Trastuzumab și interleukina-2 în cancerul de sân metastatic HER2-pozitiv :Un studiu pilot

Clin Cancer Res (2003) 9 (7): 2440–2446.

Abstract

Scop: Trastuzumab ca agent unic are activitate în cancerul de sân metastatic; cu toate acestea, mecanismul de acțiune pentru această activitate clinică este incert. În timp ce are loc întreruperea semnalizării membrilor familiei erbB, trastuzumab mediază, de asemenea, citotoxicitatea celulară dependentă de anticorpi in vitro și in vivo . Pe baza acestor date, a fost efectuat un studiu clinic pentru a testa dacă interleukina (IL)-2, prin creșterea numărului de celule FcRγIII ⁺ natural killer (NK) și a funcției citolitice in vivo , atunci când este adăugată la trastuzumab, poate crește eficacitatea, poate fi administrată în siguranță, și evitați utilizarea chimioterapiei.

Design experimental: În acest studiu de fază I, 10 pacienți cu cancer de sân metastatic cu supraexprimare a HER2 au fost tratați cu IL-2 (1,75 × 106 ^UI /m2 ^/ zi, sc – intre low dose< 6 000 000 si ultra low < 1 000 000) timp de 7 săptămâni și trastuzumab (4 mg/kg încărcare și apoi 2 mg/kg săptămânal) timp de 6 săptămâni. Au fost evaluate siguranța, răspunsurile imune in vitro și răspunsurile clinice.

Rezultate: Zece femei au primit un total de 12 cicluri de terapie (fiecare ciclu a durat 7 săptămâni). Nu au fost observate toxicități semnificative și un pacient a necesitat o reducere a dozei de IL-2. Printre pacienții evaluabili (10 cicluri), răspunsurile au fost un răspuns parțial, cinci cazuri de boală stabilă și patru cazuri de boală progresivă. Testele imune in vitro au arătat expansiunea celulelor NK și uciderea crescută a celulelor NK mediată de trastuzumab a țintelor cancerului de sân (citotoxicitate celulară dependentă de anticorpi) într-o manieră specifică HER2, dar nu s-au corelat cu răspunsurile clinice.

Concluzii: Trastuzumab + IL-2 este un regim ambulatoriu bine tolerat care are ca rezultat expansiunea celulelor NK cu uciderea țintită îmbunătățită in vitro a celulelor care exprimă HER2. Aceste date preliminare sugerează că această strategie poate aduce beneficii pacienților cu cancer de sân metastatic pretratați puternic.

INTRODUCERE

Factorii de creștere și receptorii lor sunt cunoscuți că joacă roluri critice în dezvoltarea, creșterea celulară și diferențierea. Mulți receptori posedă activitate tirozin kinază intrinsecă care este activată la interacțiunea receptorului cu ligandul său înrudit. Amplificarea genică a genei receptorului 2 al factorului de creștere epidermic uman (HER2) (1, 2) este observată frecvent într-un număr de tumori primare, ceea ce sugerează că supraexprimarea acestui receptor al factorului de creștere poate contribui la transformare și tumorigeneză (3) . Aproximativ 25-30% dintre pacienții cu cancer de sân supraexprimă HER2 (4, 5). În cele mai multe cazuri, supraexpresia proteinei HER2 este corelată cu amplificarea genei și este asociată cu un rezultat clinic slab la pacienții cu cancer de sân pozitiv la ganglionii limfatici.

Mai multe linii de dovezi susțin un rol direct pentru supraexpresia p185HER2 (produsul genei HER2) în patogeneza și cursul clinic slab al tumorilor umane. În timp ce omologul HER2 de șobolan, proto-oncogena neu, este asociat cu inducerea neuroblastoamelor (6) , supraexprimarea erbB2 (neu) la șoarecii transgenici induce tumori mamare (7) . În plus, anticorpii specifici la domeniul extracelular al proteinei bazate pe membrană codificată de gena HER2/neu vor inhiba creșterea tumorilor care supraexprimă HER2 (8, 9). Aceste date sunt în concordanță cu un rol direct al proto-oncogenei HER2 atât în transformarea malignă, cât și în tumorigenitatea sporită și indică o țintă potențială pentru terapia cancerului. Trastuzumab (Herceptin) este un anticorp monoclonal umanizat de șoarece care a fost aprobat pentru tratamentul femeilor cu cancer de sân metastatic.

În timp ce trastuzumab are o eficacitate superioară atunci când este combinat cu chimioterapie (10, 11, 12) , este clar că trastuzumabul în monoterapie are activitate semnificativă la pacienții cu tumori care supraexprimă HER2 (13, 14, 15) . Într-un studiu pe 114 pacienți care nu au primit chimioterapie anterioară pentru boala metastatică, Vogel și colab. au arătat că ratele de răspuns au fost de 26% (CR + PR ³ ) și 38% (răspuns complet + PR + SBD > 6 luni) pentru pacienții care aveau 2 sau 3+ prin IHC (16) . Când au fost luați în considerare numai pacienții care au fost IHC 3+ sau hibridizare in situ cu fluorescență pozitive, ratele de răspuns obiectiv au fost substanțial mai mari (35% și, respectiv, 34%), în timp ce cei care au fost IHC 2+ și fluorescență.hibridizarea in situ negativă nu a avut niciun răspuns. Beneficiile de supraviețuire în acest studiu au fost similare cu cele raportate în studiile care au utilizat trastuzumab plus chimioterapie (16) .

