Editorului: Raportăm o remisiune completă pe termen lung a metastazelor cutanate de melanom legate de utilizarea unui tratament popular cu planta Thymus vulgaris .O femeie albă de 73 de ani a fost trimisă la unitatea noastră de melanom în aprilie 1999 cu multipli noduli cutanați albăstrui peste piciorul stâng, care au apărut în ultimele 8 luni (Fig 1 , A ) . Ea a raportat că cu un an mai devreme a apărut o leziune cutanată neagră pe aceeași zonă a piciorului ei, unde o așchie a fost îndepărtată de un alt medic fără examinare patologică. Ea a negat alte antecedente patologice. Noduli metastatici cutanați multipli de melanom au fost diagnosticați după examene histologice și imunohistologice ( Fig 2 , A și B). Nu au existat ganglioni limfatici sau metastaze viscerale la examenele clinice, analitice sau de stadializare (inclusiv tomografie computerizată corporală, imagistică prin rezonanță magnetică cerebrală și scintigrafie osoasă). Pacienta a fost stadializată în stadiul III AJCC, dar a refuzat tratamentul propus, care a constat în perfuzia hipertermică a piciorului stâng cu melfalan și interferon.
Fig 1 A , Extremitatea inferioară stângă a pacientului în aprilie 1999 cu multe metastaze cutanate. B , Răspuns complet cu dispariția tuturor leziunilor cutanate în martie 2002.Vezi imaginea mareVizualizator de figuriDescărcați (PPT)Fig 2 A , Colorarea cu hematoxilină și eozină a metastazei cutanate cu o proliferare malignă. B , Detaliu al celulelor maligne o mărire mare. C , Colorarea cu hematoxilină și eozină a pielii cu dispariția completă a celulelor tumorale și prezența regresiei extinse și a melanofagiei. D , Detaliu al melanofagelor din derm fără prezența celulelor tumorale. E , Negativitatea colorării HMB-45. F , colorare NKI. ( A – D ; colorație hematoxilină-eozină; măriri originale: A , ×100 B , ×400 C , ×100 D , ×400E , ×100 F , ×100.)Vezi imaginea mareVizualizator de figuriDescărcați (PPT)
Câteva săptămâni mai târziu, a fost observată o dispariție progresivă a tuturor nodulilor ( Fig 1 , B ). Examenele histologice au confirmat regresia completă a metastazelor cutanate ( Fig 2 , C – F ). Pacienta a declarat că a folosit cimbru uscat (frunze și tulpini măcinate) pentru ceaiul din plante și pentru aplicații topice în comprese peste leziuni. Nu este evidentă nicio dovadă de boală la acest pacient după 5 ani de urmărire.Regresia spontană a cancerului a fost observată în diferite tipuri de tumori. Melanomul malign cuprinde doar 1,8% din toate tipurile de cancer, dar reprezintă 11% din toate cazurile raportate de regresie spontană a tumorii. Regresia parțială a melanomului malign este un eveniment binecunoscut și se găsește în 25% dintre melanoamele primare.12Deși regresia spontană completă a melanomului primar este mai puțin frecventă, între 5% și 10% dintre melanoamele metastatice prezintă o leziune primară necunoscută sau după o dispariție completă a leziunii primare.3Melanoamele primare subțiri cu regresie extinsă prezintă un risc mai mare de dezvoltare a metastazelor.4Caracteristicile histopatologice ale leziunilor regresate includ o epidermă cu aspect normal care se află deasupra unei zone fibroplastice, cu melanofagie, un infiltrat inflamator dens de celule mononucleare și neoangiogeneză.4Regresia spontană a melanomului metastatic este extrem de rară, iar cele mai multe cazuri apar în metastaze cutanate, subcutanate și ganglionare,5dar regresia pulmonară6și coroidă7s-au observat de asemenea metastaze ale melanomului cutanat. Înainte de 1988, au fost raportate doar 34 de cazuri; până în prezent, am găsit încă aproximativ 20 de cazuri în literatură.Dintre diferitele mecanisme care au fost propuse pentru explicarea fenomenului de regresie spontană, cel imunologic rămâne cel mai probabil.2Cazurile recente documentate de activitate antitumorală a unui vaccin cu celule întregi de melanom polivalent heterolog au furnizat, de asemenea, dovezi indirecte ale medierii imune în regresia melanomului.8Pathak și colab9au raportat că regresia spontană a melanomului cutanat de porc Sinclair este asociată cu pierderea activității telomerazei în tumorile care regresează. Ar putea fi un alt mecanism implicat în regresia spontană a metastazelor melanomului uman.Prezentăm un caz de regresie spontană a metastazelor cutanate multiple ale melanomului în asociere cu ingestia și aplicarea topică a perfuziilor cu T vulgaris (cimbru). Cimbrul este o planta medicinala binecunoscuta, iar componenta activa, timolul, are proprietati antimicrobiene si antispastice. S-a raportat că uleiul de T vulgaris este un agent iritant în produsele topice și ar putea avea un efect caustic asupra pielii în concentrații mari,10dar iritația nu a fost prezentă în cazul de față.Cazul nostru arată o relație cronologică între T vulgaris și regresia metastazelor, dar această asociere poate fi în întregime coincidență și nu putem confirma nici un posibil rol al T vulgaris în inducerea răspunsului imun autolog antitumoral (producând o ipotetică haptenizare a antigenelor tumorale). ) sau un efect antitumoral intrinsec al extractelor de timus.Mulțumim Barbara J. Rutledge pentru ajutorul acordat în editarea manuscrisului.
Referințe
Trau H.
Kopf AW
Rigel DS
Levine J.
Rogers G.
Levenstein M.
et al.
Regresia în melanomul malign.J Am Acad Dermatol. 1983; 8 : 363-368Vedeți în articol
Caracteristicile histologice ale melanoamelor subțiri metastazante. Un studiu caz-control pe 43 de cazuri.Arch Dermatol. 2002; 138 : 603-608Vedeți în articol
Regresia spontană a melanomului malign metastatic al glandei parotide și ganglionilor limfatici gâtului: raport de caz și revizuire a literaturii.Clin Oncol. 2001; 13 : 466-469Vedeți în articol
Tratamentul pacienților cu melanom metastatic nerezecabil progresiv cu un vaccin cu celule întregi de melanom polivalent heterolog.Int J Cancer. 2003; 106 : 626-631Vedeți în articol
Regresia spontană a melanomului cutanat la porcul Sinclair este asociată cu activitatea defectuoasă a telomerazei și eroziunea extinsă a telomerilor.Int J Oncol. 2000; 17 : 1219-1224Vedeți în articol
Evaluarea potențialei iritații ale pielii cauzate de utilizarea cosmetică a uleiurilor esențiale din plante aromatice (Lamiaceae).Alergologie. 1995; 18 : 465-466Vedeți în articol
Sprijinit parțial prin granturi 03/0019 de la Fondo de Investigaciones Sanitarias, V2003-REDC03/07 și grantul RO-1 CA 83115 (fond 538226 de la Institutul Național al Cancerului).
Fig 1 A , Extremitatea inferioară stângă a pacientului în aprilie 1999 cu multe metastaze cutanate. B , Răspuns complet cu dispariția tuturor leziunilor cutanate în martie 2002.
Fig 2 A , Colorarea cu hematoxilină și eozină a metastazei cutanate cu o proliferare malignă. B , Detaliu al celulelor maligne o mărire mare. C , Colorarea cu hematoxilină și eozină a pielii cu dispariția completă a celulelor tumorale și prezența regresiei extinse și a melanofagiei. D , Detaliu al melanofagelor din derm fără prezența celulelor tumorale. E , Negativitatea colorării HMB-45. F , colorare NKI. ( A – D ; colorație hematoxilină-eozină; măriri originale: A , ×100 B , ×400 C , ×100 D , ×400E , ×100 F , ×100.)
De Leigh Erin Connealy, MD, și Bita Badakhshan, MD
REZUMAT
Melanomul reprezintă doar 1% din toate cancerele de piele, dar este responsabil pentru majoritatea deceselor cauzate de cancerul de piele. 1 Deși îndepărtarea chirurgicală este adesea curativă în melanomul în stadiu incipient, riscul de recidivă crește și prognosticul se înrăutățește în boala avansată. Raportăm cazul unui pacient cu melanom recidivant în stadiul 4 cu metastază la ficat. Detectarea precoce a recurenței cu teste de sânge specializate ale biomarkerilor de cancer și tratamentul cu terapii integrative au condus la un răspuns excelent, iar pacientul este acum în remisie.
Introducere
Incidența melanomului este în creștere în SUA, cu o creștere de 1,4% a cazurilor noi pe an din 2009 până în 2018. 2 Prognosticul pentru melanomul localizat în stadiu incipient este excelent, dar rata de supraviețuire la cinci ani pentru melanomul metastatic este de doar 27%. 3 Prin urmare, este necesară investigarea unor noi teste de sânge și terapii eficiente pentru a îmbunătăți detectarea precoce și rezultatele în melanom și alte tipuri de cancer.
Câteva teste de sânge specializate sunt adjuvante excelente pentru depistarea precoce a cancerului. 4 Deși aceste teste sunt subutilizate în oncologia convențională, ele identifică biomarkeri care indică activitatea cancerului înainte ca semnele și simptomele să fie evidente la examenul fizic, testele de sânge de rutină și scanările imagistice. Acestea includ următoarele:
Terapii integrative pentru cancer (bară laterală)
Vitamina C intravenoasă (IV): Nivelurile sanguine foarte mari de vitamina C, care pot fi atinse numai prin administrarea IV de doze mari de ascorbat, formează peroxid de hidrogen, care ucide celulele canceroase fără a afecta țesuturile normale. Folosită singură sau împreună cu alte tratamente pentru cancer, vitamina C IV s-a dovedit în numeroase studii clinice că încetinește progresia bolii și crește timpul de supraviețuire. 8
Terapii IV suplimentare : Alte terapii IV care vizează cancerul includ dicloracetat de sodiu ( DCA , care ucide celulele canceroase prin întreruperea metabolismului lor 9 ), Poly MVA (un amestec proprietar de paladiu legat de acid alfa lipoic, vitamine B și oligominerale), și artesunatul (un medicament antimalaric despre care s-a demonstrat că se leagă de fier în organism și declanșează moartea celulelor canceroase 10 ). Curcumina IV și seleniul sunt, de asemenea, administrate pentru proprietățile lor antiinflamatorii, antioxidante și anticancerigene.
Terapia cu oxigen hiperbaric (HBOT): Când oxigenul 100% este respirat într-o cameră presurizată, oxigenul difuzează în plasmă, limfă și lichidul cefalorahidian și este transportat în tot corpul, crescând dramatic nivelul de oxigen. 11 Pe lângă crearea unui mediu mai puțin ospitalier pentru celulele canceroase, care se bazează în mare parte pe metabolismul anaerob, HBOT îmbunătățește eficacitatea tratamentelor pentru cancer și reduce efectele secundare adverse ale acestora.
Terapia cu câmp electromagnetic pulsat (PEMF): administrate în combinație cu vitamina C IV și/sau HBOT, tratamentele PEMF induc câmpuri electromagnetice în intervalul 0-300 Hz pentru a crește producția de ATP și pentru a ajuta la restabilirea funcției și integrității celulare. Când este utilizat ca adjuvant la chimioterapie și radiații, reduce, de asemenea, efectele secundare și îmbunătățește prognosticul. 12
Terapia cu oligonucleotide de susținere (SOT): Acest tratament personalizat pentru cancer valorifică puterea oligonucleotidelor (molecule scurte de ADN sau ARN). 13 Fiecare tratament este adaptat individual pentru a viza și a se lega de celulele tumorale circulante ale pacientului și pentru a bloca expresia genelor necesare creșterii și proliferării.
Terapia cu ozon: Tratamentele implică expunerea unei cantități mici din sângele pacientului la ozon, apoi reinfuzarea acestuia în organism. Această terapie oxidativă crește vulnerabilitatea celulelor canceroase în timp ce declanșează apărarea antioxidantă și imunitară care protejează celulele normale. 14
Generator de fascicul de lumină (LBG): LBG este o terapie neinvazivă care se concentrează asupra sistemului limfatic. Prin stimularea fluxului limfatic cu lungimi de undă specifice de lumină, LBG elimină excesul de lichid limfatic și deșeurile celulare.
Hipertermie: Tratamentul hipertermiei, care implică creșterea temperaturii unor zone specifice sau a întregului corp peste niveluri normale, dăunează celulelor canceroase și ajută la micșorarea tumorilor. De asemenea, sensibilizează celulele canceroase la alte modalități de tratament. 15
Terapia de chelare cu EDTA: EDTA este tratamentul de alegere pentru toxicitatea metalelor grele. Infuzat intravenos, se leagă de plumb, fier și alte minerale din sânge și le permite să fie excretate din organism. 16
Suport nutrițional: Sfaturile dietetice și regimurile de suplimente individualizate, bazate pe evaluarea nutrițională, reprezintă un pilon al terapiei integrative a cancerului. Protocoalele comune de suplimente includ acid alfa lipoic, vitamina D3, vitamine din complexul B, probiotice și enzime pancreatice.
Fosfohexoza izomeraza (PHI), numită și factor de motilitate autocrină, este o enzimă implicată în metabolismul anaerob. Creșterile au fost legate de creșterea activității tumorii în cancerele de piele, ficat și alte locuri. 5 Interval normal: 15,6–31,4 U/L
Celulele tumorale circulante (CTC) sunt celule canceroase care sunt îndepărtate din tumori și eliberate în sânge. Recidiva sau metastaza apare atunci când aceste celule circulante își au reședința în locul inițial al tumorii sau în alte organe. 6 CTC pot fi detectate prin „biopsia lichidă” a RGCC. Interval normal: 0 celule/ml
Nagalaza, oralfa-N-acetilgalactosaminidaza, este o enzimă care inhibă factorul de activare a macrofagelor Gc (GcMAF) și interferează cu producția de macrofage. Pacienții cu cancer au niveluri crescute de nagalază și cu cât nivelul este mai mare, cu atât este mai mare sarcina tumorală și cancerul este mai agresiv. 7 Interval normal: sub 0,95 nmol/min/mg
Aceste teste sunt utile și pentru monitorizarea eficacității intervențiilor terapeutice și ghidarea protocoalelor de tratament, atât convenționale, cât și integrative. (Consultați bara laterală pentru o scurtă descriere a terapiilor integrative pentru cancer.) Aici, discutăm despre un pacient cu recurență a melanomului documentată prin RMN, diagnosticat în stadiul 4 cu metastază la ficat, care a fost suspectat inițial pe baza PHI, CTC și testul nagalase. rezultate. Detectarea precoce a activității cancerului plus un program cuprinzător de tratament integrativ cu o serie de terapii anti-cancer și de susținere au dus la regresie și remiterea finală a bolii.
Descrierea cazului
Un bărbat de 50 de ani ne-a consultat în ianuarie 2016 pentru monitorizare și tratament. El a fost diagnosticat cu melanom în stadiul 3 în iunie 2014, cu îndepărtarea chirurgicală a leziunilor de pe spate și tibie stângă. Doisprezece ganglioni limfatici au fost, de asemenea, îndepărtați, iar unul a avut metastaze microscopice. O scanare PET în septembrie 2014 a fost clară și nu a fost recomandat niciun tratament suplimentar. El a fost monitorizat de medicul oncolog cu analize de sânge la fiecare trei până la șase luni și a avut o scanare CT la sfârșitul anului 2015 care a fost negativă. Pacientul are, de asemenea, antecedente de cancer tiroidian, diagnosticat și tratat în 2014, și se află în stare post radioterapie și tiroidectomie.
Când am văzut prima dată pacientul în ianuarie 2016, acesta nu a avut plângeri, dar, având în vedere istoricul său de cancer, a vrut să-și îmbunătățească funcția imunitară și starea generală de sănătate. Analizele de sânge la examenul inițial al pacientului au arătat că hemoleucograma completă (CBC), panoul metabolic cuprinzător (CMP) și proteina C reactivă de înaltă sensibilitate (hs-CRP) au fost în limitele normale și, de fapt, au rămas așa pe tot parcursul lui. curs de tratament. Cu toate acestea, PHI și CTC au fost ridicate la 60 U/L și, respectiv, 9,3 celule/mL, ceea ce sugerează activitatea cancerului în curs.
Prin urmare, am început pacientul cu un protocol de trei luni, constând din terapie cu oxigen hiperbaric (HBOT) de trei ori pe săptămână, vitamina C intravenoasă și dicloracetat de sodiu (DCA) plus terapia cu câmp electromagnetic pulsat (PEMF) de două ori pe săptămână și generator de fascicul luminos. (LBG) și terapie cu ozon o dată pe săptămână. De asemenea, am recomandat patru tratamente de terapie cu oligonucleotide de susținere (SOT), distanțate la câteva luni, începând din octombrie 2016.
Deși nivelurile PHI și CTC au scăzut inițial, până la sfârșitul anului 2016 PHI a crescut la o valoare foarte mare de 92,9 U/L, CTC a fost de 9,5, iar nagalaza a fost crescută la 1,97 nmol/min/mg, așa că scanările au fost comandate în decembrie 2016. CT pulmonar a fost negativ, dar CT abdominal a evidențiat două leziuni hipodense adiacente în lobul stâng al ficatului, măsurând 10 mm și 11 mm, o creștere de la 3 mm fiecare anterior. Un RMN al abdomenului cu substanță de contrast a fost pozitiv pentru două leziuni pe lobul hepatic stâng care măsoară 10,8 mm și 6,4 mm în concordanță cu metastazele hepatice. Au existat și câteva leziuni chistice.
În urma diagnosticului său de melanom metastatic, pacientul a reluat HBOT de trei ori pe săptămână plus terapii PEMF și IV (vitamina C, DCA, poli MVA, seleniu și artesunat) de două ori pe săptămână. De asemenea, a început săptămânal tratamente cu LBG și hipertermie de două ori pe săptămână și a început să ia metformină 500 mg de două ori pe zi. A avut un al doilea tratament SOT în martie 2017. RMN-ul abdominal în aprilie 2017 a arătat că leziunea mai mare s-a micșorat la 9,6 mm față de 10,8 mm anterioare, iar a doua leziune a fost stabilă la 6,4 mm. Au fost observate mici leziuni chistice, dar nu au fost prezente leziuni noi. RMN-ul pelvisului și CT-ul toracelui au fost negative. Nivelurile CTC în aprilie au scăzut la 7,9 celule/mL, iar PHI a fost în intervalul normal la 30,7 U/L. Nagalase a scăzut, de asemenea, la un nivel normal ridicat de 0,94 nmol/min/mg.
În următoarele câteva luni, pacientul a continuat săptămânal IV vitamina C plus seleniu IV și artesunat. A primit al treilea tratament SOT în august 2017 și a continuat să se descurce bine. RMN-ul în acea lună a arătat o contracție suplimentară a celor două leziuni la 4 mm și 6 mm, cu leziuni chistice mici, dar nimic nou. A avut un al patrulea tratament SOT în ianuarie 2018 și HBOT de două sau trei ori pe săptămână. Testele de sânge din februarie 2018 au arătat că PHI-ul său a scăzut la 31,5 U/L și nagalaza la 0,66 nmol/min/mg, ambele în limitele normale. RMN-ul abdominal din aprilie 2018 a arătat leziuni stabile de 4 mm și 6 mm cu leziuni chistice mici și fără leziuni noi.
Am continuat să urmăm pacientul cu tratamente regulate și analize de sânge pe tot parcursul anului 2018. CTC-ul său a scăzut în continuare la 7,0 celule/ml în iunie. PHI, de asemenea, a scăzut treptat. Interesant este că atunci când pacientul și-a scăzut tratamentele, PHI-ul lui s-a strecurat. Când a reluat IV-urile și HBOT, s-a normalizat. Până în decembrie 2018, RMN-ul abdomenului a arătat o scădere suplimentară a celor două leziuni hepatice, acum măsurând 2 mm și 4 mm cu leziuni chistice mici care au rămas neschimbate.
I-am intensificat terapiile IV în 2019, iar în iunie nivelurile sale de PHI și nagalază au fost în intervalul normal la 28,1 U/L și, respectiv, 0,75 nmol/min/mg. RMN-ul abdomenului în iunie 2019 a arătat calcificarea leziunilor hepatice fără leziuni suplimentare, cu excepția leziunilor chistice și nicio dovadă de boală metastatică. RMN-ul pelvisului a fost, de asemenea, negativ pentru metastaze. Melanomul în stadiul 4 al pacientului este în remisie din iunie 2019. RMN-ul abdominal cu și fără contrast în decembrie 2019 a observat prezența unor chisturi hepatice stabile minuscule și nicio dovadă de neoplasm abdominal.
Pacientul revine pentru urmărire cu teste periodice și tratamente de susținere. Cel mai recent test CTC al său a fost de 5,2 celule/ml, o îmbunătățire semnificativă față de rezultatul inițial al testului din 2016, de 9,3 celule/ml. Nivelurile sale de PHI au fost, de asemenea, în intervalul normal, cu excepția unei creșteri în ianuarie 2021, care a revenit rapid la normal. Acest lucru s-ar putea datora nivelurilor ridicate de paladiu, un metal greu toxic care suprimă funcția imunitară. El a primit multiple tratamente de chelare cu EDTA cu îmbunătățiri semnificative ale nivelurilor anterior ridicate de plumb, gadoliniu, platină, uraniu și alte metale, iar nivelul său de paladiu scade lent.
Discuţie
Acest pacient este în remisie cu melanom în stadiul 4 din iunie 2019. Diagnosticat inițial cu melanom în stadiul 3 în iunie 2014, a fost tratat cu excizie chirurgicală a leziunilor de pe spate și tibie stângă plus îndepărtarea a 12 ganglioni limfatici. A avut o scanare PET normală la sfârșitul anului 2015, fără alte recomandări de tratament.
După ce ne-am consultat pentru monitorizare la începutul anului 2016, am suspectat o recidivă bazată pe niveluri crescute de PHI, CTC și nagalaze care sugerează activitatea tumorii. L-am început cu un program de tratament cuprinzător constând din HBOT, vitamina C IV și DCA, PEMF, LBG și terapie cu ozon, cu adăugarea ulterioară a SOT. Un RMN din decembrie 2016 a confirmat recidiva, cu metastaze la ficat (două leziuni și multiple chisturi hepatice) și un diagnostic de melanom în stadiul 4.
Având în vedere că monitorizarea recomandată de pacient de către oncologul său a fost analiza de sânge la fiecare trei până la șase luni, este posibil ca această recidivă să fi trecut neobservată, dacă biomarkerii activi ai cancerului nu ar fi fost detectați prin testele PHI, CTC și nagalase. Indicațiile timpurii ale activității cancerului ne-au permis să începem tratamentul cu luni înainte de confirmarea RMN din decembrie 2016 a melanomului metastatic.
În următorii cinci ani, am tratat pacientul cu un program cuprinzător de tratament, făcând adăugiri și ajustări periodice pentru a include terapii IV suplimentare (Poly MVA, seleniu, curcumină și artesunat), hipertermie, suport nutrițional și chelare EDTA. În acest timp, PHI, CTC și nagalase au revenit încet la niveluri normale, ceea ce indică o reducere a activității cancerului. Acest lucru a reflectat rezultatele scanărilor CT și RMN, deoarece cele două leziuni hepatice au regresat lent de la 10,8 și 6,4 mm inițiale, la 2 și 4 mm un an mai târziu, iar, în iunie 2019, la calcificarea celor două leziuni hepatice, fără leziuni suplimentare. și „nicio dovadă de boală metastatică”.
