasificată în conformitate cu „Ghidul de utilizare adecvat antiemetic Versiunea 1” de către Societatea de Oncologie Clinică din Japonia), radioterapia (cu excepția radioterapiei paliative pentru metastaze osoase sau radioterapie pentru metastaze cerebrale), corticosteroizi sistemici, preparate GH, medroxiprogesteron , medicamente antiaritmice, antracicline antitumorale, inhibitori ai CYP3A4, inductori ai CYP3A4, produse care conțin grapefruit, medicamente antiinflamatoare, anticoagulante antitumorale, inhibitori ai CYP3A4, medicamente pe bază de plante medicinale chinezești (anchusan, orento, saireito, juzentaihoto, shiosekoto, seishoekkito, ninjin’yoeito, heiisan, hochuekkito, rikkunshito, junshousan) și alte tratamente experimentale au fost interzise în timpul studiului.

Estimări de eficacitate

Obiectivele primare au fost modificările medii ale LBM, măsurate prin absorbția de radiații X cu raze duale (DEXA) și rezistența mâinilor la mâna non-dominantă de la momentul inițial până în săptămâna 12. Alte obiective au inclus modificările variabilelor legate de compoziția corporală, determinată de DEXA și bioimpedanță, rezistența la strângere, greutatea corporală, versiunea japoneză a inventarului de simptome MD Anderson (MDASI-J), chestionarul QOL pentru pacienții cu cancer tratați cu medicamente anticanceroase (QOL-ACD), ECOG PS, Scala de performanță Karnofsky și biomarkeri serici. Toate variabilele de eficacitate au fost determinate la momentul inițial (începutul observării) și în săptămânile 4, 8 și 12. Variabilele de eficacitate au fost de asemenea măsurate după întreruperea tratamentului.

DEXA a fost efectuată utilizând sisteme Hologic (Bedford, MA, SUA) sau GE Lunar (Wauwatosa, WI, SUA) capabile de scanarea întregului corp; scanările au fost efectuate ≥48 ore după orice utilizare a mediului de contrast pentru a evita interferența. DEXA a fost utilizat pentru a măsura LBM, grăsimea corporală, conținutul de minerale osoase și greutatea totală utilizând procedurile standard. Bioimpedanța a fost utilizată, de asemenea, pentru a înregistra LBM, grăsimea corporală, conținutul de minerale osoase, masa celulelor corpului și greutatea corporală utilizând metodele stabilite. Bioimpedanța a fost efectuată utilizând instrumentul InBody720 (InBody Japan Inc., Tokyo, Japan) furnizat de sponsor. Rezistența la strângere a fost măsurată de trei ori pentru fiecare mână utilizând un dinamometru de prindere (Tracker Freedom® Wireless Grip, JTECH Medical Midvale, UT, SUA). Valoarea maximă a celor trei măsurători a fost înregistrată pentru fiecare mână, iar mâna dominantă / non-dominantă a fost înregistrată.

MDASI-J este o scală auto-evaluată care acoperă 13 elemente de simptom și 6 elemente de interferență, care arată o bună validitate și o practică pentru evaluarea simptomelor legate de cancer în ultimele 24 de ore cu 11 scale [ 25 ]. Versiunea japoneză a fost validată și a demonstrat o bună coerență cu versiunea în limba engleză. QOL-ACD ( Materiale Suplimentare ) este o scală auto-evaluată care a evaluat statutul pacienților în ultimele zile cu cinci scale, compusă din patru domenii (funcționale, fizice, mentale și psihosociale) și o scală globală a feței a fost dezvoltată ca o chestionar generic pentru evaluarea QOL a pacienților japonezi supuși chimioterapiei. Toate cele patru domenii au prezentat asociații moderate și puternice cu variabile relevante clinic, cum ar fi statutul de performanță și pierderea în greutate la pacienții japonezi cu NSCLC [ 26 ]. Starea de performanță a fost examinată în funcție de ECOG PS și Scala de performanță Karnofsky. Probele de sânge au fost colectate după o perioadă rapidă de ≥12 h pentru a măsura concentrațiile de IGF-1, proteina de legare IGF I-3 (IGFBP-3), interleukina (IL) -6, factorul de necroză tumorală (TNF) prealbumină, acilghrelin și des-acilghrelin. Testele de laborator au fost efectuate la un laborator central (SRL Medisearch Ltd.).

Siguranță

Printre variabilele de siguranță s-au numărat semnele vitale, electrocardiografia cu 12 coloane, statutul tumorii (evaluat cu ajutorul criteriilor de evaluare a răspunsului în tuburile solide [RECIST]), rezultatele pacientului / supraviețuire, testele clinice de laborator și evenimentele adverse. Supraviețuirea globală a fost determinată folosind metoda tabelului de viață pentru fiecare grup de tratament. Evenimentele adverse au fost evaluate utilizând versiunea japoneză a Institutului Național al Cancerului Criterii comune de terminologie pentru evenimentele adverse ver. 4,0 și au fost clasificate după clasa de organe pe sistem / termenul preferat.

Evenimentele adverse au fost, de asemenea, evaluate în ceea ce privește gravitatea, gravitatea, relația cauzală cu medicamentul de studiu, rezultatul, cursul clinic și dacă medicamentul de studiu a fost întrerupt.

analize statistice

În conformitate cu protocolul de studiu pre-specificat și planul de analiză statistică, toate variabilele de eficacitate au fost analizate mai întâi în setul per protocol (PPS) și apoi confirmate utilizând setul complet de analiză (FAS). FAS a inclus toți subiecții eligibili care au făcut cel puțin o evaluare a eficacității după începerea studiului. PPS a cuprins toți subiecții eligibili care nu au primit niciunul dintre tratamentele interzise și ale căror valori LBM (DEXA) și rezistența la strângere au fost măsurate în timpul perioadei de observație și cel puțin o dată după începerea tratamentului cu medicamentul de studiu. S-au efectuat analize de siguranță utilizând setul de analize de siguranță, care a fost definit ca fiind toți subiecții cărora li sa administrat cel puțin o dată medicamentul de studiu.

Mărimea eșantionului a fost calculată pe baza rezultatelor unui studiu de fază 2 în care diferența medie ± deviația standard (SD) în LBM (DEXA) între 50 mg anamorelin și placebo a fost de 2,09 ± 3,06 kg. La un nivel de semnificație de 5% și o putere de 80%, au fost necesari cel puțin 35 subiecți pe grup de tratament.Având în vedere că aproximativ 35% dintre pacienți au fost probabil excluse din PPS, am planificat să înscriem 54 de pacienți per grup. Toate datele privind eficacitatea sunt prezentate pentru PPS, după cum se specifică în planul de analiză statistică, iar rezultatele au fost confirmate utilizând FAS. Variabilele de bază au fost analizate descriptiv pentru a determina media ± SD sau n (%) dintre pacienți. Variabilele de eficacitate au fost analizate utilizând analiza covarianței cu grupul de tratament, punctul de timp și pierderea în greutate precedentă (5-15% și> 15%) ca factori fixi și valoarea de bază ca o covarianță.Schimbarea medie a celor mai mici pătrate (LS) față de momentul inițial până la punctul de timp indicat a fost calculată pentru fiecare grup. Diferența medie LS în grupurile de anamorelin față de grupurile placebo a fost de asemenea calculată cu intervale de încredere de 95% (CI). O interacțiune a grupului de tratament × interval de timp a fost inclusă, de asemenea, pentru obiective secundare de eficacitate (modificări ale compoziției corporale măsurate prin DEXA sau bioimpedanță, rezistența la strângere, greutatea corporală, MDASI-J, QOL-ACD, Scorul de performanță Karnofsky și biomarkeri serici). Variabilele de siguranță au fost analizate descriptiv și sunt prezentate ca n (%) pacienți. Supraviețuirea globală a fost determinată utilizând metoda Kaplan-Meier și a fost comparată între cele trei grupuri folosind testele log-rank.Deoarece acesta a fost un studiu exploratoriu, nu sa făcut nicio ajustare pentru multitudinea testelor statistice, iar datele lipsă nu au fost imputate.

Modificări ale protocolului

Anumite modificări au fost făcute în planul de analiză statistică, dar toate modificările au fost implementate înainte de dezvăluire. Pe scurt, durata studiului și înscrierea pacientului au fost prelungite, deoarece a necesitat mai mult decât se aștepta să se înscrie numărul țintă al pacienților. De asemenea, am reevaluat dimensiunea eșantionului țintă, așa cum am planificat inițial să înscriem la 44 pacienți pe grup, după ce am anticipat că 20% din pacienții tratați ar fi excluși din PPS; aceasta a crescut la 35%. În plus, deoarece administrația americană pentru alimente și medicamente a emis noi recomandări privind inhibitorii CYP3A4 după începerea acestui studiu, utilizarea acestor medicamente a fost adăugată criteriilor de excludere și a listei cu medicamente interzise. Aceste criterii au fost aplicate retrospectiv tuturor pacienților din PPS și FAS.

Rezultate

pacienţii

Între martie 2011 și septembrie 2012, 181 subiecți au fost înscriși și randomizați în grupuri placebo, 50 mg anamorelin sau 100 mg anamorelin (figura suplimentară 1 ). Doi pacienți nu au primit tratament. PPS a cuprins 115 pacienți, cu 42, 42 și 31 în grupul tratat cu placebo, 50 mg anamorelin și respectiv 100 mg anamorelin (Figura 1 ). Au existat 12, 8 și 6 decese în grupul tratat cu placebo, 50 mg anamorelin și respectiv 100 mg anamorelin, în timp ce 6, 14 și, respectiv, 13 pacienți au întrerupt tratamentul datorită evenimentelor adverse. Toate cele trei grupe au fost comparabile în ceea ce privește caracteristicile lor inițiale (Tabelul Tabelul1 1 )).

tabelul 1

Caracteristicile pacientului

Parametru Placebo ( n = 60) 50 mg anamorelin ( n= 65) 100 mg anamorelin ( n = 55)
Sex Masculin 39 (65,0) 50 (76,9) 35 (63,6)
Femeie 21 (35,0) 15 (23,1) 20 (36,4)
Varsta (ani) Mean ± SD 66,0 ± 9,4 64,8 ± 8,7 65,7 ± 8,8
Greutate (kg) Mean ± SD 52,31 ± 10,29 51,10 ± 8,53 52,30 ± 11,57
IMC (kg / m 2 ) Mean ± SD 19.80 ± 2.86 19,33 ± 2,57 20,23 ± 3,21
Pierdere în greutate (%) 5 până la <10 36 (62,1) 38 (58,5) 38 (69,1)
10 la 15 20 (34,5) 16 (24,6) 14 (25,5)
> 15 2 (3.4) 11 (16,9) 3 (5.5)
Compoziția corpului (DEXA) (kg) LBM 38,65 ± 6,80 38,77 ± 6,20 38,80 ± 7,58
Grăsime corporală 11,30 ± 5,26 10,12 ± 4,44 11,70 ± 5,06
BMC 1,92 ± 0,48 1,90 ± 0,47 1,91 ± 0,55
Rezistența la strângere (kg) Mana dominanta 24,91 ± 9,05 27,32 ± 8,29 25,32 ± 9,28
Mână dominantă 23,73 ± 9,31 25,79 ± 7,70 23,31 ± 9,24
Suma ambelor mâini 48,64 ± 18,09 53,12 ± 15,59 48,63 ± 18,13
QOL MDASI-J 50,9 ± 33,4 49,0 ± 36,9 55,6 ± 37,2
QOL-ACD 73,4 ± 13,9 71,3 ± 14,9 70,6 ± 13,9
ECOG PS 1 46 (79,3) 47 (72,3) 45 (81,8)
2 12 (20,7) 18 (27,7) 10 (18.2)
Tip histologic de NSCLC adenocarcinom 47 (78,3) 44 (69,8) 43 (79,6)
Celula scuamoasă 10 (16,7) 15 (23,8) 7 (13,0)
Alte 3 (5.0) 4 (6.4) 4 (7.4)
Dispărut 2 1
Stadiul bolii IIIA 5 (8.3) 8 (12,3) 8 (14,5)
IIIB 3 (5.0) 9 (13,8) 4 (7.3)
IV 45 (75,0) 38 (58,5) 38 (69,1)
recurență 7 (11,7) 9 (13,8) 5 (9.1)
Alte 1 (1,5)
Timpul de la diagnostic până la începerea studiului de droguri (zile) Mean ± SD 549,0 ± 422,3 627,1 ± 572,6 466,6 ± 436,7
Istoricul chimioterapiei (numărul de linii) 0 1 (1,5)
1 9 (15,0) 15 (23,1) 17 (30,9)
2 19 (31,7) 12 (18,5) 14 (25,5)
≥3 32 (53,3) 37 (56,9) 24 (43,6)

Valorile sunt exprimate ca n (%) dintre pacienți sau medie ± SD

SD deviația standard, indicele de masă corporală IMC , absorbția de raze X cu raze X DEXA , masa corporală slabă LBM , conținutul mineral BMC , calitatea vieții QOL , MDASI-J MD Anderson Simptom Inventory, chestionarul ACDpentru pacienții cu cancer tratați cu medicamente anticanceroase Chestionarul grupului Kurihara), starea de performanță a Grupului de cooperare orientală ECOG PS , cancerul pulmonar cu celule mici neuniforme NSCLC , proteina C-reactivă CRP , hemoglobina Hb , albumina albă

Masa fizică masivă și rezistența mâinii nepotrivite

Conformitatea cu medicamentele studiate a fost ridicată, deoarece ≥96% dintre pacienți au luat ≥ 80% din medicamentele alocate. După cum se arată în figura 1a,1a , creșterea LBM față de valoarea inițială a fost semnificativ mai mare în grupul de anamorelin de 100 mg în săptămânile 8 și 12 decât în ​​grupul placebo, deși modificarea medie LS față de valoarea inițială până în săptămâna 12 a fost de importanță limită.Rezultatele obținute în FAS au fost în concordanță cu cele din PPS, cu LS medie ± SE modificări de 0,19 ± 0,31 kg și 1,07 ± 0,31 kg în grupul tratat cu placebo și respectiv 100 mg anamorelin. Diferența față de placebo a fost de 0,89 kg (95% CI 0,29, 1,48 kg) în grupul de anamorelină de 100 mg ( P = 0,0037). Deși 50 mg anamorelin a crescut și LBM, diferența față de placebo nu a fost semnificativă.

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este 520_2016_3144_Fig1_HTML.jpg

Efectele anamorelinului asupra masei corporale slabe ( a ) și a forței de prindere (mâna non-dominantă;Intervalul de încredere CI , media LSM medie pătrate, eroarea standard SE

Nu s-au înregistrat modificări ale rezistenței mânerului non-dominant în orice grup (Fig.

QOL-ACD

S-au identificat îmbunătățiri semnificative în grupul de anamorelin de 100 mg comparativ cu grupul placebo în scorul total QOL-ACD și scorurile pentru articole 1-6 „activitate zilnică”, condiție fizică 7-11 „” 8 „Ați avut apetit bun ?, „și 9″ V-ați bucurat de mese? ” (Fig.2-2 a-e).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este 520_2016_3144_Fig2_HTML.jpg

Efectele anamorelinului asupra scorului total QOL-ACD ( a ) și scorurile pentru articolele 1-6 „activitate zilnică” ( b ), articolele 7-11 „starea fizică ( c ), punctul 8″ Ați avut un apetit bun? „( D ) și punctul 9″ V-ați bucurat de mese? „( E )

Greutate corporala

În concordanță cu mecanismul său de acțiune și creșterea LBM, Fig.3a3 a arată că administrarea de anamorelin 100 și 50 mg a determinat o creștere semnificativă a greutății corporale în comparație cu placebo. Aceste creșteri ale greutății corporale au fost evidente în săptămâna 4 și au fost sustinute pe durata studiului.

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este 520_2016_3144_Fig3_HTML.jpg

Efectele anamorelinului asupra greutății corporale ( a ) și a scării de performanță Karnofsky ( b )

Scala de performanță Karnofsky

Administrarea anamorelinului de 100 mg a crescut semnificativ scara de performanță Karnofsky la începutul săptămânii 4 și 12 față de placebo, dar nu au fost detectate modificări în grupul de anamorelin de 50 mg (Fig.3.3b).

Alte obiective secundare

Efectele anamorelinului asupra altor obiective secundare, inclusiv biomarkeri serici / variabile de laborator, măsurători ale compoziției corporale (măsurate prin DEXA și bioimpedanță), rezistența la strângere și MDASI-J sunt prezentate în tabelele complementare 1 și 2 . Biomarkerii serici IGF-1, IGFBP-3 și prealbumina au fost semnificativ crescuți la pacienții care au luat 100 mg anamorelin comparativ cu placebo. Chiar și la pacienții care au luat 50 mg anamorelin, acești parametri au prezentat creșteri; totuși, amploarea modificărilor a fost mai mică decât cea observată în grupul de anamorelin de 100 mg. Fig.4a-c)4a -c).Nu au existat modificări în IL-1 β, IL-6, TNFα, acilghrelin sau des-acilghrelin (Tabelul suplimentar 1 ). În ceea ce privește celelalte obiective secundare, 100 mg anamorelin a fost asociat, de asemenea, cu creșteri semnificative ale greutății corporale măsurate prin DEXA la fiecare punct de timp (tabelul suplimentar 2 ).

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este 520_2016_3144_Fig4_HTML.jpg

Efectele anamorelinului asupra factorului de creștere asemănător insulinei-1 ( a ), a proteinei de legare a factorului de creștere de tip insulină-3 ( b ) și a prealbuminei ( c )

Siguranță

Răspunsurile tumorale în conformitate cu RECIST au fost clasificate ca răspuns complet, răspuns parțial, boală stabilă, boală progresivă și neevaluabile la 0, 4 (7,0%), 11 (19,3%), 24 (42,1%) și 14 %), respectiv, în grupul placebo; la 0, 3 (4,6%), 14 (21,5%), 27 (41,5%) și, respectiv, 15 (23,1%) pacienți în grupul de anamorelin de 50 mg; și în 1 (1,8%), 1 (1,8%), 20 (36,4%), 23 (41,8%) și respectiv 9 (16,4%) pacienți, respectiv în grupul de anamorelină de 100 mg. Ratele globale de supraviețuire nu au fost semnificativ diferite în rândul celor trei grupuri (Rata de risc [CI 95%], placebo vs. 50 mg anamorelin: 0,91 [0,62, 1,33], placebo față de 100 mg anamorelin: 0,74 [0,50, 1,10] Fig.2-2 ).

Incidența generală a evenimentelor adverse, a reacțiilor adverse la medicamente, a reacțiilor adverse severe la medicamente și a deceselor este prezentată în Tabelul2. 2 . Incidența evenimentelor adverse a fost comparabilă în toate cele trei grupuri. Cu toate acestea, incidența reacțiilor adverse la medicament a fost semnificativ mai mare la ambele grupuri de anamorelin comparativ cu grupul placebo. Incidența reacțiilor adverse la gradul ≥ 3 a fost similară în fiecare grup (tabelul 2 ). Având în vedere populația de pacienți, majoritatea deceselor au fost atribuite progresiei maligne a neoplasmelor și aceste evenimente nu au fost considerate a fi legate de medicamentele studiate.

tabel 2

Reacții adverse și reacții adverse la medicament

placebo 50 mg anamorelin 100 mg anamorelin
n 58 65 55
Evenimente adverse 58 (100,0) 61 (93,8) 53 (96,4)
Diferența (%) față de placebo (CI 95%) -6,2 (-12,0, -0,3) -3,6 (-8,6, 1,3)
P valoare 0.0548 0.1428
Evenimente adverse grave 29 (50,0) 26 (40,0) 17 (30,9)
Întreruperi datorate evenimentelor adverse 6 (10,3) 14 (21,5) 13 (23,6)
Reacții adverse la medicament 12 (20,7) 25 (38,5) 29 (52,7)
Diferența (%) față de placebo (CI 95%) 17,8 (2,0, 33,5) 32,0 (15,2, 48,9)
P valoare 0.0319 0,0004
Reacții adverse grave la medicament 4 (6.9) 3 (4.6) 0 (0.0)
Întreruperi datorate reacțiilor adverse la medicament 2 (3.4) 4 (6.2) 5 (9.1)
decese 12 (20,7) 8 (12,3) 6 (10,9)
Evenimente adverse pe grade
Gradul 3 17 (29,3) 23 (35,4) 15 (27,3)
Gradul 4 13 (22,4) 9 (13,8) 11 (20,0)
Gradul 5 13 (22,4) 11 (16,9) 7 (12,7)
Evenimentele adverse la ≥20% dintre pacienții din grupul anamorelin
Numărul leucocitelor a scăzut 18 (31,0) 20 (30,8) 14 (25,5)
Numărul de neutrofile a scăzut 15 (25,9) 19 (29,2) 13 (23,6)
CRP a crescut 19 (32,8) 16 (24,6) 10 (18.2)
Hemoglobina a scăzut 15 (25,9) 14 (21,5) 11 (20,0)
Greaţă 10 (17,2) 9 (13,8) 17 (30,9)
Vărsături 10 (17,2) 14 (21,5) 6 (10,9)
Hemoglobina hemoglobină a crescut 0 (0) 4 (6.2) 11 (20,0)

Valorile sunt exprimate ca n (%) dintre pacienți

Interval de încredere CI

În ambele grupuri tratate cu anamorelin, ≥ 20% dintre pacienți au prezentat greață, vărsături, creșterea proteinei C-reactive, creșterea hemoglobinei glicozilate, scăderea numărului de neutrofile sau scăderea numărului de hemoglobină și a leucocitelor. Dintre aceste evenimente, doar greața și creșterea hemoglobinei glicozilate au apărut la ≥ 5% pacienți din grupul anamorelin decât în ​​grupul placebo.

Discuţie

Acest studiu a arătat că administrarea anamorelinului de 100 mg a fost asociată cu îmbunătățiri semnificative din punct de vedere statistic ale LBM, greutății corporale, QOL și creșteri semnificative statistic ale biomarkerilor serici IGF-1, IGFBP-3 și prealbumină comparativ cu placebo. Prin contrast, 50 mg anamorelin nu a fost asociat cu îmbunătățiri semnificative la majoritatea acestor variabile în comparație cu placebo. Aceste rezultate indică faptul că 100 mg anamorelin este cea mai eficientă doză la pacienții japonezi cu NSCLC. Eficacitatea anamorelinului nu a fost confirmată în ceea ce privește rezistența mâinii, IL-1β, IL-6, TNFα, acilghrelin sau des-acilghrelin.

Au fost efectuate mai multe studii clinice cu anamorelin [ 20 , 21 , 27 ]. Într-un studiu de fază 1, cu doze multiple, anamorelinul a fost asociat cu creșteri ale greutății corporale legate de doză pe parcursul a 6 zile la voluntari sănătoși, cu cea mai mare creștere observată după administrarea o dată pe zi a 50 mg [ 21 ].Într-un studiu farmacodinamic la voluntari sănătoși, anamorelin (25, 50 și 75 mg) a fost asociat cu creșteri ale greutății corporale legate de doză și creșteri semnificative ale concentrațiilor de GH, IGF-1 și IGFBP-3, în concordanță cu mecanismul său de acțiune [ 22 ]. Într-o analiză cumulată a două studii de fază 2 la pacienții cu cașexie de cancer, 50 mg anamorelin a fost asociată cu o creștere semnificativă a LBM (LS medie 1,89 kg, 95% CI 0,84, 2,95 kg) comparativ cu placebo (-0,20, -1,23, 0,83), corespunzând unei diferențe între grupuri de 2,09 kg (95% CI 0,94, 3,25, P = 0,0006) [ 27 ]. În două studii de fază 3 la pacienți cu NSCLC și cașexie, anamorelinul de 100 mg a fost asociat cu simptome / preocupări semnificative privind LBM, greutatea corporală și anorexia-cachexia23 ].

În studiul de față, anamorelinul de 50 și 100 mg a fost asociat cu creșteri scăzute în placebo cu greutate corporală de 0,76 și 0,89 kg, respectiv. În concordanță cu studiile farmacodinamice anterioare [ 22 ], studiul nostru a evidențiat creșteri ale nivelurilor IGF-1 și IGFBP-3 la pacienții tratați cu anamorelin 100 mg care sugerează o creștere a sintezei proteinelor musculare. Aceste modificări sunt în concordanță cu creșterile în LBM. Am observat, de asemenea, o creștere semnificativă a prealbuminei, un marker al stării nutriționale.

Anamorelin (100 mg) a fost asociat, de asemenea, cu îmbunătățiri semnificative ale QOL-ACD, în special articolele 8 și 9, care se concentrează asupra apetitului și a plăcerii meselor, precum și pentru creșterea activității zilnice și îmbunătățirea stării fizice. Aceste constatări indică faptul că pacienții tratați cu anamorelin de 100 mg au raportat apetit mai mare în timpul tratamentului și au avut mai multe șanse de a se bucura de mese în comparație cu pacienții tratați cu placebo. În plus, creșterea scorului de performanță Karnofsky sugerează că au existat îmbunătățiri în starea funcțională a acestei cohorte de pacienți.

Timpul general de supraviețuire și răspunsurile tumorale conform RECIST au fost în general similare în fiecare grup de tratament, ceea ce indică faptul că tratamentul în sine nu a modificat progresia bolii. În plus, nu au existat diferențe în ceea ce privește caracteristicile pacientului (de exemplu stadiul bolii și istoricul chimioterapiei) sau factorii prognostici existenți, printre cele trei grupuri.

Incidența reacțiilor adverse la medicament a fost semnificativ mai mare la ambele grupuri de anamorelin decât la grupul placebo, dar au existat foarte puține reacții serioase la medicamente, iar distribuția evenimentelor de grad 3-5 a fost similară în toate cele trei grupuri. În mod special, cele mai multe decese și întreruperea tratamentului s-au datorat progresiei bolii, mai degrabă decât medicamentele de studiu în sine. Deși greața și hemoglobina glicozilată au apărut la ≥ 5% mai mulți pacienți din grupul anamorelin decât în ​​grupul placebo, niciunul eveniment advers nu a fost considerat un risc semnificativ. Acest lucru sugerează că anamorelinul este tolerabil la pacienții japonezi cu cașexie de cancer.