Mecanismele potențiale de acțiune ale trastuzumabului sunt diverse și nu au fost încă pe deplin elucidate. Am arătat anterior că trastuzumab, prin domeniul său Fc IgG1, poate îmbunătăți ADCC împotriva țintelor cancerului de sân care supraexprimă HER2/neu (17) . În plus, Clynes și colab. (18) au raportat că ADCC poate fi un mecanism important pentru răspunsurile induse de trastuzumab in vivo , deoarece xenogrefele dependente de HER2 la șoarecii tratați cu anticorpi anti-Her2/neu nu au fost inhibate în absența FcyRIII.

Am fost interesați de diferite modalități de imunoterapie ca adjuvant la terapiile citotoxice standard (19) și am câștigat o experiență considerabilă în utilizarea IL-2 în ambulatoriu, sc, cu doze mici pentru a crește numărul de celule NK, ceea ce ar trebui să sporească ADCC (20, 21) . Concluzia noastră din studiile care utilizează IL-2 sc cu agent unic în ambulatoriu timp de până la 12 săptămâni este că terapia este sigură cu toxicitate gestionabilă. IL-2 subcutanat a crescut numărul absolut de celule NK circulante de aproximativ 10 ori și a indus o creștere a funcției acestor limfocite împotriva unei serii de ținte pentru cancerul de sân (17, 22). Cu toate acestea, natura nespecifică a acestei activări imune nu s-a dovedit a avea beneficii clinice. În acest studiu, am fost interesați să determinăm dacă IL-2 și trastuzumab ar putea fi administrate concomitent în siguranță și, prin stimularea numărului și funcției celulelor NK, servesc la îmbunătățirea ADCC împotriva celulelor țintă a cancerului de sân care poartă HER2.

MATERIALE ȘI METODE

Studiu clinic.

Pacienții cu un diagnostic de cancer de sân avansat HER2/neu-pozitiv [2+ sau 3+ de către Herceptest (Dako)] de orice tip histologic au fost înscriși într-un studiu pilot aprobat de Comitetul pentru Subiecți Umani de la Universitatea din Minnesota și de Food and United States Administrarea medicamentelor. Toți pacienții au fost tratați anterior cu chimioterapie standard, radioterapie sau intervenție chirurgicală. Pacienților li se cerea să aibă un scor Karnofsky de cel puțin 70% și o speranță de viață de cel puțin 4 luni. Boala evaluabilă sau măsurabilă nu a fost necesară pentru intrarea în acest studiu pilot. Au fost necesare funcții adecvate de organ și următorii parametri hematologici: Hb ≥ 9 g/dl netransfuzat; număr de trombocite ≥ 100 × 10 ⁹ /litru netransfuzat; și un număr absolut de neutrofile > 1,5 × 10 ⁹/litru fără factori de creștere.

Pacienții cu boală cardiacă activă sau insuficiență cardiacă simptomatică care necesită intervenție medicală, fracțiune de ejecție ≤40% sau alte anomalii valvulare sau aritmii care pot predispune pacienții la insuficiență cardiacă congestivă au fost excluși. Pacienții nu ar putea primi medicamente imunosupresoare concomitente. Toți pacienții au avut un istoric complet și un examen fizic, teste hematologice și biochimice de rutină, radiografie toracică, electrocardiogramă și determinarea fracției de ejecție prin scanare MUGA înainte de intrarea în studiu. Au fost, de asemenea, obținute tomografie computerizată de bază sau scanări imagistice prin rezonanță magnetică ale locurilor bolii și markerul tumoral CA27.29.

Toți pacienții au semnat un acord specific protocolului. IL-2 subcutanat (furnizat de Chiron Corp., Emeryville, CA) a fost administrat la 1,75 × 10 ⁶ UI/m2 ^/ zi × 49 de zile, pe baza studiilor de creștere a dozei efectuate anterior (20) . Toți pacienții au primit premedicații profilactice constând din acetaminofen (650 mg, po), ibuprofen (400 mg, po) și difenhidramină (50 mg, po) cu 30 de minute înainte și 4 ore după fiecare doză sc de IL-2. S-a recomandat pacienților să administreze IL-2 cu 4 ore înainte de culcare. Pacienții care au dezvoltat simptome constituționale greu de tolerat sau retenție de lichide, care nu au constituit toxicitate limitatoare de doză, și-au scăzut doza de IL-2 la 1,25 × 10 ⁶ UI/m ²/zi. Doza mai mică a fost apoi continuată pentru restul studiului. Dacă IL-2 a fost întreruptă din cauza toxicității, a fost repornită la 1,25 × 106 ^UI /m2 ^/ zi. Dacă IL-2 a fost întreruptă din alte motive, a fost reluată cu aceeași doză. Trastuzumab a fost început la 1 săptămână după doza inițială de IL-2 (ziua 8) și a fost perfuzat săptămânal timp de șase săptămâni (6 doze). Doza inițială de trastuzumab a fost de 4 mg/kg (peste 90 min), cu doze săptămânale ulterioare (în zilele 15, 22, 29, 36 și 43) de 2 mg/kg (peste 30 min). Nu s-au administrat premedicații pentru terapia cu trastuzumab, cu excepția cazului în care au apărut reacții. Meperidina (25-50 mg, iv) a fost utilizată pentru reacții la perfuzie cu frisoane sau frisoane.