Aceasta este o recuperare remarcabilă, având în vedere agresivitatea și riscul de mortalitate al melanomului metastatic. În ultimul deceniu, s-au înregistrat progrese semnificative în tratamentul melanomului în stadiul 4, care a avut istoric o rată de supraviețuire la cinci ani de mai puțin de 10%. Regimurile de imunoterapie mai noi, care ajută sistemul imunitar al pacientului să identifice și să lupte împotriva cancerului, sunt o opțiune de tratament promițătoare și binevenită cu remisie de durată pentru unii pacienți cu melanom avansat 17 . Cu toate acestea, imunoterapia nu funcționează pentru toată lumea și mulți pacienți se confruntă în continuare cu un prognostic dificil.
Aproape 1,9 milioane de cazuri noi de cancer sunt prognozate în SUA în 2021, împreună cu aproximativ 608.507 decese cauzate de cancer. Aproximativ 39% dintre americani vor fi diagnosticați cu un anumit tip de cancer de-a lungul vieții 18 . Rezultatele pe care le-a experimentat acest pacient și mulți alți pacienți cu o varietate de cancere atestă eficacitatea acestor și a altor tratamente integrative pentru cancer – nu numai pentru melanom, ci și pentru majoritatea tipurilor de cancer.
Biomarkerii cancerului subutilizați (PHI, CTC și nagalase) și terapiile integrative pe care le-am prezentat merită o utilizare mai largă, precum și cercetări viitoare, inclusiv studii clinice randomizate, pentru a elucida modul lor de acțiune, siguranța și capacitatea de a crește supraviețuirea pe termen lung.
Notă: Pacientul și-a dat consimțământul informat pentru a-și folosi informațiile în scopuri educaționale.
5. Araki K, şi colab. Fosfoglucoza izomeraza/factorul de motilitate autocrină promovează migrarea celulelor melanomului prin activarea ERK dependentă de producția autocrină de interleukină-8. J Biol Chem . 2009 noiembrie;284(47):32305-11.
6. Alix-Panabieres C, et al. Detectarea metastazelor canceroase: trecut, prezent și viitor. Clin Exp Metastasis . 7 mai 2021.
7. Thyer L, și colab. Factorul de activare a macrofagelor derivat din proteina GC scade nivelurile de α- N -acetilgalactosaminidaza la pacientii cu cancer avansat. Oncoimunologie . 2013 august 1;2(8):e25769.
8. Nauman G, şi colab. Revizuirea sistematică a ascorbatului intravenos în studiile clinice privind cancerul. Antioxidanți (Basel). 2018 Iul 12;7(7):89.
9.Tataranni T, Piccoli C. Dicloroacetat (DCA) și Cancer: O privire de ansamblu către aplicațiile clinice. Oxid Med Cell Longev. 14 noiembrie 2019;2019:8201079.
10. Augustin Y, Staines HM, Krishna S. Artemisinins ca o nouă terapie anti-cancer: țintirea unei pandemii globale de cancer prin reutilizarea medicamentelor. Pharmacol Ther. 2020;216:107706.
11. Jones MW, şi colab. Fizica hiperbară. 27 oct 2020. În: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): Editura StatPearls; 2021 ianuarie.
12. Vadalà M, și colab. Mecanisme și eficacitate terapeutică a terapiei cu câmp electromagnetic pulsat în oncologie. Cancer Med. 2016 noiembrie;5(11):3128-3139.
13. Le BT, et al. Oligonucleotide antisens care vizează factorii angiogeni ca potențiali terapii împotriva cancerului. Acizi nucleici moli. 1 martie 2019;14:142-157.
14. Clavo B, et al. Terapia cu ozon ca adjuvant pentru tratamentul cancerului: sunt necesare cercetări suplimentare? Evid Based Complement Alternat Med. 9 septembrie 2018;2018:7931849.
15. Scutigliani EM, et al. Modularea răspunsului la stresul termic pentru a îmbunătăți tratamentele anticancer bazate pe hipertermie. Cancer (Basel). 12 martie 2021;13(6):1243.
16. Ferrero ME. Motivație pentru gestionarea cu succes a terapiei de chelare cu EDTA în sarcina umană de către metale toxice. Biomed Res Int. 2016;2016:8274504.
17. Kuryk L, și colab. De la terapii convenționale la imunoterapie: Tratamentul melanomului în revizuire. Cancer (Basel). 2020;12(10):3057.
Robert HI Andtbacka , MD, CM 1; Brendan Curti , MD 2; Gregory A. Daniels , MD, PhD 3; Signrun Hallmeyer , MD 4; Eric D. Whitman , MD 5; Jose Lutzky , MD 6;Lynn E. Spitler , MD 7; Karl Zhou , dr. 8 ; Praveen K. Bommareddy , MS, PhD 9; Mark Grose , BSc 10; Meihua Wang , PhD 11; Cai Wu , PhD 11; și Howard L. Kaufman , MD 121 Huntsman Cancer Institute, University of Utah, Salt Lake City, UT 2 Earle A. Chiles Research Institute, Providence Cancer Institute, Portland, SAU 3 Moores Cancer Center, University of California, San Diego, La Jolla, CA 4 Advocate Aurora Health, Park Ridge, IL 5 Atlantic Melanoma Center, Atlantic Health System Cancer Care, Morristown, NJ 6 Sylvester Comprehensive Cancer Center, Universitatea din Miami, Miami, FL 7 St Mary’s Medical Center, San Francisco, CA 8 inVentiv Health Clinical, Bridgewater, NJ 9 Rutgers Graduate School of Biomedical Sciences, New Brunswick, NJ 10Viralytics Limited, o filială deținută în totalitate de Merck & Co, Inc, Kenilworth, NJ 11 Merck & Co, Inc, Kenilworth, NJ 12 Massachusetts General Hospital, Boston, MA Arata mai putin
Am evaluat activitatea intratumoral Coxsackievirus A21 (V937) la 57 de pacienți cu melanom în stadiul IIIC sau IV nerezecabil.
PACIENȚI ȘI METODE
În acest studiu multicentric, deschis, de fază II, pacienții au primit până la o doză totală de V937 de 3 × 10 8 TCID 50 ( 50% doză infecțioasă de cultură tisulară) într-un volum de maxim 4,0 ml prin injecție intratumorală. Zece seturi de injecții V937 au fost administrate între zilele 1 și 127 ( NCT01227551 ). Pacienții care aveau boală stabilă sau au răspuns pot continua tratamentul într-un studiu de extensie ( NCT01636882). Răspunsul și starea de progres s-au bazat pe tomografie computerizată cu contrast, imagistica prin rezonanță magnetică sau măsurători cu șubler și au fost clasificate folosind criteriile de evaluare a răspunsului imun în tumorile solide (irRECIST). Alte evaluări au inclus monitorizarea evenimentelor adverse și a nivelurilor serice ale titrurilor de anticorpi V937 și anti-V937. Obiectivul principal de eficacitate a fost rata de supraviețuire fără progresie (PFS) la 6 luni per irRECIST.
REZULTATE
Punctul final principal de eficacitate, rata PFS la 6 luni per irRECIST, a fost de 38,6% (IC 95%, 26,0 la 52,4). Rata de răspuns durabil (răspuns parțial sau complet timp de ≥ 6 luni) a fost de 21,1% per irRECIST. Cea mai bună rată generală de răspuns (răspuns complet plus parțial) a fost de 38,6% (neconfirmat) și 28,1% (confirmat) per irRECIST. Regresia melanomului a fost observată în leziunile neinjectate. Pe baza estimării Kaplan-Meier, PFS la 12 luni a fost de 32,9% (IC 95%, 19,5 până la 46,9) per irRECIST și supraviețuirea globală la 12 luni a fost de 75,4% (IC 95%, 62,1 până la 84,7). Nu au apărut evenimente adverse de grad ≥ 3 legate de tratament. ARN viral a fost detectat în ser în 30 de minute de la administrare. Titrurile de anticorpi neutralizanți au crescut la > 1:16 la toți pacienții după ziua 22, fără efect asupra răspunsului clinic sau imunologic.
CONCLUZIE
V937 a fost bine tolerat și necesită investigații suplimentare pentru tratamentul pacienților cu melanom nerezecabil. Studiile abordărilor combinate cu V937 și inhibitori ai punctelor de control imunitare sunt în curs de desfășurare.
INTRODUCERE
Limfocitele care infiltrează tumora în micromediul tumoral sunt asociate cu o probabilitate mai mare de răspuns la imunoterapie. 1 , 2 Virușii oncolitici (OV) mediază activitatea antitumorală prin distrugerea celulelor tumorale primare prin oncoliză mediată de virus și inducerea secundară a imunității antitumorale a gazdei, care promovează acumularea de limfocite care infiltrează tumora. 3 Un OV, talimogene laherparepvec (T-VEC), este aprobat pentru tratamentul melanomului nerezecabil. 4 Acest virus ADN modificat genetic este derivat dintr-o tulpină oncolitică a virusului herpes simplex tip 1 (HSV-1) și codifică factorul de stimulare a coloniilor de macrofage granulocite umane (GM-CSF). 5Într-un studiu de fază III, rata de răspuns durabil (DRR; răspuns parțial [PR] sau răspuns complet [CR] timp de ≥ 6 luni în primul an) a fost mai mare cu T-VEC decât cu GM-CSF la pacienții cu melanom nerezecabil la analiza primară. (16,3% vs 2,1%) 5 și analiza finală (19,3% vs 1,4%). 6 Virușii HSV-1, cum ar fi T-VEC, se replic în nucleul celulelor infectate și sunt detectați de către calea de detecție citosolică a genei interferonului (STING) GMP-AMP-sintaza ciclică (cGAS), 7 potențial conducând la clearance-ul viral . .CONTEXT
Obiectiv cheie
Studiul CALM cu un singur braț, deschis, de fază II a evaluat eficacitatea și siguranța virusului ARN oncolitic, Coxsackievirus A21 (V937), la pacienții cu melanom în stadiul IIIC sau IV nerezecabil.
Cunoștințe generate
Dintre 57 de pacienți înrolați, rata de supraviețuire fără progresie la 6 luni pe criteriile de evaluare a răspunsului imun în tumorile solide (punctul final primar de eficacitate) a fost de 38,6% (IC 95%, 26,0 până la 52,4) și rata de răspuns durabil (parțial sau complet). răspunsul pentru ≥ 6 luni) a fost de 21,1%; pe baza estimării Kaplan-Meier, supraviețuirea fără progresie la 12 luni a fost de 32,9% (IC 95%, 19,5 la 46,9) și supraviețuirea globală la 12 luni a fost de 75,4% (IC 95%, 62,1 la 84,7). Nu au apărut evenimente adverse de grad ≥ 3 legate de tratament.
Relevanţă
Din cunoștințele noastre, acesta este primul raport care descrie rezultatele cu V937 intratumoral pentru tratamentul pacienților cu melanom. Important, a avut loc regresia leziunilor atât injectate, cât și neinjectate (de exemplu, plămâni și hepatice), indicând un efect antitumoral sistemic. Rezultatele noastre susțin studii suplimentare ale V937 în alte tipuri de cancer și în combinație cu inhibitori ai punctelor de control pentru melanom.
Virușii ARN reprezintă o strategie oncolitică alternativă. Coxsackievirus A, un agent patogen uman minor care produce simptome ușoare asemănătoare răcelii, 1 , 3 nu necesită atenuare pentru siguranță sau replicare selectivă în celulele tumorale. Virusul Coxsackie intră în celule prin molecula de adeziune intercelulară 1 (ICAM-1) și receptorii factorului de accelerare a degradarii, care sunt supraexprimați în mai multe tipuri de cancer, inclusiv melanoamele metastatice. 8 Mai mult, expresia crescută a ICAM-1 este corelată cu boala metastatică și poate juca un rol în transformarea metastatică; acest profil de expresie a receptorilor de suprafață asociat cancerului poate îmbunătăți direcționarea virală către celulele canceroase. 1 , 3În plus, replicarea virusurilor ARN nu este de așteptat să fie inhibată de semnalizarea căii STING, așa cum este replicarea virusului ADN. 7 Aceste proprietăți au condus la dezvoltarea Coxsackievirus A21 (V937), o tulpină bioselectată nemodificată a Coxsackievirus A. V937 este un virus ARN oncolitic neînvelit care se repetă în citoplasmă, eliminând riscul recombinării genomice și, prin urmare, fără preocupări legate de latență. 1 , 3 Descoperirile anterioare au demonstrat siguranța V937 intratumoral la pacienții cu melanom. 9 Pentru a defini mai bine eficacitatea și impactul V937 asupra imunității antitumorale a gazdei, studiul CALM a fost efectuat la pacienți cu melanom în stadiu IIIC sau IV nerezecabil.PACIENȚI ȘI METODEAlegeÎnceputul paginiiAbstractINTRODUCEREPACIENȚI ȘI METODE <<REZULTATEDISCUŢIEREFERINȚEPacienții
Pacienții eligibili aveau vârsta ≥ 18 ani cu melanom malign în stadiul IIIC sau IV nerezecabil confirmat histologic (American Joint Committee on Cancer, ediția a 7-a, stadializare 10 , 11) .) și ≤ 1 terapie anterioară pentru melanom sistemic; chimioterapia adjuvantă finalizată cu ≥ 6 luni înainte de intrarea în studiu sau a fost permisă imunoterapia anterioară pentru boala metastatică. În timpul înscrierii (2011-2015), chimioterapia a fost o opțiune, dar combinațiile de inhibitori BRAF și MEK și inhibitorii anti-programați de moarte 1 nu au fost aprobate, cu excepția dabrafenibului și trametinibului, respectiv pembrolizumab. Pacienții eligibili aveau cel puțin o tumoare cu diametrul de 0,5 până la 10 cm într-o locație injectabilă și cel puțin o tumoare cu diametrul ≥ 1 cm care s-a calificat ca leziune țintă pentru Criteriile de evaluare a răspunsului în tumorile solide (RECIST) versiunea 1.1 12; Starea de performanță a Eastern Cooperative Oncology Group de 0 sau 1; și funcție hematologică, hepatică și renală adecvată. Au fost necesare titruri serice de anticorpi neutralizanți V937 ≤ 1:16 pentru a evita posibilele efecte de confuzie ale anticorpilor de neutralizare preexistenți; era de așteptat ca aproximativ 15% dintre pacienții examinați să fie excluși din acest motiv. 13 A fost necesar consimțământul informat scris (consultați Suplimentul de date [numai online] pentru criterii suplimentare de includere și excludere).Design de studiu
Acest studiu deschis, de fază II, cu un singur braț a fost efectuat la 10 centre din SUA (Protocol 1 [VLA-007], numai online; NCT01227551 ). Respondenții au fost înscriși într-o extensie (Protocolul 2 [VLA-008], numai online; NCT01636882 ). Studiile au fost efectuate în conformitate cu Declarația de la Helsinki. Protocoalele au fost aprobate de consiliile de evaluare instituționale locale și de comitetele de etică.
O descriere a V937 este furnizată în Suplimentul de date. La fiecare vizită de injectare, pacienții au primit o doză de V937 de 3 × 108 TCID 50 ( 50% doză infecțioasă de cultură tisulară) într-un volum de 4 ml prin administrare intratumorală; un pacient de 70 kg, de exemplu, ar primi aproximativ 4,5 × 10 6 TCID 50pe kg. Volumul ar putea fi redus sub 4 ml, cu o reducere consecutivă a dozei, dacă ar fi disponibile prea puține leziuni de dimensiune suficientă pentru injectare. La fiecare vizită de injectare, leziuni multiple au fost injectate folosind ghidaj ecografic dacă este necesar. Mai întâi, tumorile cu diametrul > 2,5 cm au fost injectate cu 2,0 ml. Apoi, tumorilor cu diametrul de 1,5-2,5 cm au fost injectate cu 1,0 ml, cele cu diametrul de 0,5 până la < 1,5 cm cu 0,5 ml și leziuni injectate anterior care s-au redus la un diametru < 0,5 cm cu 0,1 ml. Pacienții au primit injecții cu V937 o dată pe zi în zilele 1, 3, 5, 8, 22, 43, 64, 85, 106 și 127. Un maxim de cinci leziuni țintă (până la două pe organ) ar fi putut fi identificate la momentul inițial și măsurată pe parcursul studiului. Tratamentul a fost întrerupt în caz de deteriorare clinică rapidă din cauza progresiei tumorii,
Starea bolii a fost evaluată prin tomografie computerizată (CT) cu contrast sau imagistică prin rezonanță magnetică și/sau măsurători directe cu șublerul și evaluată prin criteriile de evaluare a răspunsului imun în tumori solide (irRECIST), 14 .cu confirmarea necesară pentru evaluările CR sau PR; termenul irRECIST, așa cum este utilizat în acest manuscris, include aceste criterii modificate. Starea bolii a fost evaluată înainte de începerea tratamentului (nivel de bază); în zilele 43, 85, 127 și 169; și după aceea la fiecare 12 săptămâni până la progresia bolii sau la vizita finală de urmărire a studiului. Ulterior, pacienții au fost contactați la fiecare 6 luni pentru supraviețuire. La 12 săptămâni după începerea tratamentului (ziua 85), dacă boala unui pacient a fost clasificată ca PD fără deteriorare clinică rapidă, pacientul putea rămâne în studiu încă 6 săptămâni până în ziua 127. Dacă PD a fost confirmată în ziua 127, tratamentul a fost oprit, iar pacientul a fost observat pentru siguranță și eficacitate până la începerea unui nou regim. Dacă boala stabilă (SD), PR sau CR a fost observată în ziua 85, pacienții au continuat tratamentul, iar CR și PR au fost confirmate în ziua 127. Pacienții care au avut dovezi de activitate biologică (adică, reacție inflamatorie tumorală și/sau SD sau mai bine) în ziua 127 au fost eligibili să participe la o extensie și să continue să primească nouă seturi suplimentare de V937 intratumoral. injecții la fiecare 3 săptămâni până la un total de 1 an de terapie de la prima injecție. Datele privind eficacitatea, siguranța și supraviețuirea au fost colectate în același timp ca și în studiul primar. Pacienții care au optat să nu participe la extindere au fost urmăriți la fiecare 12 săptămâni începând cu ziua 169 pentru un total de 12 luni. Dacă PD fără deteriorare rapidă a fost observată în ziua 169, evaluarea de confirmare a fost efectuată 6 săptămâni mai târziu. Odată ce PD a fost confirmată, pacienții puteau rămâne în studiu și puteau fi urmăriți pentru supraviețuire. Pacienții care s-au retras din studiu în timpul tratamentului au fost contactați de două ori,
Pentru obiectivul principal de eficacitate, rata de supraviețuire fără progresie la 6 luni (PFS) per irRECIST, un pacient nu a fost considerat ca având PD decât dacă a fost confirmat prin măsurarea ulterioară a tumorii și/sau asociat cu o boală rapid progresivă per investigator. Pacienții considerați fără progresie la 6 luni au trebuit să aibă o evaluare care să arate CR, PR sau SD la 6 luni; pacienții cenzurați înainte de 6 luni au fost considerați nonrespondenți în scopul obiectivului primar. Obiectivele secundare ale eficacității au fost DRR (menținerea PR sau CR timp de ≥ 6 luni în orice moment după inițierea tratamentului) conform RECIST versiunea 1.1 și irRECIST; cea mai bună rată generală de răspuns; PFS per RECIST versiunea 1.1 și ratele irRECIST și PFS la 6, 9 și 12 luni, pe baza estimărilor Kaplan-Meier; supraviețuirea globală (OS); rate de supraviețuire la 6, 9 și 12 luni;
Pentru a calcula dimensiunea studiului a fost utilizat un design minimax al lui Simon în două etape. Pe baza datelor anterioare, a fost desemnată ca ipoteză alternativă o PFS legată de imunitatea la 6 luni de ≥ 22,5% și o PFS (pe irRECIST) de ≤ 10% ca ipoteză nulă. Folosind un nivel alfa de 5% și 80% putere, au fost necesari 54 de pacienți evaluabili. Dacă la sfârșitul studiului s-au observat ≥ 10 pacienți cu PFS (per irRECIST) la 6 luni, atunci ar fi luată în considerare investigarea ulterioară a V937 la această populație de pacienți. Obiectivul primar (rata PFS la 6 luni per irRECIST) a fost definit ca proporția de pacienți cu CR, PR sau SD la 6 luni după inițierea tratamentului; pacienții cărora le lipseau date valide la 6 luni pentru a evalua starea răspunsului au fost clasificați ca nonresponders. Rata PFS la 6 luni, RRD, cea mai bună rată generală de răspuns, și rata de răspuns obiectivă au fost prezentate ca estimări punctuale și IC binomiale exacte de 95%. Punctele finale de timp până la eveniment (PFS și OS) au fost de asemenea rezumate descriptiv folosind estimările Kaplan-Meier ca parte a punctelor finale secundare. În cazurile în care au fost necesare răspunsuri confirmate (de exemplu, PD), data primei evaluări a fost utilizată pentru analize (a se vedea Suplimentul de date pentru metodologia statistică suplimentară).REZULTATEAlegeÎnceputul paginiiAbstractINTRODUCEREPACIENȚI ȘI METODEREZULTATE <<DISCUŢIEREFERINȚEPacienții
Studiile au fost efectuate din decembrie 2011 (prima vizită la pacient) până în ianuarie 2015 (ultimul pacient întrerupt), iar data limită pentru analiza finală a fost 8 mai 2015. A fost utilizat un design în două etape, cu rezultate de eficacitate atinse în etapa 1, care conduce pentru înscrierea în continuare a pacienților în stadiul 2. Cincizeci și șapte de pacienți au primit ≥ 1 tratament V937: 40 (70,2%) au primit ≥ 80% și 17 (29,8%) au primit < 80% din injecțiile planificate. Douăzeci și trei de pacienți (40,4%) au finalizat studiul; cele mai frecvente motive pentru retragere au fost progresia bolii (n = 26) și retragerea consimțământului (n = 4) (Supliment de date). Din cei 16 pacienți înscriși în extensie, doi (12,5%) au terminat tratamentul, unul (6,3%) era încă în curs de tratament și 13 (81,3%) s-au retras; cel mai frecvent motiv pentru retragere a fost progresia bolii (n = 12; Supliment de date).
Majoritatea pacienților (61,4%) au avut boală în stadiul IV la screening; cele mai frecvente locuri de metastaze au fost ganglionii limfatici (40,4%), pielea la distanță (33,3%) și plămânii (26,3%; Tabelul 1).). Majoritatea pacienților au avut anterior tratament anticancer, inclusiv neoadjuvant, adjuvant, paliativ și altele: 44 (77,2%) intervenții chirurgicale, 33 (57,9%) imunoterapie, 36 (63,2%) terapie adjuvantă și 13 (22,8%) radioterapie. Cele mai frecvente imunoterapii primite anterior au fost interferonul alfa-2b (n = 15), ipilimumab (n = 14), interleukina-2 (n = 10) și T-VEC (n = 5); niciun pacient nu a primit anterior o combinație de inhibitori BRAF și MEK sau pembrolizumab. Timpul mediu ± abaterea standard în studiul primar și studiul de extensie a fost de 7,4 ± 5,5 luni, iar durata medie ± abaterea standard a tratamentului a fost de 4,8 ± 3,5 luni. Numărul mediu de injecții intratumorale a fost de 9,0 (interval, 4-10) în studiul primar și 9,0 (interval, 2-9) în studiul de extensie; numărul mediu de leziuni injectate a fost 2,0. Expunerea medie ± abaterea standard V937 a fost de 3,49 ± 1,85 TCID50 × 10 9 /mL, corespunzătoare unei doze medii ± abatere standard de 0,43 ± 0,27 TCID 50 /kg × 10 9 /mL.