Acest studiu are câteva limitări. În primul rând, eficacitatea anamorelinului nu a fost confirmată în ceea ce privește rezistența mâinii. În al doilea rând, bioimpedanța ar fi putut să nu fie potrivită ca metodă pentru a determina LBM, grăsime corporală etc. pentru pacienții cu cașexie de cancer. În al treilea rând, dat fiind că acesta este un studiu exploratoriu, nu s-au efectuat mai multe comparații; ar trebui să fie efectuată într-un studiu cu dimensiuni mai mari care va fi efectuat în viitor.

concluzii

În concluzie, 100 mg anamorelin o dată pe zi a avut efecte favorabile asupra LBM la pacienții japonezi cu NSCLC care suferă de cașexie, sugerând că această doză ar trebui să fie preferată la această populație de pacienți. Tratamentul cu anamorelin a fost însoțit de creșteri ale IGF-1 și IGFBP-3, care indică o creștere a sintezei proteinelor și o creștere a prealbuminei, indicând o stare nutritivă îmbunătățită. Mai mult, anamorelinul a fost asociat cu îmbunătățiri favorabile în QOL, apetitul și starea de performanță. Deși incidența reacțiilor adverse la medicamente și întreruperea tratamentului datorită evenimentelor adverse au fost mai mari la grupurile de anamorelin, majoritatea întreruperilor de tratament au fost legate mai degrabă de progresia bolii decât de anamorelin.

Casexia de cancer necesită tratament multimodal, cum ar fi nutriția, exercițiile fizice și farmacoterapia. Profilul anamorelinului prezentat în acest studiu indică un mare potențial al medicamentului sigur și eficient ca opțiune pentru farmacoterapia pentru tratamentul multimodal al cazexiei de cancer.

Materiale electronice suplimentare

Materiale suplimentare (26K, docx)

(DOCX 25 kb)

Tabelul suplimentar 1 (27K, docx)

(DOCX 27 kb)

Tabelul suplimentar 2 (29K, docx)

(DOCX 29 kb)

Fig. 1 (66K, pptx)

Dispoziția pacientului. * Pacienții la care modificările de la valoarea inițială nu au putut fi analizate pentru ambele obiective primare de eficacitate de către DEXA și rezistența la aderență. DEXAabsorbție cu raze X cu energie duală. (PPTX 73 kb)

Fig. Suplimentar 2 (81K, pptx)

Supraviețuirea globală în funcție de grupul de tratament. Intervalul de încredere CI , rata de risc HR, timpul de supraviețuire MST median (PPTX 81 kb)

Recunoasteri

Autorii mulțumesc tuturor pacienților, anchetatorilor și personalului site-ului care au participat la studiu. Acest studiu a fost finanțat de Ono Pharmaceutical Co., Ltd., Osaka, Japonia. Autorii multumesc Nicholas D. Smith, dr., In numele Springer Healthcare Communications, pentru furnizarea de sprijin medical scris, care a fost finantat de Ono Pharmaceutical Co, Ltd.

Contribuția autorului

K. Takayama, H. Saito, Y. Takiguchi, K. Aoe, A. Koyama, N. Komura și K. Eguchi au fost responsabili pentru concepție și design. N. Katakami, T. Yokoyama, S. Atagi, K. Yoshimori, H. Kagamu, H. Saito, Y. Takiguchi și K. Aoe au fost responsabili pentru achiziționarea de date. K. Takayama, H. Saito, Y. Takiguchi, K. Aoe, A. Koyama, N. Komura și K. Eguchi au fost responsabili pentru analiza și interpretarea datelor. Toți autori au fost responsabili de scrierea manuscrisului și de aprobarea finală a manuscrisului.

Site-uri de studiu

Hokkaido Spitalul Universitar (Primul Departament de Medicină), Spitalul Universitar Hokkaido (Departamentul de Oncologie Medicală), Spitalul General Public Okitama, Centrul Medical Municipal Funabashi, Spitalul Internațional St.Luke, Centrul Național pentru Sănătate și Medicină Globală, Centrul de Cancer Kanagawa, Universitatea Niigata Spitalul medical și dentar, Centrul de Cancer Aichi Spitalul Aichi, Spitalul Universitar Tottori, Spitalul Universitar din Hiroshima, Hiroshima Centrul Medical Yamaguchi-Ube, Centrul Medical Shikoku, Spitalul Universitar Kumamoto, Spitalul Universitar Chiba, Organizația Spitalului Național Nagoya Medical Center, Kyoto Spitalul Universitar, Spitalul Universitar Keio, Spitalul Fukujuji, Spitalul Național Toneyama, Institutul de Cercetare și Inovare Biomedicală, Spitalul Yokohama Rosai,Centrul Medical Central Kinki-chuo, Spitalul Universitar din Nagoya, Spitalul Universitar Fukuoka, Spitalul Universitar Nagaoka, Centrul Medical Spitalul Nagaoka, Spitalul Prefectural Fukui, Spitalul Universitar Dokkyo, Spitalul Universitar Kyorin, Centrul Medical Itabashi Chuo, Societatea spitalului Suwa Suedia.

Respectarea standardelor etice

Studiul a fost realizat în conformitate cu Declarația de la Helsinki, protocolul de studiu, articolul 14 alineatul (3) și articolul 80 alineatul (2) din Legea privind afacerile farmaceutice din Japonia și Ghidul bunelor practici clinice (Ordonanța Ministerului Sănătății și Protecției Sociale nr. 28). Studiul a fost aprobat de comitetele de etică la toate instituțiile participante.

Conflictul de interese

K. Takayama a primit remunerație de la Ono Pharmaceutical Co., Ltd. H. Saito și K. Eguchi au primit finanțare de la Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Y. Takiguchi a primit remunerație și finanțare de la Ono Pharmaceutical Co., Ltd. A. Koyama și N , Komura sunt angajați ai Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Toți autorii rămași nu au declarat conflicte de interese.

Sprijin financiar

Ono Pharmaceutical Co., Ltd., Osaka, Japonia.

Logo-ul springeropen

Link to Publisher's site
Suportul de îngrijire în caz de cancer
Asistență pentru îngrijirea cancerului . 2016; 24: 3495-3505.
Publicat online 2016 Mar 23. doi: 10.1007 / s00520-016-3144-z
PMCID: PMC4917578
PMID: 27005463

Referințe

1. Fearon K, Arends J, Baracos V. Înțelegerea mecanismelor și opțiunilor de tratament în cazexia de cancer. Nat Rev Clin Oncol. 2013; 10 : 90-99. doi: 10.1038 / nrclinonc.2012.209. PubMed ] Cross Ref ]
2. Bruera E. ABC de îngrijire paliativă. anorexie, cașexie și nutriție. BMJ. 1997; 315 : 1219-1222. doi: 10.1136 / bmj.315.7117.1219. Articolul gratuit PMC ] PubMed ] Ref.cross ]
3. Dewys WD, Begg C, Lavin PT, Band PR, Bennett JM, Bertino JR, Cohen MH, Douglass HO Jr, Engstrom PF, Ezdinli EZ, Horton J, Johnson GJ, Moertel CG, Oken MM, Perlia C, Rosenbaum C , Silverstein MN, Skeel RT, Sponzo RW, Tormey DC (1980) Efectul prognostic al pierderii în greutate înainte de chimioterapie la pacienții cu cancer. Grupul de oncologie de cooperare orientală. Am J Med 69: 491-497 PubMed ]
4. Reuben DB, Mor V, Hiris J. Simptome clinice și durata supraviețuirii la pacienții cu cancer terminal.Arch Intern Med. 1988; 148 : 1586-1591. doi: 10.1001 / archinte.1988.00380070082020. PubMed ]Cross Ref ]
5. von Haehling S, Anker SD. Tratamentul cașexiei: o prezentare generală a evoluțiilor recente. J Am Med Dir Conf. 2014; 15 : 866-872. doi: 10.1016 / j.jamda.2014.09.007. PubMed ] Cross Ref ]
6. von Haehling S, Anker SD. Prevalența, incidența și impactul clinic al cașexiei: fapte și numere – actualizare 2014. J Cachex Sarcopenia Muscle. 2014; 5 : 261-263. doi: 10.1007 / s13539-014-0164-8.Articolul gratuit PMC ] PubMed ] Ref.cross ]
7. von Haehling S, Anker SD. Cachexia ca o necesitate medicală majoră subestimată și nesatisfăcută: fapte și cifre. J Cachex Sarcopenie Muscle. 2010; 1 : 1-5. doi: 10.1007 / s13539-010-0002-6.Articolul gratuit PMC ] PubMed ] Ref.cross ]
8. Ruiz Garcia V, Lopez-Briz E, Carbonell Sanchis R, Gonzalvez Perales JL, Bort-Marti S. Megestrol acetat pentru tratamentul sindromului anorexie-cașexie. Cochrane Database Syst Rev. 2013; 3 : Cd004310. PubMed ]
9. Loprinzi CL, Schaid DJ, Doza AM, Burnham NL, Jensen MD. Modificări ale compoziției corporale la pacienții care au primit greutate în timpul administrării acetat de megestrol. J Clin Oncol. 1993; 11 : 152-154. PubMed ]
10. Kojima M, Hosoda H, data Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin este o peptidă acilată eliberată de hormon de creștere din stomac. Natură. 1999; 402 : 656-660. doi: 10.1038 / 45230. PubMed ]Cross Ref ]
11. Smith RG, Cheng K, Schoen WR, Pong SS, Hickey G, Jacks T, Butler B, Chan WW, Chaung LY, Judith F și colab. Un secretagog al hormonului de creștere nonpeptidil. Ştiinţă. 1993; 260 : 1640-1643. doi: 10.1126 / science.8503009. PubMed ] Cross Ref ]
12. Near NM, Small CJ, Wren AM, Lee JL, Druce MR, Palmieri C, Frost GS, Ghatei MA, Coombes RC, Bloom SR. Ghrelin crește aportul de energie la pacienții cu cancer cu apetit afectat: studiu acut, randomizat, controlat cu placebo. J Clin Endocrinol Metab. 2004; 89 : 2832-2836. doi: 10.1210 / jc.2003-031768. PubMed ] Cross Ref ]
13. Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG, Dhillo WS, Ghatei MA, Bloom SR. Ghrelin sporește apetitul și mărește aportul de alimente la om. J Clin Endocrinol Metab. 2001; 86 : 5992. doi: 10.1210 / jcem.86.12.8111. PubMed ] Cross Ref ]
14. Akamizu T, Takaya K, Irako T, Hosoda H, Teramukai S, Matsuyama A, Tada H, Miura K, Shimizu A, Fukushima M, Yokode M, Tanaka K, Kangawa K. Farmacocinetica, siguranța și efectele endocrine și apetitului de administrare de ghrelin la tineri subiecți sănătoși. Eur J Endocrinol. 2004; 150 : 447-455. doi: 10.1530 / eje.0.1500447. PubMed ] Cross Ref ]
15. Morozumi N, Hanada T, Habara H, Yamaki A, Furuya M, Nakatsuka T, Inomata N, Minamitake Y, Ohsuye K, Kangawa K. Rolul părții C-terminale a ghrelinului în profilul farmacocinetic și activitatea biologică la șobolani. Peptidele. 2011; 32 : 1001-1007. doi: 10.1016 / j.peptides.2011.01.021. PubMed ]Cross Ref ]
16. Currow DC, Abernethy AP. Anamorelin clorhidrat în tratamentul sindromului anorexie-cachexie a cancerului. Viitorul Oncol. 2014; 10 : 789-802. doi: 10.2217 / fon.14.14. PubMed ] Cross Ref ]
17. Zhang H, Garcia JM. Anamorelin clorhidrat pentru tratamentul cancerului-anorexie-cașexie în NSCLC. Expert Opin Pharmacother. 2015; 16 : 1245-1253. doi: 10.1517 / 14656566.2015.1041500.Articolul gratuit PMC ] PubMed ] Ref.cross ]
18. Pietra C, Takeda Y, Tazawa-Ogata N, Minami M, Yuanfeng X, Duus EM, Northrup R. Anamorelin HCl (ONO-7643), un nou agonist al receptorilor de ghrelin, pentru tratamentul sindromului de anorexie-cachexie a cancerului: profil. J Cachex Sarcopenie Muscle. 2014; 5 : 329-337. doi: 10.1007 / s13539-014-0159-5. Articolul gratuit PMC ] PubMed ] Ref.cross ]
19. Efectul ghrelin și anamorelin (ONO-7643), un agonist selectiv al receptorilor de ghrelin, asupra creșterii tumorii la un model de xenogrefă de șoarece de cancer pulmonar . Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2013; 21 : 2409-2415. doi: 10.1007 / s00520-013-1800-0. Articolul gratuit PMC ] PubMed ]Ref.cross ]
20. Garcia JM, Friend J, Allen S. Potențialul terapeutic al anamorelinului, un roman, mimetic de ghrelin oral, la pacienții cu cazhexie legată de cancer: un studiu pilot multicentric, randomizat, dublu-orb, crossover. Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2013; 21 : 129-137. doi: 10.1007 / s00520-012-1500-1.PubMed ] Cross Ref ]
21. Garcia JM, Polvino WJ. Efectul asupra masei corporale și a siguranței RC-1291, un nou mimetic ghrelin disponibil pe cale orală și un secretagog al hormonului de creștere: rezultate ale unui studiu randomizat, controlat cu placebo, randomizat, controlat cu placebo, la voluntari sănătoși. Oncolog. 2007;12 : 594-600. doi: 10.1634 / theoncologist.12-5-594. PubMed ] Cross Ref ]
22. Garcia JM, Polvino WJ. Efecte hormonale farmacodinamice ale anamorelinului, un nou mimetic de ghrelin oral și secretagogon de hormon de creștere la voluntari sănătoși. Hormonul de creștere IGF Res.2009; 19 : 267-273. doi: 10.1016 / j.ghir.2008.12.003. PubMed ] Cross Ref ]
23. Temel SA, Currow DC, Fearon K, Yan Y, Friend J, Abernethy AP. Studiile de fază III ale anamorelinului la pacienții cu cancer pulmonar fără celule mici (NSCLC) avansate și cașexie (ROMANA 1 și 2) J Clin Oncol. 2015; 33 : 9500.
24. Moyle GJ, Daar ES, Gertner JM, Kotler DP, Melchior JC, O’Brien F, Svanberg E. Hormonul de creștere îmbunătățește masa corporală slabă, performanța fizică și calitatea vieții la subiecții cu pierdere în greutate asociată cu HIV sau risipirea terapie antiretrovirală foarte activă. J Acquir Immune Defic Syndr. 2004; 35 : 367-375. doi: 10.1097 / 00126334-200404010-00006. PubMed ] Cross Ref ]
25. Okuyama T, Wang XS, Akechi T, Mendoza TR, Hosaka T, Cleeland CS, Uchitomi Y. Versiunea japoneză a inventarului simptomelor MD Anderson: un studiu de validare. J Pain Symptom Manag. 2003;26 : 1093-1104. doi: 10.1016 / j.jpainsymman.2003.05.003. PubMed ] Cross Ref ]
26. Matsumoto T, Ohashi Y, Morita S, Kobayashi K, Shibuya M, Yamaji Y, Eguchi K, Fukuoka M, Nagao K, Nishiwaki Y, Niitani H. Calitatea vietii chestionar pentru pacienții cu cancer tratați cu medicamente împotriva cancerului (QOL- ACD): validitatea și fiabilitatea la pacienții japonezi cu cancer pulmonar avansat nemetal. Qual Life Res. 2002; 11 : 483-493. doi: 10.1023 / A: 1015614505929. PubMed ]Cross Ref ]
27. Garcia JM, Boccia RV, Graham CD, Yan Y, Duus EM, Allen S, Friend J. Anamorelin pentru pacienții cu cașexie de cancer: o analiză integrată a două studii clinice randomizate, controlate cu placebo, dublu-orb. Lancet Oncol. 2015; 16 : 108-116. doi: 10.1016 / S1470-2045 (14) 71154-4. PubMed ] Cross Ref ]

formate:

    • Articol

|

|

|

|

Anamorelin la pacienții cu cancer pulmonar cu celule mici și cașexie (ROMANA 1 și ROMANA 2): rezultate din două studii randomizate, dublu-orb, de fază III

Abstract

FUNDAL:

Pacienții cu cancer avansat prezintă adesea anorexie și cașexie, care sunt asociate cu aportul alimentar redus, cu alterarea compoziției corporale și cu scăderea funcționalității. Am evaluat anamorelinul, un nou agonist al receptorilor de ghrelin, la casexia la pacienții cu cancer pulmonar fără celule mici și cașexie.

METODE:

ROMANA 1 și ROMANA 2 au fost studii randomizate, dublu-orb, placebo-controlate de faza 3 studii efectuate la 93 de site-uri/ locatii  din 19 țări.Pacienții cu cancer pulmonar cu stadiul III sau IV inoperabil și cu cașexie (definită ca o pierdere în greutate ≥5% în decurs de 6 luni sau un indice de masă corporală <20 kg / m (2)) au fost repartizati aleatoriu 2: 1 la anamorelin 100 mg pe cale orală o dată pe zi sau cu placebo, cu un algoritm de randomizare generat de calculator stratificat pe regiuni geografice, statutul de tratament al cancerului și pierderea în greutate în ultimele 6 luni. Obiectivele finale de eficacitate co-primară au fost modificările mediane ale masei corporale slabe și a rezistenței la mâner pe parcursul a 12 săptămâni și au fost măsurate la toți participanții la studiu (populație de intenție de tratament). Ambele studii sunt acum finalizate și sunt înregistrate la ClinicalTrials.gov, numerele NCT01387269 și NCT01387282 .

CONSTATĂRI:

Începând cu data de 8 iulie 2011 până la 28 ianuarie 2014, 484 pacienți au fost înscriși în ROMANA 1 (323 la anamorelin, 161 la placebo), iar în perioada 14 iulie 2011 – 31 octombrie 2013, 495 pacienți au fost înscriși în ROMANA 2 330 la anamorelin, 165 la placebo).

Peste 12 săptămâni, masa corporală slabă a crescut la pacienții cărora li sa administrat anamorelin comparativ cu cei cărora li sa administrat placebo în ROMANA 1 (creștere mediană de 0,99 kg [95% CI 0,61-1,36] vs -0,47 kg [-1 · 00-021], p <0,0001) și ROMANA 2 (0,65 kg [0,38-0,91] vs -0,98 kg [-1,49 până la -0,41], p <0 · 0001).

Nu am observat nici o diferență în puterea mânerului în ROMANA 1 (-1 · 10 kg [-1 · 69 până la -0 · 40] vs -1,58 kg [-2,99-1,14], p = 0,15 ) sau ROMANA 2 (-1,49 kg [-2,06 până la -0,58] vs -0,95 kg [-1,56 până la 0,04], p = 0,65).

Nu au existat diferențe între evenimentele adverse legate de tratamentul de gradul 3-4 între grupurile de studiu; cel mai frecvent eveniment advers de grad 3-4 a fost hiperglicemia, aparând la un (<1%) din 320 pacienți cărora li sa administrat anamorelin în ROMANA 1 și la patru (1%) din 330 pacienți cărora li sa administrat anamorelin în ROMANA 2.

INTERPRETARE:

Anamorelin a sporit în mod semnificativ masa corporală slabă, dar nu și rezistența mainii la pacienții cu cancer pulmonar fără celule mici. Având în vedere nevoia medicală nesatisfăcută pentru tratamente sigure și eficiente pentru cașexie, anamorelinul ar putea fi o opțiune de tratament pentru pacienții cu anorexie de cancer și cașexie.

FINANȚAREA:

Helsinn Therapeutics.

Comentariu în

PMID: 
26906526 
DOI: 
10.1016 / S1470-2045 (15) 00558-6
Lancet Oncol. 2016 Apr; 17 (4): 519-531. doi: 10.1016 / S1470-2045 (15) 00558-6. Epub 2016 Feb 20.
Temel JS 1 , Abernethy AP 2 , Currow DC 3 , Prieten J 4 , Duus EM 4 , Yan Y 4 , Fearon KC 5 .

Informatia autorului

1
Departamentul de Medicină, Massachusetts General Hospital Cancer Center, Boston, MA, SUA. Adresă electronică: jtemel@partners.org.
2
Departamentul de Medicina, Universitatea Duke, Scoala de Medicina, Durham, NC, SUA.
3
Departamentul de îngrijire paliativă și de susținere, Universitatea Flinders, Adelaide, SA, Australia.
4
Helsinn Therapeutics (SUA) Incorporated, Iselin, NJ, SUA.
5
Departamentul de Chirurgie, Infirmeria Regală, Edinburgh, Marea Britanie.
  • Fearon, K
  • Arends, J
  • Baracos, V
Understanding the mechanisms and treatment options in cancer cachexia.

Nat Rev Clin Oncol. 2013; 1090-99

  • Fearon, K
  • Strasser, F
  • Anker, SD
  • et al.

Definition and classification of cancer cachexia: an international consensus.

Lancet Oncol. 2011; 12489-495

  • Fearon, KC
  • Voss, AC
  • Hustead, DS
  • , Cancer Cachexia Study Group

Definition of cancer cachexia: effect of weight loss, reduced food intake, and systemic inflammation on functional status and prognosis.

Am J Clin Nutr. 2006; 831345-1350

  • LeBlanc, TW
  • Nipp, RD
  • Rushing, CN
  • et al.

Correlation between the international consensus definition of the Cancer Anorexia-Cachexia Syndrome (CACS) and patient-centered outcomes in advanced non-small cell lung cancer.

J Pain Symptom Manage. 2015; 49680-689

  • Prado, CM
  • Baracos, VE
  • McCargar, LJ
  • et al.

Sarcopenia as a determinant of chemotherapy toxicity and time to tumor progression in metastatic breast cancer patients receiving capecitabine treatment.

Clin Cancer Res. 2009; 152920-2926

  • Ross, PJ
  • Ashley, S
  • Norton, A
  • et al.

Do patients with weight loss have a worse outcome when undergoing chemotherapy for lung cancers?.

Br J Cancer. 2004; 901905-1911

  • Dewys, WD
  • Begg, C
  • Lavin, PT
  • et al.

Prognostic effect of weight loss prior to chemotherapy in cancer patients. Eastern Cooperative Oncology Group.

Am J Med. 1980; 69491-497

  • Tuca, A
  • Jimenez-Fonseca, P
  • Gascón, P
Clinical evaluation and optimal management of cancer cachexia.

Crit Rev Oncol Hematol. 2013; 88625-636

  • Mann, M
  • Koller, E
  • Murgo, A
  • Malozowski, S
  • Bacsanyi, J
  • Leinung, M
Glucocorticoidlike activity of megestrol. A summary of Food and Drug Administration experience and a review of the literature.

Arch Intern Med. 1997; 1571651-1656

  • Subramanian, S
  • Goker, H
  • Kanji, A
  • Sweeney, H
Clinical adrenal insufficiency in patients receiving megestrol therapy.

Arch Intern Med. 1997; 1571008-1011

  • Pietra, C
  • Takeda, Y
  • Tazawa-Ogata, N
  • et al.

Anamorelin HCl (ONO-7643), a novel ghrelin receptor agonist, for the treatment of cancer anorexia-cachexia syndrome: preclinical profile.

J Cachexia Sarcopenia Muscle. 2014; 5329-337

  • Guillory, B
  • Splenser, A
  • Garcia, J
The role of ghrelin in anorexia-cachexia syndromes.

Vitam Horm. 2013; 9261-106

  • Garcia, JM
  • Boccia, RV
  • Graham, CD
  • et al.

Anamorelin for patients with cancer cachexia: an integrated analysis of two phase 2, randomised, placebo-controlled, double-blind trials.

Lancet Oncol. 2015; 16108-116

  • Garcia, JM
  • Friend, J
  • Allen, S
Therapeutic potential of anamorelin, a novel, oral ghrelin mimetic, in patients with cancer-related cachexia: a multicenter, randomized, double-blind, crossover, pilot study.

Support Care Cancer. 2013; 21129-137

  • Temel, J
  • Bondarde, S
  • Jain, M
  • Allen, S
  • Mann, W
Efficacy and safety of anamorelin HCl in NSCLC patients: results from a randomized, double-blind, placebo-controlled, multicenter phase II study.

Eur J Cancer. 2013; 49 ((abstr).)1308 ((abstr).)

  • LeBlanc, TW
  • Samsa, GP
  • Wolf, SP
  • Locke, SC
  • Cella, DF
  • Abernethy, AP
Validation and real-world assessment of the Functional Assessment of Anorexia-Cachexia Therapy (FAACT) scale in patients with advanced non-small cell lung cancer and the cancer anorexia-cachexia syndrome (CACS).

Support Care Cancer. 2015; 232341-2347

  • Yellen, SB
  • Cella, DF
  • Webster, K
  • Blendowski, C
  • Kaplan, E
Measuring fatigue and other anemia-related symptoms with the Functional Assessment of Cancer Therapy (FACT) measurement system.

J Pain Symptom Manage. 1997; 1363-74

  • Loprinzi, CL
  • Schaid, DJ
  • Dose, AM
  • Burnham, NL
  • Jensen, MD
Body-composition changes in patients who gain weight while receiving megestrol acetate.

J Clin Oncol. 1993; 11152-154

  • Courneya, KS
  • Segal, RJ
  • Mackey, JR
  • et al.

Effects of aerobic and resistance exercise in breast cancer patients receiving adjuvant chemotherapy: a multicenter randomized controlled trial.

J Clin Oncol. 2007; 254396-4404

  • Galvão, DA
  • Taaffe, DR
  • Spry, N
  • Joseph, D
  • Newton, RU
Combined resistance and aerobic exercise program reverses muscle loss in men undergoing androgen suppression therapy for prostate cancer without bone metastases: a randomized controlled trial.