Funcția cardiacă a fost monitorizată prin scanarea MUGA în mijlocul studiului și în decurs de 7 zile după finalizarea tratamentului. Numărările complete de sânge și diferențiale și panourile chimice au fost efectuate săptămânal în timp ce pacientul era în studiu. Evaluarea tumorii a fost făcută în ziua 1 și la terminarea studiului. PR a fost definită ca o reducere de ≥50% a sumei produselor diametrelor perpendiculare ale tuturor bolilor măsurabile bidimensional în comparație cu măsurătorile pretratament. SBD a fost definit ca nicio modificare a bolii măsurabile pe durata studiului.

Studii in vitro .

PBMC-urile au fost obținute după centrifugarea cu densitate Ficoll-Hypaque. Probele de pacienți au fost testate proaspete, fără alte manipulări. PBMC donatori normali au fost îmbogățiți în continuare pentru celule NK utilizând o coloană MACS, așa cum este specificat de producător (Miltenyi, Auburn, CA), rezultând o puritate de > 85% celule CD56 ⁺ /CD3 ^– NK. Linia celulară de cancer de sân uman SKBR-3 și linia celulară K562 derivată din leucemie mielogenă cronică (Colecția Americană de Cultură de Tip, Manassas, VA) au fost cultivate folosind condiții stabilite. Testele de citotoxicitate au fost efectuate la rapoartele E:T indicate folosind PBMC ale pacienților sau celule NK ale donatorilor normali împotriva liniilor celulare într-un test de eliberare a ⁵¹ Cr de 4 ore (17). Trastuzumab (Herceptin; Genentech, Inc., San Francisco, CA) la o concentrație de 1 μg/ml, ser pacientului sau ser normal a fost adăugat la ținte cu 30 de minute înainte de fiecare test și a rămas pentru incubarea de 4 ore. Liza specifică a fost calculată așa cum sa raportat anterior (17) .

Rezultatele punctelor experimentale obținute din experimente multiple au fost raportate ca medie ± 1 SE. Nivelurile de semnificație au fost determinate prin analiza testului t Student pe două fețe .

REZULTATE

Zece pacienți cu cancer de sân metastatic au fost înrolați în acest studiu și au primit un total de 12 cicluri de trastuzumab și IL-2. Vârsta medie a fost de 51 de ani (interval, 32-69 de ani). Majoritatea pacienților aveau boală viscerală (60%), iar restul pacienților prezentau leziuni osoase și cutanate. Toți pacienții au primit tratament anterior și au avut boală metastatică progresivă. Saizeci la suta dintre pacienti au primit chimioterapie anterior, iar 30% au primit doua sau mai multe regimuri. Cincizeci la suta dintre pacienti au primit anterior regimuri care contin trastuzumab cu sau fara chimioterapie. Patruzeci la sută dintre pacienți au progresat după terapia hormonală anterioară. Dintre cei 10 pacienți, 3 au avut o boală metastatică primară, iar 7 pacienți au progresat la boală metastatică din cancerul mamar primar în stadiul II sau III după fie chimioterapie (neo) adjuvantă ( n= 5) sau terapie hormonală ( n = 2).

Toți pacienții au fost evaluați pentru toxicitate. Un pacient a dezvoltat o ușoară retenție de lichide după 3 săptămâni de tratament și a necesitat o reducere a dozei de IL-2 la 1,25 × 106 ^UI /m2 ^/ zi pentru restul studiului. Majoritatea pacienților au primit mai mult de 80% din terapia planificată ( Tabelul 1 ). Nu au fost observate toxicități neașteptate. Toxicitățile atât hematologice cât și nonhematologice au fost minime. Un pacient a dezvoltat anemie de gradul III (Hb 7,1 de la Hb inițial 9,3 la debutul studiului). Nu a fost observată nicio toxicitate cardiacă în urma terapiei combinate ( Fig. 1). Doi pacienți au prezentat toxicitate nonhematologică de grad III: un pacient a avut dispnee, despre care se credea că este legată de tumoră, care s-a rezolvat după terapie, iar un pacient a avut constipație considerată a fi datorată tratamentului analgezic opioid.

Doi pacienți (două cicluri) nu au fost evaluați pentru răspuns. O pacientă s-a retras după 3 săptămâni din motive personale (ciclul 10), iar 2 luni mai târziu s-a reînrolat și a finalizat studiul, primind 100% din terapia planificată (ciclul 11). Un pacient nu a avut nicio boală măsurabilă la intrarea în studiu (ciclul 4). Dintre cele 10 cicluri evaluabile de trastuzumab și IL-2, răspunsurile au fost 1 PR, 5 cazuri de SBD (4 cu o scădere a CA27.29) și 4 cazuri de PD.

Pacientul care a obținut un PR (ciclul 1) a primit anterior un transplant de celule stem periferice pentru tratamentul bolii metastatice și nouă scheme de chimioterapie distincte ulterioare, inclusiv trastuzumab în monoterapie și în combinație cu chimioterapie, fără niciun răspuns. Ea a avut un răspuns obiectiv la regimul de trastuzumab și IL-2 cu rezoluția aproape completă a leziunilor metastatice ale țesuturilor moi de pe spate. Acest răspuns a durat 2 luni după ce terapia a fost întreruptă și ulterior a progresat. Ea nu a răspuns la chimioterapie ulterioară. După obținerea aprobării Food and Drug Administration și a consiliului de revizuire instituțional pentru retratamentul cu trastuzumab și IL-2, ea a primit un al doilea ciclu al acestei terapii și a avut SBD și o scădere a CA27.29 (ciclul 2). Intervalul de timp dintre ciclul 1 și ciclul 2 a fost de 12 luni.