Rezultatele de eficacitate sunt rezumate în Tabelul 2 , inclusiv la pacienții cărora li se administrează ≥ 80% și < 80% din injecțiile programate și suplimentul de date. Modificările procentuale ale dimensiunilor leziunilor țintă, inclusiv leziunile pulmonare și hepatice țintă neinjectate, sunt prezentate în Figura 1.. Rata PFS la 6 luni per irRECIST (punctul final primar) a fost de 38,6% (22 din 57 de pacienti); dintre aceștia, la 6 luni, 5,3% (n = 3) au fost CR, 17,5% (n = 10) au fost PR și 15,8% (n = 9) au fost SD per irRECIST. Opt pacienți (14,0%) au fost clasificați ca PD per irRECIST, ceea ce a fost confirmat prin măsurarea ulterioară a tumorii între 4 și 6 săptămâni mai târziu, în măsura posibilului. Nu a fost efectuată nicio evaluare la 6 luni pentru 47,4% (27 din 57) dintre pacienți, în principal din cauza progresiei bolii care necesită terapie alternativă. Printre cei cinci pacienți care au primit anterior T-VEC, BOR a fost confirmată PR (n = 2) și SD (n = 3).
TABELUL 2. Răspunsuri terapeutice asociate cu tratamentul V937
FIG 1.Răspunsurile tumorale la tratamentul cu V937. (A) Modificare procentuală față de valoarea inițială în timp în leziunile injectate țintă la toți pacienții cu ≥ 1 evaluare scanată după momentul inițial. (B) Cea mai bună modificare procentuală față de valoarea inițială a leziunilor injectate țintă la toți pacienții cu ≥ 1 leziune țintă injectată după momentul inițial. Albastrul reprezintă pacienții cu boala în stadiul IIIC, roșu reprezintă stadiul bolii IVM1a, tealul reprezintă stadiul bolii IVM1b și portocaliul reprezintă stadiul bolii IVM1c. (C) Graficul în cascadă a celei mai bune modificări procentuale față de momentul inițial în leziuni individuale, țintă, pulmonare și hepatice, la toți pacienții cu ≥ 1 leziune țintă neinjectată după momentul inițial. Au fost opt pacienți cu un total de 13 leziuni viscerale. Dimensiunea tumorii a fost evaluată conform irRECIST prin evaluarea investigatorului. În (A), (B) și (C), liniile punctate orizontale reprezintă pragul de 20% pentru declararea progresiei bolii și pragul de -30% pentru declararea răspunsului la boală. (A și B) Răspunsuri la nivelul pacientului, fiecare linie sau bară reprezentând un pacient. (C) Răspunsuri la nivelul leziunii viscerale individuale, fiecare bară reprezentând o leziune. Răspunsurile se bazează numai pe leziunile țintă. irRECIST, criterii de evaluare a răspunsului legat de imun în tumorile solide; V937, Coxsackievirus A21.
Răspunsurile clinice au inclus regresia leziunilor superficiale cutanate și ale țesuturilor moi injectate și neinjectate, precum și tumori viscerale profunde, neinjectate ( Fig 2) .). Din totalul de 117 leziuni țintă, 87 au fost injectate și 30 au fost neinjectate; per total, s-a observat o reducere de ≥ 30% față de valoarea inițială în 49,4% (43 din 87) din leziunile țintă injectate și 26,7% (8 din 30) din leziunile țintă neinjectate.
FIG 2.Exemple de răspunsuri ale pacientului. Răspunsul tipic este exemplificat la un pacient care a primit mai multe injecții în mai multe leziuni superficiale de melanom cutanat (A, stânga), iar atât leziunile injectate cât și cele locale neinjectate au regresat (A, dreapta) după tratamentul cu V937. La un alt pacient (B), o leziune mare a gâtului stâng a fost utilizată pentru injectarea V937 (stânga), iar leziunile viscerale profunde neinjectate în plămâni au regresat (dreapta), sugerând activitate antitumorală sistemică. Imagini prin amabilitatea doctorului Robert HI Andtbacka. V937, Coxsackievirus A21.
Curba Kaplan-Meier pentru PFS per irRECIST este prezentată în Figura 3A. Pe baza irRECIST, mediana (95% CI) PFS a fost de 5,7 (2,8 până la 11,1) luni; Ratele PFS Kaplan-Meier la 6, 9 și 12 luni au fost de 46,1% (32,2 la 58,9), 43,9% (30,1 la 56,8) și, respectiv, 32,9% (19,5 la 46,9). Nouasprezece pacienti care nu au progresat sau au murit au fost cenzurati; aceasta a inclus șase pacienți (doi PR și patru SD) cenzurați înainte de 6 luni, deoarece a fost ultima lor evaluare prin scanare.
FIG 3.PFS, OS, niveluri V937 și titruri de anticorpi anti-V937. (A) Curba Kaplan-Meier a PFS per irRECIST pentru toți cei 57 de pacienți din studiul CALM arătând o valoare mediană de 5,7 luni (IC 95%, 2,8 până la 11,1). (B) Curba Kaplan-Meier a OS pentru toți cei 57 de pacienți din studiul CALM arătând o valoare mediană de 25,6 luni (IC 95%, 16,7 până la 33,7). (C) OS în funcție de stadiul bolii, pe baza ediției a șaptea AJCC, care arată o îmbunătățire a OS pentru pacienții cu boală în stadiul IIIC sau IVM1a în comparație cu pacienții cu boala în stadiul IVM1b sau IVM1c. (D) Graficul de dispersie al nivelurilor de V937 după tratamentul cu V937 (valorile mediane sunt afișate la 30 de minute după injectare în studiul principal [inclusiv la BL]; valorile mediane au variat de la 0 la 13.158 în timpul studiului de extensie). (E) Titrurile de anticorpi anti-V937 în urma tratamentului cu V937 (procentul de pacienți cu titruri > 1:16 sunt prezentate în studiul principal; 100% dintre pacienți au continuat să aibă titruri > 1:16 în timpul studiului de extensie). AJCC, Comitetul mixt american pentru cancer; BL, linia de bază; irRECIST, criterii de evaluare a răspunsului legat de imun în tumorile solide; OS, supraviețuire globală; PFS, supraviețuire fără progresie; UND, nedetectabil; V937, Coxsackievirus A21.
În general, 38,6% (22 din 57) dintre pacienți au răspuns (28,1% [16 din 57] confirmați) pe baza irRECIST ( Tabelul 2 ) și 21,1% (12 din 57) au avut un răspuns durabil (menținerea PR). sau CR per irRECIST timp de ≥ 6 luni) cu o durată mediană de 10,1 luni (interval, 5,8-14,8 luni). La pacienții cărora li sa administrat ≥ 80% din injecțiile programate, 27,5% (11 din 40 de pacienți) au avut un răspuns durabil care a durat o medie de 9,7 luni (interval, 5,8-14,8 luni).
Curba Kaplan-Meier pentru OS este prezentată în Figura 3B. Mediana (95% CI) OS a fost de 25,6 (16,7 până la 33,7) luni. Supraviețuirea mediană (95% CI) a fost mai lungă pentru pacienții cu boală în stadiul IIIC sau IVM1a (26,6 [25,6 până la neatins] luni) față de stadiul IVM1b sau boala M1c (16,1 [9,5 până la 17,3] luni; Fig 3C )). Pentru toți pacienții tratați, ratele de supraviețuire Kaplan-Meier la 6, 9 și 12 luni au fost de 94,7% (84,6 la 98,3), 84,2% (72,1 la 92,5) și, respectiv, 75,4% (62,2 la 85,9). La 12 luni, 43 din 57 de pacienți (75,4%) erau în viață; 31 de pacienți care nu au murit sau care au fost pierduți de urmărire au fost cenzurați.
Rezultate suplimentare de eficacitate (de exemplu, evaluarea funcțională a terapiei cancerului – chestionarul modificator de răspuns biologic 16 ) sunt în Suplimentul de date.Siguranță
Creșterea ARN viral seric a fost observată la 30 de minute după injecție la fiecare vizită ( Fig 3D). Nivelurile serice de ARN viral au crescut odată cu administrarea suplimentară din ziua 1, atingând un maxim în zilele 64-85, când nivelul anticorpilor seric tinde să atingă un maxim, deși influența datelor lipsă și a abandonului pacientului asupra mediei face acest lucru dificil de evaluat. . Nu a fost detectat niciun virus în probele de urină.
AE legate de V937 au fost în general uşoare sau moderate ca severitate. Dintre 57 de pacienți, 54 (94,7%) au prezentat EA. Dintre aceștia, 45 de pacienți (78,9%) au prezentat 235 de reacții adverse asociate tratamentului, cel mai frecvent durere la locul injectării, oboseală și frisoane ( Tabelul 3 ). Toate AE legate de tratament au fost de gradul 1 (95,7% din toate evenimentele la 64,9% dintre pacienți) sau de gradul 2 (4,3% din toate evenimentele la 14,0% dintre pacienți). Trei pacienți (5,3%) au întrerupt tratamentul din cauza reacțiilor adverse nelegate de tratament: unul a decedat din cauza sepsisului de gradul 5 și a șocului cardiogen; unul s-a retras din cauza oboselii de gradul 2 și a disfuncției motorii de gradul 3; iar unul s-a retras din cauza emboliei pulmonare de gradul 4 (a se vedea suplimentul de date pentru rezultate suplimentare de siguranță).
TABELUL 3. AE legate de tratament asociate cu tratamentul cu V937 și care apar la ≥ 4 pacienți a
Toți cei 57 de pacienți au avut titruri de anticorpi neutralizanți < 1:16 înainte de inițierea tratamentului. Numărul de pacienți cu titruri de anticorpi neutralizanți ≥ 1:16 a crescut în timp ( Fig 3E). Înainte de ziua 8, au existat titruri de anticorpi neutralizanți neglijabile; cu toate acestea, până în ziua 22, 96,5% dintre pacienți au avut un titru ≥ 1:16, iar titrurile de anticorpi neutralizanți ale tuturor pacienților au fost ≥ 1:16 după aceea. Toți pacienții cu un răspuns cu anticorpi V937 în zilele 1, 3 și 5 au rămas seropozitivi în restul studiului primar. Toți pacienții din extensie au rămas seropozitivi în acea perioadă de studiu, care în unele cazuri s-a extins la câteva luni după ultima doză de V937. Anticorpii antivirali de neutralizare nu au anulat răspunsurile antitumorale.DISCUŢIEAlegeÎnceputul paginiiAbstractINTRODUCEREPACIENȚI ȘI METODEREZULTATEDISCUȚIE <<REFERINȚE
În acest studiu de fază II al pacienților cu melanom în stadiul IIIC sau IV nerezecabil tratați cu V937 intratumoral, 38,6% dintre pacienți prezentau CR, PR sau SD documentat la 6 luni sau mai mult, în timp ce mediana globală a SLP pe analiza Kaplan-Meier (luând în considerare pacienții cenzurati care au abandonat înainte de 6 luni) a fost de 5,7 luni. Rezultatele noastre de supraviețuire au depășit standardele Korn 17 specificate de protocol; cu toate acestea, acele valori de referință din 2008 s-au bazat pe melanomul metastatic în stadiul IV, în timp ce studiul nostru a inclus pacienți cu melanom în stadiul IIIC și IV. În plus, valorile de referință Korn sunt mai puțin relevante astăzi, deoarece peisajul tratamentului melanomului a avansat, inclusiv disponibilitatea inhibitorilor punctelor de control imunitare. A avut loc regresia leziunilor atât injectate cât și neinjectate (de exemplu, plămâni și hepatice). V937 intratumoral a fost bine tolerat. Colectiv, aceste date demonstrează că V937 are activitate antitumorală sistemică care justifică investigații suplimentare.
Este dificil să comparăm rezultatele noastre cu cele din alte studii de melanom care evaluează OV. De exemplu, studiul OPTiM de fază III cu T-VEC a folosit criterii diferite pentru a evalua răspunsurile (OMS mai degrabă decât irRECIST) și numai OPTiM a înrolat pacienți cu melanom în stadiul IIIB (aproximativ 8%). 5 Având în vedere aceste avertismente, este interesant că ratele DRR și CR au fost similare în CALM (21,1% și, respectiv, 14,0%, pe baza irRECIST) și OPTiM (19,3% și, respectiv, 16,9%, la analiza finală). 6 OS de un an în CALM (75,4%) a fost mai mare decât cel din studiul de fază II cu T-VEC (58%) 18 și similar cu rezultatul final OPTiM (73,7%). 6Rezultatele OS în CALM trebuie interpretate cu prudență, având în vedere rata relativ mare de întrerupere; de asemenea, tratamentele poststudiu nu au fost surprinse. Majoritatea efectelor adverse legate de tratament în CALM au fost de gradul 1; niciunul nu a fost de grad ≥ 3. În schimb, în OPTiM, 11% dintre pacienții tratați cu T-VEC‒ au prezentat reacții adverse de grad 3 sau 4 legate de tratament; deși celulita a fost singurul AE de gradul 3 sau 4, indiferent de relația cu medicamentul studiat, care a apărut la > 2% dintre pacienți. 5 , 6 Aprobarea și utilizarea imunoterapiilor oferă un factor de confuzie suplimentar pentru compararea încrucișată.
Unele dintre diferențele menționate mai sus ar putea fi de așteptat, deoarece V937 și T-VEC sunt fundamental diferite în ceea ce privește tipul de virus și mecanismul de infecție (de exemplu, V937 folosește ICAM-1 sau receptorii factorului de accelerare a dezintegrarii, în timp ce T-VEC se bazează pe nectine legate de suprafață pentru a avea acces la celulele tumorale 19 ). Unele AE asociate cu T-VEC pot avea legătură cu faptul că acesta este un HSV-1 și/sau producția de GM-CSF. Diferențele dintre virusurile ADN și ARN se pot referi, de asemenea, la starea de bază a expresiei cGAS-STING în celulele melanomului infectate. 20Alte studii care evaluează rolul expresiei bazale de cGAS-STING ca biomarker al activității OV par justificate. Profilul de siguranță al V937 a fost favorabil și în concordanță cu tolerabilitatea emergentă observată cu alte OV. Efectul OV în celulele tumorale (de exemplu, creșterea celulelor T CD8-pozitive și a expresiei PD-L1) 21 susține includerea lor în regimurile combinate. Datele preliminare cu V937 au sugerat activitate antitumorală și nicio toxicitate crescută atunci când este combinată cu alte terapii anticanceroase (de exemplu, pembrolizumab și ipilimumab). 22 , 23
Am detectat ARN viral în ser la 30 de minute după dozare, ceea ce indică faptul că administrarea intratumorală a permis totuși virusului să ajungă în circulația sistemică. Nivelurile serice de ARN viral au crescut cu doze repetate, tinzând să ajungă la vârf între zilele 64-85; cu toate acestea, dimensiuni mai mici ale eșantionului în momente ulterioare (de exemplu, date lipsă și întreruperi) ar putea să fi influențat rezultatele noastre. În mod corespunzător, titrurile de anticorpi neutralizanți au început să crească în jurul zilei 8 și toți pacienții au rămas seropozitivi ulterior. Anticorpii de neutralizare nu au inhibat răspunsurile clinice, în concordanță cu ipoteza că eficacitatea a fost mediată de activarea imună.
Prezentat parțial la reuniunea anuală a Societății Americane de Oncologie Clinică (ASCO), Chicago, IL, 30 mai-3 iunie 2014; Societatea Europeană de Oncologie Medicală, Madrid, Spania, 26-30 septembrie 2014; Society for Melanoma Research 2014 International Congress, Zurich, Elveția, 13-16 noiembrie 2014; Reuniunea anuală ASCO, Chicago, IL, 29 mai-2 iunie 2015; și reuniunea anuală ASCO, Chicago, IL, 3-7 iunie 2016.
A SUSTINE
Sprijinit de Viralytics Limited, o subsidiară deținută în totalitate de Merck & Co, Inc, Kenilworth, NJ.
INFORMAȚII ÎN PROCEDURILE CLINICE
NCT01227551 (studiu principal) și NCT01636882 (studiu de extensie)DECLARAȚIE PRIVIND DISTRIBUIREA DATELOR
Merck Sharp & Dohme Corp, o subsidiară a Merck & Co, Inc, Kenilworth, NJ (MSD) se angajează să ofere cercetătorilor științifici calificați acces la date anonimizate și rapoarte de studii clinice din studiile clinice ale companiei în scopul efectuării de cercetări științifice legitime. MSD este, de asemenea, obligat să protejeze drepturile și confidențialitatea participanților la studiu și, ca atare, are o procedură în vigoare pentru evaluarea și îndeplinirea cererilor de partajare a datelor din studiile clinice ale companiei cu cercetători științifici externi calificați. Site-ul web de partajare a datelor MSD (disponibil la: http://engagezone.msd.com/ds_documentation.php) prezintă procesul și cerințele pentru transmiterea unei cereri de date. Aplicațiile vor fi evaluate cu promptitudine în ceea ce privește caracterul complet și conformitatea cu politicile. Solicitările fezabile vor fi analizate de un comitet de experți în domeniu MSD pentru a evalua validitatea științifică a cererii și calificările solicitanților. În conformitate cu legislația privind confidențialitatea datelor, cei care depun cererile aprobate trebuie să încheie un acord standard de partajare a datelor cu MSD înainte de a se acorda accesul la date. Datele vor fi disponibile pentru cerere după aprobarea produsului în Statele Unite și Uniunea Europeană sau după întreruperea dezvoltării produsului. Există circumstanțe care pot împiedica MSD să partajeze datele solicitate, inclusiv reglementări specifice țării sau regiunii. Dacă cererea este respinsă, aceasta va fi comunicată anchetatorului. Accesul la datele biomarkerilor genetici sau exploratori necesită un plan de analiză statistică detaliat, bazat pe ipoteze, care este dezvoltat în colaborare de solicitant și experții în materie de MSD; după aprobarea planului de analiză statistică și execuția unui acord de partajare a datelor, MSD fie va efectua analizele propuse și va împărtăși rezultatele cu solicitantul, fie va construi covariate ale biomarkerilor și le va adăuga într-un fișier cu date clinice care este încărcat într-o analiză. portal astfel încât solicitantul să poată efectua analizele propuse.CONTRIBUȚII AUTORULUI
Concepție și design: Robert HI Andtbacka, Karl Zhou, Howard L. Kaufman
Furnizarea de materiale de studiu sau pacienți: Brendan Curti, Lynn E. Spitler, Karl Zhou, Howard L. Kaufman
Colectarea și asamblarea datelor: Robert HI Andtbacka, Brendan Curti, Gregory A. Daniels, Eric D. Whitman, Jose Lutzky, Lynn E. Spitler, Karl Zhou, Mark Grose, Howard L. Kaufman
Analiza și interpretarea datelor: Robert HI Andtbacka, Brendan Curti, Gregory A. Daniels, Sigrun Hallmeyer, Eric D. Whitman, Karl Zhou, Praveen K. Bommareddy, Meihua Wang, Cai Wu, Howard L. Kaufman
Scrierea manuscrisului: Toți autorii
Aprobarea finală a manuscrisului: Toți autorii
Responsabil pentru toate aspectele lucrării: toți autoriiDEZVĂLUREA AUTORILOR DE POTENȚIALE CONFLICTE DE INTERESERăspunsuri clinice ale coxsackievirusului oncolitic A21 (V937) la pacienții cu melanom nerezecabil
Următoarele reprezintă informații de divulgare furnizate de autorii acestui manuscris. Toate relațiile sunt considerate compensate, dacă nu se specifică altfel. Relațiile sunt deținute de sine, dacă nu este menționat. I = Membru imediat al familiei, Inst = Instituția mea. Este posibil ca relațiile să nu aibă legătură cu subiectul acestui manuscris. Pentru mai multe informații despre politica ASCO privind conflictele de interese, vă rugăm să consultați www.asco.org/rwc sau ascopubs.org/jco/authors/author-center .
Open Payments este o bază de date publică care conține informații raportate de companii despre plățile efectuate către medicii autorizați din SUA ( Open Payments ).
Robert HI Andtbacka
Angajare: Novartis, Merck Sharp & Dohme, Seven and Eight Biopharmaceuticals
Acțiuni și alte interese de proprietate: Novartis, Merck Sharp și Dohme
Brendan Curti
Onorari: Grupul Clinigen, Nektar
Rol de consultanță sau consultanță: Merck
Finanțarea cercetării: Bristol Myers Squibb, Galectin Therapeutics, Clinigen Group
Brevete, drepturi de autor, alte proprietăți intelectuale: biomarkeri pentru răspunsul OX40
Călătorii, Cazare, Cheltuieli: Agonox
Gregory A. Daniels
Onorari: Sanofi/Regeneron
Rol de consultanță sau consultanță: Sanofi/Regeneron
Acțiuni și alte interese de proprietate: Nuclear RNA Networks Inc
Praveen K. Bommareddy
Angajare: Replimune
Acțiuni și alte interese de proprietate: Replimune
Mark Grose
Rol de consultanță sau consultanță: ImmVirX
Meihua Wang
Angajare: Merck
Acțiuni și alte interese de proprietate: Merck
Cai Wu
Angajare: Merck (la momentul în care lucrarea a fost efectuată)
Acțiuni și alte interese de proprietate: Merck Sharp & Dohme
Howard L. Kaufman
Angajare: Imunizare
Conducere: Imunizare
Acțiuni și alte interese de proprietate: Imuneering
Onorari: Societatea pentru Imunoterapie a Cancerului
Nu au fost raportate alte posibile conflicte de interese.
CONFIRMARE
Autorii îi mulțumesc lui Darren Shafren, fostul Viralytics Limited, o subsidiară deținută în totalitate de Merck & Co, Inc, Kenilworth, NJ, pentru contribuțiile sale la studiu. Autorii îi mulțumesc, de asemenea, lui Emilee Connors, un angajat al Merck Sharp & Dohme Corp, o subsidiară a Merck & Co, Inc, Kenilworth, NJ, pentru contribuția ei utilă în timpul dezvoltării manuscrisului. Asistența medicală pentru scriere a fost oferită de Michael S. McNamara, MS, de la ICON plc (North Wales, PA). Această asistență a fost finanțată de Merck Sharp & Dohme Corp, o subsidiară a Merck & Co, Inc, Kenilworth, NJ.REFERINȚEAlegeÎnceputul paginiiAbstractINTRODUCEREPACIENȚI ȘI METODEREZULTATEDISCUŢIEREFERINȚE <<
1.
Bradley S , Jakes AD , Harrington K , et al: Applications of coxsackievirus A21 in oncology . Oncolytic Virother 3: 47 – 55 , 2014 Crossref , Medline , Google Scholar
2.
Taube JM , Galon J , Sholl LM , et al: Implications of the tumor immune microenvironment for staging and therapeutics . Mod Pathol 31: 214 – 234 , 2018 Crossref , Medline , Google Scholar
3.
Kaufman HL , Kohlhapp FJ , Zloza A : Viruși oncolitici: O nouă clasă de medicamente pentru imunoterapie . Nat Rev Drug Discov 14: 642 – 662 , 2015 Crossref , Medline , Google Scholar
4.
Imlygic (Talimogene Laherparepvec). Informații complete de prescripție, Thousand Oaks, CA , BioVex Inc, o subsidiară a Amgen Inc , 2018 Google Scholar
5.