J Clin Oncol. 2010; 28340-347

  • Rhondali, W
  • Chisholm, GB
  • Daneshmand, M
  • et al.

Association between body image dissatisfaction and weight loss among patients with advanced cancer and their caregivers: a preliminary report.

J Pain Symptom Manage. 2013; 451039-1049

  • Leese, PT
  • Trang, JM
  • Blum, RA
  • de Groot, E
An open-label clinical trial of the effects of age and gender on the pharmacodynamics, pharmacokinetics and safety of the ghrelin receptor agonist anamorelin.

Clin Pharmacol Drug Dev. 2015; 4112-120

  • Chen, JA
  • Splenser, A
  • Guillory, B
  • et al.

Ghrelin prevents tumour- and cisplatin-induced muscle wasting: characterization of multiple mechanisms involved.

J Cachexia Sarcopenia Muscle. 2015; 6132-143

  • Chen, L
  • Nelson, DR
  • Zhao, Y
  • Cui, Z
  • Johnston, JA
Relationship between muscle mass and muscle strength, and the impact of comorbidities: a population-based, cross-sectional study of older adults in the United States.

BMC Geriatr. 2013; 1374

  • Dobs, AS
  • Boccia, RV
  • Croot, CC
  • et al.

Effects of enobosarm on muscle wasting and physical function in patients with cancer: a double-blind, randomised controlled phase 2 trial.

Lancet Oncol. 2013; 14335-345

  • Park, SW
  • Goodpaster, BH
  • Strotmeyer, ES
  • et al.

Decreased muscle strength and quality in older adults with type 2 diabetes: the health, aging, and body composition study.

Diabetes. 2006; 551813-1818

  • Crawford, JC
  • Johnston, MA
  • Hancock, ML
  • et al.

Enobosarm, a selective androgen receptor modulator (SARM) increases lean body mass (LBM) in advanced NSCLC patients: updated results of two pivotal, international phase 3 trials.

Support Care Cancer. 2014; 22 ((abstr).)S30 ((abstr).)

  • Loprinzi, CL
  • Ellison, NM
  • Schaid, DJ
  • et al.

Controlled trial of megestrol acetate for the treatment of cancer anorexia and cachexia.

J Natl Cancer Inst. 1990; 821127-1132

  • Jean-Pierre, P
  • Morrow, GR
  • Roscoe, JA
  • et al.

A phase 3 randomized, placebo-controlled, double-blind, clinical trial of the effect of modafinil on cancer-related fatigue among 631 patients receiving chemotherapy: a University of Rochester Cancer Center Community Clinical Oncology Program Research base study.

Cancer. 2010; 1163513-3520

  • Northrup, R
  • Kuroda, K
  • Duus, EM
  • et al.

Effect of ghrelin and anamorelin (ONO-7643), a selective ghrelin receptor agonist, on tumor growth in a lung cancer mouse xenograft model.

Support Care Cancer. 2013; 212409-2415

  • Yavuzsen, T
  • Davis, MP
  • Walsh, D
  • LeGrand, S
  • Lagman, R
Systematic review of the treatment of cancer-associated anorexia and weight loss.

J Clin Oncol. 2005; 238500-8511

  • Berenstein, EG
  • Ortiz, Z
Megestrol acetate for the treatment of anorexia-cachexia syndrome.

Cochrane Database Syst Rev. 2005; 2 (CD004310) (CD004310)

  • Ruiz Garcia, V
  • López-Briz, E
  • Carbonell Sanchis, R
  • Gonzalvez Perales, JL
  • Bort-Marti, S
Megestrol acetate for treatment of anorexia-cachexia syndrome.

Cochrane Database Syst Rev. 2013; 3 (CD004310) (CD004310)

Anamorelin clorhidrat în tratamentul sindromului anorexie-cachexie a cancerului: proiectarea, dezvoltarea și locul potențial în terapie

Abstract

Sindromul de anorexie-casexie a cancerului (CACS) este o complicație paraneoplazică complexă și în mare măsură netratata în comun în cazul cancerului avansat. Este asociat cu efecte profund dăunătoare asupra calității vieții și supraviețuirii. De la descoperirea sa de peste un deceniu în urmă, clorhidratul de anamorelin (anamorelin), un mimetic al ghrelinului secretagogic al hormonului de creștere, a arătat o promisiune considerabilă în ameliorarea componentelor anorexie-casexie a cancerului CACS atunci când este administrat la pacienți cu cancer avansat, incluzând pierderea masei musculare slabe și inversarea anorexiei . Această revizuire rezumă evoluția anamorelinului și siguranța și eficacitatea acestuia în investigațiile clinice. Se discută, de asemenea, rolul potențial viitor al anamorelinului în tratarea anorexie-casexie a cancerului CACS.

Introducere

Anorexia și cașexia sunt semne recunoscute de mult timp pentru boala avansată. La pacienții cu cancer, sindromul anorexie-cachexie (CACS) descrie un sindrom multifactorial caracterizat printr-o pierdere continuă a masei musculare scheletice (cu sau fără pierderea de masă de grăsime) care nu poate fi complet inversată prin suport nutrițional convențional și conduce la o deteriorare funcțională progresivă . 1 , 2Mecanismele patologice responsabile pentru anorexie-casexie a cancerului CACS sunt incomplet înțelese. 3 , 4 Studii recente în modelele murine au identificat căi moleculare și enzimatice care par să conducă cașexia, incluzând, de exemplu, semnalizarea prin Fn14 (membru 12A a superfamiliei receptorului factorului de necroză tumorală) și inductor slab de apoptoză asociat cu factorul de necroză tumorală (TWEAK) , Inactivarea 5 – 7a proteinei kinazei activate 5 ‘de adenozin monofosfat care duce la pierderea energiei inutile de către țesutul adipos albe, 8 și rolul peptidei legate de hormonul paratiroidian care mediază hipermetabolismul. 9Complexitatea factorilor care stau la baza anorexie-casexie a cancerului CACS se reflectă în diversitatea manifestărilor și rezultatelor sale clinice. 7

sindromul anorexie-casexie a cancerului  CACS este o afecțiune progresivă a pierderii: gravitatea sa este clasificată de-a lungul unui spectru de la precachexie la cașexie până la cașexia 2 refractară și este de obicei măsurată prin scăderea procentuală a greutății sau a masei musculare în contextul indicele de masă corporală (BMI). 10 În timp ce anorexie-casexie a cancerului CACS câștigă recunoașterea ca o entitate importantă în practica oncologică, probabil că rămâne subdiagnostic 11 și adesea merge netratată. 2 , 10 , 12 anorexie-casexie a cancerului CACS pot fi asociate cu rezistența la tratamentul cancerului, distresul psihosocial la pacienți și familiile acestora, pierderea calității vieții și scăderea supraviețuirii globale. 13Studiile care evaluează terapiile anorexie-casexie a cancerului CACS trebuie să țină cont de aceste complexități și să evalueze obiectivele semnificative din punct de vedere clinic. Agențiile de reglementare, inclusiv Administrația SUA pentru Alimentație și Medicamente (FDA) și Agenția Europeană pentru Medicamente încă nu au coalizat parametrii acceptați în proiectarea studiilor clinice care să evalueze intervențiile CACS. 14

Abordările moderne la CACS recunosc complexitatea sindromului și încearcă să abordeze orice factori modificabili, inclusiv cancerul subiacent. 15 De exemplu, recomandările rețelei naționale privind cancerul la nivel global susțin o evaluare cuprinzătoare a potențialelor cauze ale anorexiei și cașexiei și intervențiile corespunzătoare, inclusiv tratamentul farmacologic al depresiei și al motilității și digestiei deteriorate, instituirea unui program de exerciții și luarea în considerare a consultării nutriționale și susținerea și, în anumite cazuri, stimularea apetitului farmacologic. 16 Liniile directoare accentuează în plus concentrarea activă asupra obiectivelor și preferințelor pacientului, pe lângă educația pacientului și a familiei privind istoricul natural al anorexie-casexie a cancerului CACS la pacienții cu boli terminale. Unele studii clinice cu un singur centru au arătat beneficiul regimurilor multiagente, incluzând progestine, agenți antiinflamatori și antioxidanți și imunomodulare în combinație. Cu toate acestea, această abordare nu a fost validată în studii mai mari controlate cu placebo și niciun tratament nu este aprobat în prezent de FDA pentru prevenirea sau tratamentul cașexiei. Prin urmare, opțiunile îmbunătățite de tratament pentru anorexie-casexie a cancerului CACS rămân o necesitate importantă clinică nesatisfăcută.

Incidența sindromului anorexie-casexie a cancerului CACS variază în funcție de tipurile de cancer, afectând> 50% dintre pacienții cu cancer pulmonar avansat și în sus de 80% dintre pacienții cu cancer gastro-intestinal avansat. 19 sindromul anorexie-casexie a cancerului CACS este influențat de stadiul cancerului, de eficacitatea terapiei anticanceroase, de impactul cancerului asupra funcției gastrointestinale și de tratamentele cancerului în sine. O mare parte din cercetările clinice efectuate în cadrul CACS au fost efectuate la pacienții cu cancer pulmonar fără celule mici (NSCLC), deoarece este un cancer relativ comun, cu o prevalență ridicată a anorexie-casexie a cancerului CACS. Principalul pilon al terapiei pentru majoritatea pacienților cu NSCLC avansat include chemo- și imunoterapiile sistemice anticanceroase administrate pentru progresia lentă a bolii și pentru optimizarea calității vieții. Imbunatatirea intelegerii biologiei NSCLC, atat in ceea ce priveste profilul mutatiei sale, cat si interactiunea cu imunitatea gazdei, din fericire, a dus la imbunatatiri semnificative ale rezultatelor acestei boli in ultimii ani. In plus, implicarea timpurie a ingrijirii paliative, cu accent pe simptomele pacientului, inclusiv anorexie-casexie a cancerului CACS, a aparut ca o componenta cheie a ingrijirii NSCLC. Cu toate acestea, stadiul avansat de NSCLC rămâne incurabil, iar anorexie-casexie a cancerului CACS, prin urmare, continuă să fie o complicație proeminentă și în mare măsură netratabilă a bolii.

Anamorelin clorhidrat (denumit ulterior ca anamorelin) este un medicament nou care a generat o excitare considerabilă pentru potențialul său de a trata anorexie-casexie a cancerului CACS, inclusiv la pacienții cu NSCLC avansat. Aici, revizuim evolutia sa preclinice si rezuma datele recente cu privire la utilizarea sa tratarea pacientilor cu anorexie-casexie a cancerului CACS.

Design și dezvoltare

Sistemul ghrelin

Ghrelin, un hormon peptidic de 28 de aminoacizi, secretat în principal de stomac, este un modulator cheie al homeostaziei energetice și secretagogului hormonului de creștere (GH). 21 Se traversează bariera hemato-encefalică și se angajează un receptor cuplat cu proteină G în nucleele hipotalamice care reglează consumul de energie și consumul de alimente. Acest receptor este, de asemenea, exprimat în alte țesuturi din periferie, deși nu este exprimat în ficat, mușchi scheletici sau țesut adipos. 23 Mai multe studii au sugerat că nu toate efectele ghrelinului sunt mediate prin acest receptor, deși receptorul alternativ nu a fost încă caracterizat. 24 , 25 Sistemul ghrelin este un punct central al cercetării farmacologice în secreția GH, 26 obezitate, 27 dismotilitate intestinală, 28 și cașexie.

Studiile pe animale au arătat că administrarea intravenoasă a ghrelinului a îmbunătățit markerii de nutriție, incluzând consumul de alimente, adipozitatea și masa corporală slabă și puterea musculară. În modelele de cașexie de cancer, precum și sepsis, ghrelinul sa dovedit a scădea de asemenea inflamația. 24 , 30 

În studiile mici, ghrelinul și-a arătat promisiunea ca terapie cu un singur agent administrată intravenos la pacienții cu anorexie-casexie a cancerului CACS, dintre care unii au primit în mod activ chimioterapie foarte emetogenă. Tratamentul a fost bine tolerat și sa observat o îmbunătățire a aportului alimentar, a poftei de mâncare și a greaței legate de chimioterapia în curs de desfășurare. 31 , 32 

Ghrelin a prezentat, de asemenea, rezultate încurajatoare prin îmbunătățirea apetitului, a masei corporale slabe și a capacității de efort în studiile mici efectuate la pacienții cu cașexie datorită insuficienței cardiace congestive și bolii pulmonare obstructive cronice. 33 – 35

Anamorelin de dezvoltare

Deși promite în potențialul său de a trata anorexie-casexie a cancerului CACS, administrarea ghrelinului este greoaie în practica clinică de zi cu zi datorită formulării sale parenterale și timpului de înjumătățire de 30 de minute. Prin urmare, au fost urmărite alte abordări privind direcționarea sistemului ghrelin. Deși ghrelinul a fost identificat numai în 1999 ca ligand endogen al receptorului ghrelin, 36 de agoniști ai receptorului ghrelin au fost în dezvoltare clinică încă din 1981. 37 Anamorelin (cunoscut anterior ca ONO-7643 și RC-1291) este un mimetic sintetic al Miez activ N-terminal al ghrelinului. Acesta a fost dezvoltat de Novo Nordisk în 1999 și a fost ulterior licențiat pentru Ono și Helsinn Therapeutics pentru tratamentul cașexiei și anorexiei la pacienții cu cancer. 38 Este disponibil pe cale orală și are un timp de înjumătățire de ~ 7 ore, făcându-l un candidat atractiv pentru modularea axei ghrelin. Experimentele cu medicamente radioactivate au arătat că anamorelinul este excretat predominant în fecale (92%) și într-o mică măsură în urină (8%). Într-un studiu de fază I care a implicat 24 de voluntari sănătoși, o doză fixă ​​de 25 mg de anamorelin a determinat concentrații plasmatice mai mari la femei comparativ cu bărbații, cu o arie de sub curba concentrație-timp de la zero la infinit – de 1,9 ori mai mare la femei. Cu toate acestea, nu s-a observat nicio relație corespunzătoare în ceea ce privește valorile GH, iar datele ulterioare, nepublicate, au indicat că doze mai mari de 100 mg nu au avut ca rezultat nici o diferență în concentrațiile plasmatice dintre bărbați și femei.

Datele preclinice

În liniile celulare cultivate, anamorelinul are o valoare a concentrației efective pe jumătate maximă pentru activitatea agonistă pe receptorul ghrelin de 0,74 nanomolari. În cazul unui model de șoarece xenograft pentru cancer pulmonar, anamorelinul nu a avut niciun impact asupra ratei creșterii tumorale in vivo și nu s-au observat semne de toxicitate asociată tratamentului la toate dozele testate, până la 30 mg / kg. La șobolani, administrarea de anamorelin la doze unice orale de 3, 10 și 30 mg / kg a determinat un răspuns dependent de doză al concentrațiilor plasmatice crescute ale GH, iar administrarea o dată pe zi a determinat creșteri ale consumului de alimente și a greutății corporale în timpul în prima săptămână de tratament.Studiile farmacodinamice au arătat ulterior că creșterea valorilor GH circulante a atins un maxim de 1 oră după doză, iar amploarea efectului a scăzut după câteva zile de tratament. Nu s-au observat efecte sub-țintă asupra axelor hormonale pituitare anterioare, incluzând prolactina, hormonul luteinizant, hormonul de stimulare a foliculului, hormonul stimulator al tiroidei, hormonul adrenocorticotropic și cortizolul și nu s-au constatat efecte semnificative asupra metabolismului carbohidraților, efectul relativ selectiv în hipofiza anamorelinului asupra reglementării GH.

Date clinice

Studiul clinic precoce al anamorelinului a inclus evaluarea acestuia într-un studiu de fază I, randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, cu doză-escaladare la 32 de voluntari sănătoși. La subiecți au fost administrate inițial 25 mg anamorelin zilnic timp de 5 zile, iar cohortele ulterioare au fost administrate 50 mg pe zi (doză unică sau divizată) și 75 mg o dată pe zi. Creșterea semnificativă a greutății corporale a fost observată la pacienții cărora li s-au administrat 50 sau 75 mg zilnic, cu o creștere medie în greutate față de valoarea inițială până în ziua 6 de 1,25 ± 0,725 kg ( P = 0,0022 față de placebo) în cohorta care a primit 50 mg zilnic și 1,16 ± 0,651 kg ( P = 0,0022 față de placebo) la cei care au primit 75 mg pe zi. 

Nu a existat o creștere a modificărilor de greutate corporală la subiecții cărora li sa administrat 25 mg de două ori pe zi, comparativ cu cei cărora li sa administrat 50 mg o dată pe zi. 

Nu s-au observat reacții adverse semnificative legate de medicamentul de studiu, cu excepția unui singur caz de transaminaze moderat ridicate care s-au normalizat după întreruperea tratamentului. 44

Într-un studiu de fază II randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, efectuat pe șapte locuri din SUA, anamorelin a fost administrat la 16 pacienți cu diferite tipuri de cancer incurabil, dintre care 7 au prezentat NSCLC și anorexie-casexie a cancerului CACS. Pacienții au fost tratați cu 50 mg zilnic sau cu placebo timp de 3 zile, urmată de o zi de spălare de la 3 la 7, urmată de trecerea tratamentelor. În acest studiu relativ mic, cu o scurtă intervenție, 3 zile de anamorelin au dus la creșterea greutății corporale medii (0,77 kg comparativ cu 0,33 kg negativ, P = 0,016) și ameliorarea numerică a simptomelor și a apetitului raportate de pacient; studiul nu a fost alimentat pentru a confirma astfel de efecte. Compoziția corpului nu a fost evaluată și nu s-au efectuat măsuri obiective privind funcția pacientului. Hiperglicemia a fost observată la 2 pacienți și a fost atribuită anamorelinului. 45

Două studii mai mari, randomizate, dublu-orb, controlate cu placebo, randomizate, de fază II, au fost efectuate la 20 de locații din SUA, iar rezultatele lor au fost colectate a priori și raportate împreună. Au fost tratați în total 82 de pacienți, iar în ambele studii, pacienții au fost nevoiți să aibă cancer confirmat și incurabil histologic și anorexie-casexie a cancerului CACS. Criteriile de excludere au inclus transaminaze mai mari de două ori decât limita superioară a valorilor normale, diabetul, ascita sau edemul care ar putea afecta evaluarea greutății și indicele de masă corporală de> 30 kg / m2. Pacienții au fost randomizați după stratificare prin severitatea pierderii în greutate (5% -15% față de> 15%) și cei din brațul de tratament cărora li sa administrat anamorelin 50 mg pe zi timp de până la 12 săptămâni. Pacienții au prezentat o varietate de afecțiuni maligne, inclusiv pulmonar ( N = 20), colorectal ( N = 17) și genitourinar ( N = 13), iar majoritatea (80%) au primit chimioterapie concurentă. O sută două pacienți au fost examinați și 82 au fost tratați. Atriția în timpul studiului a fost relativ mare, dar a reprezentat în proiectarea statistică a priori la această populație de pacienți cu cancer avansat: dintre cei 44 de pacienți cărora li sa administrat anamorelin, 21 tratamentul întrerupt (12 din cauza preferințelor pacientului) înainte de finalizarea planificată a tratamentului; din cei 38 de pacienți cărora li sa administrat placebo, 15 întreruperea tratamentului (6 din cauza preferințelor pacientului) înainte de finalizarea planificată a tratamentului. În comparație cu placebo, pacienții tratați cu anamorelin au avut o îmbunătățire a masei medii a corpului la o greutate de 12 săptămâni; obiectivul primar al studiului este următorul: creșterea de 1,89 kg (intervalul de încredere 95% [CI]: 0,84-2,95) comparativ cu scăderea de 0,20 kg (IC 95%: -1,23-0,83), P = 0,0006. În plus, rezultatele au favorizat anamorelinul în ceea ce privește obiectivele secundare, incluzând masa corporală totală, dar nu masa de grăsime, puterea necondiționată a mâinii și calitatea vieții pacientului, în special în domeniile sentimentului de bunăstare, somn, greață și somnolență. Anamorelin a determinat, de asemenea, creșterea semnificativă a nivelurilor de GH și a biomarkerilor de proteină 3 de legare a factorului de creștere de tip insulină-I (IGF-1) și de proteine ​​3 de legare a factorului de creștere asemănător insulinei (IGFBP-3) după trei zile de tratament. Deși anamorelinul a fost foarte bine tolerat, sa constatat că concentrațiile medii de glucoză și insulină au crescut modest cu anamorelin față de placebo (diferențe de 0,95 mmol / l pentru glucoză [ P = 0,0002] și 77,92 pmol / l pentru insulină [ P = 0,0031]) . Deși acest lucru nu a avut un impact apreciabil asupra ratei de hiperglicemie, pacienții cu diabet zaharat sau obezitate au fost excluși din studiu.

Un alt studiu de fază II, randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, a fost efectuat la 32 de locații din Japonia și a fost recent publicat. 47 Proiectul de studiu a inclus o perioadă de observație / alergare de 2 săptămâni înainte de tratament. Subiecții cu NSCLC stadiul III sau IV inoperabil sau recidivat au trebuit să aibă cel puțin 5% pierdere în greutate involuntară în ultimele 6 luni, în plus față de markerii clinici și biochimici ai cașexiei. Pacienții au fost randomizați în trei brațe și au primit 50 sau 100 mg de anamorelin sau placebo o dată pe zi timp de 12 săptămâni, iar modificarea masei corporale slabe măsurată prin absorbție cu raze X cu energie duală și rezistența la manevrare nedominantă au fost cele două obiective finale. O sută optzeci și unu de pacienți au fost înscriși între martie 2011 și septembrie 2012. Dintre aceștia, doar 115 pacienți au fost incluși în setul final „per protocol” care a fost analizat. Cei 66 de pacienți care nu au fost în analiza finală au fost excluși în primul rând din cauza întreruperii tratamentului în decurs de 6 săptămâni de la randomizare sau încălcări ale protocolului, inclusiv primirea de tratamente concomitente interzise, ​​cum ar fi anumite terapii de cancer, corticosteroizi sistemici și numeroase alte medicamente prescrise și suplimentare. Rata de excludere de 36% din setul per protocol a fost mai mare decât rata de 20% anticipată inițial și a necesitat o creștere a mărimii eșantionului planificate. În setul per protocol, ≥96% dintre pacienți au luat ≥ 80% din medicamentul de studiu alocat. Masa corporală masei la 12 săptămâni a crescut în toate cele 3 grupe; motivul pentru acest rezultat în grupul placebo nu a fost clar.Diferența față de placebo a fost statistic semnificativă în brațul de tratament de 100 mg, cu o creștere netă de 0,6 kg (IC 95%: 0,00-1,21, P = 0,05). Creșterea masei corporale slabe nu a fost statistic diferită între brațele de tratament cu placebo și 50 mg. Nu a fost observată nici o diferență în ceea ce privește rezistența mâinii între cele 3 brațe. Obiectivele secundare, inclusiv evaluările calității vieții și greutatea corporală, în plus față de markerii sintezei proteinelor musculare IGF-1 și IGFBP-3, au fost de asemenea îmbunătățite în brațul de tratament de 100 mg, dar nu în brațul de 50 mg comparativ cu placebo. Tratamentul cu anamorelin a fost în general bine tolerat, dar a fost asociat cu greață (31% în brațul de tratament de 100 mg față de 9% în brațul de tratament de 50 mg și 17% în brațul placebo) și glucoza din sânge, măsurată prin hemoglobina A1c (20% hemoglobină în brațul de tratament de 100 mg versus 6% în brațul de tratament de 50 mg și 0% în grupul placebo).

Rezultate promițătoare din aceste studii clinice de fază timpurie au condus la studiile pivotale de fază III, controlate cu placebo, randomizate, dublu-orb, controlate cu placebo, ale anamorelinului la pacienții cu NSCLC avansate, ROMANA 1 și ROMANA 2. 48 Majoritatea pacienților au fost recrutați în locuri din Ucraina, Polonia, Rusia și Ungaria. În total, 54 de site-uri din 15 țări au participat la ROMANA 1 și 39 de site-uri din 7 țări au participat la ROMANA 2. Pacienții au fost randomizați 2: 1 pentru a primi 100 mg anamorelin sau placebo o dată pe zi pentru o perioadă de studiu de 12 săptămâni. Criteriile de includere au reprezentat o speranță de viață de cel puțin 4 luni, NSCLC stadiul III sau IV inoperabil și CACS definit ca pierderea involuntară de greutate de cel puțin 5% în ultimele 6 luni sau indicele de masă corporală de <20 kg / m2. Rezultatele au inclus obiectivele finale ale schimbării masei corporale slabe și a rezistenței la mâna necondiționată, precum și obiectivele secundare ale supraviețuirii globale, modificarea greutății corporale față de valoarea inițială și simptomele anorexiei-cachexiei și oboselii. Dimensiunea calculată a eșantionului de 477 a reprezentat o rată de abandon anticipată de 30% și a fost proiectată cu o putere de 90% pentru a detecta o schimbare de 2,0 kg față de valoarea inițială pe parcursul a 12 săptămâni atât în ​​ceea ce privește masa corporală slabă, cât și puterea mânerului. ROMANA 1 a înregistrat 484 pacienți între iulie 2011 și ianuarie 2014; ROMANA 2 a înregistrat 495 pacienți între iulie 2011 și octombrie 2013.

Tratamentul planificat a fost finalizat la 74% și 72% dintre pacienții din ROMANA 1 și, respectiv, ROMANA 2; 19% și 14% au decedat în perioada de studiu de 12 săptămâni, respectiv. Majoritatea au primit terapie împotriva cancerului în timpul studiului, incluzând> 70% dintre pacienții din ROMANA 1 și> 60% dintre pacienții din ROMANA 2 tratați concomitent cu un dublet de chimioterapie pe bază de platină. Analizele post hoc au arătat că pacienții tratați în ROMANA 2 au avut cancer mai avansat, cu o durată mai lungă de la diagnosticare până la intrarea în studiu, stare de performanță mai slabă, rată mai scăzută a terapiei cancerigene în curs și markeri mai severi de cașexie, povară.