PBMC-urile și serul au fost colectate de la pacienții aflați în studiu. Numărul absolut de celule NK circulante a crescut in vivo de aproximativ 10 ori până în ziua 28 de terapie, indiferent de răspunsul clinic ( Fig. 2 ). Numărul absolut de celule T nu s-a modificat pe parcursul perioadei de monitorizare. PBMC-urile au fost testate împotriva țintelor K562 HER2/neu-negative și țintelor SKBR-3 HER2/neu-pozitive înainte de intrarea în studiu și în timpul terapiei. Pentru a testa dacă celulele NK derivate de la pacient ar putea fi „pre-armate” cu trastuzumab in vivo pentru a ucide ținte in vitro, celulele derivate de la pacient au fost testate singure (martor) sau în prezența pacientului și a serului uman normal. Activitatea litică nespecifică împotriva țintelor K562 a fost crescută semnificativ în timpul terapiei, așa cum era de așteptat cu creșterea numărului de celule NK. Incubarea cu trastuzumab, serul pacientului sau ser uman normal nu a modificat această citotoxicitate nespecifică K562 ( Fig. 3).). În absența trastuzumabului sau a serului pacientului, 24 ± 5,1% din țintele SKBR-3 cu supraexprimare HER2/neu au fost lizate de celulele pacientului în curs de terapie (>28 de zile), comparativ cu studiul preliminar de 6 ± 4% (nivel de bază), reprezentativ pentru creșterea uciderea din cauza doar SC IL-2. Spre deosebire de celulele K562, liza specifică a SKBR-3 a fost îmbunătățită și mai mult prin adăugarea de trastuzumab (52 ± 6,3%) sau de ser al pacientului (58 ± 7,5%), comparativ cu serul uman normal (16 ± 4,8%), care nu a contribuit la activitate adăugată ( P <0,01; Fig. 3 ). Uciderea similară, dar mai puțin crescută a fost observată împotriva țintelor MCF-7 cu expresie scăzută a HER2/neu (datele nu sunt prezentate).

Am studiat în continuare probe de ser de la pacienți aflați în studiu împotriva celulelor NK donatoare normale. Celulele mononucleare au fost îmbogățite pentru celule NK folosind margele imunomagnetice. Serul de la pacienți înainte de intrarea în studiu și din probele colectate în ziua 28, înainte de următoarea doză de trastuzumab (un ser minim), au fost adăugate celulelor NK normale și țintelor SKBR-3. S-au văzut două modele. La pacienții care nu au primit niciodată trastuzumab anterior, a existat o creștere marcată a activității ADCC serice în timpul tratamentului, comparativ cu studiul preliminar. În mod surprinzător, la pacienții la 2-8 săptămâni libere de la un curs anterior de trastuzumab, activitatea ADCC seric a fost încă menținută ( Fig. 4).). Acest lucru sugerează că timpul de înjumătățire biologic al acestei activități poate dura multe săptămâni între dozele de trastuzumab și sprijină luarea în considerare a creșterii intervalului de trastuzumab între perfuzii.

DISCUŢIE

Una din opt femei va fi afectată de cancer de sân la un moment dat în timpul vieții. Deși s-au făcut progrese cu agenții de chimioterapie mai noi și combinarea chimioterapiei cu anticorpi monoclonali, terapia actuală pentru pacienții cu boală metastatică este încă inadecvată. Agenții de chimioterapie pot avea o morbiditate considerabilă și, în cele din urmă, boala devine rezistentă la chimioterapie. Trastuzumab este un anticorp umanizat care recunoaște HER2/neu pe celulele maligne; cu toate acestea, mecanismul său exact de acțiune este mai puțin înțeles (23) . Efectele inhibitoare ale trastuzumabului asupra cancerului de sân se pot datora unor acțiuni precum: ( a ) îmbunătățirea degradării receptorului c-erbB-2 (24) ; ( b) inhibarea progresiei ciclului celular și suprimarea moleculelor de reglare a apoptozei, cum ar fi Akt și fosfatidilinozitol 3′-kinaza (25) ; și ( c ) suprimarea angiogenezei (26) și a metastazelor (27) . Unul dintre mecanismele propuse de acțiune antitumorală a trastuzumabului este prin ADCC (17, 18) .

Obiectivul principal al acestui studiu a fost de a determina siguranța trastuzumab combinat cu o doză deja stabilită de IL-2 sc zilnic, în ambulatoriu. Nu au existat toxicități neașteptate, iar efectul secundar principal a fost hematologic, cu anemie ușoară și neutropenie. Nu s-a observat nicio toxicitate cardiacă la monitorizarea atentă a fracțiilor de ejecție cardiacă pre-, mijloc și post-ciclu. Obiectivul secundar al studiului a fost evaluarea răspunsurilor imune in vivo și in vitro induse de trastuzumab în combinație cu IL-2 sc. Am documentat creșterea numărului de celule NK și uciderea crescută a țintelor cancerului de sân prin ADCC. Acest ADCC specific HER2/neu necesită doar semnalizare prin FcRγIII (CD16) și nu necesită cooperare din partea moleculei de adeziune intercelulară 1/β ₂Interacțiunile antigenului-3 asociate cu funcția integrinei sau leucocitelor CD2 între celulele NK și țintele cancerului de sân, așa cum am arătat anterior (17) .