Andtbacka RH , Kaufman HL , Collichio F , et al: Talimogene laherparepvec îmbunătățește rata de răspuns durabil la pacienții cu melanom avansat . J Clin Oncol 33: 2780 – 2788 , 2015 Link , Google Scholar
6.
Andtbacka RHI , Collichio F , Harrington KJ , și colab.: Analize finale ale OPTiM: Un trial randomizat de fază III de talimogene laherparepvec versus factor de stimulare a coloniilor de granulocite-macrofage în melanomul stadiul III-IV nerezecabil . J Immunother Cancer 7: 145 , 2019 Crossref , Medline , Google Scholar
7.
Xia T , Konno H , Barber GN : Pierderea recurentă a semnalizării STING în melanom se corelează cu susceptibilitatea la oncoliză virală . Cancer Res 76: 6747 – 6759 , 2016 Crossref , Medline , Google Scholar
8.
Kageshita T , Yoshii A , Kimura T , și colab: Relevanța clinică a expresiei ICAM-1 în leziunile primare și serul pacienților cu melanom malign . Cancer Res 53: 4927 – 4932 , 1993 Medline , Google Scholar
9.
Hersey P , Gallagher S : Imunoterapie intralesională pentru melanom . J Surg Oncol 109: 320 – 326 , 2014 Crossref , Medline , Google Scholar
10.
Edge SB , Byrd DR , Compton CC , et al: AJCC Cancer Staging Manual ( ed 7 ). Chicago, IL , Comitetul mixt american pentru cancer , 2010 Google Scholar
11.
Balch CM , Gershenwald JE , Soong SJ și colab.: Versiunea finală a stadializării și clasificării melanomului AJCC din 2009 . J Clin Oncol 27: 6199 – 6206 , 2009 Link , Google Scholar
12.
Eisenhauer EA , Therasse P , Bogaerts J , et al: New Response Evaluation Criteria in Solid Tumours: Revised RECIST guideline (versiunea 1.1) . Eur J Cancer 45: 228 – 247 , 2009 Crossref , Medline , Google Scholar
13.
Au GG , Beagley LG , Haley ES , et al: Oncolysis of malign human melanom tumors by Coxsackieviruses A13, A15 and A18 . Virol J 8: 22 , 2011 Crossref , Medline , Google Scholar
14.
Bohnsack O , Hoos A , Ludajic K : Adaptarea criteriilor de răspuns imun legat: irRECIST . Ann Oncol 25: iv369 , 2014 Crossref , Google Scholar
Bacik J , Mazumdar M , Murphy BA , et al: The Functional Assessment of Cancer Therapy-BRM (FACT-BRM): Un nou instrument pentru evaluarea calității vieții la pacienții tratați cu modificatori ai răspunsului biologic . Qual Life Res 13: 137 – 154 , 2004 Crossref , Medline , Google Scholar
17.
Korn EL , Liu PY , Lee SJ și colab.: Meta-analiză a studiilor de grup cooperant de fază II în melanomul metastatic în stadiul IV pentru a determina reperele de supraviețuire fără progresie și globală pentru studiile viitoare de fază II . J Clin Oncol 26: 527 – 534 , 2008 Link , Google Scholar
18.
Senzer NN , Kaufman HL , Amatruda T și colab.: Trial clinic de fază II al unui factor de stimulare a coloniilor de granulocite-macrofage care codifică herpesvirusul oncolitic de a doua generație la pacienții cu melanom metastatic nerezecabil . J Clin Oncol 27: 5763 – 5771 , 2009 Link , Google Scholar
19.
Kohlhapp FJ , Kaufman HL : Căi moleculare: Mecanism de acțiune pentru talimogene laherparepvec, o nouă imunoterapie cu virus oncolitic . Clin Cancer Res 22: 1048 – 1054 , 2016 Crossref , Medline , Google Scholar
20.
Bommareddy PK , Zloza A , Rabkin SD și colab.: Imunoterapia cu virus oncolitic induce moartea celulelor imunogene și depășește deficiența STING în melanom . Oncoimmunology 8: 1591875 , 2019 Crossref , Medline , Google Scholar
21.
Ribas A , Dummer R , Puzanov I , et al: Viroterapia oncolitică promovează infiltrarea intratumorală a celulelor T și îmbunătățește imunoterapia anti-PD-1 . Celula 170: 1109 – 1119.e10 , 2017 Crossref , Medline , Google Scholar
22.
Curti B , Richards J , Hallmeyer S , et al: Studiul MITCI (faza 1b): O nouă combinație de imunoterapie de Coxsackievirus A21 intralezional și ipilimumab sistemic la pacienții cu melanom avansat, cu sau fără tratament anterior cu punct de control imun . Cancer Res 77, 2017 (abstr CT114) Google Scholar
23.
Silk A , Kaufman H , Gabrail N și colab.: CAPRA: A phase 1b study of intratumoral Coxsackievirus A21 (CVA21) and systemic pembrolizumab in advanced melanom patients . J Immunother Cancer 5: 128 , 2017 Google Scholar
Pacienții cu melanom care au raportat că au consumat mai multe alimente bogate în fibre atunci când au început tratamentul cu imunoterapie au supraviețuit mai mult fără evolutia cancerului decât pacienții cu un aport insuficient de fibre alimentare, potrivit unei noi cercetări publicate de Spencer și colab. în Science . Beneficiul a fost cel mai vizibil la pacienții care nu au luat suplimente probiotice disponibile comercial. Studiile preclinice paralele au susținut rezultatele observaționale.
Jennifer Wargo, MD
„Cercetările din partea echipei noastre și a altora au arătat că microbii intestinali influențează răspunsul la tratamentul cu imunoterapie, dar rolul dietei și al suplimentelor probiotice nu a fost bine studiat”, a spus co-autorul principal Jennifer Wargo, MD , profesor de medicină genomică și oncologie chirurgicală. la Universitatea din Texas MD Anderson Cancer Center. „Studiul nostru pune în lumină efectele potențiale ale dietei și ale consumului de suplimente ale pacientului la începerea tratamentului cu blocarea punctului de control imunitar . Aceste rezultate oferă un sprijin suplimentar pentru studiile clinice pentru a modula microbiomul cu scopul de a îmbunătăți rezultatele cancerului folosind strategii alimentare și alte strategii.”
Supraviețuire fără progresie a bolii îmbunătățită
Pacienții care au raportat că au consumat mai multe fructe, legume, leguminoase și cereale integrale au atins pragul de studiu pentru un aport suficient de fibre. Cei 37 de pacienți cu un aport suficient de fibre au avut o supraviețuire fără progresie a bolii îmbunătățită (mediană = neatins) comparativ cu cei 91 de pacienți cu aport insuficient de fibre (mediana = 13 luni). Fiecare creștere cu 5 grame a aportului zilnic de fibre a fost asociată cu un risc cu 30% mai mic de progresie a cancerului sau de deces.
Atunci când pacienții au fost grupați în continuare în funcție de dieta bogată sau săracă în fibre și utilizarea suplimentelor probiotice disponibile comercial,răspunsul la imunoterapie a fost observat la 18 din 22 de pacienți (82%) care au raportat atât un aport suficient de fibre, cât și nici o utilizare a probioticelor în comparație cu răspunsul observat la 60 (59%) din 101 pacienți care au raportat fie un aport insuficient de fibre, fie utilizarea de probiotice.
Răspunsul a fost definit ca contracție completă sau parțială completă sau parțială a tumorii sau boală stabilă timp de cel puțin 6 luni. Numai utilizarea probioticelor nu a fost asociată cu o diferență semnificativă în supraviețuirea fără progresie sau cu șansele de răspuns la imunoterapie.
„Fibrele alimentare sunt importante pentru sănătatea intestinului, la fel cum sunt importante pentru sănătatea generală, iar cele două lucruri sunt foarte strâns legate”, a spus co-autorul principal Carrie Daniel-MacDougall, PhD , profesor asociat de epidemiologie la MD Anderson. „În acest studiu, am văzut că fibrele alimentare pot fi, de asemenea, importante pentru tratamentul cancerului, ceea ce ne duce la un punct în care putem proiecta studii intervenționale pentru a răspunde întrebărilor la care pacienții își doresc cu adevărat răspuns: „Contează ceea ce mănânc acum și ar putea are impact asupra rezultatului tratamentului meu? Suntem uniți în a lucra pentru a găsi răspunsuri pentru pacienții noștri.”
Credit foto: Getty
Diferențele în microbiota intestinală și modelele preclinice
Studiul a început cu analiza profilurilor microbiomului intestinal la 438 de pacienți cu melanom, dintre care 321 aveau boală în stadiu avansat și au fost tratați cu terapie sistemică și 293 dintre aceștia au avut un răspuns evaluabil la tratament în curs de urmărire. Majoritatea acestor pacienți (87%) au primit blocare a punctelor de control imun, cel mai frecvent inhibitori PD-1. Un total de 158 de pacienți au completat, de asemenea, un studiu privind stilul de viață privind utilizarea antibioticelor și a probioticelor; dintre aceștia, 128 au completat un chestionar alimentar pe măsură ce au început terapia cu puncte de control imun.
Echipa de cercetare și-a consolidat descoperirile anterioare, care au arătat o abundență mai mare de Ruminococcaceae și Faecalibacterium prausnitzii – bacterii binecunoscute și potențial benefice implicate în digestia fibrelor sau a amidonului – la pacienții care au răspuns la imunoterapie. Spre deosebire de descoperirile anterioare, diversitatea generală a bacteriilor intestinale nu a fost asociată cu răspunsul la imunoterapie, posibil datorită dimensiunii mai mari a acestei cohorte de pacienți.
Cercetătorii au testat, de asemenea, dietele bogate în fibre și utilizarea probioticelor în mai multe modele preclinice de melanom pentru a arunca lumină asupra mecanismelor potențiale din spatele constatărilor observaționale de la cohortele de pacienți. În mai multe modele, utilizarea probioticelor a fost asociată cu răspunsul afectat la blocarea punctului de control imunitar, tumori mai mari, diversitate mai scăzută a microbiomului intestinal și niveluri mai scăzute de celule T citotoxice în micromediul tumoral. O dietă bogată în fibre a fost asociată cu o creștere mai lentă a tumorii și cu o frecvență semnificativ mai mare a celulelor T CD4-pozitive în modelele preclinice tratate cu inhibitori PD-1.
Studiu clinic pentru a construi pe constatări, testarea efectului intervenției dietetice
Pe baza constatărilor timpurii ale studiului, un studiu clinic randomizat (identificator ClinicTrials.gov: NCT04645680 ), condus de co-primul autor Jennifer McQuade, MD , profesor asistent de oncologie medicală melanomului la MD Anderson, va examina modul în care dietele pe bază de alimente integrale cu conținutul variabil de fibre afectează microbiomul și răspunsul imunitar. În prezent, studiul include pacienți cu melanom în stadiul III până la IV care primesc imunoterapie.
Dezvăluire: Studiul a fost susținut de Melanoma Moon Shot®, parte a Programului Moon Shots® al MD Anderson. Sprijin suplimentar pentru cercetare a inclus finanțare de la National Institutes of Health și National Cancer Institute, Andrew Sabin Family Fellowship Program, Departamentul de Apărare, MD Anderson Multidisciplinary Research Program, MD Anderson Physician Scientist Program, Melanoma Research Alliance, Sean Parker Institute for Cancer Imunotherapy at MD Anderson, Stand Up to Cancer și Fundația Binatională de Știință SUA-Israel. Pentru dezvăluiri complete ale autorilor studiului, vizitați science.org .
Inozitol hexafosfat (IP6) numit și acid fitic este un carbohidrat polifosforilat care se găsește în mod natural în cereale, nuci, cereale și alimente bogate în fibre. S-a demonstrat că inhibă creșterea multor linii celulare tumorale diferite atât in vitro, cât și in vivo, cum ar fi colonul, pancreasul, ficatul, prostata și chiar melanomul. Vitamina B inozitol este un precursor al IP6 și un alt compus natural cu proprietăți anticancerigene.
Prezentăm un raport de caz al unui pacient cu melanom metastatic care a refuzat terapia alopata tradițională și a optat să încerce suplimentul contrainitol IP6 + inozitol. Spre surprinderea noastră, pacientul a obținut o remisie completă și rămâne în remisie 3 ani mai târziu.
Pe baza acestui caz și a studiilor preclinice anterioare, credem că sunt indicate cercetări suplimentare în explorarea efectelor antiproliferative și potențiale de stimulare a imunității IP6 + inozitol la pacienții cu melanom metastatic
Khurana, Sharad; Baldeo, Candice; Joseph, Richard W.
Acest articol a fost citat de alte articole din PMC.
Abstract
Datele preliminare ar sugera că hormonul pineal, melatonina (MLT), poate spori eficacitatea anti-tumorale a tamoxifenului (TMX).Atât MLT cât și TMX au fost utilizați ca agenți unici în tratamentul paliativ al neoplasmelor metastatice, altele decât tumorile clasice dependente de hormoni, fără, însă, o eficacitate clară.Pe această bază, a fost efectuat un studiu de fază II cu TMX plus MLT la pacienți cu tumoare solidă metastatică care nu se poate trata.Studiul a cuprins 25 de pacienți cu tumori solide metastatice, altele decât cancerul de sân și cancerul de prostată (șase tumori primare necunoscute; patru melanom; patru carcinom uterin de col uterin; cinci cancer de pancreas; trei hepatocarcinom; două cancer de ovar; unul de cancer pulmonar care nu are celule mici), pentru care nu a fost disponibilă nici o altă terapie standard eficientă, din cauza condițiilor clinice precare, fără răspuns la chimioterapii anterioare și / sau tumori rezistente la chimioterapie.Ambele medicamente au fost administrate oral în fiecare zi până la progresia bolii (TMX, 20 mg zi-1 la prânz; MLT, 20 mg zi-1 seara).Trei pacienți au avut un răspuns parțial (PR) (12%; 95% limite de încredere 2-24%) (un carcinom de col uterin; un melanom; o tumoră primară necunoscută).O boală stabilă (SD) a fost realizată la alți 13 pacienți, în timp ce ceilalți nouă pacienți au progresat.Starea de performanță (PS) s-a îmbunătățit la 9/25 de pacienți, al căror scor mediu a crescut de la 50% la 70%.În sfârșit, a fost observată o supraviețuire mai mare de 1 an la 7/25 (28%) pacienți.Acest studiu în faza a II-a ar sugera că combinația neuroendocrină cu TMX plus MLT poate avea un anumit beneficiu la pacienții cu tumori solide metastatice netratabile, fie în controlul proliferării celulelor canceroase, fie în îmbunătățirea PS.
Text complet
Textul complet este disponibil ca o copie scanată a versiunii originale de imprimare.Obțineți o copie tipărită (fișier PDF) a articolului complet (576K) sau faceți clic pe o imagine de pagină de mai jos pentru a parcurge pagina cu pagină.Link-uri către PubMed sunt de asemenea disponibile pentru referințe selectate .
1466
1467
1468
Referințe selectate
Aceste referințe sunt în PubMed.Aceasta poate să nu fie lista completă de referințe din acest articol.
Beutler B, Cerami A. Cachectină: mai mult decât un factor de necroză tumorală.N Engl J Med.1987 12 februarie;316 (7): 379–385.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Broder S, Muul L, Waldmann TA.Celule supresoare în boala neoplazică.J Natl Cancer Inst.1978 iul;61 (1): 5–11.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Inge TH, Hoover SK, Susskind BM, Barrett SK, Bear HD.Inhibarea răspunsurilor limfocitelor T citotoxice specifice tumorii prin transformarea factorului de creștere beta 1. Cancer Res.1992 15 mar;52 (6): 1386–1392.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Knabbe C, Lippman ME, Wakefield LM, Kland Flandra, Kasid A, Derynck R, Dickson RB.Dovadă că transformarea factorului de creștere-beta este un factor de creștere negativ reglat hormonal în celulele canceroase ale sânului uman.Cell.1987 13 februarie;48 (3): 417–428.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Lissoni P, Barni S, Crispino S, Tancini G, Fraschini F. Endocrine și efecte imunitare ale terapiei cu melatonină la pacienții cu cancer metastatic.Eur J Cancer Clin Oncol.1989 mai;25 (5): 789–795.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Lissoni P, Barni S, Cattaneo G, Tancini G, Esposti G, Esposti D, Fraschini F. Rezultate clinice cu hormonul pineal melatonină în cancerul avansat rezistent la terapiile antitumoare standard.Oncologie.1991;48 (6): 448–450.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Lissoni P, Barni S, Meregalli S, Fossati V, Cazzaniga M, Esposti D, Tancini G. Modularea terapiei endocrine a cancerului prin melatonină: un studiu de fază II a tamoxifenului, plus melatonina, la pacienții cu cancer de sân metastatic care progresează sub tamoxifen.Br J Rac.1995 Apr;71 (4): 854–856.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
Maestroni GJ, Conti A, Pierpaoli W. Melatonina pineală, rolul său fundamental imunoregulator în îmbătrânire și cancer.Ann NY Acad Sci.1988;521 : 140–148.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Pollak M, Costantino J, Polychronakos C, Blauer SA, Guyda H, Redmond C, Fisher B, Margolese R. Efectul tamoxifenului asupra nivelului factorului I de creștere a insulinei în serul pacienților cu cancer de sân în stadiul I.J Natl Cancer Inst.1990 7 noiembrie;82 (21): 1693–1697.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Regelson W, Pierpaoli W. Melatonina: un hormon antitumoral redescoperit?Relația sa cu receptorii de suprafață;metabolismul steroizilor sexuali, răspuns imunologic și factori cronobiologici în creșterea și terapia tumorii.Cancer Invest.1987;5 (4): 379–385.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Obiective: A explora dacă mortalitatea cauzată de cancerul mamar feminin, ovarian, colon și prostată au fost asociate negativ cu expunerea la soare.
Metode : Un studiu de caz de control al mortalității bazat pe un certificat de deces a fost realizat în cinci tipuri de cancer: cancer de piele feminin, ovarian, colon, prostată și non-melanom (ca un control pozitiv) pentru a examina asociațiile cu expunerea rezidențială și ocupațională la lumina soarelui.Cazurile au fost toate decesele cauzate de aceste tipuri de cancer între 1984 și 1995 în 24 de state din Statele Unite.Controalele, care au fost frecvența de vârstă, adaptate la o serie de cazuri, au excluzat decesele cauzate de cancer și anumite boli neurologice.Regresia logistică multiplă a fost utilizată într-un model care a inclus vârsta, sexul, rasa, expunerea rezidențială la lumina soarelui (bazată pe regiune) și statutul socioeconomic, expunerea ocupațională la lumina soarelui și activitatea fizică (ultimele trei bazate pe ocupația obișnuită).
Rezultate: Expunerea rezidențială la lumina soarelui a fost asociată negativ(adica INVERS) și semnificativ cu mortalitatea cauzată de cancerul mamar, ovarian, prostatic și de colon feminin.Doar cancerul de sân și de colon feminin, de asemenea, a arătat asociații negative semnificative cu locuri de muncă cu cea mai mare expunere ocupațională la lumina soarelui (proporție (OR) 0,82 (95% interval de încredere (95% CI) 0,70 până la 0,97) pentru cancerul de sân feminin; OR 0,90 (95% CI 0,86 până la 0,94) pentru cancer de colon).Pentru ambele tipuri de cancer, asocierea negativă cu lumina soarelui ocupațional a fost cea mai mare în regiunea geografică cu cea mai mare expunere la soare și a fost independentă de activitatea fizică la locul de muncă.Cancerul de piele non-melanom, așa cum era de așteptat, a fost asociat pozitiv atât cu lumina solară (atentie LUMINA SOLARA, NU vitamina D3) rezidențială, cât și profesională.
Concluzii: În acest studiu exploratoriu, spre deosebire de mortalitatea cauzată de cancerul de piele non-melanom, mortalitatea cauzată de cancerul de sân feminin și cancerul de colon au fost asociate în mod negativ atât cu lumina solară rezidențială, cât și profesională.
Acest articol a fost citat de alte articole din PMC.
Text complet
Textul complet al acestui articol este disponibil ca PDF (157K).
Referințe selectate
Aceste referințe sunt în PubMed.Aceasta poate să nu fie lista completă de referințe din acest articol.