Mediul de masă slabă a corpului a crescut în grupul tratat cu anamorelin în comparație cu placebo, atât în ​​ROMANA 1 (0,99 kg, CI 95%: 0,61-1,36 față de -0,47 kg, IC 95%: -1,00-0,21, P <0,0001) și ROMANA 2 0,65 kg, CI 95%: 0,38-0,91 versus -0,98 kg, CI 95%: -1,49 până la -0,41; P <0,0001) și a fost observat în mod constant în toate subgrupurile. Rezistența mediană a mânerului a rămas neschimbată în ambele studii.În subgrupul de bărbați tratați în ROMANA 1, rezistența mediană a mânerului a fost îmbunătățită în brațul anamorelin: -0,76 kg, IC 95%: -1,56 până la -0,11 versus -2,51 kg, CI 95: -3,96 până la -1,37; P = 0,024.Tratamentul cu anamorelin a determinat creșterea greutății corporale medii și ameliorarea simptomelor medii anorexie-cachexie de la momentul inițial, timp de 12 săptămâni. În ambele cazuri, ameliorarea a fost evidentă în săptămâna 3 de tratament și s-a menținut pe tot parcursul perioadei de studiu. Supraviețuirea medie la 1 an nu a fost diferită între grupurile de studiu. Evenimentele adverse legate de tratament au fost mai puțin frecvente, ușoare și similare cu cele raportate anterior. Acestea au inclus hiperglicemie de grad 1-2 (5% în brațul anamorelin versus 3% în brațul cu placebo în ROMANA 1, 4% în brațul anamorelin față de 1% în brațul cu placebo în ROMANA 2) și 1-2 grade gastrointestinale (6% în anamorelin brat versus 2% în brațul cu placebo în ROMANA 1; 2% în brațul cu anamorelin față de 2% în brațul cu placebo în ROMANA 2). 48

ROMANA 3 este un studiu extensiv în curs de desfășurare al ROMANA 1 și ROMANA 2, și este conceput pentru a evalua în continuare siguranța și tolerabilitatea anamorelinului. Pacienții care au efectuat o vizită de 85 zile în studiile pivot și au fost considerați adecvați pentru a continua să primească medicamente suplimentare de studiu au fost eligibili să se înscrie. A fost planificată înscrierea țintă a 345 de subiecți și se așteaptă publicarea rezultatelor din ROMANA 3.

Anamorelin este, de asemenea, studiat pentru impactul său potențial asupra oboselii legate de cancer. Într-un singur braț, studiul de fază II condus de MD Anderson Cancer Center ( ), anamorelinul va fi administrat la 100 mg zilnic timp de 6 săptămâni la pacienții cu cancer avansat. Obiectivul primar al diferenței în Evaluarea funcțională a Scorului Subscale pentru Terapia cu Boală de Cancer-Oboseală va fi măsurat la momentul inițial față de ziua 43 într-o grupă țintă de 38 de pacienți; se vor utiliza mai multe valori pentru evaluări suplimentare ale activității fizice.

Concluzie

Anamorelin a demonstrat un beneficiu clar asupra markerilor multipli ai CACS din cauza NSCLC și a altor malignități. În cadrul studiilor, aceasta a dus în mod constant la un impact pozitiv asupra masei corporale slabe, a greutății corporale totale, a poftei de mâncare și a măsurătorilor privind calitatea vieții, atunci când este administrată pe o perioadă de zile până la câteva luniTabelul 1 ). Este bine tolerat în ansamblu, cu toxicități ocazionale de simptome ușoare și gastro-intestinale și hiperglicemie și nu prezintă nici un efect asupra progresiei cancerului sau asupra eficacității tratamentului. În ciuda acestor atribute notabile și a potențialului beneficiu pentru pacienții cu CACS, anamorelin a scăzut în ceea ce privește evaluarea în 2 studii pivot de fază III cu privire la obiectivul final coprimar care măsoară starea funcțională prin forța mâinii. Acest rezultat ilustrează dificultatea măsurării impactului unei intervenții unice într-un sindrom complex și multifactorial. Mărimea mânerului a fost îmbunătățită în studiile de fază II mai mici și, într-adevăr, în subgrupul de bărbați din ROMANA 1, dar nu și în populația totală de studiu. 48 Motivele acestei discrepanțe nu pot fi determinate din datele disponibile, dar pot include diferențe în proiectarea studiului (cum ar fi doza de anamorelin utilizată) sau la populația de pacienți (toate tumorile față de NSCLC, SUA versus internațional, etc.). Având în vedere că nu există un consens cu privire la ceea ce ar trebui să fie cea mai bună măsură de funcționare în acest context, nu este clar dacă alte instrumente (cum ar fi puterea de a urca scara, actigrafia, testul de mers pe jos de 6 minute) ar fi răspuns diferit.

tabelul 1

Rezumatul studiilor clinice publicate privind clorhidratul de anamorelin

Referinţă Anul raportat Subiecte Tratament Tipul studiului Număr de subiecte Rezultatele cheie
Garcia și Polvino 44 2007 Sănătoși voluntari Doze escaladante de anamorelin (până la 75 mg pe zi) × 5 zile Faza I, randomizată 32 Creșterea greutății corporale totale; fără AE majore
Garcia și colab. 45 2013 Canceruri avansate 50 mg zilnic de anamorelin x 3 zile Pilot de fază II, randomizat, crossover 16 Creșterea greutății corporale totale
Garcia și colab 46 2015 Canceruri avansate 50 mg zilnic de anamorelin × 12 săptămâni Două faze II, randomizate (rezultate a) 82 Creșterea LBM și a punctelor finale secundare ale HGS și a mai multor valori QOL
Takayama și colab. 47 2016 Canceruri avansate 50 sau 100 mg anamorelin zilnic × 12 săptămâni Faza II, randomizată 181 Creșterea LBM, dar nu a obiectivului final al HGS
Temel și colab. 48 2016 Avansat NSCLC 100 mg anamorelin zilnic × 12 săptămâni Două faze III, randomizate (2: 1) 484 și 495 Creșterea LBM, dar nu a obiectivului final al HGS

Abrevieri: AE, eveniment advers; HGS, rezistența la prindere manuală; LBM, masa corporală slabă; NSCLC, cancer pulmonar cu celule mici; QOL, calitatea vieții.

Prin definiție, studiile care investighează intervențiile pentru CACS tratează pacienții care se apropie de sfârșitul vieții lor și se confruntă cu provocări profunde în domenii multiple, inclusiv fizice, psihosociale și economice. Participarea acestor pacienți în protocoalele clinice poate dovedi a fi dificilă, mai ales atunci când măsurătorile de eficacitate se află în afara domeniului îngrijirii clinice standard, așa cum este cazul tratamentelor CACS. În prezent, se lucrează la eficientizarea definiției și a rezultatelor relevante ale tratamentului CACS. Prin urmare, atenuarea cu succes a CACS necesită, fără îndoială, abordări de tratament multiprovizionate care vizează în mod individual componentele care contribuie, inclusiv căile metabolice și inflamatorii, sănătatea mintală, nutriția, starea fizică și cancerul însuși și tratamentul acestuia.Activitatea viitoare ar trebui să exploreze efectele combinării anamorelin cu alte intervenții farmacologice care vizează depresia și anxietatea, după cum sa indicat, și eforturile intense de a optimiza nutriția și fitness.

Recunoasteri

Această lucrare a fost finanțată de Departamentul Afacerilor Veteranilor din SUA (subvenții MERIT BX002807 și CX000174) și Institutul Național de Sănătate acordă AG040583 către JMG. Mulțumim Centrului de Cercetare pentru Diabet și Endocrinologie al Universității din Washington (P30 DK017047) și Centrului de Cercetare a Obezității în Nutriție (P30 DK035816) pentru ajutorul lor.

Logo-ul dddt

Dove Medical Press This Article Subscribe Submit a Manuscript Search Follow Dovepress Drug Design, Development and Therapy
Drug Des Devel Ther . 2017; 11: 2325-2331.
Publicat online 2017 Aug 7. doi: 10.2147 / DDDT.S110131
PMCID: PMC5557912
PMID: 28848326

Solomon A Grafice 1, 2, 3 și Jose M Garcia 4, 5

Note de subsol

Dezvăluire

JMG este un consultant pentru Helsinn Theraputics, Inc. Autorii nu raportează alte conflicte de interese în această lucrare.

Referințe

1. Evans WJ, Morley JE, Argilés J, și colab. Cachexia: o nouă definiție. Clin Nutr. 2008; 27 (6): 793-799.PubMed ]
2. Fearon K, Strasser F, Anker SD, et al. Definirea și clasificarea cașexiei cancerului: un consens internațional. Lancet Oncol. 2011; 12 (5): 489-495. PubMed ]
3. Mondello P, Mian M, Aloisi C, Famà F, Mondello S, Pitini V. Sindromul de cachexie a cancerului: patogeneza, diagnosticul și noi opțiuni terapeutice. Nutr Cancer. 2015; 67 (1): 12-26. PubMed ]
4. Bruggeman AR, Kamal AH, LeBlanc TW, Ma JD, Baracos VE, Roeland EJ. Cachexia de cancer: dincolo de pierderea în greutate. J Oncol Pract. 2016; 12 (11): 1163-1171. PubMed ]
5. Johnston AJ, Murphy KT, Jenkinson L, și colab. Direcționarea Fn14 împiedică cazexia indusă de cancer și prelungește supraviețuirea. Cell. 2015; 162 (6): 1365-1378. PubMed ]
6. Schafer M, Oeing CU, Rohm M, și colab. Ataxin-10 face parte dintr-un cocktail de cachexokină care declanșează disfuncție metabolică cardiacă în cazexia de cancer. Mol Metab. 2016; 5 (2): 67-78.Articol gratuit PMC ] PubMed ]
7. Petruzzelli M, Wagner EF. Mecanismele de disfuncție metabolică în cazexia asociată cancerului. Genele Dev. 2016; 30 (5): 489-501. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
8. Rohm M, Schäfer M, Laurent V, și colab. O peptidă stabilizatoare a protein kinazei activată de AMP ameliorează pierderea țesutului adipos în cazexia de cancer la șoareci. Nat Med. 2016; 22 (10): 1120-1130.PubMed ]
9. Kir S, Komaba H, Garcia AP și colab. Receptorul PTH / PTHrP mediază cașexia în modelele de insuficiență renală și cancer. Cell Metab. 2016; 23 (2): 315-323. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
10. Martin L, Senesse P, Gioulbasanis I și colab. Criterii de diagnosticare pentru clasificarea pierderii în greutate asociată cancerului. J Clin Oncol. 2015; 33 (1): 90-99. PubMed ]
11. Davis MP, Dickerson D. Cachexia și anorexia: ucigașul secret al cancerului. Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2000; 8 (3): 180-187. PubMed ]
12. Vanhoutte G, van de Wiel M, Wouters K, și colab. Cachexia în cancer: ce este în definiție? BMJ deschis Gastroenterol. 2016; 3 (1): e000097. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
13. Garber K. Inhibitorii metabolizării anabolice ale cancerului se mută în clinică. Nat Biotechnol. 2016;34 (8): 794-795. PubMed ]
14. Fearon KCH, Argiles JM, Baracos VE, și colab. Cerere de îndrumare de reglementare pentru studiile de intervenție în cazexia de cancer. J Cachexia Sarcopenie Muscle. 2015; 6 (4): 272-274.Articol gratuit PMC ] PubMed ]
15. Mantovani G, Madeddu C, Maccio A. Droguri în curs de dezvoltare pentru tratamentul pacienților cu anorexie asociată cu cancer și sindromul de cașexie. Drug Des Devel Ther. 2013; 7 : 645-656.Articol gratuit PMC ] PubMed ] retractat
16. Levy M, Smith T, Alvarez-Perez A, și colab. Îngrijire paliativă versiunea 1.2016. J Natl Compr Canc Netw. 2016; 14 (1): 82-113. PubMed ]
17. Mantovani G, Macciò A, Madeddu C, și colab. Randomizat de faza III, studiu clinic de cinci arme diferite de tratament la 332 de pacienti cu cancer de cașexie. Oncolog. 2010; 15 (2): 200-211.Articol gratuit PMC ] PubMed ]
18. Maccio A, Madeddu C, Gramignano G, și colab. Un studiu clinic randomizat, de fază III, al unui tratament combinat pentru cașexia la pacienții cu cancer ginecologic: evaluarea impactului asupra profilurilor metabolice și inflamatorii și asupra calității vieții. Gynecol Oncol. 2012; 124 (3): 417-425.PubMed ]
19. von Haehling S, Anker MS, Anker SD. Prevalența și impactul clinic al cașexiei asupra bolilor cronice în Europa, SUA și Japonia: actualizarea datelor și cifrelor 2016. J Cachexia Sarcopenia Muscle. 2016; 7(5): 507-509. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
20. Temel JS, Greer JA, Muzikansky A și colab. Îngrijiri paliative timpurii pentru pacienții cu cancer pulmonar non-celular metastatic. N Engl J Med. 2010; 363 (8): 733-742. PubMed ]
21. Cui H, Lopez M, Rahmouni K. Bazele celulare și moleculare ale rezistenței la leptină și ghrelin în obezitate. Nat Rev Endocrinol. 2017; 13 (6): 338-351. PubMed ]
22. Al Massadi O, López M, Tschöp M, Diéguez C, Nogueiras R. Înțelegerea curentă a căilor hipotalamice Ghrelin care determină apetitul și adipozitatea. Tendințe Neurosci. 2017; 40 (3): 167-180. PubMed ]
23. Sun Y, Garcia JM, Smith RG. Ghrelin și expresia receptorului secretor de hormon de creștere la șoareci în timpul îmbătrânirii. Endocrinologie. 2007; 148 (3): 1323-1329. PubMed ]
24. Chen JA, Splenser A, Guillory B, și colab. Ghrelin previne pierderea musculară indusă de tumori și cisplatină: caracterizarea mecanismelor multiple implicate. J Cachexia Sarcopenie Muscle. 2015; 6 (2): 132-143. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
25. Porporato PE, Filigheddu N, Reano S, și colab. Ghrelinul acilat și neacilat afectează atrofia mușchilor scheletici la șoareci. J Clin Invest. 2013; 123 (2): 611-622. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
26. Garcia JM, Swerdloff R, Wang C, și colab. Testarea stimulată de testul de creștere a hormonului de creștere (GH) stimulat de Macimorelin (AEZS-130): validarea unui nou test de stimulare orală pentru diagnosticarea deficienței GH adulte. J Clin Endocrinol Metab. 2013; 98 (6): 2422-2429. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
27. Foster-Schubert KE, Cummings DE. Strategii terapeutice emergente pentru obezitate. Endocr Rev.2006; 27 (7): 779-793. PubMed ]
28. Hasler WL. Medicamente emergente pentru tratamentul gastroparezei. Expert Opin Emerg Drugs.2014; 19 (2): 261-279. PubMed ]
29. DeBoer MD, Zhu XX, Levasseur P, și colab. Tratamentul cu ghrelin determină creșterea consumului de alimente și reținerea masei corporale slabe într-un model de șobolan de cașexie de cancer. Endocrinologie.2007; 148 (6): 3004-3012. PubMed ]
30. Dixit VD, Schaffer EM, Pyle RS, și colab. Ghrelinul inhibă exprimarea citokinelor proinflamatorii induse de leptină și activare de către monocitele umane și celulele T. J Clin Invest. 2004; 114 (1): 57-66. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
31. Hiura Y, Takiguchi S, Yamamoto K, și colab. Efectele administrării de ghrelin în timpul chimioterapiei cu pacienți cu cancer esofagian avansat: un studiu prospectiv, randomizat, controlat cu placebo, de fază 2. Cancer. 2012; 118 (19): 4785-4794. PubMed ]
32. Neary NM, Small CJ, Wren AM și colab. Ghrelin crește aportul de energie la pacienții cu cancer cu apetit afectat: studiu acut, randomizat, controlat cu placebo. J Clin Endocrinol Metab. 2004; 89 (6): 2832-2836. PubMed ]
33. Nagaya N, Moriya J, Yasumura Y și colab. Efectele administrării de ghrelin asupra funcției ventriculului stâng, a capacității de efort și a pierderii musculare la pacienții cu insuficiență cardiacă cronică. Circulaţie. 2004; 110 (24): 3674-3679. PubMed ]
34. Miki K, Maekura R, Nagaya N, și colab. Tratamentul cu ghrelin al pacienților cu boală cronică cu boală pulmonară obstructivă cronică: un studiu multicentric, randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo. Plus unu. 2012; 7 (5): e35708. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
35. Nagaya N, Itoh T, Murakami S, și colab. Tratamentul cașexiei cu ghrelin la pacienții cu BPOC. Cufăr.2005; 128 (3): 1187-1193. PubMed ]
36. Kojima M, Hosoda H, data Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin este o peptidă acilată eliberată de hormonul de creștere din stomac. Natură. 1999; 402 (6762): 656-660. PubMed ]
37. Bowers CY, Momany F, Reynolds GA, Chang D, Hong A, Chang K. Relațiile structură-activitate ale unei pentapeptide sintetice care eliberează în mod specific hormonul de creștere in vitro. Endocrinologie.1980; 106 (3): 663-667. PubMed ]
38. Hansen TK, Peschke B, Lau J, Lundt BF, Ankersen M, Watson B, Madsen K, inventatori. Novo Nordisk A / S, asignee Compuși cu proprietăți de eliberare a hormonului de creștere. 6127391. Brevet SUA SUA. 2000 Oct 3;
39. Bednarek MA, Feighner SD, Pong SS, și colab. Studii de structură-funcție asupra noii peptide care eliberează hormonul de creștere, ghrelin: secvența minimă de ghrelin necesară pentru activarea receptorului 1a de secreție de hormon de creștere. J Med Chem. 2000; 43 (23): 4370-4376. PubMed ]
40. Leese PT, Trang JM, Blum RA, de Groot E. Un studiu clinic deschis privind efectele vârstei și sexului asupra farmacodinamicii, farmacocineticii și siguranței anamorelinului agonist al receptorului de ghrelin. Clin Pharmacol Drug Dev. 2015; 4 (2): 112-120. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
41. Pietra C, Takeda Y, Tazawa-Ogata N, și colab. Anamorelin HCl (ONO-7643), un nou agonist al receptorilor de ghrelin, pentru tratamentul sindromului de anorexie-cachexie a cancerului: profil preclinic. J Cachexia Sarcopenie Muscle. 2014; 5 (4): 329-337. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
42. Northrup R, Kuroda K, Duus EM, și colab. Efectul ghrelinului și anamorelinului (ONO-7643), un agonist selectiv al receptorilor de ghrelin, asupra creșterii tumorii la un model de xenogrefă de șoarece de cancer pulmonar. Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2013; 21 (9): 2409-2415. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
43. Garcia JM, Polvino WJ. Efecte hormonale farmacodinamice ale anamorelinului, un nou mimetic de ghrelin oral și secretagogon de hormon de creștere la voluntari sănătoși. Hormul de creștere IGF Res. 2009;19 (3): 267-273. PubMed ]
44. Garcia JM, Polvino WJ. Efectul asupra masei corporale și a siguranței RC-1291, un nou mimetic ghrelin disponibil pe cale orală și un secretagog al hormonului de creștere: rezultate ale unui studiu randomizat, controlat cu placebo, randomizat, controlat cu placebo, la voluntari sănătoși. Oncolog. 2007;12 (5): 594-600. PubMed ]
45. Garcia JM, Friend J, Allen S. Potențialul terapeutic al anamorelinului, un roman mimetic ghrelinic, la pacienții cu cazhexie legată de cancer: un studiu pilot multicentric, randomizat, dublu-orb, crossover. Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2013; 21 (1): 129-137. PubMed ]
46. Garcia JM, Boccia RV, Graham CD, și colab. Anamorelin pentru pacienții cu cachexie de cancer: o analiză integrată a două studii clinice randomizate, controlate cu placebo, dublu-orb, de fază 2. Lancet Oncol. 2015; 16 (1): 108-116. PubMed ]
47. Takayama K, Katakami N, Yokoyama T, și colab. Anamorelin (ONO-7643) la pacienții japonezi cu cancer pulmonar cu celule mici și cașexie: rezultatele unui studiu randomizat de fază 2. Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2016; 24 (8): 3495-3505. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
48. Temel JS, Abernethy AP, Currow DC, și colab. Anamorelin la pacienții cu cancer pulmonar cu celule mici și cașexie (ROMANA 1 și ROMANA 2): rezultate din două studii randomizate, dublu-orb, de fază 3. Lancet Oncol. 2016; 17 (4): 519-531. PubMed ]

Articolele de la proiectarea, dezvoltarea și terapia de droguri sunt oferite aici prin curtoazia Dove Press

Anamorelin pentru pacienții cu cancer de cașexie: o analiză integrată a două studii clinice umane faza II, randomizate, controlate cu placebo, dublu-orb

rezumat

fundal

Sindromul anorexiei-cachexie a cancerului este asociat cu creșterea morbidității și a mortalității. Anamorelin este un agonist pe cale orală de receptor ghrelinic cu activitate de creștere a apetitului și activitate anabolică. Am evaluat efectele anamorelinului asupra compoziției corporale, a rezistenței, a calității vieții, a markerilor biochimici și a siguranței la pacienții cu anorexie de cancer – cașexia.

metode

Datele s-au reunit, a priori, din două studii clinice complete cu fază 2, multicentrice, controlate cu placebo, dublu-orb, la pacienții cu cancer avansat sau incurabil și scădere în greutate de 5% sau mai mult. Pacienții au fost stratificați prin severitatea pierderii în greutate (5-15%,> 15%) și repartizați aleatoriu (1: 1) cu un program generat de computerizare cu clorhidrat de anamorelin 50 mg sau cu placebo o dată pe zi, timp de 12 săptămâni. Rezultatul primar a fost o masă fizică slabă prin absorbția de x-raze cu energie duală în perioada de tratament de 12 săptămâni la pacienții eligibili care au avut cel puțin o doză de medicament pentru studiu și o evaluare a eficacității post-tratament. Am evaluat siguranța la toți pacienții care au primit cel puțin o doză de medicament de studiu.Studiile sunt înregistrate la ClinicalTrials.gov , numere NCT00219817 și NCT00267358 .

constatări

Între 29 iunie 2005 și 26 octombrie 2006, am înscris 44 de pacienți din grupul anamorelin și 38 de pacienți din grupul placebo. 74 de pacienți au fost eligibili pentru analizele de eficacitate. Peste 12 săptămâni, masa corporală slabă a crescut la 38 pacienți din grupul de anamorelin cu o medie de pătrați de 1,89 kg (95% CI 0,84-2,55) comparativ cu o scădere a mediei celor mai mici pătrate de – 0,20 kg (-1,23 până la 0,83) pentru 36 de pacienți din grupul placebo (diferență 2,09 kg [0,94-3,25]; p = 0,0006). 
42 (95%) dintre cei 44 de pacienți tratați cu anamorelin și 33 (87%) din 38 pacienți tratați cu placebo au prezentat reacții adverse. Cele mai frecvente evenimente adverse de grad 3-4 (legate sau nu de tratament) în grupul de anamorelin au fost oboseala, astenia, fibrilația atrială și dispneea (câte două [5%]); în grupul placebo, astfel de evenimente au fost pneumonie (trei [8%]) și anemie, trombocitopenie, durere abdominală, anxietate și dispnee (câte două [5%]).

Interpretare

Tratamentul cu anamorelin timp de 12 săptămâni a avut un profil de răspuns clinic favorabil la pacienții cu sindrom de anorexie-cachexie a cancerului. Aceste constatări susțin investigații suplimentare în acest cadru.

Finanțarea

Helsinn Therapeutics (SUA), Helsinn Healthcare SA.
Pentru a citi acest articol în întregime, va trebui să efectuați o plată

Referințe

    • Fearon, K
    • Strasser, F
    • Anker, SD

et al.

Definirea și clasificarea cașexiei cancerului: un consens internațional.

Lancet Oncol. 2011; 12 : 489-495

  • von Haehling, S.
  • Anker, SD
Cachexia ca o necesitate medicală majoră subestimată și nesatisfăcută: fapte și cifre.

J Cachexia Sarcopenie Muscle. 2010; 1 : 1-5

    • Ross, PJ
    • Ashley, S.
    • Norton, A

et al.

Pacienții cu pierdere în greutate au un rezultat mai rău atunci când suferă chimioterapie pentru cancerul pulmonar?

Br J Cancer. 2004; 90 : 1905-1911

    • Aapro, M
    • Arends, J
    • Bozzetti, F

et al.

Recunoașterea precoce a malnutriției și a cașexiei la pacienții cu cancer: un document de poziție al unei Grupuri de Școală Europeană de Oncologie.

Ann Oncol. 2014; 25 : 1492-1499

    • Sattler, F
    • Bhasin, S.
    • El, J

et al.

Nivelurile de prag ale testosteronului și țintele de masă tisulară slabă necesare pentru a spori puterea și funcția mușchilor scheletici: studiul HORMA.

J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2011; 66 : 122-129

  • Kilgour, RD
  • Vigano, A
  • Trutschnigg, B
  • Lucar, E
  • Borod, M
  • Morais, JA
Rezistența mânerului prezice supraviețuirea și este asociată cu markeri ai rezultatelor clinice și funcționale la pacienții cu cancer avansat.

Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2013; 21 : 3261-3270

  • Maccio, A
  • Madeddu, C
  • Mantovani, G
Opțiunile farmacoterapeutice actuale pentru anorexia cancerului și cașexia.

Expert Opin Pharmacother. 2012; 13 : 2453-2472

    • Kumar, NB
    • Kazi, A
    • Smith, T

et al.

Casexia cancer terapii tradiționale și abordări bazate pe mecanisme moleculare noi pe tratament.