În acest studiu, arătăm că ( a ) celulele NK pot fi extinse în siguranță in vivo cu terapia ambulatorie cu IL-2, ( b ) trastuzumab mărește uciderea celulelor NK a țintelor cancerului de sân într-o manieră specifică HER2/neu și ( c ) minim serul pacientului conține niveluri fiziologice de trastuzumab capabil să medieze ADCC.

Deoarece nu am analizat efectul trastuzumabului singur, este de remarcat faptul că pacienții pretratați anterior cu trastuzumab au avut niveluri detectabile de ADCC atunci când au fost testați cu celule NK normale. Acest lucru se corelează cu datele farmacocinetice recente care arată că timpul de înjumătățire plasmatică al trastuzumabului administrat săptămânal este de 28,5 zile (28) , ceea ce sugerează că intervale mai lungi între administrarea de trastuzumab pot fi la fel de eficiente ca și dozele săptămânale. Datele noastre arată o activitate biologică eficientă ( adică ADCC) cu trastuzumab la o concentrație de 1 μg/ml, ceea ce concordă cu activitatea arătată în studiile anterioare utilizând concentrații de 1-10 μg/ml (29) . ⁴În plus, deoarece nu am comparat trastuzumab în monoterapie cu trastuzumab + IL-2, va fi dificil de determinat dacă intensificarea ADCC de către trastuzumab singur ar fi generat răspunsuri obiective sau beneficii clinice, dar pacientul 1 este instructiv. Acest pacient a fost tratat intens cu transplant de celule stem și a avut PD atât prin trastuzumab singur, cât și prin trastuzumab în combinație cu chimioterapie.

În această cohortă mică de pacienți, nu am observat nicio corelație între obținerea unui răspuns clinic sau toxicitate și punctele finale biologice, inclusiv expansiunea celulelor NK sau gradul de activitate ADCC. Aceste date sunt similare cu constatările unui studiu publicat recent de doze crescânde de trastuzumab și IL-2 zilnic la pacienții cu tumori solide, care nu au arătat nicio corelație între răspunsurile clinice și citotoxicitatea in vitro (30) . De asemenea, este posibil ca trastuzumab și IL-2 să se sinergizeze în stimularea altor funcții efectoare ale celulelor NK, cum ar fi producția de citokine (22) . Recent, Parihar et al. (31)au demonstrat că celulele canceroase de sân umane acoperite cu Herceptin cultivate cu celule NK umane purificate în prezența IL-12 au indus secreție puternică de citokine, cum ar fi IFN-γ, factorul de necroză tumorală α și factorul de stimulare a coloniilor de macrofage de granulocite. În plus, rezultatele preliminare ale unui studiu clinic de fază I efectuat de același grup demonstrează o corelație între nivelurile crescute de citokine derivate de NK IFN-γ și factorii antiangiogenici și răspunsul clinic la terapia cu trastuzumab și IL-12 (32) . Alții au arătat, de asemenea, că combinațiile de trastuzumab cu citokine, precum și moleculele de fuziune recent dezvoltate ale anticorpilor anti-HER2 legați de IL-2 sau IL-12, pot fi importante în creșterea imunității antitumorale (33, 34) .

În rezumat, trastuzumab și IL-2 sunt bine tolerate ca terapie ambulatorie, iar acest regim evită toxicitățile chimioterapiei. Un PR și 5 cazuri de SBD la pacienții pretratați intens au fost observate pe durata scurtă a studiului. Pe măsură ce anticorpii monoclonali mai umanizați și himerici intră în practica clinică, va fi important să se determine dacă ADCC împreună cu alte mecanisme efectoare are un rol semnificativ în mediarea răspunsurilor tumorale obiective. Pentru a valida în continuare această abordare, este în desfășurare un studiu mai amplu care utilizează trastuzumab și IL-2, cu o durată mai lungă de tratament, la pacienții cu cancer de sân metastatic.

Costurile de publicare a acestui articol au fost suportate parțial prin plata taxelor de pagină. Prin urmare, acest articol trebuie să fie marcat prin prezenta reclamă în conformitate cu 18 USC Secțiunea 1734 numai pentru a indica acest fapt.

Sprijinit parțial de Centrul General de Cercetare Clinică Grant M01-RR00400 de la Centrul Național pentru Resurse de Cercetare și Genetech Corp.

Abrevierile folosite sunt: PR, răspuns parțial; CR, răspuns complet; ADCC, citotoxicitate celulară dependentă de anticorpi; NK, ucigaș natural; PBMC, celulă mononucleară din sângele periferic; IL, interleukină; PD, boală progresivă; SBD, boală stabilă; IHC, imunohistochimie; Hb, hemoglobină; MUGA, scanare de achiziție cu porți multiple.

Date despre medicamente pentru aprobarea Administrației pentru Alimente și Medicamente: Herceptin, 9/1998, http://www.fda.gov/cder/drug/default.htm.Fig. 1.

VEDERE MARE DESCĂRCAȚI DIAPOZITIVUL

Terapia cu trastuzumab și IL-2 nu a provocat cardiotoxicitate. Fracțiile de ejecție au fost monitorizate de MUGA înainte de tratament ( Pre-Tx ; n = 11), la jumătatea terapiei ( Mid-Tx ; n = 9) și în decurs de 7 zile după finalizarea tratamentului ( Post-Tx ; n = 6). Sunt prezentate media ± SE a fracțiilor de ejecție la fiecare moment de timp. Nu au existat diferențe statistice între punctele de timp.Fig. 2.