Gorham ED, Garland FC, Garland CF.Lumina soarelui și incidența cancerului de sân în URSS.Int J Epidemiol.1990 Dec;19 (4): 820–824.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Garland FC, Garland CF, Gorham ED, Young JF.Variația geografică a mortalității prin cancer de sân în Statele Unite: ipoteză care implică expunerea la radiații solare.Prev. Med.1990 Nov;19 (6): 614–622.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Lefkowitz ES, Garland CF.Lumina soarelui, vitamina D și rata de mortalitate a cancerului ovarian la femeile din SUA.Int J Epidemiol.1994 Dec;23 (6): 1133–1136.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Schwartz GG, Hulka BS.Este deficitul de vitamina D un factor de risc pentru cancerul de prostată?(Ipoteză).Anticancer Res.1990 Sep-Oct;10 (5A): 1307–1311.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Hanchette CL, Schwartz GG.Modele geografice ale mortalității prin cancer de prostată.Dovadă pentru un efect protector al radiațiilor ultraviolete.Cancer.1992 15 decembrie;70 (12): 2861–2869.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Garland CF, Garland FC.Lumina soarelui și vitamina D reduc probabilitatea de cancer de colon?Int J Epidemiol.1980 Sep;9 (3): 227–231.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Braun MM, Helzlsouer KJ, Hollis BW, Comstock GW.Cancerul de colon și metabolitul seric al vitaminei D cu 10-17 ani înainte de diagnostic.Am J Epidemiol.1995 15 sept.;142 (6): 608–611.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Braun MM, Helzlsouer KJ, Hollis BW, Comstock GW.Cancerul de prostată și nivelurile prediagnostice ale metaboliților serici ai vitaminei D (Maryland, Statele Unite) Cancer Causes Control.1995 mai;6 (3): 235–239.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Gann PH, Ma J, Hennekens CH, Hollis BW, Haddad JG, Stampfer MJ.Metabolizarea vitaminei D în circulație în legătură cu dezvoltarea ulterioară a cancerului de prostată.Biomarkeri de cancer Epidemiol Prev.1996 Feb;5 (2): 121–126.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Hiatt RA, Krieger N, Lobaugh B, Drezner MK, Vogelman JH, Orentreich N. Prediagnostic vitamina D și cancer de sân.J Natl Cancer Inst.1998 18 mar;90 (6): 461–463.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Holick MF.Factorii de mediu care influențează producția cutanată de vitamina D. Am J Clin Nutr.1995 Mar;61 (3 supliment): 638S – 645S.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Martínez ME, WC Willett.Calciu, vitamina D și cancer colorectal: o revizuire a dovezilor epidemiologice.Biomarkeri de cancer Epidemiol Prev.1998 Feb;7 (2): 163–168.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Martínez ME, Giovannucci EL, Colditz GA, Stampfer MJ, Hunter DJ, Speizer FE, Wing A, Willett WC.Calciul, vitamina D și apariția cancerului colorectal la femei.J Natl Cancer Inst.1996 2 oct;88 (19): 1375–1382.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
John EM, Schwartz GG, Dreon DM, Koo J. Vitamina D și riscul de cancer de sân: Studiul de urmărire epidemiologică NHANES I, 1971-1975 – 1992. Studiu național de sănătate și nutriție.Biomarkeri de cancer Epidemiol Prev.1999 mai;8 (5): 399–406.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Janowsky EC, Lester GE, Weinberg CR, Millikan RC, Schildkraut JM, Garrett PA, Hulka BS.Asocierea între nivelurile scăzute de 1,25-dihidroxivitamina D și riscul de cancer de sânSănătate publică Nutr.1999 Sep;2 (3): 283–291.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Corder EH, Guess HA, Hulka BS, Friedman GD, Sadler M, Vollmer RT, Lobaugh B, Drezner MK, Vogelman JH, Orentreich N. Vitamina D și cancer de prostată: studiu prediagnostic cu seruri stocate.Biomarkeri de cancer Epidemiol Prev.1993 septembrie-oct;2 (5): 467–472.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Figgs LW, Dosemeci M, Blair A. Supravegherea limfomelor non-Hodgkin din Statele Unite ale Americii prin ocupație 1984-1989: un studiu de douăzeci și patru de certificate de deces.Am J Ind Med.1995 iunie;27 (6): 817–835.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Freedman DM, Dosemeci M, Alavanja MC.Mortalitate prin scleroză multiplă și expunere la radiații solare rezidențiale și profesionale: studiu de caz de control bazat pe certificate de deces.Ocuparea mediului Med.2000 iunie;57 (6): 418–421.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
Keller-Byrne JE, Khuder SA, Schaub EA.Meta-analize ale cancerului de prostată și agricultură.Am J Ind Med.1997 mai;31 (5): 580–586.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Cerhan JR, Cantor KP, Williamson K, Lynch CF, Torner JC, Burmeister LF.Mortalitatea prin cancer în rândul fermierilor din Iowa: rezultate recente, tendințe de timp și factori de viață (Statele Unite).Cancerul provoacă controlul.1998 mai;9 (3): 311–319.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Blair A, Zahm SH, Pearce NE, Heineman EF, Fraumeni JF., Jr Clues la etiologia cancerului din studii efectuate de fermieri.Scand J Work Environ Health.1992 august;18 (4): 209–215.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Green LW.Manual pentru notarea stării socioeconomice pentru cercetarea comportamentului în sănătate.Republica Sănătate Publică 1970 sept.85 (9): 815–827.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
McTiernan A, Ulrich C, Ardezie S, Potter J. Activitatea fizică și etiologia cancerului: asociații și mecanisme.Cancerul provoacă controlul.1998 Oct;9 (5): 487–509.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Albanes D, Blair A, Taylor PR.Activitate fizică și risc de cancer în populația NHANES I.Sănătate publică Am J.1989 iunie;79 (6): 744–750.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
OS Miettinen, Wang JD.O alternativă la raportul proporțional al mortalității.Am J Epidemiol.1981 iul;114 (1): 144–148.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Percy CL, Miller BA, Gloeckler Ries LA.Efectul modificărilor clasificării cancerului și exactitatea certificatelor de deces prin cancer asupra tendințelor mortalității prin cancer.Ann NY Acad Sci.1990;609 : 87–99.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Cooper SP, Buffler PA, Lee ES, Cooper CJ.Caracteristici de sănătate în funcție de cea mai îndelungată ocupație și industrie a ocupării forței de muncă: Statele Unite, 1980. Am J Ind Med.1993 iul;24 (1): 25–39.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Liu L, Deapen D, Bernstein L. Starea socioeconomică și cancerul sânului feminin și al organelor de reproducere: o comparație între populațiile rasiale / etnice din județul Los Angeles, California (Statele Unite).Cancerul provoacă controlul.1998 august;9 (4): 369–380.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Webb AR, Kline L, Holick MF.Influența sezonului și a latitudinii asupra sintezei cutanate a vitaminei D3: expunerea la lumina soarelui de iarnă la Boston și Edmonton nu va promova sinteza de vitamina D3 pe pielea umană.J Clin Endocrinol Metab.1988 august;67 (2): 373–378.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Garland C, Shekelle RB, Barrett-Connor E, Criqui MH, Rossof AH, Paul O. Vitamina D dietetică și calciu și riscul de cancer colorectal: un studiu prospectiv de 19 ani la bărbați.Lancet.1985 Feb 9;1 (8424): 307–309.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Bostick RM, Potter JD, Sellers TA, McKenzie DR, Kushi LH, Folsom AR.Relația de calciu, vitamina D și aportul de produse lactate cu incidența cancerului de colon în rândul femeilor în vârstă.Studiul de sănătate al femeii din Iowa.Am J Epidemiol.1993 15 iunie;137 (12): 1302–1317.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Kearney J, Giovannucci E, Rimm EB, Ascherio A, Stampfer MJ, Colditz GA, Aripă A, Kampman E, Willett WC.Calciu, vitamina D și alimente lactate și apariția cancerului de colon la bărbați.Am J Epidemiol.1996 mai 1;143 (9): 907–917.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Garland CF, Comstock GW, Garland FC, Helsing KJ, Shaw EK, Gorham ED.25 ser-hidroxivitamină D și cancer de colon: studiu prospectiv de opt ani.Lancet.1989 18 noiembrie;2 (8673): 1176–1178.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Tangrea J, Helzlsouer K, Pietinen P, Taylor P, Hollis B, Virtamo J, Albanes D. Nivelurile serice de metaboliți ai vitaminei D și riscul ulterior de cancer de colon și rect la bărbații finlandezi.Cancerul provoacă controlul.1997 iul;8 (4): 615–625.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Reichel H, Koeffler HP, Norman AW.Rolul sistemului endocrin al vitaminei D în sănătate și boli.N Engl J Med.1989 13 aprilie;320 (15): 980–991.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Frampton RJ, Omond SA, Eisman JA.Inhibarea creșterii celulelor canceroase umane de către metaboliții 1,25-dihidroxivitamină D3.Cancer Res.1983 Sep;43 (9): 4443–4447.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Lointier P, Wargovich MJ, Saez S, Levin B, Wildrick DM, Boman BM.Rolul vitaminei D3 în proliferarea unei linii celulare de cancer de colon uman in vitro.Anticancer Res.1987 iul-aug;7 (4B): 817–821.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Mantell DJ, Owens PE, Bundred NJ, Mawer EB, Canfield AE.1 alfa, 25-dihidroxivitamina D (3) inhibă angiogeneza in vitro și in vivo.Circ Res.2000 4 august;87 (3): 214–220.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
El Abdaimi K, Dion N, Papavasiliou V, Cardinal PE, Binderup L, Goltzman D, Ste-Marie LG, Kremer R. Analogul vitaminei D EB 1089 previne metastaza scheletică și prelungește timpul de supraviețuire la șoarecii nude transplantate cu celule canceroase ale sânului uman.Cancer Res.2000 15 august;60 (16): 4412–4418.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Colston KW, Berger U, Coombes RC.Rolul posibil pentru vitamina D în controlul proliferării celulelor canceroase de sân.Lancet.1989 28 ianuarie;1 (8631): 188–191.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Iino Y, Yoshida M, Sugamata N, Maemura M, Ohwada S, Yokoe T, Ishikita T, Horiuchi R, Morishita Y. 1 alfa-hidroxivitamină D3, hipercalcemie și suprimarea creșterii a 7,12-dimetilbenz [a] indusă de antracen [ tumori mamare de șobolan.Tratamentul cu cancerul de sân.1992;22 (2): 133–140.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Eisman JA, Barkla DH, Tutton PJ.Suprimarea creșterii in vivo a xenogrefelor tumorii solide de cancer uman cu 1,25-dihidroxivitamina D3.Cancer Res.1987 1 ianuarie;47 (1): 21–25.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Landin-Wilhelmsen K, Wilhelmsen L, Wilske J, Lappas G, Rosén T, Lindstedt G, Lundberg PA, Bengtsson BA.Lumina soarelui crește concentrația de vitamina D în serul 25 (OH), în timp ce 1,25 (OH) 2D3 nu este afectată.Rezultate ale unui studiu general al populației din Göteborg, Suedia (proiectul OMS MONICA).Eur J Clin Nutr.1995 iunie;49 (6): 400–407.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Articole de la medicina muncii și de mediu sunt furnizate aici, prin amabilitatea BMJ Publishing Group
3-Bromopiruvat (3BP) este un nou, promițător agent alchilant anticancer, cu mai multe funcții notabile.Pe lângă inhibarea enzimelor cheie ale glicolizei incluzând hexokinază II și lactat dehidrogenază (LDH), 3BP inhibă, de asemenea, selectiv fosforilarea oxidativă mitocondrială, angiogeneza și producerea de energie în celulele canceroase.Mai mult, 3BP induce producerea de peroxid de hidrogen în celulele canceroase (efect de stres oxidativ) și concurează cu substratul LDH piruvat și lactat.
Există un singur studiu clinic uman publicat care arată că 3BP a fost eficient în tratarea carcinomului hepatocelular fibrolamelar.
LDH este o măsură bună pentru evaluarea tumorii și prezice rezultatul tratamentului mai bine decât prezența unei mase tumorale reziduale.Conform efectului Warburg, LDH este responsabil de sinteza lactatului, care facilitează supraviețuirea celulelor canceroase, progresia, agresivitatea, metastaza și angiogeneza.Lactatul produs prin activitatea LDH alimentează populațiile de celule aerobe din tumorile prin simbioză metabolică.
În melanom, cel mai mortal cancer de piele, moartea celulelor necrotice a indus 3BP în celulele sensibile, în timp ce conținutul ridicat de glutation (GSH) a făcut ca alte celule de melanom să fie rezistente la 3BP.Utilizarea concomitentă a unui depletor/ terminator de GSH cu 3BP a dus la celule de melanom rezistente ucise.Supraviețuirea pacienților cu melanom a fost asociată invers cu niveluri ridicate de LDH în ser, care a fost raportat a fi foarte predictiv pentru tratamentul melanomului în studiile clinice randomizate.Aici, raportăm un bărbat de 28 de ani prezentat cu melanom metastatic în stadiul IV care afectează spatele, pleura stângă și plămânul.Boala a provocat distrugerea totală a plămânului stâng și un nivel ridicat de LDH seric (4.283 U / L).După aprobarea comitetului de etică și consimțământul scris al pacientului, pacientul a primit perfuzii intravenoase 3BP (1-2,2 mg / kg), dar efectul anticancer a fost minim, așa cum este indicat de un nivel seric ridicat de LDH.Acest lucru s-ar fi putut datora conținutului mare de GSH tumoral.La combinarea paracetamolului oral, care epuizează GSH tumoral, cu tratament 3BP, nivelul seric de LDH a scăzut maxim.Deși o perfuzie intravenoasă lentă de 3BP părea să aibă o citotoxicitate minimă, eficacitatea sa anticancer prin această metodă de administrare a fost scăzută.Aceasta s-a datorat, probabil, conținutului mare de GSH tumoral, care a fost crescut după utilizarea concomitentă a paracetamolului depletor GSH.Dacă eficacitatea anticanceră a 3BP este mai mică decât se aștepta, combinația cu paracetamol poate fi necesară pentru sensibilizarea celulelor canceroase la efectele induse de 3BP.
Melanomul metastatic, cel mai mortal cancer de piele, este rezistent la modalitățile actuale de tratament.Alimentarea cu energie a melanomului este derivată din oxidarea glucozei (glicoliză) în centrul tumorii și fosforilarea oxidativă la periferia tumorii [1],[2] .Cu toate acestea, inhibarea glicolizei este suficientă pentru a limita energia livrată melanomului prin ambele căi, deoarece oxidarea glucozei produce cantități enorme de lactat per efect Warburg[3] .Lactatul rezultat este utilizat pentru a alimenta fosforilarea oxidativă la periferia tumorii într-un fenomen numit simbioză metabolică [1],[2] ( figura 1A ).Celulele melanomului prezintă efectul Warburg, deoarece folosesc mai mult glucoză și produc mai mult lactat decât melanocitele normale [4] .Lactatul induce acidoza microorganismului celulelor canceroase și creează un microambient toxic pentru celulele canceroase normale și susceptibile.Pe de altă parte, celulele canceroase care pot supraviețui acestui microambient nefavorabil prospera [5] , facilitând progresiv malignitatea și metastazarea ( figura 1A ).
Glicoliza și simbioza metabolică în cancerul și metastaza melanomului.
A, 3-bromopiruvat (3BP) vizează pași critici în biologia celulelor canceroase.Glicoliza este principala sursă de energie în celulele canceroase.Producția de lactat care apare prin acest proces oferă multe beneficii pentru celulele canceroase.3BP este un analog structural al piruvatului și al lactatului și poate fi privit ca un antimetabolit.B, beneficii pe bază de lactat în celulele canceroase.Lactatul poate ajuta fosforilarea oxidativă în unele porțiuni aerobice ale celulelor canceroase și prezintă beneficii importante asupra celulelor canceroase.
Interesant este faptul că lactatul mediază reacțiile inflamatorii [6] , îmbunătățește angiogeneza [7] și este asociat cu scăderea supraviețuirii pacientului, chimiresistența, radiorezistența și scăderea imunității împotriva cancerului [8] ( Figura 1A ).„Lactatul este oglinda și motorul malignității” [9] , facilitând supraviețuirea, progresia și metastazarea celulelor canceroase [8] .Formarea lactatelor este ultima etapă a glicolizei în celulele canceroase și este catalizată de lactat dehidrogenază (LDH).LDH a fost raportat ca fiind cel mai semnificativ marker pentru progresia melanomului și este inclus în sistemul american de stadializare a melanomului Comitetului american pentru cancer (AJCC): pacienții cu LDH ridicat sunt diagnosticați cu melanom M1c în stadiul IV [10] .Sa raportat că nivelul LDH seric a fost foarte predictiv pentru tratamentul melanomului în studiile clinice randomizate [11] .
3-Bromopiruvatul (3BP) este un analog piruvat și lactat ( Figura 1B ) care a arătat activitate antitumorală împotriva unui număr de cancere.3BP a fost raportat pentru a induce moartea celulelor necrotice în celulele de melanom sensibile [12] și a scădea viabilitatea celulelor limfoblastice acute (TUL) de leucemie acută din copilărie rezistente la glucocorticoizi [13] .Recent, 3BP a fost raportat pentru a trata neuroblastomul agresiv [14] , precum și gliomul și glioblastomul [15] .El Sayed și colab .[15] a raportat că 3BP a exercitat efecte anti-gliom puternice prin epuizarea surselor de energie a celulelor gliomului și inducerea stresului oxidativ.Există un singur studiu clinic publicat care arată eficacitatea 3BP ca agent anticancer și, în cadrul acestui studiu, a fost utilizat pentru tratarea carcinomului hepatocelular fibrolamelar uman (HCC) [16] .3BP a fost administrat prin intermediul chimioembolizării arteriale transcatetere și prin moartea celulelor necrotice induse în țesutul tumoral, după cum se dovedește prin tomografie computerizată cu emisie de pozitron (PET-CT) [16] .Într-adevăr, 3BP a fost raportat la eradicarea HCC [17] .Selectivitatea 3BP față de țesutul cancerului a fost remarcată în mai multe studii [15],[17],[18] .3BP a fost, de asemenea, raportat a fi mai puțin toxic pentru celulele normale atât in vitro, cât și in vivo[15],[17],[19] .
3BP are mai multe mecanisme anticanceroase.Este un puternic inhibitor al angiogenezei [20] și al transportatorilor de casete care leagă ATP-ul, care efluxează medicamente chimioterapice și provoacă chimiresistență [19] .Mai mult, 3BP inhibă enzimele cheie implicate în glicoliză, incluzând hexokinază II [17] , gliceraldehida-3-fosfat dehidrogenază [21] și LDH [22] .El Sayed și colab .[23] a raportat că 3BP antagonizează efectele lactatului și piruvatului.În plus, 3BP a fost raportat pentru a inhiba fosforilarea oxidativă [16] și a induce moartea celulelor canceroase prin generarea peroxidului de hidrogen și provocarea stresului oxidativ [15] .Sunt necesare cercetări suplimentare pentru a explora potențialul 3BP ca agent anticancer care exploatează efectul Warburg și vizează căile energetice critice în celulele canceroase.Informațiile obținute din astfel de lucrări pot fi utile pentru dezvoltarea viitoare a 3BP ca opțiune terapeutică pentru pacienții cu cancer.
Tratamentele bazate pe o mai bună înțelegere a biologiei melanomului pot fi promițătoare.Raportăm un bărbat în vârstă de 28 de ani, cu melanom metastatic în stadiul IV, care a primit perfuzii intravenoase de 3BP cu efect limitat.Cu toate acestea, combinarea 3BP cu un inhibitor oral al glutationului (GSH) a produs un răspuns mai bun.Combinarea 3BP cu paracetamolul poate fi necesară atunci când răspunsul inițial la 3BP nu este satisfăcător.Aici, ne oferim experiența cu acest caz, examinăm concis literatura de specialitate și discutăm direcții viitoare importante.
Un bărbat în vârstă de 28 de ani, care cântărește 60 kg, s-a prezentat pentru prima dată cu o masă grea, nedureroasă în antebrațul stâng, în ianuarie 2012 și a fost admis la Sohag Cancer Institute.Un sondaj a fost colectat din masă pentru biopsie, iar histopatologia a indicat melanomul ( figura 2A ).Masa a fost excizată chirurgical, iar pacientul a fost externat la 2 săptămâni de la internare.Urmărirea periodică se făcea lunar.
Melanom metastatic la nivelul plămânului și al peretelui toracic.
A, histopatologia melanomului primar.Secțiunea colorată cu hematoxilină și eozină arată infiltrarea țesutului subcutanat prin foi de melanocite atipice cu nucleoli proeminenți (cap de săgeată) și mitoză anormală (săgeată).Măririle sunt 100 × pentru diapozitivul principal și 400 × pentru inserție.B, cicatricea rămasă după excizia melanomului primar.Tumora primară de melanom se prezintă ca o masă tare (1 cm × 1 cm) în partea superioară a aspectului frontal al antebrațului stâng.Masa a fost de consistență dură, de culoare roșiatică închisă (cu variație de culoare) și prezintă asimetrie cu margini neregulate.CF, melanom metastatic la peretele toracic stâng.C, masiv metastatic bombat prin peretele toracic stâng pentru care a fost administrată radioterapie locală.D, tomografia computerizată (CT) arată distrugerea totală a plămânului stâng cauzată de melanomul metastatic.E, radiografia toracică arată că plămânul drept este cruțat, în timp ce plămânul stâng este total distrus.F, scanarea CT arată că o masă tumorală metastatică circulară imensă ocupă o parte majoră a plămânului stâng.
În iulie 2012, a apărut o recidivă locală, în care a fost simțit un nodul progresiv dur în antebrațul stâng, la locul masei excizate ( Figura 2B ).De asemenea, pacientul a prezentat dureri în spate și peretele toracic stâng.Scanele cu radiografie toracică și tomografia computerizată (CT) au evidențiat o masă pleurală stângă în creștere progresivă care a provocat distrugerea unei porțiuni largi a plămânului stâng, ceea ce a dus la prăbușirea acesteia ( figurile 2C – F ) și trecerea inimii spre partea dreaptă ( dextrocardia).Pacientul a fost tratat cu bifosfonați.Durerea în peretele toracic și în spate a fost intolerabilă, iar pacientul a fost tratat cu medicamente anti-inflamatorii nesteroidiene (ibuprofen și diclofenac), care nu au fost suficiente pentru gestionarea durerii.Pe măsură ce masa de la peretele toracic stâng a continuat să crească, o masă metastatică puternică (5 cm × 3 cm) bombată în afara peretelui toracic ( figura 2C ).Radioterapia locală, care a presupus o doză totală de 25 Gy, administrată în fracții 5-Gy, 5 zile pe săptămână, folosind un accelerator liniar, a fost aplicată la masa bombată.
Pacientul a solicitat consultanță medicală la Departamentul de Oncologie Medicală și Medicină Nucleară din Facultatea de Medicină din Sohag, la Universitatea Sohag (Egipt) și a fost internat pe 13 septembrie 2012. Imediat după internare, evaluarea inițială a relevat că avea dispnee, ortopnee, hipotensiune (BP) , 90/60 mmHg), anorexie, anasarca generalizată (în principal edem nutritiv), deplasare spre dreapta a bătăii apicale cardiace (dextrocardie), masă metastatică bombată prin peretele toracic stâng și regiuni dureroase peste peretele pieptului stâng și spate.Evaluarea de laborator a confirmat hipoxalbuminemia, hipoproteinemia și anemia, împreună cu funcțiile renale și hepatice normale.Întregul plămân stâng al pacientului a fost distrus de metastaza pulmonară, pe scanare CT ( Figurile 2C-F ), fără intrare de aer pe partea stângă.Astfel, pacientul a fost menținut pe masă de oxigen atunci când a fost necesar.Evaluarea radiologică a evidențiat plămânul stâng prăbușit, revărsat pleural pe partea stângă și masă metastatică pe peretele toracic stâng provocând deplasarea mediastinului spre dreapta.Aspiratia ghidata cu ultrasunografie nu a reusit sa elimine lichidul si putin din efuziunea hemoragica a fost aspirata.Nu a fost utilizat tubul intercostal.Pacientul nu a primit tratament legat de melanom, dar a primit tratament de susținere sub formă de infuzie albumină umană fără sare, diuretice, tonice, analgezice nesteroidiene, agenți hemostatici (de exemplu, capron) și o unitate de sânge proaspăt prin transfuzie. .
Pacientul a solicitat tratament cu noi linii de chimioterapie pentru starea lui actuală și a fost în consecință informat despre 3BP, inclusiv mecanismul său de acțiune și posibilele reacții adverse.După ce a primit aprobarea de la Comitetul de Etică al Facultății de Medicină din Sohag și consimțământul scris al pacientului conform Declarației de la Helsinki, tratamentul utilizând 3BP a fost planificat în doze terapeutice sigure, scăzute, pe baza rapoartelor anterioare și a studiilor publicate ale 3BP [15],[16],[18],[24],[25] .Planul terapeutic a fost conceput pentru a beneficia în siguranță pacientul începând cu cea mai mică doză posibilă, care ar fi administrat prin perfuzie intravenoasă de picurare.Această nouă cale pentru administrarea 3BP fracționează doza calculată.Aceasta poate fi mai sigură decât injecția intra-arterială directă a unei doze de bolus, despre care s-a raportat că în mod eficient, cu o toxicitate minimă, se tratează tumorile hepatice implantate la iepuri [25] .O modificare suplimentară a dozei a fost luată în considerare siguranța tratamentului și tolerabilitatea.
Starea generală a pacientului a fost corectă, cu excepția anasarcei ușoare până la moderate, care a fost parțial ameliorată cu albumină și diuretice fără sare.De asemenea, pacientul a menținut o cantitate bună de urină.În urma tratamentului, pacientul a avut funcții renale și hepatice normale, fără ortopnee sau dispnee.Nivelul LDH seric a fost testat înainte și în timpul tratamentului cu 3BP folosind un analizator Beckman Coulter AU prin intermediul laboratorului automat de patologie clinică din Spitalul Universitar Sohag (Egipt).Înainte de tratament, nivelul seric al LDH a fost ridicat, ceea ce reflectă rata ridicată de glicoliză și metabolismul energetic în tumoră și țesutul metastatic [26] .Urmărirea nivelului seric de LDH a răspuns la un tratament planificat cu 3BP.