Curr Opțiuni de tratament Oncol. 2010; 11 : 107-117

  • Ruiz Garcia, V
  • López-Briz, E
  • Carbonell Sanchis, R
  • Gonzalvez Perales, JL
  • Bort-Marti, S.
Acetat de megestrol pentru tratamentul sindromului anorexie-cașexie.

Cochrane Database Syst Rev. 2013; 3 ( CD004310 ) ( CD004310. )

  • Dev, R
  • Del Fabbro, E
  • Bruera, E
Asocierea dintre tratamentul cu acetat de megestrol și insuficiența suprarenală simptomatică cu hipogonadism la pacienții de sex masculin cu cancer.

Cancer. 2007; 110 : 1173-1177

  • Garcia, JM
  • Polvino, WJ
Efectul asupra masei corporale și a siguranței RC-1291, un nou mimetic ghrelin disponibil pe cale orală și un secretagog al hormonului de creștere: rezultate ale unui studiu randomizat, controlat cu placebo, randomizat, controlat cu placebo, la voluntari sănătoși.

Oncolog. 2007; 12 : 594-600

    • Murphy, MG
    • Plunkett, LM
    • Gertz, BJ

et al.

MK-0677, un secretagog al hormonului de creștere pe cale orală, inversează catabolismul indus de dietă.

J Clin Endocrinol Metab. 1998; 83 : 320-325

    • Vestergaard, ET
    • Djurhuus, CB
    • Gjedsted, J

et al.

Efecte acute ale administrării de ghrelin asupra metabolismului glucozei și lipidelor.

J Clin Endocrinol Metab. 2008; 93 : 438-444

  • Jatoi, A
  • Daly, BD
  • Hughes, VA
  • Dallal, GE
  • Kehayias, J
  • Roubenoff, R
Pacienții cu cancer non-pulmonar non-metastatic non-celule mici demonstrează o modificare a cheltuielilor de energie de odihnă ?.

Ann Thorac Surg. 2001; 72 : 348-351

  • Wallenius, K
  • Wallenius, V
  • Sunter, D
  • Dickson, SL
  • Jansson, JO
Intracerebroventricularul tratamentului cu interleukină-6 scade grăsimea corporală la șobolani.

Biochem Biophys Res Commun. 2002; 293 : 560-565

  • Lyngsø, D
  • Simonsen, L
  • Bülow, J
Efectele metabolice ale interleukinei-6 în țesutul splanchnic uman și adipos.

J Physiol. 2002; 543 : 379-386

  • Guillory, B
  • Splenser, A
  • Garcia, J
Rolul ghrelinului în sindroamele anorexiei-cașexiei.

Vitamina Horm. 2013; 92 : 61-106

  • Currow, DC
  • Abernethy, AP
Anamorelin clorhidrat în tratamentul sindromului anorexie-cachexie a cancerului.

Viitorul Oncol. 2014; 10 : 789-802

    • Pietra, C
    • Takeda, Y
    • Tazawa-Ogata, N

et al.

Anamorelin HCl (ONO-7643), un nou agonist al receptorilor de ghrelin, pentru tratamentul sindromului de anorexie-cachexie a cancerului: profil preclinic.

J Cachexia Sarcopenie Muscle. 2014; 5 : 329-337

  • Garcia, JM
  • Prieten, J
  • Allen, S.
Potențialul terapeutic al anamorelinului, un roman, mimetic de ghrelin oral, la pacienții cu casexie legată de cancer: un studiu pilot multicentric, randomizat, dublu-orb, crossover.

Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2013; 21 : 129-137

  • Garcia, JM
  • Polvino, WJ
Efecte hormonale farmacodinamice ale anamorelinului, un nou mimetic de ghrelin oral și secretagogon de hormon de creștere la voluntari sănătoși.

Hormul de creștere IGF Res. 2009; 19 : 267-273

  • Gale, CR
  • Martyn, CN
  • Cooper, C
  • Sayer, AA
Rezistența la strângere, compoziția corporală și mortalitatea.

Int J Epidemiol. 2007; 36 : 228-235

  • Chang, VT
  • Hwang, SS
  • Feuerman, M
Validarea scalei de evaluare a simptomului Edmonton.

Cancer. 2000; 88 : 2164-2171

    • Blum, D
    • Stene, GB
    • Solheim, TS

et al., Euro-Impact

Validarea consensului-definitie pentru cancer Cachexia si evaluarea unui model de clasificare: un studiu bazat pe date dintr-un proiect multicentric international (EPCRC-CSA).

Ann Oncol. 2014; 25 : 1635-1642

  • Tsai, S.
Importanța masei corporale slabe la pacienții oncologici.

Nutr Clin Pract. 2012; 27 : 593-598

    • Nass, R
    • Pezzoli, SS
    • Oliveri, MC

et al.

Efectele unui mimetic ghrelin oral asupra compoziției corporale și a rezultatelor clinice la adulții sănătoși în vârstă: un studiu randomizat.

Ann Intern Med. 2008; 149 : 601-611

    • Wang, C
    • Cunningham, G
    • Dobs, A

et al.

Tratamentul pe termen lung al gelului de testosteron (AndroGel) menține efecte benefice asupra funcției și stării de spirit, a masei slabe și a lipidelor și a densității minerale osoase la bărbații hipogonadali.

J Clin Endocrinol Metab. 2004; 89 : 2085-2098

    • Das, SK
    • Eder, S.
    • Schauer, S.

et al.

Lipazele trigliceridice adipoase contribuie la cazexia asociată cancerului.

Ştiinţă. 2011; 333 : 233-238

  • Ali, S.
  • Chen, JA
  • Garcia, JM
Dezvoltarea clinică a moleculelor derivate din axa ghrelină pentru tratamentul cazexiei de cancer.

Curr Opin Suport Palliat Îngrijire. 2013; 7 : 368-375

    • Costelli, P
    • Muscaritoli, M
    • Bossola, M

et al.

IGF-1 este scăzută în cazexia de cancer experimentală.

Am J Physiol Regul Integral Comp Physiol. 2006; 291 : R674-R683

  • Rowlands, MA
  • Gunnell, D
  • Harris, R
  • Vatten, LJ
  • Holly, JM
  • Martin, RM
Circulația peptidelor cu factori de creștere asemănători insulinei și a riscului de cancer de prostată: o revizuire sistematică și o meta-analiză.

Int J Cancer. 2009; 124 : 2416-2429

  • Han, J
  • Jogie-Brahim, S.
  • Harada, A
  • Oh, Y
Proteina-3 care leagă factorul de creștere asemănător cu insulina suprimă creșterea tumorală prin activarea apoptozei dependente de caspază și conversația încrucișată cu semnalizarea NF-kB.

Cancer Lett. 2011; 307 : 200-210

  • Wolf, RF
  • Ng, B
  • Weksler, B
  • Burt, M
  • Brennan, MF
Efectul hormonului de creștere asupra tumorii și gazdei la un model animal.

Ann Surg Oncol. 1994; 1 : 314-320

    • Hiura, Y
    • Takiguchi, S.
    • Yamamoto, K

et al.

Efectele administrării de ghrelin în timpul chimioterapiei cu pacienți cu cancer esofagian avansat: un studiu prospectiv, randomizat, controlat cu placebo, de fază 2.

Cancer. 2012; 118 : 4785-4794

    • Northrup, R
    • Kuroda, K
    • Duus, EM

et al.

Efectul ghrelinului și anamorelinului (ONO-7643), un agonist selectiv al receptorilor de ghrelin, asupra creșterii tumorii la un model de xenogrefă de șoarece de cancer pulmonar.

Asistență pentru îngrijirea cancerului. 2013; 21 : 2409-2415

    • Temel, J
    • Currow, D
    • Fearon, K

et al.

Anamorelin pentru tratamentul anorexiei de cancer – cașexia în NSCLC: rezultate din studiile de fază 3 ROMANA 1 și 2.

Ann Oncol. 2014; 25 ( abstr 14830_PR. ) ( Abstr 14830_PR. )

Dezvoltarea rezistenței la Ghrelin la un model de șobolan de cașexie de cancer folosind celule 85As2 derivate din cancerul gastric uman și efectele paliative ale medicamentului Kampo Rikkunshito asupra modelului

Abstract

Cancer-casexia (CC) este o afecțiune multifactorială caracterizată prin scăderea consumului de alimente și pierderea greutății corporale datorită musculaturii reduse, cu sau fără pierderea masei grase. Pacienții cu cancer gastric au o incidență ridicată de cașexie. Am stabilit anterior un nou model de șobolan Cancer-casexia CC indus de celule 85As2 derivate din cancerul gastric uman pentru a examina fiziopatologia Cancer-casexia CC și a identifica terapeutica potențială. La pacienții cu Cancer-casexia CC, se observă deseori anorexie, în ciuda creșterii ghrelinului, ceea ce sugerează că rezistența la ghrelin poate să apară la acești pacienți.

În acest studiu, ne-am propus să clarificăm apariția rezistenței ghrelin la Cancer-casexia șobolanii CC însoțită de anorexie și am investigat dacă rikkunshito (RKT), un medicament tradițional japonez Kampo care potențează semnalizarea ghrelinelor, aameliorat anorexia asociată cu Cancer-casexia CC prin ameliorarea rezistenței ghrelinice.

Șobolanii care suferă de tumori 85As2 au prezentat simptome severe ale Cancer-casexia CC, incluzând anorexia și pierderea greutății corporale / musculaturii, cele din urmă fiind mai mari la șobolanii cachectici decât la șobolanii care nu poartă tumori sau sunt hrăniți cu pereți.

Șobolanii cu Cancer-casexia CC au prezentat răspunsuri slabe la injectarea intraperitoneală de ghrelin. La șobolanii cu Cancer-casexia CC, nivelele de ghrelină din plasmă au fost ridicate, iar nivelele mRNA de peptidă anorexigenă hipotalamică au fost scăzute, în timp ce mRNA receptorului secretor de hormon de creștere hipotalamic ( GHS-R ) nu a fost afectat. 

In vitro , rikkunshito RKT a amplificat direct activarea GHS-R indusă de ghrelin.  rikkunshito RKT administrată pe cale orală timp de 7 zile a atenuat parțial răspunsul slab la ghrelin și ameliorarea anorexiei fără a afecta creșterea nivelurilor de ghrelină plasmatică la Cancer-casexia șobolani CC. Expresia ARN mRNA neuropeptide h hipotalamice orexigene, dar nu mRNA GHS-R hipotalamic a fost crescută prin rikkunshito RKT. 

Astfel, modelul de șobolan cu Cancer-casexia CC indusa de celule 85As2 a dezvoltat rezistența la ghrelin, contribuind eventual la anorexie și la scăderea în greutate corporală.

 Mecanismul prin care  rikkunshito RKT a ameliorat anorexia în modelul de Cancer-casexia șobolan CC poate implica atenuarea rezistenței ghrelinelor prin intensificarea semnalizării ghrelinelor.Aceste constatări sugerează că  rikkunshito RKT poate fi un agent promițător pentru tratamentul Cancer-casexia CC.

Introducere

Sindromul de anorexie-cachexie a cancerului, care apare la 80% dintre pacienții cu cancer avansat, este o boală multifactorială caracterizată prin scăderea aportului alimentar și pierderea greutății corporale și reprezintă cel puțin 20% din decesele legate de cancer [ 1-3 ]. Pierderea în greutate, cea mai proeminentă caracteristică clinică a cașexiei, se observă la 30-80% dintre pacienții cu cancer, cu variații observate în funcție de tipul tumorii [ 2 ]. De exemplu, pierderea in greutate are loc la o frecventa foarte mare (83%) la pacientii cu cancer gastric si pancreatic, dar este mai putin proeminenta la pacientii cu cancer de san, leucemie acuta nelimfocitara si sarcoame [ 2 ]. Citokinele inflamatorii derivate din celulele canceroase și celulele imunitare gazdă, incluzând interleukina (IL) -1, IL-6, factorul de necroză tumorală (TNF) -α și factorul inhibitor al leucemiei (LIF), sunt implicați în dezvoltarea anorexiei canceroase4 – 7 ]. Cu toate acestea, mecanismele care stau la baza acestui sindrom nu sunt pe deplin înțelese și nu au fost stabilite terapii adecvate pentru tratamentul casexiei (CC) de cancer.

Atât în ​​diagnosticul, cât și în tratamentul cancerului anorexie-cașexie, tratamentul apetitului este important deoarece întărește rezistența fizică și îmbunătățește calitatea vieții (QOL) și menținerea greutății corporale.Într-adevăr, consumul nutrițional reprezintă 20% din QOL la pacienții cu cancer [ 8 ]. Mai mult decât atât, pacienții cu cancer avansat cu satietate timpurie au un risc crescut de deces de 30% [ 9 ]. În consecință, ameliorarea anorexiei legate de cașexie la pacienții cu cancer este cheia îmbunătățirii atât a QOL, cât și a prognosticului.

Într-un studiu anterior, am stabilit noi modele de șobolani anorexia-cachexia de cancer prin implantarea șobolanilor nudi cu celule MKN45clone85 sau 85As2 [ 10 ], ambele derivate din linia celulară de cancer de stomac MKN-45 [ 11 ]. Modelul de CC indus de 85As2 prezintă cachexie mai veche și mai severă decât modelul MKN45cl85, permițând evaluarea mai rapidă a parametrilor CC asociați cu QOL proastă la pacienți.

Ghrelin, o peptidă cu 28 de aminoacizi, este un ligand endogen al receptorului secretogenului hormonului de creștere (GHS-R) și este secretat în principal din celulele asemănătoare X / A din stomac. Mai multe alte țesuturi, inclusiv hipotalamusul și pancreasul, exprimă niveluri scăzute de ghrelin [ 12 , 13 ]. Ghrelin este singura peptidă orexigenică secretă periferic și se cunoaște că are un efect intens de stimulare a apetitului [ 14 ]. În plus, ghrelinul stimulează secreția hormonului de creștere (GH), motilitatea gastrică și secreția de acid gastric [ 15 ]. Mai mult, ghrelinul din plasmă crește ca răspuns la postul prelungit și scade rapid după hrănire datorită efectelor sale orexigene, sugerând că ghrelinul periferic reglează apetitul [ 16 ]. La rozătoare, injecția centrală sau periferică a ghrelinului mărește aportul alimentar și greutatea corporală [ 17]. De aceea, ghrelinul poate avea aplicații în tratamentul terapeutic al sindromului de anorexie-cachexie a cancerului și sa demonstrat că ameliorează simptomele de cașexie la modelele pe animale purtătoare de tumori și la pacienții cu cancer [ 18,19 ]. Cu toate acestea, la pacienții cu anumite tipuri de CC, concentrațiile plasmatice de ghrelină sunt ridicate, dar încă apare anorexia. Prin urmare, rezistența la ghrelin poate fi observată în starea patologică20-23 ], iar reducerea rezistenței la ghrelin poate fi o țintă terapeutică potențială pentru tratamentul CC.

Rikkunshito (RKT), un medicament tradițional japonez (medicina Kampo), a fost aprobat de Ministerul Sănătății, Muncii și Bunăstării din Japonia și este prescris în general ca un remediu pentru diferite sindroame gastrointestinale superioare, cum ar fi anorexia, dispepsia, și gastrită. Într-un studiu multicentric, dublu-orb, randomizat, controlat cu placebo, sa demonstrat că RKT ameliorează dispepsia funcțională [ 24]. La diferite modele experimentale pe animale și la oameni, RKT previne anorexia printr-un mecanism care implică creșterea secreției de ghrelină [ 25-28 ]. În plus, sa demonstrat că RKT potențează semnalizarea ghrelin prin creșterea activității GHS-R [ 29 , 30 ]. Recent, am demonstrat că RKT ameliorează simptomele CC într-un nou model de șobolan CC indus de 85As2 [ 10 ]. Rămâne neclar dacă secreția sau răspunsul ghrelin crescut este legată de mecanismele specifice prin care RKT previne anorexia cancerului – cachexia în acest model.

În acest studiu, ne-am propus să clarificăm apariția rezistenței la ghrelin în modelul nostru de șobolan anorexie-cașexie și am investigat sensibilitatea acestor șobolani la administrarea ghrelinelor exogene. Mai mult, am investigat dacă RKT ameliorat anorexia în modelul nostru de șobolan CC prin intermediul unui mecanism care implică atenuarea rezistenței ghrelinelor.

materiale si metode

Experimentul pe animale

Șoarecii F344 / NJcl-rnu / rnu masculi de șase săptămâni (CLEA Japan, Tokyo, Japonia) au fost găzduiți individual sub un ciclu de lumină-întuneric 12: 12 h (luminile sunt aprinse la ora 08:00) la o temperatură și umiditate cu acces liber la alimente (CE-2, CLEA Japonia) și apă. Șobolanii au fost lăsați să se aclimatizeze în condițiile de laborator timp de 2 săptămâni înainte de experimentare. Toate studiile au fost efectuate în conformitate cu Ghidul pentru experimentele pe animale și aprobate de Comitetul pentru Etică în Experimentarea Animalelor din cadrul Centrului Național pentru Cancer (aprobările nr. T09-050-M02 și T09-050-C04). Aceste linii directoare au respectat standardele etice privind animalele experimentale din Japonia, conform legii.

Linii celulare și condițiile culturii

Celulele 85As2 s-au stabilit din celulele cancerului gastric uman MKN-45 descrise anterior [ 11 ]. Celulele au fost menținute în mediu RPMI 1640 (Nacalai Tesque, Inc., Kyoto, Japonia) suplimentat cu ser 10% fetal bovin (FBS, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), 100 UI / ml penicilină G sodică și 100 pg / streptomicină sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C. Celulele 293A de rinichi embrionare umană (HEK) 293A care au exprimat în mod stabil GHS-R s-au menținut în mediu Eagle modificat de Dulbecco (DMEM, glucoză înaltă, Wako, Osaka, Japonia) suplimentat cu 10% FBS, 100 UI / ml sulfat de streptomicină și 500 ug / ml soluție apoasă disulfat G418 (Nacalai Tesque, Inc.) sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C.

Pregătirea modelului CC și a șobolanilor hrăniți cu perechi

Modelul de șobolan CC indus de celule 85As2 a fost preparat așa cum s-a descris mai înainte [ 10 ]. Pe scurt, celulele s-au menținut în mediu RPMI 1640 suplimentat cu 10% FBS, 100 UI / ml penicilină G sodică și 100 pg / ml sulfat de streptomicină sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C. Celulele 85As2 au fost recoltate din culturi subconfluente după o scurtă expunere la 0,25% tripsină și 0,2% acid etilendiaminotetraacetic. Celulele s-au spălat o dată în mediu fără ser și s-au resuspendat în soluție salină tamponată cu fosfat. Șobolanii anesteziați prin inhalarea izofluranului de 1-2,5% (Mylan, Osaka, Japonia) au fost inoculați subcutanat (sc) cu 1 x 107 celule / situs 85As2 (șobolani care poartă tumori) sau salină (șobolani de control care nu poartă tumori) flancul stâng și dreapta, respectiv în ziua 0. Axele majore și minore ale tumorii au fost măsurate și volumul tumorii a fost estimat utilizând următoarea ecuație: volumul tumorii (cm3) = axa principală (cm) × axa minoră (cm) × axa minoră (cm) × 1/2 [ 31 ]. Șobolanii hrăniți cu șobolan au primit o cantitate de alimente care a fost aceeași cu cea consumată de șobolanii CC indusă de 85As2 în ziua precedentă (zilele 1-15), cantitatea de alimente pentru șobolanii hrăniți în pereche în ziua 1 a fost echivalentă cu cea a cachecticului șobolani în ziua 0). S-au evaluat greutatea corporală, greutățile țesuturilor organelor, consumul de alimente și apă, nivelul glucozei plasmatice și expresia mRNA a hormonului de peptidă orexigenic / anorexigenic în regiunile hipotalamice. Greutatea corporală și consumul de alimente și apă au fost măsurate zilnic până în ziua 14 sau 15. În ziua 14 (șobolani CC și șobolani de control care nu sufereau tumori) sau 15 (șobolani hrăniți cu perechi), șobolanii au fost anesteziați prin inhalare de 1-2,5 % izofluran și sângele colectat din aorta abdominală a fost imediat supus măsurării concentrației plasmatice a glucozei utilizând un sistem pilot de glucoză (IWAI Chemicals Company, Tokyo, Japonia). Creierul a fost imediat disecat și depozitat la -80 ° C până la hibridizarea in situ . Țesuturile organelor au fost imediat disecate și cântărite.

Evaluarea efectelor orexigene ale injectării ghrelinului exogen

Șobolanii au fost implantați sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 107 celule / sit) în ziua 0. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori. Alimentele și aportul de apă au fost măsurate săptămânal până în ziua 14. După 2 săptămâni (ziua 14), șobolanii au fost injectați intraperitoneal (ip) cu ghrelin de șobolan (10 nmol / animal, Institutul Peptide, Osaka, Japonia) măsurată timp de o oră după injectare. A doua zi, șobolanii au fost injectați cu soluție salină, iar alimentația și aportul de apă au fost măsurate timp de 1 oră. Salina sau ghrelinul a fost injectat între orele 10:00 și 13:00.

Efectele RKT asupra atenuării efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii CC

RKT a fost fabricat de către Tsumura și Co. (Tokyo, Japonia) prin uscarea prin pulverizare a unui extract de apă fierbinte din următoarele opt medicamente brute pentru a forma un extract pulverulent: 18,6% Atractylodis lanceae rhizoma (rizom de Atractylodes lancea De Candolle, Compositae) % De ginseng radix (rădăcină de Panax ginseng CA Meyer, Araliaceae), 18,6% tubel Pinelliae (tuber de Pinellia ternateBreitenbach), 18,6% Hoelen (sclerotium Poria cocos Wolf, Polyporaceae), 9,3% Zizyphi fructus (fructul Zizyphus jujuba Miller var ( Rinacea ), 4,3 % Glycyrrhizae radix (rădăcină și stolon de Glycyrrhiza uralensis Fisher, Leguminosae) și 2,3% Zingiberis rhizoma (rhizomul de Zingiber officinale Roscoe, Zingiberaceae). RKT a fost dizolvat în apă distilată (DW) la g / 10 mL în laboratorul nostru și a fost administrat prin gavaj oral. Șobolanii au fost implantați sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 107 celule / sit) în ziua 0. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori. Șobolanii care sufereau tumori au fost împărțiți în două grupe: un grup de tratament (85As2 + RKT) și un grup de control al tumorilor (85As2 + DW). Grupul de tratament a fost administrat pe cale orală RKT de două ori pe zi la 1 g / kg / zi timp de 7 zile (de la ziua 14 până în ziua 20). Grupului de control purtător al tumorii și șobolanilor care nu poartă tumori s-au administrat DW (10 ml / kg) în aceeași perioadă. Pentru evaluarea efectelor orexigene induse de ghrelin, șobolanii au fost injectați ip cu ghrelin (10 nmol / animal) în ziua 21, iar consumul alimentar a fost măsurat timp de 1 oră sau 22 ore după injectare. A doua zi, șobolanii au fost injectați ip cu vehicul (soluție salină) ca martor, iar consumul de alimente a fost măsurat timp de 1 oră sau 22 h.

Efectele RKT asupra anorexiei-cachexiei, ghrelinului plasmatic și a peptidei orexigene / anorexigenice hipotalamice în modelul CC

Într-o procedură similară cu cea utilizată pentru evaluarea efectelor RKT asupra atenuării efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii indusă de 85As2, s-au preparat trei grupuri (control + DW, 85As2 + DW și 85As2 + RKT). Aportul alimentar și greutatea corporală au fost măsurate săptămânal până în ziua 14 și zilnic după aceea. În plus față de creșterea și pierderea în greutate după administrare, datele privind greutatea corporală în zilele 14-21 după administrarea RKT sau DW au fost exprimate utilizând următoarea relație ca comparații zilnice:% din pre (%) = greutatea corporală a fiecărui animal după administrare zilele 15-21) / greutatea corporală a fiecărui animal înainte de administrare (în ziua 14) × 100. Aportul de alimente după administrarea RKT sau DW a fost calculat ca valoarea medie zilnică din zilele 16 până la 21 după cum urmează: consumul mediu zilnic de hrană pentru fiecare animal (după) – consumul de hrană al fiecărui animal (înainte).

În ziua 21, pentru măsurarea concentrațiilor plasmatice de acil ghrelin, șobolanii au fost anesteziați cu izofluran, sângele colectat din aorta abdominală a fost centrifugat (1700 x g timp de 10 minute) și plasmă a fost păstrată la -80 ° C până la analiză. Pentru măsurarea mARN  urilor neuropeptidului Y ( NPY ) și GHS-R și a hibridizării in situ , creierul sau hipotalamusul a fost imediat disecat și depozitat la -80 ° C până la analiză.

Măsurarea concentrațiilor plasmatice de grelină

Sângele colectat din aorta abdominală a fost centrifugat (1700 x g timp de 10 minute). Pentru a preveni degradarea acil ghrelinului, plasmă a fost imediat tratată cu 1/10 volum de HCI 1 M. Plasma a fost stocată la -80 ° C până la analiză. Nivelele plasmatice de acil ghrelină au fost măsurate utilizând un kit de testare a imunosorbantului enzimatic (ELISA) (SCETI, Tokyo, Japonia) conform instrucțiunilor producătorului.