VEDERE MARE DESCĂRCAȚI DIAPOZITIVUL

sc IL-2 mărește efectorii celulelor NK. Numerele absolute de celule NK (CD56 ⁺ /CD3 ^– ) și de celule T (CD3 ⁺ ) au fost determinate prin înmulțirea numărului absolut de limfocite din hemograma completă cu procentul fiecărui tip de celulă respectiv. Procentele au fost determinate prin citometrie în flux din fereastra cu limfocite a populației de celule mononucleare.Fig. 3.

VEDERE MARE DESCĂRCAȚI DIAPOZITIVUL

Terapia cu IL-2 + trastuzumab crește ADCC la țintele cancerului de sân care supraexprimă HER2/neu. PBMC de la pacienții cu cancer de sân au fost studiate în teste de citotoxicitate cu eliberare de crom în 4 ore împotriva țintelor K562 ( grafice de sus ) și SKBR-3 ( grafice de jos ). Celulele au fost colectate de la pacienți și testate înainte de studiu ( grafice din stânga ), după 14 zile de terapie chiar înainte de perfuzia săptămânală cu trastuzumab ( grafice din mijloc ) și înainte de perfuzia săptămânală cu trastuzumab la sau după ziua 28 din studiu ( grafice din dreapta ). PBMC-urile pacienților au fost testate numai cu mediu ( Martor ), trastuzumab proaspăt adăugat ex vivo (1 μg/ml), ser normal 25% ( ser normal), și 25% ser al pacientului colectat în același timp cu PBMC-urile ( ser pacientului ). Din cele cinci eșantioane incluse în studiul preliminar pentru SKBR-3 ( graficul din stânga jos ), trei din cinci au fost de la pacienți care nu au primit niciodată trastuzumab anterior, iar dintre cei doi care au primit trastuzumab anterior, unul a avut activitatea inițială a ADCC înainte de studiu și unul nu a primit. . Nu au existat diferențe între aceste condiții față de țintele K562 HER2/neu-negative. În schimb, după ziua 14 sau ziua 28 de studiu, atât trastuzumab a adăugat ex vivo , cât și serul pacientului a crescut citotoxicitatea împotriva țintelor SKBR-3 HER2/neu-pozitive, comparativ cu serul martor sau normal ( P < 0,01). n reprezintă numărul de mostre de pacienți testate pentru fiecare afecțiune.Fig. 4.

VEDERE MARE DESCĂRCAȚI DIAPOZITIVUL

Serul de la pacientele cu cancer de sân aflate în studiu este capabil să medieze ADCC. Serul de la pacienții aflați în studiu a fost testat împotriva țintelor SKBR-3 și a celulelor NK obținute de la donatori normali voluntari. PBMC-urile de la subiecți normali au fost îmbogățite pentru celule NK folosind margele imunomagnetice. Serul de la pacienți înainte de studiu și din probele colectate în ziua 28, înainte de următoarea doză de trastuzumab (un ser minim), au fost adăugate celulelor NK normale și țintelor SKBR-3. Citotoxicitatea în absența serului sau cu ser normal a fost întotdeauna mai mică de 10%. Au fost observate două modele cu serul pacientului. La pacienții care nu au primit niciodată trastuzumab ( n = 5), a existat o creștere marcată a activității ADCC serice în timpul tratamentului, comparativ cu studiul preliminar. În schimb, la pacienții cu 2-8 săptămâni libere de la terapia anterioară cu trastuzumab ( n= 5), activitatea ADCC serică a fost încă prezentă, chiar înainte de începerea terapiei de studiu.

tabelul 1

IL-2 și trastuzumab eliberate și răspunsul la terapie

Ciclul ^a	IL-2/trastuzumab finalizat	starea HER2	Răspuns (boală) ^b	Răspuns (CA27.29)
1	100%/100%	2+	relatii cu publicul	40 până la 38
2	100%/100%	2+	SBD	384 până la 318
3	33%/33% — reducere după 16 zile pentru PD	3+	PD	43 până la 35
4	100%/100%	3+	NE ^c	43 până la 35
5	81%/66% — reducere după 34 de zile pentru PD	3+	PD	nl ^d
6 ^e	100%/100%	3+	SBD	60 până la 49
7	86%/83%	2+	PD	58 la 61
8	100%/100%	3+	SBD	200 până la 117
9	100%/100%	3+	SBD	nl
10	49%/42% — reducere după 24 de zile din motive personale	2+	NE	75 la n/a ^f
11	100%/100%	2+	SBD	157 până la 134
12	82%/83%	2+	PD	nl

Ciclurile 1 și 2 au fost același pacient; ciclurile 10 și 11 au fost același pacient.

Pacienții au fost considerați evaluabili pentru răspuns dacă au avut o boală măsurabilă înainte de studiu și au putut fi evaluați la terminarea studiului.

Ciclul 4 nu a fost evaluabil (NE) pentru răspuns, deoarece nu a avut nicio boală măsurabilă.

nl, normal.

Ciclul 6 a necesitat o reducere a dozei de IL-2 după 3 săptămâni de tratament.

Ciclul 10: CA27.29 nu a fost disponibil (n/a) când pacientul a întrerupt tratamentul.

Referințe

1Coussens L., Yang-Feng TL, Liao YC, Chen E., Gray A., McGrath J., Seeburg PH, Libermann TA, Schlessinger J., Francke U. Receptorul tirozin kinazei cu omologie extinsă cu receptorul EGF împărtășește locația cromozomială cu

neu oncogene.Știință (Wash. DC),230

: 1132-1139, 1985.