Prima perfuzie de 3BP a fost administrată pe 18 septembrie 2012. Pe baza intervalului de dozare de 3BP la om (2-3,5 mg / kg corp) raportat recent de Ko et al .[16] , pacientul a primit 3BP în doză de 1 mg / kg, adăugată la 500 ml glucoză (5%), prin perfuzie intravenoasă cu picurare lentă timp de 2 ore ( Figura 3A ).Tratamentul a fost tolerat, fără anafilaxie sau evenimente adverse neașteptate.Membrii echipei de tratament au participat alături de pacient în timpul perfuziei 3BP și au fost disponibile măsuri pentru tratamentul de urgență.Singurul eveniment advers a fost o senzație de arsură ușoară până la moderată la locul perfuziei, care a scăzut la încetinirea vitezei de perfuzie.Nu au fost întâlnite flebite, reacții inflamatorii locale sau reacții alergice.La sfârșitul perfuziei, pacientul era într-o stare generală bună, culcat confortabil în pat și putând să stea, să stea și să meargă.S-a dus la toaletă și apetitul i s-a îmbunătățit.
A, doze de tratament date pacientului.Tratamentul B, 3BP a determinat o scădere moderată a nivelului de lactat dehidrogenază (LDH) seric, un predictor metabolic al energiei celulelor canceroase.Nivelul LDH seric a scăzut maxim la combinarea paracetamolului și 3BP.
A doua zi, rezultatele au fost promițătoare, întrucât LDH a scăzut moderat de la 4.283 U / L la 3.126 U / L ( Figura 3B ).Atât funcțiile renale, cât și cele hepatice au fost normale ( figura 4 ).Nu au fost înregistrate anomalii metabolice în ceea ce privește gazele arteriale, glucoza serică sau acidul uric seric. Analizele sângelui a fost în indici normali, fără a avea dovezi de anemie hemolitică ( Figura 5 ).Obiceiurile intestinale au fost normale după tratament cu 3BP.Durerea la peretele pieptului stâng și la spate a fost controlată cu un plasture cutanat trans-cutanic duragesic (fentanil).
3BP nu este toxic pentru funcțiile hepatice sau renale.
A, alanina transaminazei (ALT) se află în raza normală cu tratament cu 3BP (poate apărea o creștere ușoară).B, transaminază aspartată serică (AST) prezintă creșteri moderate cu tratament cu 3BP.C, bilirubina serică se încadrează în intervalul normal cu tratament 3BP.D, albumina serică nu a scăzut (comparativ cu nivelul de pretratare) cu tratamentul cu 3BP.E, proteina serică este în limitele normale cu tratament 3BP.F, raportul seric de albumină / globulină (A / G) nu a scăzut (comparativ cu nivelul de pretratare) cu tratamentul cu 3BP.G, creatinina serică se situează în intervalul normal cu tratamentul 3BP.H, uree serică se situează în intervalul normal cu tratament 3BP (poate apărea o creștere moderată).
3BP nu afectează nivelul glucozei serice sau parametrii hematologici.
Tratamentul A, 3BP nu provoacă hipoglicemie.B, numărul eritrocitelor nu este afectat de tratamentul 3BP.Tratamentul C, 3BP nu provoacă trombocitopenie.Tratamentul D, 3BP nu provoacă leucopenie (leucocitoza s-ar putea datora infecției toracice intercurente).E, nivelul hemoglobinei nu este afectat de tratamentul 3BP.
Patru zile mai târziu, nivelul seric al LDH a început să crească din nou și a ajuns la 4.353 U / L.
Pacientul a primit o a doua doză de 3BP – de data aceasta, 1 mg / kg adăugat la 500 ml soluție salină normală (0,9%) a fost admis prin intermediul perfuziei intravenoase prin picurare peste 3 ore.Tratamentul a fost tolerat, iar pacientul a avut senzații de arsură la locul perfuziei comparativ cu prima dată, deoarece rata de perfuzie a fost mai mică.Nu a existat flebita sau anafilaxia.
În următoarele 10 zile, pacientul a primit 6 doze de 3BP (1,5-2,2 mg / kg adăugate la 500 ml soluție salină normală, administrate prin perfuzie intravenoasă prin picurare) ( figura 3A ).Toate evaluările de laborator au evidențiat funcții hepatice și renale normale ( figura 4 ), fără tulburări hematologice, cum ar fi neutopenie sau anemie hemolitică ( figura 5 ).Starea generală a pacientului a fost stabilă la tratamentul cu 3BP.Nivelul LDH seric a fost în jur de jumătate din nivelul inițial la prezentare, dar nu a scăzut la nivelul normal ( Figura 3B ).
Pe 5 octombrie 2012, pacientul a început tratamentul cu paracetamol, un epuizant GSH sigur [27]–[32] , sub formă de comprimate orale, de 500 mg administrate de două ori la fiecare 8 ore timp de 3 zile consecutive.Până a doua zi, pacientul a primit tratament 3BP (2,2 mg / kg adăugat la 500 ml de soluție salină normală, administrat prin perfuzie intravenoasă prin picurare lentă timp de 3 ore timp de 3 zile consecutive), care a fost tolerat fără anafilaxie sau evenimente adverse neașteptate.
Urmărirea clinică a relevat un răspuns bun la tratament, astfel cum este evidențiat de o scădere a durerii cu plasture dermice durabile și de o îmbunătățire moderată a apetitului.Edemul ușor al membrelor inferioare a persistat și a fost controlat cu diuretice.Funcțiile renale și hepatice au fost în limitele normale.A fost o scădere accentuată a nivelului seric de LDH până la 1.809 U / L (7 octombrie), 58 U / L (8 octombrie) și 12 U / L (9 octombrie) ( Figura 3B ).Tratamentul a fost oprit, iar pacientul era într-o stare corectă, în afară de o infecție toracică intercurentă și de edem ușor până la moderat al membrelor inferioare.
Infecția toracică se manifestă cu febră, tuse și tulburări respiratorii (dispnee).Examenul toracic a arătat că nu a existat nicio intrare de aer pe partea stângă a pieptului din cauza distrugerii anterioare consemnate. Analiza completa de sânge a evidențiat leucocitoză moderată ( Figura 5D ) și neutrofilie, în concordanță cu infecția.Pneumonia bacteriană a fost considerată în lumina imunocompromisului din cauza malignității și a hipoproteinemiei borderline, iar pacientul a primit injecție intravenoasă de antibiotice adecvate cu spectru larg.Tensiunea arterială a pacientului a fost de 90/60 mmHg, iar funcțiile renale și hepatice au fost normale ( figura 4 ).Hipoxalbuminemia și hipoproteinemia au fost persistente, în mare parte datorită anorexiei și deficienței nutriționale.
Pacientul a avut încă dureri în regiunea din spate și peretele toracic stâng în punctele metastatice, iar acest lucru a fost controlat cu plasture transdermic duragesic.Edemul la ambele membre inferioare a fost moderat sub tratament cu diuretice (cu o bună ieșire de urină).A doua zi, s-a observat febră, tuse, detresă respiratorie și scăderea intrării aerului pe partea dreaptă și s-a produs o scădere suplimentară a tensiunii arteriale.Edemul membrelor inferioare a persistat și scăderea producției de urină.Din cauza restricției de fluid, pacientul a primit perfuzie de dopamină la unitatea de terapie intensivă, unde tensiunea arterială a crescut la 100/60 mmHg.Producția de urină a crescut și urina proaspătă a fost anulată într-un sac de colectare a urinei.Ficatul și funcțiile renale au fost normale.Evaluarea ecocardiografică a evidențiat o masă metastatică în peretele ventriculului stâng (2,5 cm × 2,5 cm) împreună cu revărsat pericardic moderat.Diagnosticul a fost tamponadă cardiacă iminentă, care poate fi fost secundară metastazelor care a mișcat inima spre dreapta, precum și hipoproteinemie nutrițională.În general, mișcarea cardiacă a fost normală.Pacientul a fost menținut la tratamentul cu antibiotice, dopamină, dobutamină și diuretice în unitatea de terapie intensivă.Edemul la membrele inferioare a scăzut treptat, iar tensiunea arterială a fost stabilă la 100/60 mmHg.
Leucocitoza ( Figura 5D ) și neutrofilia absolută au crescut în ciuda antibioticelor cu spectru larg.Testele funcției hepatice, incluzând transaminază alanină serică (ALT) ( figura 4A ) au fost în intervalul normal, cu o ușoară creștere a transaminazei aspartate serice (AST) ( figura 4B ).În plus, bilirubina serică ( figura 4C ) a fost în limitele normale.Testele funcției renale, cum ar fi creatinina serică ( Figura 4G ) au fost în limita normală, cu o creștere moderată a ureei serice ( Figura 4H ).Pacientul era în suferință respiratorie și hipoxemia a fost evidentă.Pacientul a murit din cauza hipoxemiei pe 12 octombrie 2012.
LDH seric, un parametru bun pentru evaluarea tumorilor, cum ar fi melanomul, este superior prezenței unei mase tumorale reziduale pentru a prezice rezultatul tratamentului.Direcționarea glicolizei și a efectului Warburg cu agenți precum 3BP privează celulele melanomului de energia necesară supraviețuirii, proliferării și metastazelor.
Interesant este că nivelul LDH seric reflectă activitatea energetică metabolică a celulelor canceroase în interiorul masei tumorale, ceea ce poate fi un indicator mai sensibil al activității tumorii decât dimensiunea tumorii.Măsurarea timpurie a nivelului seric de LDH a fost raportată a fi utilă în identificarea răspunsului la chimioterapie.De exemplu, în leucemia pediatrică, nivelurile mai mari de LDH în ALL au fost asociate cu un număr mare de leucocite și celule blastice.În tumorile solide pediatrice, nivelurile ridicate de LDH au fost asociate cu întinderea masei tumorale și stadiul bolii [33] .Mai mult, LDH-A contribuie la dezvoltarea rezistenței celulelor canceroase la chimioterapie [34] .În melanom, LDH este un marker metabolic pentru a detecta progresia și a prezice prognosticul în stadiul IV al bolii [35] .Atunci când se discută despre efectele anticancerigene ale 3BP, estimarea nivelului de LDH seric ca răspuns la tratament este critică, deoarece 3BP este un analog structural atât la lactat cât și la piruvat.Lactatul produs prin activitatea combustibililor LDH în populațiile aerobe din tumorile prin simbioză metabolică ( Figura 1A ) [1] .
Combinând 3BP cu lactat sau piruvat, substraturi de LDH, viabilitatea celulelor canceroase protejate, ceea ce sugerează că 3BP este un antagonist pentru lactat și piruvat.3BP a fost raportat să concureze cu piruvatul pentru LDH [36] .Mai mult, acesta poate fi transportat în interiorul celulelor canceroase prin intermediul transportorului piruvat-lactat (transportoare monocarboxilate).Reglarea actualizată a acestor transportori duce la o absorbție crescută de 3BP în celulele tumorale [37] .Astfel, 3BP inhibă LDH prin concurența cu substraturile sale [22] .
Paracetamolul (acetaminofen, N-acetil para-amino-fenol) este utilizat pe scară largă în practica pediatrică și la adulți.Paracetamolul este un depletor al GSH și este mai sigur decât acidul salicilic acetilic (aspirina, Aspegic) ca antipiretic, deoarece Aspegic poate induce sindromul Rey [27] .Paracetamolul este tolerat în doze mari [28] .Într-adevăr, nu a existat o creștere a toxicității hepatice la pacienții alcoolici cărora li s-a administrat doza terapeutică maximă de paracetamol (4 g / zi) [29] .Lipsa scăderii maxime a nivelului seric de LDH cu 3BP s-ar putea datora conținutului mare de GSH celular, adică conținutul ridicat de tumori de GSH poate inhiba efectele anticancerigene induse de 3BP.Atunci când paracetamolul depletor GSH a fost utilizat cu 3BP, LDH a scăzut dramatic.În special, această scădere nu s-a datorat inhibării de LDH seric mediată de 3BP, fapt dovedit de lipsa unei scăderi maxime a nivelului seric de LDH doar cu 3BP.Scăderea maximă a LDH la tratamentul combinat a confirmat că GSH tumorală a fost antagonistă la moartea celulelor melanomului indusă de 3BP.Acest lucru ar putea indica o închidere a glicolizei în celulele melanomului și semnalează vindecarea metabolică a melanomului metastatic.În mod similar, Qin și colab .[12] a raportat că unele celule de melanom au fost rezistente la 3BP datorită conținutului lor celular ridicat de GSH, un antioxidant și inhibitor al 3BP.Epuizarea GSH în melanom folosind L-Butionina sulfoximină (BSO), un inhibitor selectiv al biosintezei GSH, celule de melanom rezistente sensibilizate la 3BP și moartea celulelor necrotice induse.Astfel, atunci când răspunsul inițial la tratamentul cu 3BP este slab, poate fi indicat să se combine un depletor GSH cu 3BP.
BSO este un alt consumator de GSH care a fost studiat in vitro, dar care nu a fost studiat la om;paracetamolul este mai sigur decât BSO pentru uz uman.Interesant este că paracetamolul a inhibat creșterea și scăderea dimensiunii tumorii la modelele experimentale [30] .Celulele melanomului care folosesc enzima tirozinază au folosit paracetamolul ca substrat pentru tirozinază.În plus, paracetamolul a omorât celulele melanomului prin epuizarea GSH, creșterea nivelului reactiv al speciilor de oxigen și inducerea toxicității mitocondriale [31] .Paracetamolul a fost, de asemenea, raportat recent că crește activitatea LDH [38]. Combinarea paracetamolului cu 3BP pare promițătoare, deoarece 3BP țintește celulele canceroase în multe puncte.Recent am raportat că 3BP vizează brațul energetic, brațul metastatic (sinteza hialuronanului pe calea acidului uronic) și brațul mitotic al malignității (sinteza ADN), pe lângă țintirea fosfohexose izomerazei, un factor de motilitate autocrină [39] .
În cazul raportat aici, 3BP neformulată (Sigma, SUA) a fost administrată prin perfuzie intravenoasă lentă pentru a minimiza eventualele reacții adverse.Această abordare a fost tolerabilă cu o toxicitate minimă.Starea pacientului a fost stabilă sub tratament de susținere.3BP și paracetamol au fost administrate atunci când starea pacientului și investigațiile de laborator au fost stabile.O supraveghere medicală atentă a fost oferită în orice moment și nu a fost administrat niciun tratament (cu excepția tratamentului de susținere) atunci când au fost prezente afecțiuni acute.Funcțiile renale normale, funcțiile hepatice și indicii hematologici în timpul tratamentului pot indica faptul că 3BP este un agent anticancer sigur.Creșterea moderată a ureei serice s-ar putea datora antibioticelor administrate pentru infecții toracice severe, stare de infecție sau 3BP.
3BP poate fi privit ca un antimetabolit, fiind un analog structural al piruvatului și al lactatului, care poate fi administrat prin perfuzie intravenoasă lentă cu toxicitate hepatică, renală și hematologică minimă.Eficacitatea anticanceră a 3BP poate fi antagonizată de conținutul mare de GSH tumoral, dar poate fi potențată la administrarea concomitentă a depletorilor de GSH, cum ar fi paracetamolul.Sunt recomandate viitoarele studii clinice care utilizează 3BP ca agent anti-melanom și ca agent anticancer general.Atunci când efectul anticancer al 3BP trebuie să fie potențat, se poate lua în considerare combinația cu paracetamolul.
Suntem recunoscători bibliotecarilor din biblioteca Facultății de Medicină din Sohag, Universitatea Sohag, Egipt, pentru furnizarea de facilități de bibliotecă care au ajutat la scrierea acestei lucrări.
1. Nakajima EC, Van Houten B. Simbioză metabolică în cancer: refocarea lentilelor Warburg.Mol Carcinog.2012;52 : 329–337.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
2. Ho J, de Moura MB, Lin Y și colab.Importanța glicolizei și a fosforilării oxidative în melanomul avansat.Mol Cancer.2012;11 : 76–88.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
3. Warburg O. Despre originea celulelor canceroase.Ştiinţă.1956;123 : 309–314.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
4. Scott DA, Richardson AD, Filipp FV și colab.Profilul metabolic comparativ al profilului de linii celulare de melanom: dincolo de efectul Warburg.J Biol Chem.2011;286 : 42626–42634.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
5. Gatenby RA, Gillies RJ.De ce cancerele au glicoliză aerobă ridicată?Nat Rev Cancer.2004;4 : 891–899.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
6. Shime H, Yabu M, Akazawa T și colab.Acidul lactic secretat de tumoră favorizează calea proinflamatoare IL-23 / IL-17.J Immunol.2008;180 : 7175–7183.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
7. Végran F, Boidot R, Michiels C și colab.Fluxul de lactat prin transportorul monocarboxilat de celule endoteliale MCT1 susține o cale NF-κB / IL-8 care conduce angiogeneza tumorală.Cancer Res.2011;71 : 2550–2560.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
8. Hirschhaeuser F, Sattler UG, Mueller-Klieser W. Lactat: un actor cheie metabolic în cancer.Cancer Res.2011;71 : 6921–6925.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
9. Walenta S, Mueller-Klieser WF. Lactat: oglindă și motor al malignității tumorii. Semin Radiat Oncol.2004;14 : 267–274.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
10. Balch CM, Gershenwald JE, Soong SJ și colab. Versiunea finală a stadiului și clasificării melanomului AJCC din 2009.J Clin Oncol.2009;27 : 6199–6206.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
11. Agarwala SS, Keilholz U, Gilles E și colab. Corelația LDH cu supraviețuirea în melanomul avansat din două studii mari, randomizate (Oblimersen GM301 și EORTC 18951), Eur J Cancer.2009;45 : 1807–1814.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
12. Qin JZ, Xin H, Nickoloff BJ. 3-Bromopiruvatul induce moartea celulelor necrotice în liniile celulare de melanom sensibile.Biochem Biophys Res Comun.2010;396 : 495–500.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
13. Hulleman E, Kazemier KM, Holleman A și colab. Inhibarea glicolizei modulează rezistența prednisolonului în celulele leucemiei limfoblastice acute.Sânge.2009;113 : 2014–2021.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
14. Matsushita K, Uchida K, Saigusa S și colab. Inhibitori ai glicolizei ca o potențială opțiune terapeutică pentru tratarea neuroblastomului agresiv care exprimă GLUT1. J Pediatr Surg.2012;47 : 1323–1330.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
15. El Sayed SM, Abou El-Magd RM, Shishido Y și colab. Terapia genică D-aminoacid oxidaza sensibilizează celulele gliomului la efectul antiglicolitic al 3-brmopiruvatului. Cancer Gene Gene.2012;19 : 1–18.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
16. Ko YH, Verhoeven HA, Lee MJ și colab. Un studiu translațional „raport de caz” pe 3-bromopiruvat („blocant de energie”) al moleculei mici (3BP) ca agent anticancer puternic: de la bancă la pat. J Bioenerg Biomembr.2012;44 : 163–170.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
17. Ko YH, Smith BL, Wang Y și colab. Cancere avansate: eradicarea în toate cazurile, folosind terapia cu 3 bromopiruvate pentru a epuiza ATP.Biochem Biophys Res Comun.2004;324 : 269–275.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
18. Buijs M, Vossen JA, Geschwind JF și colab. Specificitatea activității anti-glicolitice a 3-bromopiruvatului confirmată prin absorbția de FDG la un model de șobolan de cancer de sân.Investiți noi medicamente.2009;27 : 120–123.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
19. Nakano A, Tsuji D, Miki H și colab. Inhibiția glicolizei inactivează transportatorii ABC pentru a restabili sensibilitatea la medicamente în celulele maligne.Plus unu.2011;6 : 1-10.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
20. El Sayed SM, El-Magd RM, Shishido Y și colab. Stresul oxidativ indus de aminoacizii D, 3-bromopiruvatul și citratul inhibă angiogeneza, care prezintă efecte puternice anticancerigene. J Bioenerg Biomembr.2012;44 : 513–523.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
21. Barnard JP, Reynafarje B, Pedersen PL. Catabolism cu glucoză în tripanozomii africani. Dovadă că etapa terminală este catalizată de un transportor cu piruvat, capabil să faciliteze absorbția de analogi toxici.J Biol Chem.1993;268 : 3654–3661.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
22. Mulet C, Lederer F. Bromopyruvate ca etichetă de afinitate pentru drojdia de panificator flavocytochrome b2. Studiul cinetic al reacției de inactivare.Eur J Biochem.1977;73 : 443–447.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
23. El Sayed SM, El-Magd RM, Shishido Y și colab. 3-Bromopiruvatul antagonizează efectele lactatului și piruvatului, sinergizează cu citratul și exercită noi efecte anti-gliom. J Bioenerg Biomembr.2012;44 : 61–79.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
24. Vali M, Liapi E, Kowalski J, și colab. Terapia intraarterială cu un nou inhibitor puternic al metabolismului tumorii (3-bromopiruvat): identificarea dozei terapeutice și metoda de injecție la un model animal de cancer la ficat. Radiol J Vasc Interv.2007;18 : 95–101.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
25. Geschwind JF, Ko YH, Torbenson MS și colab. Noua terapie pentru cancerul hepatic: injecție intraarterială directă a unui puternic inhibitor al producției de ATP.Cancer Res.2002;62 : 3909–1313.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
26. Magrath IT. Tratamentul limfoamelor pediatrice: paradigme de plagiat?Ann Oncol.1997;1 : 7–14.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
27. McCullough HN. Acetaminofen și ibuprofen în tratarea febrei și dureri ușoare până la moderate la copii. Sănătatea copilului pediatru.1998;3 : 246–250.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
28. Gregoire N, Hovsepian L, Gualano V și colab. Siguranța și farmacocinetica paracetamolului după administrarea intravenoasă de 5 g în primele 24 de ore cu o doză inițială de 2 g. Clin Pharmacol Ther.2007;81 : 401–405.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
29. Kuffner EK, Dart RC. Utilizarea acetaminofenului la pacienții care beau alcool: dovezi ale studiului actual. Am J Manag Care.2001;7 : 592–596.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
30. Vad NM, Yount G, Moore D și colab. Mecanismul biochimic al acetaminofenului (APAP) induce toxicitate în liniile celulare de melanom. J Pharm Sci.2009;98 : 1409–2525.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
31. Vad NM, Kudugunti SK, Graber D și colab. Eficacitatea acetaminofenului la șoarecii C57BL / 6 purtători de melanom B16-F0.Int J Oncol.2009;35 : 193–204.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
32. Wolchok JD, Williams L, Pinto JT și colab. Procesul de faza I cu administrare de paracetamol în doză mare și de carmustină, cu melanom metastatic.Melanom Rez.2003;13 : 189–196.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
33. Al-Saadoon EA, Al-Naama LM, Hassan JK. Activitate serică de lactat dehidrogenază (LDH) la copiii cu boli maligne. Bahrain Med Bull.2003;25 : 1–5.[ Academic Google ]
34. Zhao Y, Butler EB, Tan M. Metodologia metabolismului celular pentru îmbunătățirea terapeuticii cancerului. Moarte celulară Dis.2013;4 : 1–10.[ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
35. Bánfalvi T, Edesné MB, Gergye M și colab. Markeri de laborator ai progresiei melanomului. Magy Onkol.2003;47 : 89–104.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
36. Dell’Antone P. Obiectivele 3-bromopiruvatului, un agent anticancer, care se epuizează în energie. Med Chem.2009;5 : 491–416.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
37. Fang J, Quinones QJ, Holman TL și colab. Transportor monocarboxilat legat cu H + (MCT1 / SLC16A1): o potențială țintă terapeutică pentru neuroblastom cu risc ridicat.Mol Farmacol.2006;70 : 2108-2115.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
38. Olaleye MT, Akinmoladun AC, Ogunboye AA și colab. Activitatea antioxidantă și proprietatea hepatoprotectoare a extractelor de frunze de Boerhaavia diffusa Linn împotriva afectării hepatice provocate de acetaminofen la șobolani. Food Chem Toxicol.2010;48 : 2200-2205.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
39. El Sayed SM, Mahmoud AA, El Sawy SA și colab. Efectul Warburg crește starea ROS în stare de echilibru în celulele canceroase prin scăderea capacităților lor antioxidante (efectele anticancerigene ale 3-bromopiruvatului prin antagonizarea efectului Warburg) Med Ipotezele.2013;81 : 866–870.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Articole din Jurnalul Chinezesc de Cancer sunt furnizate aici, prin amabilitatea BioMed Central
Anumite tipuri de cancer pot fi auxotrofice pentru un anumit aminoacid și privarea de acesti aminoacizi specifici este o metodă pentru tratarea acestor tumori.Lipsa de arginină este o abordare nouă în privința tumorilor țintă cărora le lipsește expresia sintetazei argininosuccinatului (ASS).ASS este o enzimă cheie care transformă citrulina în arginină.Tumorile care, de obicei, nu exprimă ASS includ melanomul, carcinomul hepatocelular, unele mezoteliomuri și unele tipuri de cancer renal.Arginina poate fi degradată de mai multe enzime, inclusiv arginin deiminaza (ADI).Deși ADI este o enzimă microbiană din micoplasmă, are afinitate ridicată la arginină și catalizează arginina la citrulină și amoniac.Citrulina poate fi reciclată înapoi la arginină în celulele normale care exprimă ASS, în timp ce celulele tumorale ASS (-) nu pot.A fost formulată o formă pegilată de ADI (ADI-PEG20) și a demonstrat activitate in vitro și in vivo împotriva melanomului și carcinomului hepatocelular.ADI-PEG20 induce apoptoza în liniile celulare de melanom.Cu toate acestea, deprivarea argininei poate induce expresia ASS în anumite linii celulare de melanom care pot conduce la rezistență in vitro la medicament.Studii clinice umane de fază I și II cu ADI-PEG20 au fost efectuate la pacienți cu melanom și carcinom hepatocelular și s-a demonstrat activitate antitumorală în ambele tipuri de cancer.Acest articol analizează experiența noastră în laborator și clinică, precum și altele cu ADI-PEG20 ca agent antineoplazic.Orientarea viitoare în utilizarea acestui agent este de asemenea discutată.