Extracția ARN, transcripția inversă și reacția în lanț în timp real a polimerazei (PCR)

PCR în timp real a fost realizat așa cum s-a descris mai sus [ 32 ]. Pe scurt, suprafața hipotalamică a fost disecată pe o placă metalică rece pe gheață și ARN-ul total a fost izolat utilizând un kit Isogen (Nippon Gene Co., Ltd., Tokyo, Japonia) conform instrucțiunilor producătorului. Primul catenar ADNc a fost transcris invers din 5 ug ARN total utilizând sistemul de sinteză SuperScript First-Strand (Invitrogen) într-un volum final de 100 pl. Cromatografia rapidă (2 pL) a fost amplificată într-un ciclu termic rapid (LightCycler, Roche Diagnostics, Barcelona, ​​Spania) folosind LightCycler 480 SYBR Green I MasterMix (Roche) și următoarele primeri: GHS-R1a , 5'-GAAAGCAAACACCACCACAG-3'- și (invers) 5'-AGGAAGCTATGGCGGAGAC-3' ; NPY , (înainte) 5'-CCGCTCTGCGACACTACAT-3 ' și (invers) 5'-TGTCTCAGGGCTGGATCTCT-3' ; GAPDH, (înainte) 5'-CCCCCAATGTATCCGTTGTG-3 ' și (invers) 5'-TAGCCCAGGATGCCCTTTAGT-3' . Produsele PCR au fost cuantificate utilizând software-ul LightCycler 480.Cantitatea de ARNm țintă în grupul experimental relativ la cea din grupul martor a fost determinată din valorile de fluorescență și de prag (CT) rezultate utilizând metoda 2- ΔΔCT [ 33 ].

Hibridizarea in situ

Hibridizarea in situ a fost realizată așa cum s-a descris mai înainte [ 10 , 34 ]. Pe scurt, s-au preparat secțiuni de creier coronat grosime de 12 um înghețate într-un criostat la -20 ° C, dezghețate și montate pe diapozitive acoperite cu gelatină / crom de aluminiu. Nucleul paraventricular (PVN), nucleul arcuat (ARC) și zona hipotalamică laterală (LHA) au fost identificate conform atlasului Paxinos și Watson [ 35 ] și confirmate prin microscopie. Hibridizarea a fost realizată sub o acoperitoare Nescofilm (Bando Chemical IMD, Osaka, Japonia). [35S] marcat 3′-end-deoxyoligonucleotides complementare transcrieri care codifică NPY (5'-GGAGTAGTATCTGGCCATGTCCTCTGCTGGCGCGTC-3'), proteina agouti-asociată (AgRP; 5'-CGACGCGGAGAACGAGACTCGCGGTTCTGTGGATCTAGCACCTCTGCC-3'), proopiomelanocortin (POMC; 5'-CTTCTTGCCCAGCGGCTTGCCCCAGCAGAAGTGCTCCATGGACTAGGA-3'), cocaină și-amfetamina reglementate transcript (CART; 5'-TGGGGACTTGGCCGTACTTCTTCTCATAGATCGGAATGC-3'), orexin (5'-TTCGTAGAGACGGCAGGAACACGTCTTCTGGCGACA-3'), de eliberare a corticotropinei hormonului (CRH; 5'-CAGTTTCCTGTTGCTGTGAGCTTGCTGAGCTAACTGCTCTGCCCTGGC-3'), hormonul de eliberare a tirotropinei (TRH; 5'-GTCTTTTTCCTCCTCCTCCCTTTTGCCTGGATGCTGCGCTTTTGTGAT-3' ) și hormonul de concentrare a melaninei ( MCH ; 5'-CCAACAGGGTCGGTAGACTCGTCCCAGCAT-3' ) au fost utilizați ca probe specifice genei.

Au fost utilizate numerele totale de 6×105 cpm / diapozitiv pentru NPY, AgPR, POMC, CART, MCH, TRH și CRH și 4×105 cpm / diapozitiv pentru orexină. Secțiunile hibridizate care conțin regiunile ARC, LHA și PVN au fost expuse filmului autoradiografic (Hyperfilm; Amersham, Buckinghamshire, UK) timp de 4 zile pentru orexină și 7 zile pentru NYP, AgRP, POMC, CART, MCH și CRH. Imaginile autoradiografice au fost capturate la 40x mărire și cuantificate folosind un analizor MCID imagistic (Imaging Research, St. Catherines, ON, Canada). Absorbanța medie a fost măsurată și comparată cu eșantioanele microscale de 14 C expuse simultan (Amersham). Curba standard a fost adaptată în funcție de absorbția microscalelor de 14 C pe același film.

Evaluarea semnalizării ghrelinelor utilizând sistemul CellKey

Măsurarea semnalizării ghrelinelor de către sistemul CellKey (MDS Sciex, Ontario, Canada) a fost efectuată utilizând metodele descrise anterior [ 36 ]. Pe scurt, o placă CellKey cu 96 de godeuri a fost spălată cu apă sterilă timp de 1 oră după acoperirea suprafeței cu poli- d- lizină. Celulele HEK293A care exprimă GHS-R au fost însămânțate la o densitate de 25.000 celule / godeu și incubate sub o atmosferă de 5% C02 la 37 ° C. Celulele au fost tratate cu vehicul sau ghrelin la 28 ° C. Ghrelin a fost preparat la o concentrație finală de 10x ( 10-10 , 3×10-10 și 10-9 M) diluată cu soluție salină echilibrată Hank (1,3 mM CaCI2 2H2O, 0,81 mM MgS04, 5,4 mM KCI, 0,44 mM KH2P04, 4,2 mM NaHC03, 136,9 mM NaCI, 0,34 mM Na2HP04 și 5,6 mM d- glucoză) conținând 20 mM acid 4- (2-hidroxietil) -1-piperazetansulfonic (HEPES). Plăcile celulare s-au spălat de trei ori cu pH 7,4. Soluția salină echilibrată Hank conținând 20 mM HEPES (HHBS) și 135 pL HHBS s-a adăugat la fiecare godeu. Plăcile au fost lăsate să se echilibreze la 28 ° C timp de 30 de minute. O linie de bază a fost stabilită timp de 5 minute, s-a adăugat 15 ui de soluție de ghrelin sau vehicul (HHBS), iar impedanța dintre electrozii a fost măsurată la fiecare 10 s timp de 15 minute pentru a măsura semnalizarea ghrelinică. Pentru a evalua efectele RKT asupra activării semnalizării ghrelinice, s-au adăugat 135 pl soluție RKT (10 pg / ml) la plăci după spălarea finală și s-au lăsat să se echilibreze la 28 ° C timp de 1 oră în dispozitivul CellKey. Impedanța a fost apoi măsurată după adăugarea soluției de ghrelin sau a vehiculului.

Efectele hrănirii pe termen lung a unei diete care conține RKT asupra anorexiei în modelul CC

Șobolanii au fost împărțiți în trei grupe: un grup care nu poartă tumori (control + CE-2), un grup de control al grupului tumoral (85As2 + CE-2) și un grup de tratament (85As2 + RKT-1%). Șobolanii au fost implantați sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 106 celule / sit) în ziua 0 ca șobolani care poartă tumoare. Șobolanii inoculați cu soluție salină servesc ca grup de control care nu poartă tumori. Grupul de tratament a fost alimentat cu o dietă RKT-1% (dieta CE-2 conținând 1% RKT) cu acces ad libitum în timpul experimentului (din ziua -7 până în ziua 28). Grupul de control al tumorii și cel care nu poartă tumori a fost alimentat cu CE-2 în aceeași perioadă. Volumul tumoral, consumul mediu zilnic de hrană și greutatea corporală au fost măsurate săptămânal în această perioadă.

analize statistice

Toate datele sunt exprimate ca medie ± eroare standard a mediei (SEM). Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând testele teste ale lui Aspin-Welch, t- testele pereche, analiza unică a varianței (ANOVA), urmate de testele comparative multiple ale lui Dunnett, ANOVA cu o singură cale, urmate de testele comparative multiple ale lui Bonferroni post- hoc sau două – în repetate rânduri, ANOVA, urmată de teste Bonferroni post-hoc. Nivelul de semnificație α a fost stabilit la 0,05, iar diferențele cu o valoare pbidirecțională de mai puțin de 0,05 au fost considerate semnificative. Toate analizele statistice au fost efectuate utilizând GraphPad Prism versiunea 5 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, SUA).

Rezultate

Caracterizarea modelului de șobolan CC indus de 85As2 comparativ cu șobolanii hrăniți cu perechi

Greutatea corporală și consumul de alimente și apă au fost examinate la șobolani până la 14 zile după tratamentul cu 85As2 (sau vehicul) sau la începutul hrănirii cu perechi. Implantarea subcutanată a celulelor 85As2 a determinat creșterea progresivă a tumorii la șobolani; volumele tumorale și greutățile la 14 zile după implantarea celulelor 85As2 sunt prezentate în Tabelul 1 . Greutățile corporale ale șobolanilor care nu suferă de tumori au continuat să crească în timpul experimentului, în timp ce greutățile corporale ale șobolanilor din grupurile 85As2 și cele alimentate cu perechi nu au fost. Măsurile repetate în două direcții ANOVA ale greutăților corporale în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale timpului (F) (F (14, 210) = 34.98, p <0.0001) și interacțiunea de tratament (grup) 22,59, p <0,0001], dar nu și tratamentul [F (2, 210) = 2,789, nu semnificativ (ns)]. Greutățile corporale ale șobolanilor din grupul 85As2 în ziua 10 au fost semnificativ mai mici decât cele din grupul martor, iar după aceea, diferențele au crescut treptat (măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc, ziua 10: p <0,05 , ziua 11: p <0,01, zilele 12-14: p <0,001; Pe de altă parte, șobolanii hrăniți cu perechi au prezentat modificări ale greutății corporale în timp, similare cu cele din șobolanii CC induși de 85As2, iar greutatea corporală a acestora a fost semnificativ mai mică decât cea din grupul de control (măsurători repetate ANOVA, hoc teste Bonferroni, ziua 10: p <0,05; zilele 11-12: p <0,01; zilele 13-14: p <0,001; Fig. 1A ). Reducerea consumului alimentar a fost observată în grupul 85As2 în comparație cu grupul martor; prin urmare, aportul alimentar în grupul alimentat cu perechi a fost redus similar cu cel din grupul 85As2. Măsurile repetate în două direcții ANOVA privind aportul alimentar la toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului [F (2, 210) = 35,05, p <0,0001], timpul [F (14, 210) = 31,50, p <0,0001] × timp de interacțiune [F (28, 210) = 7,26, p <0,0001]. Reducerea consumului alimentar în grupul 85As2 în comparație cu animalele de control a fost observată la 6 zile după implantare, iar diferența a devenit mai mare cu 8 zile mai târziu. Ulterior, reducerea a fost stabilă și persistată (măsurători repetate în două direcții ANOVA urmate de teste post-hoc Bonferroni, zilele 6-7: p <0,01, zilele 8-14: p <0,001; Similar cu observarea la șobolanii CC indus de 85As2, aportul alimentar la șobolanii hrăniți cu perechi a fost semnificativ redus (măsurători repetate în două sensuri ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, zilele 6, 8 și 14: p <0,01; și 9-13: p <0,001; Fig. 1B ). În plus, mușchii (mai mare pectoral, gastrocnemius și tibialis anterior), țesutul adipos (grăsime epididimală și mesenterială), greutatea ficatului, splinei și a rinichilor au fost substanțial reduse atât la șobolanii CC hrăniți cu perechi cât și 85As2, comparativ cu șobolanii de control Tabelul 1 ). Nivelurile de glucoză din plasmă au fost, de asemenea, semnificativ mai scăzute atât la șobolanii hrăniți cu perechi, cât și la șobolanii CC decât la șobolanii control. Greutatea corporală, după scăderea greutății tumorii, a fost mai scăzută în cazul cachectic decât în ​​cazul șobolanilor hrăniți cu perechi. În plus, greutatea mai mare a mușchilor pectorali în grupul 85As2 a fost semnificativ mai mică decât cea din grupul hrănit cu perechi. Aportul de apă a fost redus în grupul 85As2 comparativ cu cel din grupul martor și a fost ușor redus în grupul hrănit cu perechi. Măsurile repetate în două direcții ANOVA privind aportul de apă în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului [F (2, 210) = 8,744, p <0,01], timpul [F (14, 210) = 26,17, p <0,0001] × timp de interacțiune [F (28, 210) = 4.318, p <0.0001]. Reducerea șobolanilor CC a fost semnificativă, stabilă și persistentă (măsurători repetate în două direcții ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, zile 7-8: p <0,01, zile 9-14: p<0,001; Cu toate acestea, spre deosebire de șobolanii CC, aportul de apă la șobolanii hrăniți cu perechi a prezentat o reducere semnificativă numai în ziua 14.

tabelul 1

Organismul, tumora, mușchiul, grăsimile, greutățile organelor și nivelurile de glucoză din plasmă la șobolani cu hrănire cu perechi și la șobolani indusă de 85As2.
Control 85As2 -Pair hrănite
Greutatea tumorii (TW) 0,00 ± 0,00 2,46 ± 0,42 0,00 ± 0,00
Volumul tumorii 0,00 ± 0,00 7,71 ± 1,51 0,00 ± 0,00
Greutatea corporală (BW) 229,53 ± 4,47 195,13 ± 5,83 ** 196,36 ± 2,99 ***
BW-TW 229,53 ± 4,47 192,67 ± 6,02 *** 196,36 ± 2,99 ***
BW (pre-inoculare) 191,70 ± 5,47 191,63 ± 4,67 191,32 ± 5,56
% Schimbare (post / pre) 119,93 ± 1,84 100,62 ± 2,87 *** 101,93 ± 1,89 ***
Greutăți musculare
Mai mare pectoral 2,22 ± 0,13 1,80 ± 0,03 * 1,93 ± 0,04 #
gastrocnemian 1,24 ± 0,03 1,06 ± 0,03 ** 1,08 ± 0,02 ***
Tibialis anterior 0,46 ± 0,01 0,39 ± 0,02 ** 0,40 ± 0,01 **
solear 0,07 ± 0,01 0,07 ± 0,00 0,07 ± 0,00
Total mușchi 5,76 ± 0,19 4,84 ± 0,12 ** 5,03 ± 0,09 *
Greutăți de grăsime
epididim 2,31 ± 0,19 1,70 ± 0,08 * 1,80 ± 0,11 *
perirenal 1,63 ± 0,25 0,98 ± 0,10 1,05 ± 0,19
mezenterului 1,52 ± 0,16 0,76 ± 0,03 ** 0,88 ± 0,15 *
Grăsime totală 5,46 ± 0,56 3,45 ± 0,20 * 3,73 ± 0,44 *
Greutăți de organe
Ficat 10,15 ± 0,23 7,73 ± 0,30 *** 7,72 ± 0,15 ***
Splină 0,57 ± 0,02 0,46 ± 0,03 * 0,48 ± 0,02 *
Rinichi 2,25 ± 0,12 1,91 ± 0,07 * 1,92 ± 0,03 *
Plasma glucoză 142,67 ± 2,40 131,50 ± 1,93 *** 130,83 ± 3,56 **

Șobolanii au fost inoculate cu celule sc A 85As2 (1 x 10 7 celule / sau site – ul) , injectat cu soluție salină în ambele flancuri. Datele sunt exprimate ca media ± SEM a șase șobolani. Toate datele privind greutatea sunt exprimate în grame. Datele privind glucoza din plasmă sunt exprimate în mg / dl. Volumul tumorii a fost estimată utilizând următoarea ecuație: volumul tumorii (cm 3) = axa principală (cm) × axa minoră (cm) × axa minoră (cm) × 1/2. Tumoarea și volumul tumoral sunt exprimate ca total pentru ambele situsuri. Greutățile corporale și țesuturile au fost măsurate în ziua 14 (85As2 și grupurile de control) sau 15 (grup de hrană cu perechi). % Schimbare = greutate corporală fără tumori (BW-TW) în ziua 14 sau 15 / greutate corporală pre-inoculare cu celule 85As2 sau soluție salină în ziua 0 x 100. Valorile pentru țesuturile musculare bilaterale reprezintă media celor pentru cele două țesuturi unilaterale. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate folosind Aspin-Welch t – test.

p <0,05,

** p <0,01,

*** p <0,001 față de grupul de control,

p <0,05 față de grupul 85As2.

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g001.jpg

Comparația șobolanilor CC indusă de pereche și 85As2 indusă.

Schimbări în greutatea corporală (A), (B) consumul de alimente și (C) consumul de apă. Șobolanii au fost inoculați subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Șobolanii hrăniți cu perechi au primit o cantitate de alimente care a fost aceeași cu cea consumată de șobolanii CC indusă de 85As2 pentru ziua precedentă (zilele 1-15). Fiecare punct de date reprezintă media ± SEM a șase șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc; * p <0,05, ** p <0,01, *** p <0,001 comparativ cu grupul de control corespunzător.

nivelele mRNA ale peptidei hrănite hipotalamice hrănite au fost evaluate la 14 zile după implantarea celulelor 85As2. One-way ANOVA a expresiei POMC și MCH mRNA în toate grupurile a relevat efecte semnificative [ POMC , F (2, 15) = 23,98, p <0,0001; MCH , F (2, 15) = 12,42, p <0,001]. Nivelurile mRNA ale POMC în ARC și MCH în LHA au fost semnificativ mai mici la șobolanii CC indusă de 85As2 decât la șobolanii de control (ANOVA cu o singură cale urmată de testele de comparație multiplă Bonferroni post-hoc, p <0,001, respectiv p <0,01 ; figura 2 ). One-way ANOVA a NPYExpresia AgRP , CART , ORX , CRH și TRH mRNA în toate grupurile nu a evidențiat efecte semnificative [ NPY , F (2, 15) = 2.611, n . s .; AgRP , F (2, 15) = 2,349, n . s .; CART , F (2, 15) = 3,385, n . s .; ORX , F (2, 15) = 0,7201, n . s .; CRH , F (2, 15) = 0,1887, n . s .; TRH , F (2, 15) = 0,9264,n . s .]. nivelele mRNA ale NPY , AgRP și CART în ARC, ORX în LHA și CRH și TRH în PVN nu au fost diferite de cele ale șobolanilor de control. Pe de altă parte, la șobolanii hrăniți-pereche, nivelurile de expresie ale tuturor peptidelor expuse variații similare celor la șobolanii CC ( POMC , p <0,001; MCH , p <0,001, NPY , n . S ;. AgRP , n . S . ; COȘUL , ns .; ORX , n . s .; CRH , n . s .; TRH , n . s ., cu o singură cale ANOVA, urmată de testele comparative multiple ale lui Bonferroni post-hoc; Fig. 2 ).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g002.jpg

Exprimarea mRNA care codifică neuropeptidul Y ( NPY ), proteina asociată cu agouti ( AgRP ), proopiomelanocortina ( POMC ) și transcripția reglementată cu cocaină și amfetamină ( CART ) în nucleul arcuat (ARC); hormonul de eliberare a corticotropinei ( CRH ) și hormonul eliberator al tireotropinei ( TRH ) în nucleul paraventricular (PVN); și orexin ( ORX ) și hormon de concentrare a melaninei ( MCH ) în zona hipotalamică laterală (LHA) la șobolanii CC indus de control, hrăniți cu perechi și 85As2 2 săptămâni după implantare.

Șobolanii au fost inoculați subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Șobolanii hrăniți cu perechi au primit o cantitate de alimente care a fost aceeași cu cea consumată de șobolanii CC indus de 85As2 în ziua precedentă (zilele 1-15). Hibridizarea in situ a fost efectuată la 2 săptămâni după implantare (șobolani hrăniți cu perechi: ziua 15). Autoradiografii reprezentative ale secțiunilor hibridizate cu secvențe 35Sondă de oligodeoxinucleotidă marcată cu S complementară la ARNm relevant. Intensitatea semnalului a variat de la mare (negru) la joasă (alb). Bara neagră = 1 mm. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a șase șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA cu o singură cale urmată de teste Bonferroni post-hoc; ** p <0,01, *** p <0,001 comparativ cu grupul de control corespunzător.

Atenuarea efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii CC indus de 85As2

Reacțiile orexigene induse de ghrelin au fost examinate la șobolani timp de 2 săptămâni (ziua 14) după tratamentul cu 85As2 sau vehicul. Creștere a tumorii (4,32 ± 0,45 cm 3 ) și cașexie simptome, cum ar fi pierderea de greutate corporală și anorexie, au fost induse la sobolani implantat cu celule 85As2 (greutate corporală: grup de control, 238.90 ± 2,85 g, grupa 85As2, 188.68 ± 3,39 g, p <0,001; alimentar aportul zilnic: lotul martor, 22,79 ± 0,42 g, grupa 85As2, 15,31 ± 1,32 g, p <0,001; aportul zilnic de apă: grup de control, 27,99 ± 0,84 ml, grupa 85As2, 18,70 ± 0,48 ml, p <0,001 , măsurători repetate în două direcții ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni), care este în concordanță cu cele precedente [ 10 ] și prezente ( Fig. 1). La șobolanii care nu sufereau de tumori, injecția ip a ghrelinului a indus o creștere semnificativă a consumului de alimente timp de 1 oră în comparație cu injectarea în vehicul (salină) (testul t- pair, p <0,05). Cu toate acestea, la șobolanii CC care poartă 85As2, injectarea ip a ghrelinului nu a modificat consumul de alimente timp de 1 oră în comparație cu injecția vehiculului ( Fig. 3A ). În contrast, nu au existat diferențe în aportul de apă de 1 oră după injectarea ip a ghrelinului între grupuri ( Fig. 3B ). Pe de altă parte, măsurătorile repetate în ambele sensuri, ANOVA, pentru aportul alimentar de o oră nu au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grup) [F (1, 8) = 0,4732, n . s .], injectarea [F (1, 8) = 1,121, n . s.] și interacțiunea de tratament × injectare [F (1, 8) = 1.425, n . s .]. În plus, măsurătorile repetate în două direcții ANOVA de admisie de apă de o oră nu au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grup) [F (1, 8) = 4.468, n . s .], injectare [F (1, 8) = 1,518, n . s .] și interacțiunea de tratament x injectare [F (1, 8) = 0,05166, n . s .].

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g003.jpg

Atenuarea efectelor orexigene induse de ghrelin la șobolanii CC indus de 85As2.

(A) consumul de alimente și (B) aportul de apă după injectarea ip a ghrelinului sau vehiculului. Șobolanii au fost inoculați subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Șobolanii s-au injectat ip cu 10 nmol ghrelin și s-au măsurat consumul de alimente și apa de 1 h în ziua 14. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a cinci șobolani. Diferențele dintre vehicul și ghrelin în fiecare grup au fost evaluate folosind t-teste asociate .

Îmbunătățirea semnalizării ghrelinelor prin RKT în celulele HEK293A care exprimă GHS-R

Stimularea ghrelină în celulele HEK293A care exprimă GHS-R a determinat modificări ale impedanței specifice proteinei Gq într-o manieră dependentă de concentrație ( fig.4A și 4B ). Schimbările de impedanță induse de ghrelin de 3 x 10-10 M au fost îmbunătățite prin pretratarea cu 10 ug / ml RKT ( Fig. 4C ); RKT a îmbunătățit răspunsul de semnalizare ghrelin până la 160% ± 11,9% ( Fig. 4D ). Măsurile repetate în două direcții ANOVA ale răspunsului la semnalizarea ghrelinului au evidențiat efecte semnificative ale medicamentului (cu sau fără RKT) [F (1, 10) = 13,06, p <0,01], tratamentul (cu sau fără ghrelină) [F ) = 235,1, p <0,0001] și interacțiunea cu medicamentul x [F (1, 10) = 16,57, p<0,01]. Amplificarea răspunsului de semnalizare ghrelin prin RKT a fost semnificativă (măsurători repetate în două direcții ANOVA urmate de teste post-hoc Bonferroni, p <0,01; Fig. 4D ).

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g004.jpg

Îmbunătățirea semnalizării ghrelinelor prin RKT în celulele HEK293A care exprimă GHS-R.

(A) schimbările dependente de timp impedanta induse prin stimularea cu ghrelin la diferite concentrații (10 -10, 3 x 10 -10 , sau 10 -9 M) în celulele care exprimă HEK293A GHS-R. (B) Răspuns la 3×10-10 M ghrelin la 10 min după injectare. (C) Modificări dependente de timp în răspuns la 3 x 10 -10 M ghrelin la 60 min după pre-tratament cu 10 ug / ml RKT. (D) Răspunsuri la 3 x 10 -10 M ghrelin la 10 min după injectare. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a șase determinări. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hip Bonferroni. RKT: rikkunshito; GHS-R: receptor de secreție de hormon de creștere.