2Akiyama T., Sudo C., Ogawara H., Toyoshima K., Yamamoto T. Produsul genei umane c-erbB-2: o glicoproteină de 185 kilodalton cu activitate tirozin kinază.Știință (Wash. DC),232

: 1644-1646, 1986.

3Salomon DS, Brandt R., Ciardiello F., Normanno N. Peptide legate de factorul de creștere epidermic și receptorii lor în bolile maligne umane.Crit. Rev. Oncol. Hematol.,19

: 183-232, 1995.

4Slamon DJ, Clark GM, Wong SG, Levin WJ, Ullrich A., McGuire WL Cancerul de sân uman: corelația recăderii și supraviețuirea cu amplificarea oncogenei Her-2/neu.Știință (Wash. DC),235

: 177-182, 1987.

5Ravdin PM, Chamness GC Proto-oncogenei c-erbB-2 ca marker prognostic și predictiv în cancerul de sân: o paradigmă pentru dezvoltarea altor markeri macromoleculari – o revizuire.Gene (Amst.),159

: 19-27, 1995.

6Bargmann CI, Hung MC, Weinberg RA Oncogena neu codifică o proteină legată de receptorul factorului de creștere epidermic.Natura (Londra),319

: 226-230, 1986.

7Guy CT, Webster MA, Schaller M., Parsons TJ, Cardiff RD, Muller WJ Exprimarea protooncogenei neu în epiteliul mamar al șoarecilor transgenici induce boala metastatică.Proc. Natl. Acad. Sci. STATELE UNITE ALE AMERICII,89

: 10578-10582, 1992.

8Hudziak RM, Lewis GD, Winget M., Fendly BM, Shepard HM, Ullrich A. p185HER2 Anticorpul monoclonal are efecte antiproliferative

in vitro și sensibilizează celulele tumorale de sân uman la factorul de necroză tumorală.Mol. Celulă. Biol.,9

: 1165-1172, 1989.

9Shepard HM, Lewis GD, Sarup JC, Fendly BM, Maneval D., Mordenti J., Figari I., Kotts CE, Palladino MA, Jr., Ullrich A. Terapia cu anticorpi monoclonali a cancerului uman: preluarea protooncogenei HER2 la clinică .J. Clin. Imunol.,11

: 117-127, 1991.

10Pegram M., Hsu S., Lewis G., Pietras R., Beryt M., Sliwkowski M., Coombs D., Baly D., Kabbinavar F., Slamon D. Efectele inhibitoare ale combinațiilor de anticorpi HER2/neu și chimioterapeutice agenți utilizați pentru tratamentul cancerului de sân uman.Oncogene,18

: 2241-2251, 1999.

11Slamon DJ, Leyland-Jones B., Shak S., Fuchs H., Paton V., Bajamonde A., Fleming T., Eiermann W., Wolter J., Pegram M., Baselga J., Norton L. Administrare concomitentă de anticorp monoclonal anti-HER2 și chimioterapie de primă linie pentru cancerul de sân metastatic cu supraexprimare a HER2: un studiu de fază III, multinațional, randomizat, controlat.N. Engl. J. Med.,344

: 783-792, 2001.

12Ligibel JA, Winer EP Trastuzumab/combinații de chimioterapie în cancerul de sân metastatic.Semin. Oncol.,29 (Supliment. 11)

: 38-43, 2002.

13Baselga J., Tripathy D., Mendelsohn J., Baughman S., Benz CC, Dantis L., Sklarin NT, Seidman AD, Hudis CA, Moore J., Rosen PP, Twaddell T., Henderson IC, Norton L. Phase II studiu al anticorpului monoclonal anti-p185HER2 umanizat recombinant intravenos săptămânal la pacienții cu cancer de sân metastatic cu supraexprimare HER2/neu.J. Clin. Oncol.,14

: 737-744, 1996.

14Cobleigh MA, Vogel CL, Tripathy D., Robert NJ, Scholl S., Fehrenbacher L., Wolter JM, Paton V., Shak S., Lieberman G., Slamon DJ Studiu multinațional al eficacității și siguranței anti-HER umanizat -2 anticorp monoclonal la femeile care au cancer de sân metastatic supraexprimant HER-2 care a progresat după chimioterapie pentru boala metastatică.J. Clin. Oncol.,17

: 2639-2648, 1999.

15Vogel CL, Cobleigh MA, Tripathy D., Gutheil JC, Harris LN, Fehrenbacher L., Slamon DJ, Murphy M., Novotny WF, Burchmore M., Shak S., Stewart SJ Monoterapia cu Herceptin de primă linie în cancerul de sân metastatic.Oncologie (Basel),61 (Supliment 2)

: 37-42, 2001.

16Vogel CL, Cobleigh MA, Tripathy D., Gutheil JC, Harris LN, Fehrenbacher L., Slamon DJ, Murphy M., Novotny WF, Burchmore M., Shak S., Stewart SJ, Press M. Eficacitatea și siguranța trastuzumabului ca un singur agent în tratamentul de primă linie al cancerului de sân metastatic cu supraexprimare a HER2.J. Clin. Oncol.,20

: 719-726, 2002.

17Cooley S., Burns LJ, Repka T., Miller JS Citotoxicitatea celulelor ucigașe naturale a țintelor cancerului de sân este îmbunătățită de două mecanisme distincte de citotoxicitate celulară dependentă de anticorpi împotriva LFA-3 și HER2/neu.Exp. Hematol.,27

: 1533-1541, 1999.