INTRODUCERE
Un tip de terapie vizată pentru cancerele umane implică epuizarea aminoacizilor cheie necesari tumorilor pentru a supraviețui.Cel mai bun exemplu este asparaginaza care este folosită pentru a trata leucemia limfoblastică acută (ALL), un tip comun de leucemie la copii și adulți tineri [ 1 , 2 ].Această enzimă anticanceră scade sau scade nivelul sanguin de asparagină.În timp ce asparagina este un aminoacid neesențial la oameni, TOATE celulele o cer să supraviețuiască și să se prolifereze.Astfel, epuizarea acestui aminoacid prin terapia cu asparaginază este, în general, bine tolerată, deoarece celulele umane normale nu necesită asparagină.Astfel, eliminarea unui anumit aminoacid care nu este esențial la oameni, dar pentru care un anumit cancer este auxotrofic poate fi o metodă selectivă de țintire a malignităților.
Arginina este un alt aminoacid neesențial la adulți, dar este esențial pentru celulele cu proliferare rapidă.Astfel, privarea de arginină poate fi exploatată ca o potențială terapie vizată pentru tratamentul diferitelor forme de cancer.În această lucrare revedem rațiunea pentru această formă de terapie și propriile noastre, precum și alte date de laborator și clinice.
De ce privarea de arginina duce la moartea celulelor în anumite linii celulare tumorale?
Arginina este implicată în căi multiple care sunt implicate în funcțiile celulare majore, cum ar fi producția de oxid nitric, producția de creatină și sinteza poliaminei [ 3 , 4 ].La om, arginina este derivată în principal din dietă, fluctuația proteinelor corporale și sinteza de-novoprin intermediul axei renale intestinale [ 4 ].Deși arginina poate fi sintetizată, este considerată un aminoacid semi-esențial la adulți, deoarece producția endogenă este insuficientă atunci când celulele sunt supuse stresului sau necesită proliferare [ 5 , 6 ].În celulele tumorale, arginina influențează creșterea lor / proliferarea [ 5 , 7 – 9 ] și s-a demonstrat că restricția de dietă inhibă creșterea tumorilor metastatice [ 8 ].
sinteza De-novo de arginină apare în primul rând în tubul renal proximal prin intermediul ciclului de uree.Cu toate acestea, această capacitate se regăsește și în multe alte celule [ 6 ].Arginina este sintetizată din citrulină în două etape prin ciclul de uree.Enzima argininosuccinat sintetază catalizează conversia L-citrulinei și a acidului aspartic la argininosuccinat, care este apoi transformat în continuare în L-arginină și acid fumărie de argininosuccinat-lază, L-arginina poate fi degradată la L-ornitină prin enzima arginază din ciclul ureei.L-ornitina este apoi transformată înapoi în L-citrulină prin transcarbamil transferat de ornitină (OCT) și apoi reciclată înapoi la arginină prin ASS / ASL (vezi figura 1 ).Astfel, capacitatea de a regenera arginina din citrulină depinde de cantitatea / activitatea ASS și ASL [ 10 , 11 ].De fapt, Wheatley a sugerat că aceste două enzime sunt cuplate strâns [ 12-14 ] și că sensibilitatea celulelor la privarea argininei depinde de capacitatea lor de regenerare a argininei din intermediarul alternativ (ornitină, citrulină și argininosuccinat) în ciclul ureei [ 9 , 12-14 ].
Enzime implicate în ciclul de uree.Linia punctată pe ADI desemnează acțiunea sa asupra conversiei extracelulare a argininei la citrulină și amoniac.
Mai multe laboratoare au raportat că anumite linii de celule tumorale, cum ar fi melanomul, carcinomul hepatocelular, carcinomul celulelor renale și unele mesothelioame, nu exprimă ASS și, prin urmare, devin auxotrofice pentru arginină [ 9 , 11 , 15-18 ].În consecință, enzima de degradare a argininei a fost demonstrată de mai multe laboratoare pentru a avea efect antitumoral în aceste tumori [9 , 13 , 19-25 ].Pentru a dovedi în continuare că lipsa expresiei ASS în liniile celulare de melanom este o cheie pentru a le face susceptibile la moartea celulară după deprivarea argininei, noi și alții am transfectat celulele melanomului cu ASS.Acești transfectanți sunt rezistenți la deprivarea argininei [ 15 , 18 ].
Arginina poate fi catabolizată de trei enzime: arginază, arginină decarboxilază și deminazidă de arginină (ADI).Arginaza a fost testată pe animale experimentale încă din 1950, cu toate acestea, terapia nu a reușit să producă răspunsuri majore.Motivul eșecului ar putea fi datorat faptului că această enzimă are o afinitate scăzută pentru arginină și astfel va fi necesară o cantitate mare de enzimă.PH-ul optim pentru arginază este, de asemenea, ridicat (9,5) [ 26 ] și nu poate fi atins.Cu toate acestea, recent, Wheatly și colab.au arătat că arginaza este eficientă de la pH 7,2-9 [ 27 ].Foarte important, arginaza catabolizează arginina cu ornitina.Nu se știe dacă alte țesuturi normale, cu excepția ficatului și intestinului subțire, pot sintetiza ornitina la citrulină datorită faptului că OCT, o enzimă cheie necesară pentru această reacție, este exprimată în principal în ficat.În alte țesuturi, gena OCT este hipermetilată și, prin urmare, nu este exprimată.Astfel, se poate întâlni toxicitate normală a țesutului.Aceste neajunsuri pot explica de ce dezvoltarea arginazei ca agent antitumoral a eșuat în ciuda activității sale observate in vitro [ 28 , 29 ].Cu toate acestea, s-a arătat că arginaza pegilată recent are activitate în carcinomul hepatocelular atât in vitro, cât și in vivo datorită lipsei expresiei OCT în anumite linii celulare de carcinom hepatocelular [ 30 ].Pe de altă parte, arginina deiminaza, o enzimă microbiană din micoplasma care catabolizează arginina cu citrulină și amoniac, este mai atractivă datorită faptului că celulele tumorale care nu au ASS nu vor putea să sintetizeze arginina intracelulară din citrulină, în timp ce celulele normale sunt capabile să regenereze arginina.Această abordare va evita toxicitatea țesutului normal.Mai mult, această enzimă este activă în pH fiziologic și are o afinitate ridicată pentru arginină.De fapt, s-a raportat că ADI are activitate antitumorală atât in vitro, cât și in vivo în liniile celulare de melanom și hepatocellular carcinom și în alte linii celulare [ 15-18 , 31-34 ].Cu toate acestea, unul dintre dezavantajele ADI este că nu este produs de oameni și, prin urmare, este foarte antigenic.În plus, ADI are și un timp de înjumătățire scurt.Pentru a depăși aceste dezavantaje, o formă pegilată a ADI (ADI-PEG20) a fost dezvoltată de Polaris, Inc (fostă Phoenix Pharmacologics) [ 35 ] și după testele in vitro și studiile in vivo [ 15 , 34 ] a intrat în studiu clinic atât pentru carcinom hepatocelular, cât și pentru melanom.
Activitatea antitumorală a ADI-PEG20 în celulele de melanom
Noi și alții am demonstrat că arginina degradantă în mediile de cultură folosind ADI sau expunerea liniilor celulare melanom la mediul liber de arginină cu citrulină și suplimentul cu NH4CI poate inhiba creșterea și poate avea efecte citotoxice în liniile celulare de melanom [ 15 , 18 ].IC50 după 7 zile de expunere a fost cuprins între 0,01-0,3 μg / ml dintre cele 16 linii celulare melanom testate [ 15 ].În laboratorul nostru, am studiat efectul de inhibare a creșterii ADI-PEG20 în 4 linii celulare de melanom (A-375, SK-Mel2, A-2058 și Mel-1220 toate fibroblastele umane normale (BJ-1 ) și o linie NSCLC ASS (+) Efectul inhibitor al creșterii a variat de la 0,05-0,09 μg / ml după expunerea timp de 3 zile la liniile celulare de melanom 4 testate (vezi tabelul 1 ) și mai mare de 1 în liniile celulare BJ-1 și NSCLCS [ 18 ] .. Interesant, la 72 de ore a rămas în mediu arginina (12,8 pM pentru Sk-Mel-2 și 23,5 pM pentru A2058 și nici arginină detectabilă pentru A375 și MEL-1220). cu 0,05 pg / ml de ADI-PEG20, nu există valori detectabile ale argininei la 48 h. Astfel, se pare că capacitatea mașinilor intracelulare de a menține nivelele de arginină fie prin degradarea altor proteine neesențiale, fie prin scăderea proliferării sau prin activarea ASS prin translație sau transcripție este diferită în rândul liniilor celulare melanom. Aceste diferențe pot explica de ce o partelanoma de celule lanoma pot deveni rezistente la această formă de tratament.
tabelul 1
Efectul de inhibare a creșterii ADI-PEG20
Linii telefonice
ID 50 (ug / ml)
Arginina (uM) la 72 ore
Citrulină (uM) la 72 ore
A2058
0,088 ± 0,008
23.5
367.5
A375
0,05 ± 0,001
ND
317.5
Sk-Mel-2
0,070 ± 0,008
12.8
329.2
Mel-1220
0,090 ± 0,008
0
3
BJ-1
> 1
1.6
404
NSCLCS *
> 1
20.27
603
* Medii RPMI (linie de bază Arginină: 971 uM).
Mediul EMEM (linia de bază arginină: 400 uM).
Activitatea antitumorală a ADI-PEG20 în carcinomul hepatocelular
S-a demonstrat că ADI-PEG20 are activitate antitumorală în unele linii celulare de carcinom hepatocelular care nu au expresia ASS [ 15 ].Cu toate acestea, recent, Cheng et al.au studiat 5 linii celulare HCC (HepG2, Hep3B, PLC / PRF / 5, Huh7 și Sk-HEP-1) și au raportat că aceste linii celulare exprimă ASS și nu sunt sensibile la ADI [ 30 ].Pe de altă parte, aceste linii de celule nu au expresia OCT și sunt sensibile la arginază [ 30 ].Activitatea antitumorală a fost de asemenea observată in vivo utilizând PEG-arginază, dar profilul de toxicitate nu a fost discutat.Este interesant de ce celulele carcinomului hepatocelular nu au o expresie OCT sau ASS deoarece hepatocitele normale posedă aceste enzime.Astfel, nu este încă cunoscut cum celulele frecvente de carcinom hepatocelular nu exprimă ASS sau OCT sau ambele.Cu toate acestea, Dillion et al .au raportat că toate cele 51 de probe de tumori hepatoame sunt deficitare în ASS prin colorare imunohistochimică [ 36 ]
Activitatea antitumorală a ADI-PEG20 în alte linii celulare
Anumite linii celulare mezoteliom (2591 și MSTO) nu exprimă ASS și sunt sensibile la ADI-PEG20, în timp ce alte două linii celulare (226,2461) exprimă niveluri ridicate [ 17 ].Studiul imunohistochimic a arătat că 63% din mezoteliom exprimă niveluri scăzute de ASS [ 17 ].Pe baza acestui studiu, au fost inițiate studii clinice cu mezoteliom [Szlosarck, comunicare personală].ADI-PEG20 este, de asemenea, activ în anumite linii celulare de celule renale care nu exprimă ASS [ 16 ].Interesant, unele cancere celulare renale sunt, de asemenea, negative pentru ASS prin colorare imunohistochimică, în ciuda nivelurilor ridicate ale acestor enzime găsite în rinichi.Alte linii celulare care sunt sensibile la ADI-PEG20 includ linii celulare neuroblastomice [ 37 ] și liniile celulare limfoblastice T și B umane [ 31 – 33 ], dar nu o linie celulară leucemică mieloidă (HL-60).În acest raport, ADI-PEG20 are o activitate antitumorală mai bună decât L-asparaginaza [ 31 ].Liniile celulare tumorale care exprimă niveluri scăzute de ASS pot fi, de asemenea, sensibile la deprivarea argininei [ 11 ].În schimb, Kang și colab.[ 38 ] au demonstrat că epuizarea argininei cu ADI izolat din celulele sertoli nu a induce apoptoza în liniile celulare de cancer de prostată DU145, totuși, le-a protejat de apoptoza indusă de paclitaxel.Acest lucru nu este surprinzător, deoarece DU145 posedă ASS, iar scăderea argininei va duce la o întârziere a creșterii celulare care le face rezistente la chimioterapie.
ADI-PEG20 induce apoptoza în liniile celulare de melanom
Sa demonstrat că ADI-PEG20 inhibă sinteza proteinelor utilizând încorporarea de 35S , dar modul în care inhibarea sintezei proteinelor conduce la moartea celulară nu este clară.Gong și colab .au raportat moartea celulelor apoptotice în liniile celulare limfoblastice umane [ 31 , 32 ].De asemenea, am văzut moartea celulelor apoptotice în celulele melanomului [ 18 ] ( figurile 2 și 3).3 ).Interesant este că, deși apoptoza este observată în celulele melanomului tratate cu ADI-PEG20 la doza ID50 timp de trei zile, aceste celule pot supraviețui prin reaprovizionarea mediilor noi cu arginină și îndepărtarea ADI-PEG20, dar dacă continuă să se adauge ADI-PEG20 în noul mediu , nu există celule viabile în cele trei linii de celule (A-375, Sk-mel2 și Mel1220) în 3 săptămâni.Se speculează că toate aceste celule suferă autofagie fără arginină înainte de a suferi apoptoză.De fapt, datele noastre preliminare au arătat o creștere a Beclin1 în aceste linii celulare, cu Mel1220 având nivelele cele mai ridicate de Beclin1.În mezoteliom, Szlosarek a arătat că epuizarea argininei induce modificări ale conformației BAX și depolarizarea membranei mitocondriale interne în celulele ASS (-) care conduc la apoptoză [ 17 , 39 ].Astfel, mecanismul (mecanismele) care conduc la apoptoză este complex și poate fi diferit printre toate liniile celulare care nu au expresia ASS.
In situ testul de apoptoză de etichetare la linia celulară A375.R: control.B: după expunerea la 0,08 ug / ml timp de 72 ore.Celulele tratate suferă apopotoză care prezintă petele de maro în nuclee
Apoptoza detectată prin clivarea PARP în liniile celulare de melanom 4 (A375, Sk-mel-2, A2058 și MEL-1220).Celula netratată a prezentat PARP nevăzută la 116 kD, în timp ce celulele tratate au prezentat PARP scindat observat la 89 kD.
ADI-PEG20 inhibă producerea NO
Deoarece arginina este singurul substrat pentru sintetaza de oxid nitric [ 3 ], nu este surprinzător faptul că ADI-PEG20 inhibă producția de NO în lipopolizaharide și macrofage provocate de interferon [ 40 ].Această observație a fost de asemenea observată in vivo atunci când șoarecii au fost tratați cu TNF și endotoxină.[ 40 ].Totuși, ADI-PEG20 nu a inhibat NO care produce eNOS [ 40 ].Astfel, se pare că ADI-PEG20 poate fi utilizat ca modulator selectiv pentru NO care este produs de iNOS.Implicarea acestor rezultate asupra supraviețuirii celulelor tumorale / carcinogenezei nu a fost studiată.Pe de altă parte, NO poate inactiva în mod reversibil ASS prin S-nitrozulări atât in vitro, cât și in vivo [ 41 ].Astfel, relația complexă a acestor parametri va necesita investigații suplimentare.
ADI-PEG20 inhibă angiogeneza
Efectul ADI asupra angiogenezei a fost investigat atât in vitro, cât și in vivo .Beloussow și colab.prima [ 42 ] a demonstrat efectul antiangiogen al ADI recombinant cu celulele endoteliale ale venei umane ombilicale cultivate (HUVEC).Park și colab.au folosit de asemenea HUVEC și ADI recombinant pentru a arăta că ADI ar putea inhiba angiogeneza într-o manieră dependentă de doză și acest efect inhibitor poate fi inversat prin alimentarea argininei înapoi în mediul de cultură [ 43 ].Park și colab.a observat că ADI recombinant a exercitat inhibiția angiogenezei în studiile in vivo utilizând modelul de embrion pui și model de șoarece [ 43 ].Această proprietate antiangiogenetică a ADI a sugerat o modalitate eficientă de tratare a tumorilor.Ei au arătat că ADI a fost capabil să inhibe creșterea celulelor tumorale utilizând liniile celulare CHO și HeLa.Mai mult, Gong și colab.[ 37 ] au arătat, de asemenea, că ADI a fost eficace în inhibarea creșterii neuroblastomului nefavorabil similar cu alți reactivi de blocare a angiogenezei.Interesant, ADI sau acești reactivi au fost capabili să potențeze efectul radioterapiei pentru această tumoare utilizând un model de șoarece.
ADI-PEG20 scade ticlul viral al hepatitei C
Izzo și colab .au raportat că ADI-PEG20 poate reduce titrul HCV până la 99% la pacienții cu HCV sero-5b de 5/10 cu o îmbunătățire ulterioară a funcției hepatice.Cu toate acestea, nu are efect asupra pacienților cu VHC de tip 2c [ 44 ].Mecanismul exact al acestui lucru nu este cunoscut și poate fi legat de scăderea producției de NO.
ADI-PEG20 afectează semnalizarea mTOR
Se știe că deprivarea de nutrienți scade semnalul mTOR [ 45 – 47 ].Acest lucru se datorează cel mai probabil scăderii ATP care conduce la activarea AMPK și, prin urmare, influențează negativ activitatea mTOR [ 48 ].Este nesigur că este implicat complexul TSC1 / 2 [ 49 ].Degradarea nutrițională influențează pozitiv asocierea mTOR cu raptorul, asocierea strânsă dintre mTOR și Raptor va diminua activitatea mTOR [ 50 ].Am demonstrat că, după expunerea a 4 linii de celule melanom la ADI-PEG20 timp de 72 ore, fosforilarea 4E-BP este redusă substanțial în 3 linii celulare de melanom și într-o măsură mult mai mică în linia celulară A-2058 ( Fig.4A ).Mai mult, cantitatea de fosforilare a p-70S6 kinazei este de asemenea redusă la 72 ore ( Figura 4B ).În contrast, pAMPK care influențează negativ activitatea mTOR este foarte crescut la A-375 și Mel1220 la 72 de ore, dar este moderat crescut în A-2058 ( Figura 4C ).Nu există nici o schimbare în Sk-Mel 2;această linie celulară poate avea o modificare în LKB.Modificările în fosforilarea 4E-BP și fosforilarea kinazei P-70S6 nu sunt observate în linia celulară NSCLC și liniile celulare BJ-1 care posedă ASS.Astfel, deprivarea argininei în celulele melanomului ASS (-) are un impact negativ asupra semnalizării mTOR.Sa demonstrat că inhibarea mTOR a scăzut proliferarea celulară și contribuie la autofagie [ 51 ] care poate explica activitatea antitumorală a ADI-PEG20 în celulele melanomului
A).Activitatea mTOR a fost măsurată prin capacitatea sa de a 4E-BP fosforilat.Banda inferioară este forma nefosforilată.4E-BP.4E-BP are o fosfilare multiplă care descrie mai multe benzi observate.După tratamentul cu ADI-PEG la 0,6 ug / ml (81 UI / ml = 11,3 mg / ml) timp de 72 ore, forma majoră de 4E-BP este nefosforilată.B).fosforilarea p-70S6 kinazei reflectă de asemenea activitatea mTOR.După expunerea la ADI-PEG20 la 0,6 mg / ml, kinaza fosfo-p-70S6 a descrescut în A-375, Sk-Mel2, dar a crescut în A-2058, ceea ce indică fosforilarea altor proteine din amonte.Mel-1220 are o fosforilare minimă a kinazei p-70S6 și, prin urmare, modificările nu sunt discernebile.C).fosfo-AMPK în liniile celulare de melanom 4 după expunerea la ADI-PEG20 pentru 72 ht.Trei linii celulare au crescut fosfo-AMPK, dar nici o schimbare în Sk-Mel 2.
Alte efecte biologice ale ADI
Deoarece arginina servește drept precursor pentru poliamină (ornitină, putrescină), deprivarea argininei poate produce biosinteza poliaminei.În acest sens, Shen și colab .au arătat că adăugarea de putrezină la ADI nu a afectat activitatea antitumorală a ADI, totuși a anulat efectul antitumoral al DFMO, un inhibitor de decarboxilază a ornitinei [ 10 ].Mai mult, în celulele CHO care nu au expresia ASS, tratamentul cu ADI nu a afectat concentrația de poliamină intracelulară.Autorii au concluzionat că scăderea Km de ODC, precum și compensarea prin degradarea, efluxul și absorbția proteinelor ar putea fi responsabile de aprovizionarea cu arginină, iar concentrația argininei nu este critică pentru menținerea concentrației de poliamină intracelulară.Alte efecte ale deprivării argininei, inclusiv alte modificări ale proteinei, cum ar fi proteina de șoc termic și proteinele care sporesc susceptibilitatea celulară la apoptoză [ 52 ].Recent, Graboa și colab .[ 53 ] a arătat că arginina poate juca un rol crucial în carcinogeneză.
De ce ASS nu este exprimat în anumite tipuri de tumori?