Ameliorarea rezistenței ghrelin la șobolanii CC indusă de 85As2 de către RKT

La șobolanii implantați cu 85As2, simptomele de cașexie, cum ar fi pierderea în greutate corporală și anorexia, s-au dezvoltat clar în ziua 14 după implantare (greutatea corporală: grupul Control + DW, 227,7 ± 5,1 g, grupul 85As2 + DW, 186,7 ± 6,7 g, 85As2 + RKT, 189,6 ± 7,8 g, p <0,001, p <0,01 față de Control + DW și, respectiv, consumul zilnic de alimente: grupul Control + DW, 22,12 ± 0,58 g, grupul 85As2 + DW 14,91 ± 1,36 g, 85As2 + RKT grup, 14,24 ± 1,04 g; p <0,001, p <0,001 versus control + DW, respectiv) , în concordanță cu alte descoperirile noastre (Figurile (Figs11 și and3).3). Ulterior, șobolanilor li s-a administrat RKT sau DW timp de 7 zile. La șobolanii care nu poartă tumori (Control + DW), injectarea ip a ghrelinului a determinat o creștere semnificativă a consumului de alimente timp de o oră în comparație cu injectarea vehiculului (teste t-perete, p <0,05, figura 5A ). Dimpotrivă, la șobolanii cu CC 85As2 (85As2 + DW), injecția ip a ghrelinului a crescut cu mult aportul alimentar de 1 h comparativ cu injectarea vehiculului. Măsurile repetate în două direcții ANOVA pentru aportul alimentar de o oră în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale injectării ip [F (1, 14) = 5.502, p <0.05] și tratament (grup) [F (2, 14) = 4.606, p<0,05], dar nu injectarea ip × interacțiunea tratamentului [F (2, 14) = 1,953, ns]. Diferența dintre grupul ghrelin Control + DW + și ghrelinul 85As2 + DW + a fost semnificativă (măsurători repetate în două direcții ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, p <0,01; Fig. 5A ). RKT a blocat, parțial, dar nu în mod semnificativ, scăderea aportului alimentar de 1 h indusă de ghrelin la șobolanii CC care poartă 85As2 ( Fig. 5A ). Nu au existat diferențe semnificative între grupul 85As2 + RKT și șobolanii care nu poartă tumori (Control + DW). Ulterior, aportul de alimente după injectarea ghrelinului a fost măsurat până la 22 ore. Spre deosebire de aportul alimentar de o oră, nu au existat diferențe între vehicul și ghrelin în toate grupurile (pereche t(teste, ns), care arată că efectele injectării ghrelinului au dispărut rapid (în 1-2 ore de la rezultatele preliminare). Măsurile repetate în două direcții ANOVA privind aportul alimentar cumulativ de 22 ore la toate grupurile au evidențiat un efect semnificativ al tratamentului (grup) [F (2, 14) = 7,280, p<0,01], dar nu și injecția ip [F (1, 14) = 0,1694, ns] și ip injectare x interacțiune de tratament [F (2, 14) = 0,00446, ns]. La șobolani CC 85As2 (85As2 + DW), aportul alimentar de 22 ore după injectarea ip atât a vehiculului, cât și a ghrelinului a fost semnificativ mai scăzut comparativ cu cel al șobolanilor care nu sufereau de tumori (admisie de 22 de ore după injectarea vehiculului: Control + DW, 21,28 ± 1,13 g, 85,32 ± DW, 14,33 ± 1,19 g, consum de alimente timp de 22 de ore după injectarea de ghrelin: Control + DW, 21,61 ± 0,82 g, 85As2 + DW, 14,78 ± 1,25 g, prin teste post-hoc Bonferroni, p <0,01, p <0,05, respectiv; Fig. 5B). RKT a redus, parțial, dar nu semnificativ, scăderea aportului alimentar de 22 de ore la șobolanii cu CC 85As2 (85As2 + RKT, 17,45 ± 1,10 g, 17,69 ± 2,44 g, vehicul și ghrelin, respectiv, Fig.5B).

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g005.jpg

Efectele RKT asupra atenuării efectelor orexigenice induse de ghrelin la șobolanii CC indus de 85As2.

(A) Efectele RKT asupra efectelor orexigene induse de ghrelin atenuat (creșterea aportului alimentar de o oră) la șobolanii CC indus de 85As2. (B) consumul cumulativ de hrană (22 ore) după injectarea vehiculului sau ghrelină în toate grupurile. Șobolanii au fost implantate sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7celule / sit). La două săptămâni după implantare, RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat pe cale orală de două ori pe zi timp de 7 zile. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori și au fost administrați DW. Șobolanii au fost injectați ip cu ghrelin (10 nmoli) după administrarea RKT sau DW timp de 7 zile, și s-au măsurat consumul de alimente timp de 1 oră și adaosul alimentar cumulativ de 22 ore. A doua zi, toți șobolanii au fost injectați ip cu vehicul (soluție salină) ca martor, și s-au măsurat aportul de alimente 1 h și 22 ore. Fiecare coloană de date reprezintă media ± SEM a 5-6 șobolani. Diferențele dintre tratamentele cu vehicul și ghrelin în fiecare grup au fost evaluate utilizând t- teste asociate . Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni; * p <0,05, **p <0,01 față de grupul tratat cu Control + DW. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată.

Efectele RKT asupra simptomelor de anorexie-cașexie, a nivelurilor de ghrelină plasmatică și a expresiei genei GHS-R și NPY hipotalamice la șobolanii indusă de 85As2

CC clar dezvoltat în ziua 14, adică la 2 săptămâni după implantarea celulelor 85As2 ( S1 Fig ); după acest timp, șobolanilor li s-a administrat RKT sau DW timp de 7 zile. În grupul implantat cu 85As2, în timpul experimentului sa observat o creștere progresivă a tumorii, iar RKT nu a afectat volumul tumorii ( Fig. 6A). Măsurile repetate în două direcții ANOVA ale volumului tumorii au relevat efecte semnificative ale timpului [F (3, 81) = 149,8, p <0,001], dar nu tratamentul [F (1, 81) = 0,001769, ns] F (3, 81) = 0,1338, ns]. Greutățile corporale ale șobolanilor din grupul Control + DW au continuat să crească în comparație cu cele din ambele grupuri 85As2 + DW și 85As2 + RKT în timpul experimentului ( Fig. 6B). Măsurile repetate în două direcții ANOVA a greutăților corporale în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grup) [F (2, 294) = 25,97, p <0,001], timp [F (14, 294) = 15.96, p < și interacțiunea de tratament × timp [F (14, 294) = 21,24, p <0,0001]. Greutățile corporale ale șobolanilor din grupul Control + DW au fost semnificativ mai mari decât cele din grupul 85As2 + DW (măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, zilele 16-21: p <0,001; Fig. 6B ); ajungând la 105,6% ± 0,5% în ziua 21 și au fost semnificativ crescute în comparație cu cele de dinainte de administrare [perechi t -tests, Pre (ziua 14) , comparativ cu post (ziua 21): p <0,001;Fig. 6C )]. În contrast, greutățile corporale ale șobolanilor din grupul 85As2 + DWscăzut treptat, ajungând la 97,8% ± 0,7% în ziua 21,arată scăderi semnificative comparativ cu cele înainteadministrare (pereche t -tests, Pre versus Post: p <0.01 ,Figura 6C ). Dimpotrivă, greutățile corporale ale șobolanilor din grupul 85As2 + RKT nu au fost modificate comparativ cu cele înainte de administrare, măsurând 99,6% ± 0,8% în ziua 21 (figurile6B și 6C). Astfel, administrarea RKT ameliorează pierderea în greutate corporală.

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g006.jpg

Efectele RKT asupra creșterii tumorale, scăderii în greutate corporală și anorexiei în modelul CC indus de 85As2.

Schimbări în volumul tumorii (A) în timp și (B) greutatea corporală după administrarea RKT sau DW. Compararea câștigului de greutate corporală (C) și a creșterii (D) a aportului mediu zilnic de hrană înainte și după administrarea RKT sau DW la șobolani individuali. Șobolanii s- au implantat subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) în ziua 0. RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat oral de două ori pe zi , timp de 7 zile de la ziua 14. Rats inoculați cu salina a servit ca un grup de control care nu poartă tumori și au fost administrate DW. Fiecare punct de date reprezintă media ± SEM de 14-16 șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc; *** p<0,001 față de grupul tratat cu 85As2 + DW (B). Diferențele înainte de (pre) și după (post) administrarea RKT sau DW au fost evaluate folosind t- teste pereche ; ## p <0.01, ### p <0,001 comparativ cu grupul corespunzător înainte de administrare (fiecare sistem de referință a fost stabilită ca 0) (C, D). Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA într-o singură direcție, urmată de testele de comparație multiple Dunnett post-hoc; ** p <0,01 față de grupul tratat cu 85As2 + DW (D). RKT: rikkunshito; DW: apă distilată; ns: nu este semnificativ.

Atât în ​​grupul 85As2 + DW, cât și în grupul 85As2 + RKT, consumul zilnic de alimente înainte de administrare a scăzut semnificativ la 2 săptămâni după implantare comparativ cu cel din grupul Control + DW ( S1 Fig ). Ulterior, în grupul 85As2 + RKT, consumul mediu zilnic de alimente după administrarea din ziua 16 până la 21 a crescut semnificativ comparativ cu cel anterior administrării ( t- teste perechi , p<0,001; Fig. 6D ), în timp ce cele ale grupului Control + DW și grupe 85As2 + DW au prezentat doar creșteri foarte ușoare (zilnic câștig aportul alimentar: control + grup DW, 0,20 ± 0,34 g; 85As2 + grup DW, 0,22 ± 0,52 g; 85As2 + grupa RKT, 2,38 ± 0,55 g; Fig 6D). One-way ANOVA a câștigului mediu zilnic de aport alimentar în toate grupurile a evidențiat efecte semnificative [F (2, 42) = 6,839, p <0,01]. Diferențele dintre grupurile 85As2 + DW și 85As2 + RKT au fost semnificative (ANOVA cu o singură cale, urmată de testele de comparație Dunnett post-hoc multiple, p <0,01; Fig. 6D ).

In 85As2 + DW grup, mușchi (mai mare pectoral, gastrocnemian, solear si tibial anterior), țesutul adipos (epididimului, perirenal și grăsime mezenterului), ficatului și splinei greutăți a scăzut substanțial în comparație cu cei din grupul de control + DW ( Tabelul 2 ). Aceste scăderi cauzate de cașexie păreau mai mari decât cele din grupul 85As2 din Tabelul 1, deoarece creșterea tumorii și cachexia au progresat mult mai mult în decurs de 21 de zile de la 14 zile. Tratamentul cu RKT a crescut semnificativ masele musculare pectorale și greutățile totale ale mușchilor în comparație cu cele din grupul 85As2 + DW ( test t -Aspin-Welch , p <0,05, Tabelul 2 ).

masa 2

Organismul, tumora, mușchiul, grăsimile și greutățile de organe la șobolanii CC indusă de 85As2 cu sau fără tratament cu RKT.
Control + DW 85As2 + DW 85As2 + RKT
Greutatea tumorii (TW) 0,00 ± 0,00 7,74 ± 0,47 7,76 ± 0,72
Volumul tumorii 0,00 ± 0,00 11,03 ± 1,03 12,35 ± 1,37
Greutatea corporală (BW) 252,90 ± 4,00 194,71 ± 3,40 *** 198,48 ± 3,19 ***
BW-TW 252,90 ± 4,00 186,97 ± 3,36 *** 190,72 ± 2,97 ***
BW (pre-inoculare) 190,78 ± 3,11 190,81 ± 2,78 189,99 ± 2,94
% Schimbare (post / pre) 132,62 ± 1,07 98,02 ± 1,32 *** 100,44 ± 1,15 ***
Greutăți musculare
Mai mare pectoral 2,31 ± 0,07 1,60 ± 0,06 *** 1,84 ± 0,08 *** , #
gastrocnemian 1,33 ± 0,02 1,05 ± 0,02 *** 1,08 ± 0,02 ***
Tibialis anterior 0,50 ± 0,01 0,40 ± 0,01 *** 0,42 ± 0,01 ***
solear 0,08 ± 0,00 0,07 ± 0,00 *** 0,07 ± 0,00 ***
Total mușchi 6,14 ± 0,09 4,62 ± 0,12 *** 5,00 ± 0,11 *** , #
Greutăți de grăsime
epididim 3,36 ± 0,17 1,50 ± 0,08 *** 1,50 ± 0,06 ***
perirenal 2,73 ± 0,16 0,58 ± 0,08 *** 0,72 ± 0,06 ***
mezenterului 2,16 ± 0,10 0,51 ± 0,08 *** 0,68 ± 0,07 ***
Grăsime totală 8,25 ± 0,40 2,58 ± 0,24 *** 2,90 ± 0,18 ***
Greutăți de organe
Ficat 10,27 ± 0,29 6,98 ± 0,22 *** 7,43 ± 0,18 ***
Splină 0,56 ± 0,02 0,47 ± 0,02 *** 0,46 ± 0,01 ***

Șobolanii au fost implantate sc fie cu celule 85As2 (1 x 10 7 celule / locului) sau ser fiziologic , în ambele flancuri. Datele sunt exprimate ca media ± SEM de 10-12 șobolani. Toate datele privind greutatea sunt exprimate în grame. Volumul tumorii a fost estimată utilizând următoarea ecuație: volumul tumorii (cm 3 ) = axa majoră (cm) x axa minoră (cm) x axa minoră (cm) x 1/2. Tumoarea și volumul tumoral sunt exprimate ca total pentru ambele situsuri. Greutatea corporală și a țesuturilor au fost măsurate în ziua 21. Modificarea (post / pre) a fost exprimată după cum urmează:% schimbare = greutate corporală fără tumori (BW-TW) / greutate corporală preinoculare cu celule 85As2 sau salină în ziua 0 × 100. Valorile pentru țesuturile bilaterale musculare reprezintă media celor pentru cele două țesuturi unilaterale. Diferențele între grupuri au fost evaluate folosind metoda Aspin-Welch t -Test.

p <0,05,

** p <0,01,

*** p <0,001 față de grupul Control + DW,

p <0,05 față de grupul 85As2 + DW.

Nivelele de ghrelină plasmatică au fost semnificativ crescute la șobolanii cu CC care suferă de 85As2 comparativ cu cei din șobolanii care nu sufereau de tumori (ANOVA, F (2, 28) într-o singură direcție = 4,167, p <0,05, teste Dunnett post- p <0,05; Fig. 7A ). Spre deosebire de aceasta, administrarea RKT timp de 7 zile nu a afectat nivelele crescute de ghrelină plasmatică la șobolanii CC care poartă 85As2. Nivelurile de exprimare a genotipului GH -R ale hipotalamice nu s-au schimbat la șobolanii care poartă 85As2 comparativ cu cei din șobolanii care nu poartă tumori ( Fig. 7B ). În plus, tratamentul cu RKT nu a reușit, de asemenea, să modifice expresia acestei gene în șobolanii care purtau tumori 85As2. Hypothalamic NPYexpresia genelor nu s-a schimbat la șobolanii care sufereau de tumori 85As2 comparativ cu cei din șobolanii care nu sufereau de tumori. Cu toate acestea, tratamentul RKT a crescut semnificativ hipotalamic NPY expresia genelor la șobolani purtători de tumori 85As2 (one – way ANOVA, F (2, 30) = 3.784, p<0,05, teste multiple comparație post hoc Dunnett, p <0,01; Fig 7C ) . Într-un studiu preliminar, nivelele de mRNA ale peptidelor hipotalamice de hrănire a hranei au fost evaluate prin hibridizare in situ. În comparație cu șobolanii 85As2 CC, RKT a redus semnificativ expresia TRH în PVN și a crescut expresia NPY în ARC; totuși, această ultimă diferență nu a fost semnificativă ( S2 Fig ).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g007.jpg

Efectele RKT asupra nivelurilor plasmatice de acil ghrelină și a mRNA-urilor GHS-R și NPYhipotalamice la șobolanii CC induși de 85As2.

(A) nivelele de ghrelină plasmatică și (B) mRNA GHS-R și (C) NPY în hipotalamus la șobolanii de control și șobolani CC indus de 85As2 cu sau fără administrare RKT la 3 săptămâni după implantare. Șobolanii s- au implantat subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / site). La două săptămâni după implantare, RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat pe cale orală de două ori pe zi timp de 7 zile. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori și au fost administrați DW. Probele de plasmă sau de hipotalam au fost colectate după administrarea RKT timp de 7 zile. Fiecare coloană reprezintă media ± SEM de 10-12 șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA cu o singură cale, urmată de testele comparative Dunnett multiple. * p <0,05, **p <0,01 față de grupul tratat cu 85As2 + DW. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată; GHS-R: receptor de secreție de hormon de creștere.

Efectele preventive ale hrănirii pe termen lung a dietei RKT asupra anorexiei în modelul CC indus de 85As2

Pentru evaluarea efectelor pe termen lung ale RKT am folosit un model în care CC a evoluat treptat. Adică, șobolanii au fost implantați cu o zecime din numărul de celule 85As2 (1 x 10 6 celule / site) utilizat în modelul CC convențional. Tumorile au crescut lent, iar simptomele de cașexie, cum ar fi pierderea în greutate corporală și anorexia, nu au fost observate la 14 zile după implantarea tumorii, spre deosebire de șobolanii inoculați cu 1 x 107 celule / sit ( Fig.8A-8C ). Măsurile repetate în două rânduri ANOVA privind greutatea corporală în toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului (grupul) [F (2.140) = 5.001, p <0.05], timp [F (5, 140) = 706.7, p < × interacțiunea timpului [F (10, 140) = 31,73, p<0,0001]. Mai mult, măsurătorile repetate cu două sensuri ANOVA ale aportului alimentar la toate grupurile au evidențiat efecte semnificative ale tratamentului [F (2140) = 3.714, p <0.05], timpul [F (5, 140) = 17.02, p <0.0001] timp de interacțiune [F (10, 140) = 5,146, p <0,0001]. În grupul de control al tumorii (85As2 + CE2), greutatea corporală și consumul alimentar zilnic au scăzut semnificativ după 21 de zile (măsurători repetate ANOVA, urmate de teste post-hoc Bonferroni, p <0,001) comparativ cu cele din care nu prezintă tumori (control + CE-2) și aceste diferențe păreau mai mari la 28 de zile (teste Bonferroni, p <0,001; fig.8B și 8C). În contrast, hrănirea a RKT-1% dieta care începe înainte de implantarea tumorii ameliorata semnificativ aportul redus de alimente în ziua 28 la șobolanii CC 85As2 induse (testele post-hoc Bonferroni, p <0,01; Fig 8C ), în timp ce tratamentul nu a afectat creșterea tumorală sau pierderea în greutate corporală la șobolanii CC ( fig.8A și 8B ).

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este pone.0173113.g008.jpg

Efectele hrănirii pe termen lung a RKT (dieta 1%) înainte de implantarea tumorii asupra creșterii tumorale sau anorexiei în modelul CC indus de 85As2.

Schimbări în volumul tumorii (A), (B) greutatea corporală și (C) consumul mediu zilnic de alimente în timpul experimentului. Șobolanii s- au implantat subcutanat cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 6 celule / fiecare loc) în ziua 0. RKT (CE-2 dietă conținând 1% RKT) sau CE-2 a fost alimentat timp de 35 de zile de la ziua -7. Șobolanii inoculați cu soluție salină servesc ca un grup de control care nu poartă tumori și au fost hrăniți în mod similar timp de 35 de zile. Fiecare punct de date reprezintă media ± SEM de 9-11 șobolani. Diferențele dintre grupuri în timpul de greutate corporală și consumul de alimente au fost evaluate utilizând măsuri repetate în două direcții ANOVA urmate de testul Bonferroni post-hoc; *** p <0,001 comparativ cu grupul Control + CE-2 corespunzător, ## p <0,01 față de grupul corespunzător 85As2 + CE-2. RKT: rikkunshito.

Discuţie

În studiul prezent, am constatat că modelul de șobolan anorexie-cachexie a cancerului, indus de celulele 85As2 derivate din cancerul gastric uman, a dezvoltat rezistența la ghrelin. Această constatare a sugerat că rezistența ghrelinului poate fi implicată în dezvoltarea anorexiei în modelul nostru CC în prezența ghrelinului plasmatic crescut. RKT, care îmbunătățește semnalizarea ghrelinelor prin GHS-R, a atenuat parțial rezistența la ghrelin și simptomele de cașexie ameliorată, cum ar fi anorexia și pierderea în greutate corporală, fără a afecta ghrelinul plasmatic crescut în model. Aceste rezultate au sugerat că mecanismele prin care RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cachexiei cancerului în acest model pot implica atenuarea rezistenței ghrelinelor, posibil prin amplificarea semnalizării ghrelinelor.

Am arătat că șobolanii implantați cu 85As2 au prezentat în mod clar simptome de cașexie reproductibilă, incluzând anorexia, pierderea în greutate corporală și țesuturile musculare și adipoase reduse, până la 14 zile după implantare. Greutățile corporale ale șobolanilor hrăniți cu perechi au fost reduse la niveluri similare cu cele ale șobolanilor de cașexie indusă de 85As2, în conformitate cu consumul scăzut de alimente. Cu toate acestea, când greutatea tumorii a fost scăzută, greutățile corporale ale șobolanilor de cașexie indusă de 85As2 au fost mai mici decât cei ai șobolanilor hrăniți cu perechi, susținută de scăderi mai mari ale țesuturilor musculare și adipoase la șobolanii CC indusă de 85As2. Diferențele în pierderile de greutate corporală dintre șobolanii hrăniți prin pereche și CC au fost probabil cauzate de alți factori decât consumul scăzut de alimente. Am demonstrat anterior că o creștere a consumului de energie a fost crescută la șobolanii CC indusă de 85As2, comparativ cu cei din șobolanii de control [10 ]. Prin urmare, creșterea consumului de energie la șobolanii cu CC indusa de 85As2 poate avea o exacerbare a pierderii în greutate corporală, inclusiv scăderea țesuturilor adipoase și musculare. Pe de altă parte, în ceea ce privește peptidele orexigene ( mRNA NPY și AgRP în mRNA ARC, ORX și MCH în LHA) sau peptide anorexigene ( ARN, PTHC și CART în ARC, CRH și TRHmRNA în PVN) în hipotalamus, nivelele ARNm au prezentat în cea mai mare parte variații similare la șobolanii CC indus de 85As2 și șobolanii hrăniți cu perechi. Prin urmare, modificările în aceste mARN peptidice hipotalamice la șobolanii CC indus de 85As2 păreau a fi implicați în reducerea consumului alimentar. Cu toate acestea, în ciuda consumului similar de alimente, aportul zilnic de apă a fost semnificativ redus la șobolanii 85As2-cachectici, în timp ce reducerea șobolanilor hrăniți cu perechi a fost minoră. Această constatare a sugerat că disfuncția în sistemul nervos central care controlează corpul lichid, cum ar fi aportul de apă atunci când percepe starea de deshidratare, poate apărea la șobolanii cachectici; cu toate acestea, sunt necesare studii suplimentare.

Interesant, șobolanii cu CC indusă de 85As2 la 2 săptămâni după implantare au prezentat o sensibilitate slabă la ghrelinul exogen/extern, sugerând că rezistența ghrelină sa dezvoltat în aceste condiții patologice. Ghrelinul indus de stimularea apetitului a apărut în principal prin activarea neuronilor NPY / AgRP în ARC a hipotalamusului, un situs important pentru reglarea apetitului în sistemul nervos central. Ghrelinul circulant, secretat de stomac, este transportat peste bariera hematoencefalică și se leagă de GHS-R localizat în neuronii NPY / AgRP, ducând la transmiterea semnalului către hipotalamus. Activarea GHS-R în neuronii NPY / AgRP ai hipotalamului stimulează apetitul. În plus, ghrelinul periferic se leagă de GHS-R localizat în nervul gastric aferent vagului și transmite un semnal de ghrelin către neuronii NPY / AgRP în hipotalamus [37 ]. Astfel, activarea GHS-R de către ghrelin în neuronii NPY / AgRP ai hipotalamusului prin aceste căi periferice stimulează pofta de mâncare. La șobolanii cu CC indusa de 85As2, nivelele de ghrelină din plasmă au fost semnificativ ridicate. Această constatare a fost raportată, de asemenea, la pacienții cu CC [ 20 , 21 ], care susțin rezultatele noastre. Deoarece postul și un echilibru energetic negativ cresc ghrelinul plasmatic [ 38], nivelurile ridicate de ghrelin din modelul nostru de șobolan CC ar putea fi un efect compensator ca răspuns la balanța energetică negativă. Cu toate acestea, consumul de alimente a fost în continuă scădere la șobolanii cachectici, sugerând că stimularea endogenă a ghrelinului indusă de apetitul nu a fost produsă fiziologic. Ulterior, pentru a elucida mecanismele prin care administrarea ghrelinului exogen la șobolanii cachectici nu a favorizat aportul suficient de alimente, am evaluat exprimarea genelor GHS-R în hipotalamus la șobolanii cachectici indusă de 85As2 și am constatat că GHS-Rexpresia la șobolani cachectici a fost comparabilă cu cea din șobolanii care nu poartă tumori. Prin urmare, este puțin probabil ca dezvoltarea rezistenței ghrelin la șobolanii cachectici să fie cauzată de răspunsul atenuat la ghrelin prin scăderea expresiei GHS-R.

Am constatat anterior că celulele 85As2 cultivate produc LIF, care este o citokină inflamatorie și factorul cachectic [ 7 ]. Receptorul LIF este localizat în neuronii anorexigenici POMC / CART [ 39 ]. În concordanță cu rezultatele din culturile celulare 85As2, concentrațiile plasmatice ale LIF au crescut la șobolanii care purtau 85As2 cu evoluția simptomelor de cașexie și îndepărtarea chirurgicală a tumorii nu numai că au eliminat simptomele de cașexie, dar și că au scăzut nivelurile LIF plasmatice sub limita de detecție, LIF contribuie la simptomele de cașexie în modelul CC indus de 85As210 ]. Astfel, LIF poate contribui la rezistența ghrelină observată în CC indus de 85As2; totuși, sunt necesare studii suplimentare pentru a clarifica asocierea.

RKT este utilizat pe scară largă pentru tratamentul simptomelor disfuncției motorii gastrointestinale [ 40 ]. Sa dovedit că RKT ameliorează anorexia prin creșterea secreției de ghrelină. Takeda și colab. a raportat că RKT crește secreția de ghrelin prin antagonismul receptorului serotoninei 2b / 2c și ameliorează anorexia indusă de cisplatina medicamentului anticancer [ 25 ]. În plus, Matsumura și colab. a raportat că RKT crește concentrațiile plasmatice de ghrelină la șoareci și la oameni [ 26 ] și Arai et al. a raportat că RKT ameliorează simptomele gastrointestinale superioare la pacienții cu dispepsie funcțională însoțită de creșterea ghrelinului plasmatic [ 28 ]. Mai recent, sa demonstrat că RKT potențează semnalizarea ghrelin prin intensificarea activității GHS-R [ 2930 ]. În studiul de față, am investigat dacă RKT ar putea amplifica direct semnalizarea ghrelinelor utilizând sistemul CellKey, care este adaptat în mod special la detectarea receptorului cuplat cu proteine ​​G și produce profiluri de răspuns care sunt consecvente într-o gamă largă de condiții de testare, cu capacitatea de distingând semnalele dintre subtipurile Gs, Gi / o și Gq ale proteinei Gα [ 41 , 42 ]. În plus, acest sistem permite teste nemarcate, cu celule întregi, în timp real și de mare viteză și poate fi utilizat pentru măsurarea răspunsului integrat al celulelor întregi la activarea receptorului prin măsurarea impedanței în celule [ 41]. Adică modificările impedanței în celule sunt dependente de tipul de proteină G, cuplată cu un receptor specific. GHS-R este un receptor cuplat la proteina Gq; prin urmare, stimularea ghrelină în celulele HEK293A care exprimă GHS-R a indus schimbări de impedanță specifice Gq într-o manieră dependentă de concentrație. RKT a îmbunătățit în continuare modificările impedanței induse de ghrelin, sugerând că RKT a amplificat direct semnalizarea ghrelină după legarea ghrelinului de GH-R. Acest rezultat a fost în concordanță cu rapoartele anterioare utilizând celulele care exprimă GHS-R [ 29 , 30 ].