18Receptorii Clynes RA, Towers TL, Presta LG, Ravetch JV inhibitori Fc modulează citotoxicitatea

in vivo împotriva țintelor tumorale.Nat. Med.,6

: 443-446, 2000.

19Burns LJ, Weisdorf DJ, DeFor TE, Ogle KM, Hammer C., Miller JS Îmbunătățirea activității antitumorale a unei grefe de celule progenitoare din sângele periferic prin mobilizarea cu IL-2 plus G-CSF la pacienții cu cancer de sân avansat.Exp. Hematol.,28

: 96-103, 2000.

20Miller JS, Tessmer-Tuck J., Peirson BA, Weisdorf D., McGlave P., Blazar BR, Katsanis E., Verfaillie C., Lebkowski J., Radford JR, Jr., Burns LJ Interleukina-2 subcutanată cu doză mică după transplantul autolog generează activitate susținută

in vivo a celulelor ucigașe naturale.Biol. Transpl. măduvă sanguină,3

: 34-44, 1997.

21Burns, LJ, Weisdorf, DJ, DeFor, TE, Vesole, DH, Repka, TL, Blazar, BR, Burger, SR, Panoskaltsis-Mortari, A., Keever-Taylor, CA, Zhang, MJ. și Miller, JS , Imunoterapia pe bază de IL-2 după transplantul autolog pentru limfom și cancer de sân induce activarea imună și eliberarea de citokine: un studiu de fază I/II. Transplant de măduvă osoasă, în presă, 2003.

22Carson WE, Parihar R., Lindemann MJ, Personeni N., Dierksheide J., Meropol NJ, Baselga J., Caligiuri MA Interleukin-2 îmbunătățește răspunsul celulelor natural killer la celulele canceroase de sân Her2/neu-pozitive acoperite cu Herceptin.EURO. J. Immunol.,31

: 3016-3025, 2001.

23Mendelsohn J., Baselga J. Familia de receptori EGF ca ținte pentru terapia cancerului.Oncogene,19

: 6550-6565, 2000.

24Klapper LN, Vaisman N., Hurwitz E., Pinkas-Kramarski R., Yarden Y., Sela MA subclasa de anticorpi monoclonali inhibitori ai tumorii la ErbB-2/HER2 blochează diafonia cu receptorii factorului de creștere.Oncogene,14

: 2099-2109, 1997.

25Yakes FM, Chinratanalab W., Ritter CA, King W., Seelig S., Arteaga CL Inhibarea indusă de Herceptin a fosfatidilinozitol-3 kinazei și Akt este necesară pentru efectele mediate de anticorpi asupra p27, ciclinei D1 și acțiunii antitumorale.Cancer Res.,62

: 4132-4141, 2002.

26Petit AM, Rak J., Hung MC, Rockwell P., Goldstein N., Fendly B., Kerbel RS.

in vitro și

in vivo : implicații angiogene pentru terapia de transducție a semnalului a tumorilor solide.A.m. J. Pathol.,151

: 1523-1530, 1997.

27Sliwkowski MX, Lofgren JA, Lewis GD, Hotaling TE, Fendly BM, Fox JA Studii nonclinice care abordează mecanismul de acțiune al trastuzumab (Herceptin).Semin. Oncol.,26

: 60-70, 1999.

28Harris KA, Washington CB, Lieberman G., Lu JF, Hass R., Bruno R. Un model de farmacocinetică populațională (PK) pentru trastuzumab (Herceptin) și implicații pentru dozarea clinică.Proc. A.m. Soc. Clin. Oncol.,21

: 488a

2002.

29Carter P., Presta L., Gorman CM, Ridgway JBB, Henner D., Wong WLT, Rowland AM, Kotts C., Carver ME, Shepard HM Umanizarea unui anticorp anti-p185 HER2 pentru terapia cancerului uman.Proc. Natl. Acad. Sci. STATELE UNITE ALE AMERICII,89

: 4285-4289, 1992.

30Fleming GF, Meropol NJ, Rosner GL, Hollis DR, Carson WE, Caligiuri M., Mortimer J., Tkaczuk K., Parihar R., Schilsky RL, Ratain MJ Un studiu de fază I a dozelor crescânde de trastuzumab combinat cu interleukină subcutanată zilnică 2: raport al grupului B 9661 de cancer și leucemie.Clin. Cancer Res.,8

: 3718-3727, 2002.

31Parihar R., Dierksheide J., Hu Y., Carson WE IL-12 îmbunătățește răspunsul citokinei celulelor ucigașe naturale la celulele tumorale acoperite cu Ab.J. Clin. Investig.,110

: 983-992, 2002.

32Parihar, R., Nadella, P., Jensen, R., Dierksheide, J., Van Buskirk, A., Shapiro, C. și Carson, W. Un studiu de fază I cu interleukina-12 și Herceptin dezvăluie o corelație între creșterea producției de citokine de către celulele natural killer și răspunsul clinic.

În: Genentech Solid Tumor Investigators’ Meeting, 2002.

33Penichet ML, Dela Cruz JS, Shin SU, Morrison SLA recombinant proteina de fuziune IgG3-(IL-2) pentru tratamentul tumorilor umane care exprimă HER2/neu.Zumzet. Anticorpi,10

: 43-49, 2001.

34Peng LS, Penichet ML, Morrison SL O proteină de fuziune a anticorpului IL-12 IgG3 cu lanț unic păstrează specificitatea anticorpului și bioactivitatea IL-12 și demonstrează activitate antitumorală.J. Immunol.,163

: 250-258, 1999.