În studiul prezent, am constatat că rezistența ghrelină sa dezvoltat la șobolani CC indusă de 85As2 la 2 săptămâni după implantare; prin urmare, am examinat dacă RKT, care îmbunătățește semnalizarea ghrelinelor, atenuează rezistența ghrelinelor. Interesant, la șobolanii cu 85As2 (DW), la 3 săptămâni după implantare, injectarea ip a ghrelin nu a crescut semnificativ consumul de alimente timp de 1 h, sugerând că dezvoltarea rezistenței ghrelinului a accelerat între 2 și 3 săptămâni după implantare. Administrarea RKT timp de 7 zile a ameliorat parțial sensibilitatea slabă la ghrelinul exogen la șobolanii cachectic la 3 săptămâni după implantare, sugerând că RKT atenuează rezistența la ghrelină. RKT a atenuat scăderea indusă de cașexie în consumul alimentar atât la o oră după injectarea de ghrelină, cât și la 22 de ore după administrarea de ghrelin sau injecție cu vehicul. Prin urmare,RKT este susceptibilă de a spori sensibilitatea la ghrelin endogen prin potențarea semnalizării ghrelinice și creșterea dozei de hrană de 22 ore, deoarece creșterea indusă de injectarea ghrelinului a avut o durată de 1-2 ore. Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în ​​greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în ​​greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în ​​greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,10 ].

Pe lângă efectele tratamentului cu RKT asupra cașexiei emergente, am constatat că tratamentul prealabil cu RKT începând înainte de implantarea tumorii a împiedicat anorexia în Administrarea RKT timp de 7 zile a ameliorat parțial sensibilitatea slabă la ghrelinul exogen la șobolanii cachectic la 3 săptămâni după implantare, sugerând că RKT atenuează rezistența la ghrelină. RKT a atenuat scăderea indusă de cașexie în consumul alimentar atât la o oră după injectarea de ghrelină, cât și la 22 de ore după administrarea de ghrelin sau injecție cu vehicul. Prin urmare,RKT este susceptibilă de a spori sensibilitatea la ghrelin endogen prin potențarea semnalizării ghrelinice și creșterea dozei de hrană de 22 ore, deoarece creșterea indusă de injectarea ghrelinului a avut o durată de 1-2 ore. Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în ​​greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în ​​greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,Această speculație a fost susținută de rezultatele care demonstrează că aportul mediu zilnic de hrană la șobolanii individuali a fost semnificativ crescut prin administrarea RKT. Mai mult, pierderile atât în ​​greutatea corporală cât și în masa musculară au fost, de asemenea, atenuate după administrarea RKT, demonstrând că RKT a ameliorat simptomele anorexiei-cașexiei în modelul CC induced de 85As2,10 ].  modelul CC indus de 85As2. Cu toate acestea, ameliorarea CC prin RKT nu sa datorat creșterii secreției de ghrelină deoarece RKT nu a afectat nivelele plasmatice de ghrelină la șobolanii CC. În plus, RKT nu a afectat creșterea tumorală. De asemenea, RKT nu a modificat nivelurile plasmatice ale LIF, după cum sa raportat anterior [ 10 ]. Aceste rezultate au arătat că efectele anticachetice ale RKT nu au fost legate de regresia tumorii sau de nivelurile LIF.

Ulterior, am constatat că RKT nu a afectat expresia genică GHS-R hipotalamică la șobolanii CC indus de 85As2, sugerând că ameliorarea rezistenței ghrelin prin RKT nu se datorează creșterii expresiei GHS-R . Yakabi și colab. raportat anterior că RKT a inversat în mod semnificativ reducerea expresiei genei GHS-Rindusă de cisplatină, în timp ce RKT nu a afectat expresia GHS-R la șobolanii normali [ 43 ]. Acest rezultat a sugerat că scăderea acută a consumului de alimente indusă de cisplatină a fost implicată în reducerea GHS-Rexpresia genelor. În contrast, în studiul prezent, sa demonstrat că rezistența la ghrelin la șobolanii cachectici este implicată în răspunsul atenuat ca urmare a legării ghrelinului de GHS-R, deoarece expresia genei GHS-R la șobolanii cachectici a fost comparabilă cu cea din non-tumorale șobolani. Prin urmare, constatările noastre sugerează că ameliorarea rezistenței la ghrelin și ameliorarea anorexiei la șobolanii cachectici tratați cu RKT are loc prin amplificarea semnalizării ghrelin după legarea GHS-R mai degrabă decât prin creșterea expresiei GHS-R. Îmbunătățirea apetitului de către ghrelin este implicată în reglarea peptidei orexigene NPY. Prin urmare, am investigat efectele amplificării dependente de RKT a semnalizării ghrelin la expresia NPY hipotalamică . Am constatat că RKT a crescutExpresia NPY în hipotalamusul șobolanilor cachectici indusă de 85As2. Într-un studiu in vitro , RKT a intensificat, de asemenea, creșterea indusă de ghrelin a Ca2 + intracelulare în neuronii NPY, care exprimă GHS-R, izolat de ARC [ 29 ]. Aceste constatări sugerează că activarea neuronilor NPY prin amplificarea semnalizării ghrelin prin RKT poate contribui la ameliorarea rezistenței la ghrelin și ameliorarea anorexiei la șobolanii cachectici.

Ulterior, am examinat efectele RKT asupra peptidelor hipotalamice orexigene / anorexigenice la șobolani cachectici indusă de 85As2. Expresia mRNA NPY în ARC a fost mai mare la șobolanii cachectici tratați cu RKT decât la cei care nu au fost tratați cu RKT, deși diferența nu a fost semnificativă. Studiul nostru anterior a demonstrat că RKT a ameliorat anorexia indusă de cisplatină la șobolani și a inversat scăderea indusă de cisplatină în exprimarea genei NPY hipotalamice în ARC [ 34 ]. În studiul preliminar prezent, cu toate acestea, nu am observat aceste efecte ale RKT. În hipotalamus, atât ARC cât și PVN s-au dovedit a juca roluri importante în sporirea aportului alimentar prin administrarea de ghrelin [ 44]. Studiul preliminar a demonstrat de asemenea că RKT a scăzut semnificativ expresia genei TRH în PVN comparativ cu cea a șobolanilor CC indusă de 85As2. TRH este o peptidă anorexigenică, iar injecția centrală a TRH reduce aportul alimentar la șobolani [ 45 ]. In plus, neuronii TRH in PVN sunt dens inervate de la terminalele axon care conțin NPY ARC [ 46 – 48 ]. Mai mult, administrarea intracerebroventriculară a NPY scade expresia genei TRH în PVN [ 49 ]. Luate împreună, această reducere a TRHexpresia genelor în PVN la șobolani cachectici prin RKT poate fi parțial implicată în ameliorarea anorexiei-cașexiei prin RKT. Cu toate acestea, aceste mecanisme nu sunt încă elucidate complet și sunt necesare studii suplimentare pentru a clarifica asocierea efectelor anticachetice ale RKT și variațiile peptidelor orexigene / anorexigenice modificate de RKT în regiunea hipotalamică, inclusiv ARC, PVN și LHA. În contrast, RKT afectează direct stomacul și se cunoaște că facilitează golirea gastrică, relaxarea adaptivă gastrică și motilitatea gastrointestinală superioară [ 50 – 52 ]. Aceste efecte pot ameliora în mod sinergic casexia-anorexia.

În concluzie, am demonstrat că modelul nostru de șobolan anorexie-cachexia de cancer, indus de celulele 85As2 derivate din cancerul gastric uman, a prezentat rezistență la ghrelin, contribuind eventual la anorexie și pierderea în greutate corporală. Mecanismul prin care RKT a ameliorat simptomele cancerului anorexie-cașexie poate implica ameliorarea rezistenței ghrelinului prin îmbunătățirea semnalizării ghrelinelor. Aceste constatări sugerează că RKT poate fi un agent promițător pentru tratamentul pacienților cu CC care prezintă niveluri ridicate de ghrelin circulant.

Informatii justificative

S1 Fig

Modificări în (a) greutatea corporală și (b) consumul de alimente înainte de administrarea RKT în modelul de cașexie cauzat de 85As2.

Șobolanii au fost implantate sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / locului) in ziua 0. Șobolani inoculați cu solutie salina a servit ca un grup de control non-tumorale purtătoare. Fiecare punct sau coloană de date reprezintă media ± SEM de 14-16 șobolani. Diferențele dintre grupele de greutate corporală și consumul de alimente în timp au fost evaluate utilizând măsurători repetate ANOVA, urmate de teste Bonferroni post-hoc. ** p <0,01, *** p <0,001 față de grupul Control + DW corespunzător. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată.

(TIFF)

S2 Fig

Efectele RKT asupra peptidelor hipotalamice orexigenice / anorexigenice la șobolanii CC indusă de 85As2.

(a) Exprimarea ARNm-urilor care codifică neuropeptida Y ( NPY ), proteina asociată cu agouti ( AgRP ), proopiomelanocortin ( POMC ) și transcripția reglementată cu cocaină și amfetamină ( CART ) în nucleul arcuat (ARC); hormonul de eliberare a corticotropinei ( CRH ) și hormonul eliberator al tireotropinei ( TRH ) în nucleul paraventricular (PVN); și orexina ( ORX ) și hormonul de concentrare a melaninei ( MCH ) în zona hipotalamică laterală (LHA) au fost măsurate prin hibridizare in situ . (b) GHS-R și (c) NPYmRNA în hipotalamus în martori și șobolani CC indus de 85As2 cu sau fără administrare RKT la 3 săptămâni după implantare. Șobolanii au fost implantate sc cu celule 85As2 în ambele flancuri (1 x 10 7 celule / site). La două săptămâni după implantare, RKT (1 g / kg / zi) sau DW a fost administrat pe cale orală de două ori pe zi timp de 7 zile. Șobolanii inoculați cu soluție salină au servit ca grup de control care nu poartă tumori și au fost administrați DW. Probele de hipotalam au fost colectate după administrarea RKT timp de 7 zile. Analizele mRNA hipotalamice care codifică peptide orexigene / anorexigenice în fiecare regiune a creierului (ARC, PVN sau LHA) au fost măsurate prin hibridizare in situ . Fiecare coloană reprezintă media ± SEM a șase șobolani. Diferențele dintre grupuri au fost evaluate utilizând ANOVA cu o singură cale urmată de teste Bonferroni post-hoc; # p<0,05 față de grupul 85As2 + DW. RKT: rikkunshito; DW: apă distilată.

(TIFF)

Logo-ul plosone

PLoS One View this Article Submit to PLoS Get E-mail Alerts Contact Us Public Library of Science (PLoS)
PLoS Unul . 2017; 12 (3): e0173113.
Publicat online 2017 Mar 1. doi: 10.1371 / journal.pone.0173113
PMCID: PMC5332064
PMID: 28249026
Kiyoshi Terawaki , # 1, 2 Yohei Kashiwase , # 1, 3 Yumi Sawada , 1 Hirofumi Hashimoto , 4 Mitsuhiro Yoshimura , 4Katsuya Ohbuchi , 1, 2 Yuka Sudo , 1, 3 Masami Suzuki , 1 Kanako Miyano , 1 Seiji Shiraishi , 1 Yoshikazu Higami , 3Kazuyoshi Yanagihara , 5 Tomohisa Hattori , 2 Yoshio Kase , 2 Yoichi Ueta , 4 și Yasuhito Uezono 1, 6, 7, *
Zane B Andrews, Editor

Recunoasteri

Mulțumim colegilor din laboratorul nostru pentru asistența tehnică și comentarii utile. Am dori să mulțumim Editage ( www.editage.jp ) pentru editarea limbii engleze.

Declarație de finanțare

Sprijinul acordat de KT a fost acordat KT prin: 1. Granturi-ajutor pentru cercetare științifică (C) de la Ministerul Educației, Culturii, Sportului, Științei și Tehnologiei, Japonia [ http://www.jsps.go.jp/j -grantsinaid / index.html ] Grant nr. 22590510. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 2. Fundația pentru promovarea cercetării în domeniul cancerului în Japonia [ http://www.ncc.go.jp/jp/ ]. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. Acordarea de sprijin a fost acordată lui Y. Uezono prin: 1. Strategia cuprinzătoare pe 10 ani pentru controlul cancerului de la Ministerul Sănătății, Muncii și Protecției Sociale, Japonia; [ http://www.mhlw.go.jp/] Grant nr. H22-General-035. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 2. Granturi-ajutor pentru cercetare științifică (C) de la Ministerul Educației, Culturii, Sportului, Științei și Tehnologiei, Japonia; [ http://www.jsps.go.jp/j-grantsinaid/index.html ] Grant nr. 24590740. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 3. Granturi din cadrul Proiectului de cercetare pentru îmbunătățirea calității în domeniul sănătății și colectarea dovezilor științifice privind medicina integrată [ http://www.amed.go.jp/] Grant nr. 15lk0310003h0001, 16lk0310020h0001. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 4. Cercetarea practică pentru controlul inovator al cancerului de la Agenția Japoneză pentru Cercetare și Dezvoltare Medicală, AMED; [ http://www.amed.go.jp/ ] Grant nr. 15ck0106059h0002, 16nk0101311h0002. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 5. Fondul Național de Cercetare și Dezvoltare al Centrului Național de Cancer [ http://www.ncc.go.jp/jp/] Grant nr. 23-A-2, 23-A-29 și 23-A-38. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului. 6. Un grant de la Tsumura & Co. (Ibaraki, Japonia) [ https://www.tsumura.co.jp/ ]. Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului.

Disponibilitatea datelor

Toate datele relevante se găsesc în fișă și în fișierele cu informații de asistență.

Referințe

1. Evans WJ, Morley JE, Argiles J, Bales C, Baracos V, Guttridge D, și colab. Cachexia: o nouă definiție . Clin Nutr . 2008; 27 ( 6 ): 793-9. Epub 2008/08/23. doi: 10.1016 / j.clnu.2008.06.013 PubMed ]
2. Laviano A, Meguid MM, Inui A, Muscaritoli M, Rossi-Fanelli F. Perspectiva terapiei: Sindromul de anorexie- cachexie a cancerului – când tot ce poți mânca ești singur . Nat Clin Pract Oncol . 2005; 2 ( 3 ): 158-65. Epub 2005/11/03. PubMed ]
3. Muscaritoli M, Bossola M, Aversa Z, Bellantone R, Rossi Fanelli F. Prevenirea și tratamentul cazhexiei de cancer: noi perspective asupra unei probleme vechi . Eur J Cancer . 2006; 42 ( 1 ): 31-41. Epub 2005/11/30. doi: 10.1016 / j.ejca.2005.07.026 PubMed ]
4. Tisdale MJ. Mecanismele cașexiei de cancer . Physiol Rev . 2009; 89 ( 2 ): 381-410. Epub 2009/04/04. doi: 10.1152 / physrev.00016.2008 PubMed ]
5. Chang JW, Yeh KY, Shen YC, Hsieh JJ, Chuang CK, Liao SK, și colab. Producerea citokinelor multiple și inducerea cașexiei la șoarecii atimici niti printr-o nouă linie celulară carcinom tiroidian anaplazic . J Endocrinol . 2003; 179 ( 3 ): 387-94. Epub 2003/12/06. PubMed ]
6. Ebrahimi B, Tucker SL, Li D, Abbruzzese JL, Kurzrock R. Cytokine în carcinomul pancreatic: corelarea cu caracteristicile și prognosticul fenotipic . Rac . 2004; 101 ( 12 ): 2727-36. Epub 2004/11/05. doi: 10.1002 / cncr.20672 PubMed ]
7. Mori M, Yamaguchi K, Honda S, Nagasaki K, Ueda M, Abe O, și colab. Sindromul de cașexie a cancerului sa dezvoltat la șoareci nud care poartă celule de melanom care produc factor de inhibiție a leucemiei . Cancer Res . 1991; 51 ( 24 ): 6656-9. Epub 1991/12/15. PubMed ]
8. Ravasco P, Monteiro-Grillo I, Vidal PM, Camilo ME. Cancerul: boala și nutriția sunt determinanții cheie ai calității vieții pacienților . Asistență pentru îngrijirea cancerului . 2004; 12 ( 4 ): 246-52. Epub 2004/03/05. doi: 10.1007 / s00520-003-0568-z PubMed ]
9. Walsh D, Rybicki L., Nelson KA, Donnelly S. Simptome și prognostic în cancerul avansat . Asistență pentru îngrijirea cancerului . 2002; 10 ( 5 ): 385-8. Epub 2002/07/24. doi: 10.1007 / s00520-001-0318-z PubMed ]
10. Terawaki K, Sawada Y, Kashiwase Y, Hashimoto H, Yoshimura M, Suzuki M, și colab. Nou model de cancer de cașexie de șobolan, generat prin implantarea unei linii celulare de cancer de stomac uman derivată din peritoneală . Am J Physiol Endocrinol Metab . 2014; 306 ( 4 ): E373-87. Epub 2013/12/19. doi: 10.1152 / ajpendo.00116.2013 PubMed ]
11. Yanagihara K, Takigahira M, Mihara K, Kubo T, Morimoto C, Morita Y și colab. Efectele inhibitorii ale izoflavonilor asupra creșterii tumorale și a cașexiei în modelele de șoareci cachectic nou înființate care transportă cancer de stomac uman . Nutr Cancer . 2013; 65 ( 4 ): 578-89. Epub 2013/05/11. doi: 10.1080 / 01635581.2013.776089 PubMed ]
12. Kojima M, Hosoda H, data Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin este o peptidă acilată eliberată de hormon de creștere din stomac . Natura . 1999; 402 ( 6762 ): 656-60. Epub 1999/12/22. doi: 10.1038 / 45230 PubMed ]
13. Date Y, Murakami N, Toshinai K, Matsukura S, Niijima A, Matsuo H, și colab. Rolul nervului vagal aferent gastric asociat hranei induse de ghrelin și secreției de hormon de creștere la șobolani . Gastroenterologie . 2002; 123 ( 4 ): 1120-8. Epub 2002/10/03. PubMed ]
14. Wren AM, Seal LJ, Cohen MA, Brynes AE, Frost GS, Murphy KG și colab. Ghrelin sporește apetitul și mărește aportul de alimente la om . Jurnalul de endocrinologie clinică și metabolism . 2001; 86 ( 12 ): 5992 Epub 2001/12/12. doi: 10.1210 / jcem.86.12.8111 PubMed ]
15. Tack J, Depoortere I, Bisschops R, Delporte C, Coulie B, Meulemans A, și colab. Influența ghrelinului asupra motilității gastrointestinale interdigestive la om . Gut . 2006; 55 ( 3 ): 327-33. Epub 2005/10/12. doi: 10.1136 / gut.2004.060426 articolul gratuit PMC ] PubMed ]
16. Tschop M, Wawarta R, Riepl RL, Friedrich S, Bidlingmaier M, Landgraf R, și colab. Reducerea postprandială a nivelurilor de ghrelin uman care circulă . Oficial al investigației endocrinologice . 2001; 246 ): RC19-21. Epub 2001/07/04. doi: 10.1007 / BF03351037 PubMed ]
17. Nakazato M, Murakami N, Data Y, Kojima M, Matsuo H, Kangawa K, și colab. Un rol pentru ghrelin în reglementarea centrală a hrănirii . Natura . 2001; 409 ( 6817 ): 194-8. Epub 2001/02/24. doi: 10.1038 / 35051587 PubMed ]
18. Hanada T, Toshinai K, Kajimura N, Nara-Ashizawa N, Tsukada T, Hayashi Y, și colab. Efectul anti-cachectic al ghrelinului asupra șoarecilor goi care poartă celule de melanom umane . Biochem Biophys Res Commun . 2003; 301 ( 2 ): 275-9. Epub 2003/02/05. PubMed ]
19. Neary NM, Small CJ, Wren AM, Lee JL, Druce MR, Palmieri C, și colab. Ghrelin crește aportul de energie la pacienții cu cancer cu apetit afectat: studiu acut, randomizat, controlat cu placebo . Jurnalul de endocrinologie clinică și metabolism . 2004; 89 ( 6 ): 2832-6. Epub 2004/06/08. doi: 10.1210 / jc.2003-031768 PubMed ]
20. Garcia JM, Garcia-Touza M, Hijazi RA, Taffet G, Epner D, Mann D, și colab. Nivelurile active de ghrelin și raportul total de ghrelin activ în cazexia indusă de cancer . Jurnalul de endocrinologie clinică și metabolism . 2005; 90 ( 5 ): 2920-6. Epub 2005/02/17. doi: 10.1210 / jc.2004-1788 PubMed ]
21. Shimizu Y, Nagaya N, Isobe T, Imazu M, Okumura H, Hosoda H, și colab. Nivel crescut de ghrelină plasmatică în cazexia cancerului pulmonar . Clin Cancer Res . 2003; 9 ( 2 ): 774-8. Epub 2003/02/11.PubMed ]
22. Ramos EJ, Suzuki S, Marks D, Inui A, Asakawa A, Meguid MM. Sindromul anorexie-cașexie a cancerului: citokine și neuropeptide . Curr Opin Clin Nutr Metab Îngrijire . 2004; 7 ( 4 ): 427-34. Epub 2004/06/12. PubMed ]
23. Wang W, Andersson M., Iresjo BM, Lonnroth C, Lundholm K. Efectele ghrelinului asupra anorexiei la șoarecii purtători de tumori cu cașexie legată de eicosanoid . Int J Oncol . 2006; 28 ( 6 ): 1393-400. Epub 2006/05/11. PubMed ]
24. Suzuki H, Matsuzaki J, Fukushima Y, Suzaki F, Kasugai K, Nishizawa T, și colab. Studiu clinic randomizat: rikkunshito în tratamentul dispepsiei funcționale – un studiu multicentric, dublu-orb, randomizat, controlat cu placebo . Neurogastroenterolul Motil . 2014; 26 ( 7 ): 950-61. Epub 2014/04/29. doi: 10.1111 / nmo.12348 PubMed ]
25. Takeda H, Sadakane C, Hattori T, Katsurada T, Ohkawara T, Nagai K, și colab. Rikkunshito, un medicament pe bază de plante, suprimă anorexia indusă de cisplatină la șobolani prin antagonismul receptorului 5-HT2 . Gastroenterologie . 2008; 134 ( 7 ): 2004-13. Epub 2008/04/29. doi: 10.1053 / j.gastro.2008.02.078 PubMed ]
26. Matsumura T, Arai M, Yonemitsu Y, Maruoka D, Tanaka T, Suzuki T, și colab. Medicamentul tradițional japonez Rikkunshito crește nivelul plasmatic al ghrelinului la oameni și la șoareci . J Gastroenterol . 2010; 45 ( 3 ): 300-7. Epub 2009/12/10. doi: 10.1007 / s00535-009-0166-z PubMed ]
27. Fujitsuka N, Asakawa A, Hayashi M, Sameshima M, Amitani H, Kojima S, și colab. Inhibitorii selectivi ai recaptării serotoninei modifică activitățile motorii gastrointestinale fiziologice prin receptorul 5-HT2c și acil ghrelinul . Biol Psihiatrie . 2009; 65 ( 9 ): 748-59. Epub 2008/12/09. doi: 10.1016 / j.biopsych.2008.10.031 PubMed ]
28. Arai M, Matsumura T, Tsuchiya N, Sadakane C, Inami R, Suzuki T, și colab. Rikkunshito îmbunătățește simptomele la pacienții cu dispepsie funcțională, însoțită de o creștere a nivelului de ghrelină plasmatică . Hepatogastroenterologie . 2012; 59 ( 113 ): 62-6. Epub 2012/01/21. doi: 10.5754 / hge11246 PubMed ]
29. Fujitsuka N, Asakawa A, Uezono Y, Minami K, Yamaguchi T, Niijima A, și colab. Potențarea semnalizării ghrelinului atenuează anorexia cancerului – cașexia și prelungește supraviețuirea . Transl Psihiatrie . 2011; 1 : e23 Epub 2011/01/01. doi: 10.1038 / tp.2011.25 articol gratuit PMC ] PubMed ]
30. Fujitsuka N, Asakawa A, Morinaga A, Amitani MS, Amitani H, Katsuura G, și colab. Creșterea semnalizării ghrelinelor prelungește supraviețuirea în modelele de șoarece ale îmbătrânirii umane prin activarea sirtuin1 . Moleculară psihiatrie . 2016. Epub 2016/02/03. Articol gratuit PMC ] PubMed ]
31. Zaki MH, Nemeth JA, Trikha M. CNTO 328, un anticorp monoclonal la IL-6, inhibă cașexia indusă de tumori umane la șoareci nudi . Int J Cancer . 2004; 111 ( 4 ): 592-5. Epub 2004/07/09. doi: 10.1002 / ijc.20270 PubMed ]
32. Suzuki M, Narita M, Ashikawa M, Furuta S, Matoba M, Sasaki H, și colab. Modificări ale receptorilor de melanocortină în hipotalamusul unui model de șobolan de cașexie de cancer . Sinapse . 2012; 66 ( 8 ): 747-51. Epub 2012/03/31. doi: 10.1002 / syn.21559 PubMed ]
33. Livak KJ, Schmittgen TD. Analiza datelor expresiei genetice relative utilizând PCR cantitativ în timp real și metoda 2 (Delta Delta C (T)) . Metode . 2001; 25 ( 4