Gena ASS este localizată pe perechea de bază cromozom 9q34.1 132, 310,092 la 132,366,481.Există multe pseudogene (14 raportate) situate printre alte cromozomi [ 54 ].Este posibil ca deleția cromozomului la această regiune în celulele tumorale să poată explica lipsa expresiei ASS.Totuși, în 4 linii celulare de melanom testate prin analiza Southern blot, a fost prezentă ADN ASS ( Figura 5 ).Cu toate acestea, este încă posibil ca promotorul să poată fi modificat și nu poate fi detectat prin analiza southernblot.Datele noastre [ 18 ] și alte lucrări publicate [ 15 , 17 ] indică faptul că lipsa proteinei ASS corespunde unor niveluri scăzute de exprimare a ARNm (care nu au fost detectate prin analiza northernblot).Recent, Szlosarek et al .au descoperit că liniile celulare mezoteliom care exprimă nivele scăzute de ASS au metilare promotor aberant CpG [ 17 ].Autorii au concluzionat că reglarea epigenetică a transcripției ASS joacă un rol în controlul exprimării ASS observată în liniile celulare mezoteliom.Studiul nostru inițial de laborator nu a susținut acest concept în liniile celulare de melanom, iar 5-azacytidina, un agent de demethylație cunoscut, nu afectează expresia ASS în liniile celulare de melanom (Savaraj, date nepublicate).Astfel, întrebarea cheie care rămâne fără răspuns este motivul pentru care diferitele linii de celule tumorale posedă niveluri diferite de expresie ASS.ASS cADN a fost clonat în 1981 [ 55 ] și este foarte conservat între specii.Regiunea promotor la om și la șoareci a fost caracterizată parțial.La om, secvența de flancare 5 ‘prezintă multiple situsuri de legare SP-1, AP2, GCN4, NF-KappaB, Max1, Egr și altele [ 56 , 57 ].Aceste site-uri de legare sunt, de asemenea, previzionate folosind instrumentul de căutare web AliBaba 2.1.În prezent, am clonat promotorul și am construit o serie de mutanți eliminați pentru a studia această întrebare.Deși proprietățile cinetice ale enzimei ASS au fost studiate pe larg și structura cristalină din bacterii a fost identificată [ 4 ], controlul transcripțional și translațional al genei ASS nu este bine înțeles.Au fost raportate două specii de ARNm mRNA care diferă în 5’UTR (baza de date Genbank).Studiile anterioare publicate indică faptul că reglementarea ASS are loc la niveluri pre-translaționale [ 4 ].S-a arătat că mulți factori influențează pozitiv și negativ gena ASS și pot fi specifici țesutului.Mai mulți anchetatori au demonstrat că glucocorticoidul, glucagonul și ciclina AMP măresc expresia ASS, în timp ce acizii grași reprimau expresia ASS [ 58-65 ].Insulina și hormonul de creștere au o influență negativă asupra ASS în țesutul hepatic, dar nu au efect asupra altor țesuturi [ 66 – 68 ].Citokinele, IL-Ib, interferonul și TGF-b pot, de asemenea, influența expresia ASS [ 69 , 70 ].Recent, s-a arătat că glutamina stimulează exprimarea ASS în hepatocite de șobolan și celule Caco-2 prin O-glicozilarea lui Sp1.site-uri [ 71 ].Expresia ASS a fost, de asemenea, arătată a fi reglementată de arginină [ 72 ].În această privință, am demonstrat că în liniile de celule melanom expresia ASS este influențată de arginină în medii [ 18 ], dar nu este influențată nici de glucocorticoidul glutamină, nici de acizii grași (date nepublicate).Cu toate acestea, reglarea genei ASS este cel mai probabil diferită în diferite tipuri de tumori.În prezent, investigăm reglementarea ASS în celulele de melanom.Este de remarcat faptul că melanocitele umane normale (linia celulară HEM-1 și HEM-m obținute de la Sciencell) exprimă niveluri foarte scăzute de proteină ASS care este diferită de hepatocitele normale.
Analiza Southernblot a ASS în liniile celulare de melanom 4 și în liniile celulare BJ-1.Toate cele cinci linii celulare prezintă niveluri similare de ADN ASS.
Exprimarea proteinei de melanom indusă de arginină
S-a demonstrat că nivelele de arginină pot regla expresia ASS în celulele limfoblastomului și celulele epiteliale.În mod similar, am descoperit că expunerea liniilor celulare de melanom la ADI-PEG20 sau medii libere de arginină cu supliment de citrulină și NH4CI2 timp de 3 zile, proteina ASS detectată prin Western blot a fost găsită în trei linii celulare.Cu toate acestea, nivelurile expresiei ASS sunt diferite: A2058 are mai multă expresie ASS (2,76 ori) urmată de Sk-Mel-2 (2,03) și A375 (1,52) în timp ce MEL-1220 nu este capabilă să producă proteină ASS.Cu toate acestea, după reaprovizionarea cu medii normale, expresia proteinei ASS este din nou reprimată [ 18 ].Figura (6) a rezumat aceste constatări.Interesant, în liniile celulare (BJ-1 și NSCLCS) care exprima în mod constitutiv ASS, nivelurile de ASS nu s-au schimbat la expunerea la mediile fără arginină.Am studiat în continuare dacă creșterea proteinei ASS apare la nivelul de transcripție.Cu toate acestea, nu am putut detecta ARNm ASS prin analiza Northern blot ( figura 7 ).Am dezvoltat o metodă RT-PCR în timp real pentru a cuantifica exprimarea ARNm ARN, numai A-2058 a arătat o creștere a expresiei mRNA la 48 și 72 ore ( figura 8 ).Celelalte trei linii celulare, incluzând BJ-1 (fibroblaste umane normale), nu au prezentat o creștere a ARNm ASS la deprivarea argininei.AARN-ul ASS a revenit, de asemenea, la normal după plasarea celulelor înapoi în medii normale.Cu toate acestea, după expunerea continuă la mediile fără arginină, A-2058 este capabil să activeze o cantitate substanțială de ARNm care ar putea fi detectată prin analiza northernblot ( Figura 7 ).
Imunoblot de proteină ASS în liniile celulare de melanom 4 (A375, Sk-mel-2, A2058 și MEL-1220) înainte și după expunerea mediului liber de arginină suplimentat cu citrulină și NH4CI timp de 24, 48 și 72 ore.După aceea, celulele au fost spălate și reumplete cu medii normale EMEM timp de 24, 48 și 72 ore.Banda 1: control.Lane 2: 24 de ore.pe suport liber de arginină Lane 3: 48 ore pe mediu liber de arginină Liniul 4: 72 ore pe mediu liber de arginină Litiu 5: Eliminarea mediului liber de arginină și schimbat în mediu EMEM normal timp de 24 de ore.Latima 6: 48 de ore.pe suporturi normale.Latima 7: 72 ore.pe suporturi normale.Rezultate similare s-au obținut cu medii fără arginină fără supliment de citrulină și medii tratate cu ADI-PEG20.cu citrulină și supliment de NH4CI.
Analiza Northernblot a ASS într-un panou de linie de celule melanom și celule BJ-1.Linia 1: A375.Banda 2: A375 după expunerea la ADI-PEG20 timp de 72 de ore.Banda 3: SK-Mel-2 Banda 4: Sk-Mel-2 după expunerea la ADI-PEG20 timp de 72 de ore.Banda 5: MEL-1220.Banda 6: MEL-1220 după expunerea la ADI-PEG20 timp de 72 de ore.Linia 7: A2058.Banda 8: A2058 după expunerea la ADI-PEG20 timp de 72 de ore.Banda 9: A2058R.Banda 10: BJ-1.Banda 11: BJ-1 după expunerea la ADI-PEG20 timp de 72 de ore.Notă: numai A2058R și BJ-1 posedă ARN mRNA de 1,9 kb și nu există diferențe în mRNA ASS în celulele BJ-1 după expunerea la ADI-PEG20.
Nivelul de expresie relativ al mRNA ASS detectat cu PCR în timp real în diferite linii celulare în medii (-Arg) fără arginină, comparativ cu cel din mediul normal (+ Arg).Metoda de cuantificare utilizată a fost propusă de Pfaffl în Nucleic Acid Research, 29: 2002-2007.GAPDH a fost utilizat ca gene de referință.Orele de pe grafic indică timpul pentru care celulele au fost cultivate în medii -Arg sau + Arg.
Rezistența la ADI-PEG20 în melanom
Datele din linia de celule melanomului, precum și culturile primare obținute de la pacienți, se pare că liniile celulare sau culturile primare care se pot transforma în ARNm ASS după deprivarea argininei au cel mai probabil să dezvolte rezistență la ADI.Suntem capabili să generăm linia celulară rezistentă la ADI-PEG20 în A-2058, dar nu în A-375, Skmel-2 sau Mel 1220. Aceste trei linii celulare nu pot transforma ARNm ASS după privarea de arginină.Creșterea tranzitorie a proteinei ASS observată la A-375 și Sk-mel2 este mediată în principal prin creșterea tranzitorie a traducerii.După ce ARNm mRNA este indus până la o anumită măsură, expresia ASS devine stabilă și nu poate fi inversată ( figura 9 ).De ce anumite linii celulare pot activa rapid AARN mRNA nu este cunoscut și în prezent investigăm controlul transcripției ARNm al ASS.
Lucrările din laboratorul nostru, precum și altele, sprijină activitatea antitumorală a ADI-PEG20 în tipurile de tumori ASS (-).Până în prezent, melanomul și hepatomul par a fi tumorile potrivite pentru această abordare datorită lipsei expresiei ASS.Anumite mezoteliom și cancerele celulare renale pot fi, de asemenea, luate în considerare pentru această abordare.Cu toate acestea, dezvoltarea rezistenței la medicament secundară exprimării ASS poate fi problematică, dar ar putea fi depășită.În prezent, dezvoltăm o metodă de identificare a acelor tumori care sunt negative ASS, dar pot fi induse după un tratament repetat.Aceste tumori vor necesita, cel mai probabil, un tratament combinat care va ucide celulele rapid și, prin urmare, celulele tumorale nu sunt capabile să activeze ASS.O altă posibilitate este de a inhiba expresia ASS utilizând o abordare farmacologică.În prezent investigăm aceste abordări diferite în melanom.
Am raportat un studiu de fază I / II cu ADI-PEG20 la pacienții cu melanom metastatic [ 73 ].Au fost realizate două studii de escaladare a dozei de cohortă: un studiu de fază I în SUA și un studiu de fază I / II din Italia.Studiul de fază I din SUA a inclus 15 pacienți din 4 cohorte.Tratamentul ADI-PEG20 a constat în injecții intramusculare săptămânale în zilele 1, 15 și 22. Primele 3 cohorte au constat din 3 pacienți și fiecare cohortă a primit ADI-PEG20 la 20, 40 sau 80 U / m2.Ulterior, 6 pacienți au fost tratați la 160 U / m2, care a fost considerată o doză biologică optimă (OBD).
Cohorta italiană a înscris 24 de pacienți în studiul de fază I.Pacienții au fost înscriși într-una din cele șase cohorte.Primele 4 cohorte au constat din 3 pacienți fiecare și fiecare cohortă a fost tratată cu un ciclu ADI-PEG20 la 40, 80, 160 sau 320 U / m2.Șase pacienți au primit un ciclu ADI-PEG20 la 640 U / m2.Primul ciclu a fost compus din terapia din zilele 1, 15 și 22. Mai mult, 6 pacienți au fost tratați pe o cohorta de 3 cicluri care a constat din 4 injecții săptămânale la OBD.
Un obiectiv al acestor studii a fost determinarea farmacocineticii / farmacodinamicii, siguranța și activitatea antitumorală a medicamentului.Studiile farmacocinetice / farmacodinamice au arătat că o doză de ADI-PEG20 la 160 U / m2 a redus nivelul argininei plasmatice de la un nivel de bază de aproximativ 130 μmol / L la mai puțin de 2 μmol / L timp de cel puțin 7 zile.Mai mult, nivelurile plasmatice ale oxidului de azot au scăzut, de asemenea, fără efect măsurabil asupra tensiunii arteriale sau a frecvenței cardiace.
În acest studiu clinic nu au fost atribuite toxicități de gradul 3 sau 4.Cel mai frecvent efect secundar a fost disconfort ușor la locul injectării.Doi pacienți au avut hipotensiune în decurs de 20-40 de minute de tratament.Unul dintre pacienți a prezentat o istorie de hipertensiune arterială și a prezentat medicamente antihipertensive.Celălalt pacient a prezentat hipotensiune după cea de-a patra injectare de ADI-PEG20, dar a primit șase tratamente suplimentare ale medicamentului fără recidiva hipotensiunii.Anomaliile din testele de laborator care au fost observate în timpul studiului includ niveluri ridicate ale acidului uric în sânge, creșterea ușoară a nivelului de fibrinogen din sânge și creșterea rar a nivelurilor de lipază serică și amilază.Niciun pacient nu a prezentat semne clinice de pancreatită.
Din punct de vedere al răspunsului, niciunul dintre cei 15 pacienți înscriși în studiul de fază I din SUA nu a răspuns.În faza italiană I / II a studiului, 6 din 24 de pacienți cu fază I / II au răspuns la tratament, incluzând un răspuns complet și 5 răspunsuri parțiale, pentru o rată de răspuns totală de 25%.Paisprezece pacienți au avut o boală stabilă pentru ≥ 1 ciclu de terapie și 6 pacienți au avut boală stabilă timp de 3 luni de la studiu.Toți pacienții cu boală sau răspuns stabil au primit OBD sau o doză mai mare de ADI-PEG20.
Un obiectiv al studiului a fost de a investiga imunogenitatea ADI-PEG20.În ceea ce privește imunogenitatea medicamentului, niciunul dintre pacienți nu a dezvoltat activitate măsurată enzimatic neutralizând anticorpul în probele de plasmă.Acest lucru este în concordanță cu lipsa reacțiilor alergice observate clinic.În ceea ce privește doza maximă tolerată, 6 pacienți au fost tratați la doza cea mai mare de 640 U / m2 intramuscular săptămânal.Cu excepția disconfortului la locul de injectare (gradul 1), nu s-au observat efecte toxice majore.Întrucât 640U / m2 a fost cea mai mare doză care s-a putut administra cu ușurință prin injecție intramusculară, s-a concluzionat că doza maximă tolerată depășea doza care ar putea fi administrată convenabil pe această cale.
În prezent, efectuăm un studiu de fază II cu ADI-PEG20 în melanom avansat, utilizând o doză săptămânală de 160 U / m2 intramuscular.Rezultatele preliminare din acest studiu au fost prezentate (ASCO, 2005).Douăzeci de pacienți cu melanom local avansat sau metastatic au fost tratați până acum.În ceea ce privește răspunsul, 4 pacienți au avut un răspuns parțial, iar 3 pacienți au avut un răspuns minor (<50% reducere) pentru o rată de control a tumorii de 35%.În plus, 3 pacienți au prezentat un răspuns mixt sugerând dovezi ale activității antitumorale.
Interesant, un pacient care a avut un răspuns parțial la o doză de 160 U / m 2 a avut progresie săptămânală a bolii.Doza a crescut și pacientul a răspuns din nou la tratament.Acest lucru sugerează că poate exista un răspuns la doză sau poate dezvoltarea rezistenței la medicament datorită anticorpului de neutralizare care a fost depășit de doza crescută de medicament.
Locurile de răspuns includ plămânul, boala nodală, țesutul moale și pielea.Acest lucru nu este neașteptat, deoarece pacienții cu boală în aceste organe au mai multe șanse de reacție decât pacienții cu alte boli viscerale.Am observat un răspuns mixt la un pacient cu metastaze hepatice extensive utilizând ADI-PEG20.
În ceea ce privește toxicitatea, un pacient a prezentat neutropenie de gradul 3, care a fost rezolvată atunci când medicamentul a fost oprit.Un alt pacient a avut grade neutropenie ¾.Ulterior, el a primit filgrastim la fiecare 2 săptămâni, ceea ce a împiedicat complet neutropenia și ia permis să continue să primească săptămânalul ADI-PEG20.Alte toxicități au fost ușoare și, în principal, au constat în oboseală și disconfort la locul injectării.Nu au fost observate alopecie, greață, vărsături, diaree sau toxicitate majoră la organe.Niciun pacient nu a oprit medicamentul din cauza toxicității.
Datele preliminare sugerează că prezența expresiei ASS în tumoare poate prezice răspunsul la ADI-PEG20.Doi pacienți au avut probe de tumori de melanom testate pentru exprimarea ASS înainte de tratament și au fost ASS (-).Ambii pacienți au avut un răspuns clinic la ADI-PEG20, dar au dezvoltat mai târziu progresia bolii.Eșantioanele de tumoare au fost obținute la momentul progresiei bolii și tumora a fost colorată ASS pozitivă.Un pacient a cărui tumoare de melanom a fost colorat cu ASS pozitiv înainte de ADI-PEG20 nu a răspuns la tratament.Cu toate acestea, 7 din 11 pacienți a căror tumoare au fost ASS (-) înainte de tratament aveau dovezi ale activității antitumorale (răspuns parțial, minor sau mixt) cu ADI-PEG20. Acest studiu continuă să acumuleze pacienți și este nevoie de investigații suplimentare pentru a confirma corelația dintre expresia ASS a tumorii și răspunsul clinic la tratament.
ADI-PEG20 a fost de asemenea studiat în studiile clinice la pacienții cu carcinom hepatocelular inoperabil. Un pacient cu carcinom hepatocelular inoperabil a fost tratat cu doze escaladate de ADI-PEG20 ca o scutire unică a pacientului [ 74 ]. Tumoarea a redus în dimensiune și a existat o reducere a nivelurilor serice ale alfa-fetoproteinei. Nu a fost observată toxicitate datorată medicamentului. Acest răspuns încurajator a condus la un studiu de fază I / II cu ADI-PEG20 la pacienții cu carcinom hepatocelular inoperabil [ 75 ]. Pacienții cu carcinom hepatocelular au fost acumulați de la Institutul de Cancer Pascale din Napoli, Italia. Nouăzeci de pacienți au fost înscriși în studiu în 1 din 4 cohorte. Nivelurile dozelor inițiale ale ADI-PEG20 au fost 20, 40, sau 80 U / m 2. Pacienții ulterioare au fost tratați cu o doză inițială de 160 U / m 2 , care a fost determinată să fie doza biologică optimă , care a redus nivelul argininei plasmatice la niveluri nedetectabile (<2 pM / L) timp de cel puțin 7 zile. Din punct de vedere al răspunsului, 2 pacienți au răspuns complet și 7 pacienți au răspuns parțial la o rată de răspuns totală de 47%. Durata răspunsului a fost definită ca timpul de la începerea tratamentului până la progresie. Durata mediană a răspunsului a fost> 400 zile (interval: 37 până la> 680 zile). În ceea ce privește toxicitatea, efectele secundare includ durerea la locul injectării, creșterea acidului uric seric și a fibrinogenului și creșterea în mod ocazional a nivelurilor de lipază serică și amilază. Nu au apărut semne clinice de pancreatită. Nu a fost găsită nicio dovadă a producerii de anticorpi neutralizanți.
Un al doilea studiu de fază I / II al ADI-PEG20 săptămânal a fost efectuat la spitalul MD Anderson (ASCO, 2005). Faza I a studiului a implicat creșterea dozei de medicament până la 160 U / m 2 . Partea din faza a II-a a testului a utilizat o doză inițială de 160 U / m 2 care a fost considerată OBD, dar a permis o creștere a dozei de până la ≤240 U / m 2. Treizeci și cinci de pacienți au fost înscriși în studiu. În ceea ce privește răspunsul, un pacient a avut un răspuns care a permis pacientului să fie rezistent. În plus, 16 pacienți aveau boală stabilă. Patru pacienți nu au efectuat studiul din cauza reacției alergice sau a bolii intercurente. Douăsprezece opt pacienți au prezentat progresia bolii. Timpul mediu raportat pentru progresie a fost de 3,4 luni, cu un interval de 1 până la 13 luni. Toți pacienții au avut niveluri plasmatice ale argininei nedetectabile după tratamentul ADI-PEG20 (<2 pM). Pentru un pacient care a avut un răspuns și a devenit rezistent, moartea a apărut datorită trombozei venoasei portal și eșecului viu rezultat. Autopsia a arătat o tumoare viabilă minimă rămasă.
În ceea ce privește toxicitatea, efectele secundare au fost mai pronunțate în comparație cu studiul de fază I din Italia. Doisprezece pacienți aveau toxicitate de gradul 3 constând în principal din funcția hepatică sau anomaliile electrolitice serice. În plus, 3 pacienți aveau toxicitate de gradul 4 care constau în anomalii ale funcției hepatice sau în creșterea lipazei serice. Ulterior, am participat la testul de fază 2B a ADI-PEG20 la pacienții cu carcinom hepatocelular nerezecabil, în colaborare cu Institutul de Cancer Pascale. Pacientii au primit ADI-PEG20 la 80 sau 160 U / m 2. Obiectivul primar a fost supraviețuirea globală. O analiză intermediară a arătat că supraviețuirea mediană din momentul diagnosticului a fost de 11,7 luni, iar supraviețuirea mediană de la primul tratament a fost de 8,8 luni. Rata de supraviețuire de 12 luni a fost de 36,7%. Aceste numere sunt comparabile cu cele raportate de Institutul de Cancer Pascale și de la un studiu de fază I / II raportat de MD Anderson [ 75 ]. Interesant, din cei 9 pacienti tratati la Universitatea din Miami, doi pacienti au avut boala stabila timp de cel putin 12 luni. Un pacient a prezentat o boală stabilă timp de un an, iar celălalt pacient a prezentat o boală stabilă timp de> 2 ani, fără efecte secundare observate în urma tratamentului, cu excepția disconfortului la locul injectării. Acest pacient continuă să primească tratament cu injecții săptămânale ADI-PEG20.
CONCLUZII FINALE
Lipsa de arginină este o abordare nouă și promițătoare orientată spre tratamentul anumitor tumori care nu pot forma arginină din ciclul ureei și, prin urmare, sunt auxotrofice pentru arginină. În special, melanomul și carcinomul hepatocelular și, eventual, anumite mezoteliomuri și cancerele celulare renale pot fi sensibile la această terapie. In timp ce noi terapii sunt in curs de aparitie pentru cancerul de celule renale, alte tipuri de cancer sunt dificil de tratat cu terapie de droguri si pentru pacientii cu boala neresectable, ratele de raspuns si supravietuirea globala ramane saraca. Astfel, există o mare nevoie de a dezvolta noi terapii de droguri pentru aceste boli maligne.
Datorită incidenței scăzute a efectelor secundare majore, cum ar fi supresia mieloidă și toxicitatea gastrointestinală sau alte efecte toxice asupra organelor, deprivarea argininei poate fi ușor combinată cu alți agenți anti-cancer pentru a crește rata de răspuns. Datele noastre in vitro de laborator sugerează că ADI-PEG20 poate fi sinergic cu agenții de distrugere a ADN-ului, cum ar fi cisplatina și temozolomida (AACR, 2007). Acest lucru pare a fi din cauza incapacității ASS (-) Pentru MDR1, primerii au fost MDR1 secvențe specifice GGAGTGTCCGTGGATCACAAG (resturile 1909-1930) și TGTTCAGGATCATCAATTCTTGT (resturile 2218-2241). Acești primeri au fost selectați în regiuni care sunt doar 36,4 și 37,5% similare cu regiunea corespunzătoare a ADNc mdr-3 . Astfel, ei nu ar trebui să recunoască mdr-3gena. Produsul PCR rezultat din acești primeri a fost de 232 bp. celulele tumorale pentru repararea ADN-ului în absența argininei. Combinația dintre ADI-PEG20 și acești agenți de deteriorare a ADN-ului și alte medicamente sunt în prezent studiate pentru un studiu clinic viitor.
Dezvoltarea rezistenței la medicament datorată inducerii expresiei genei ASS este o problemă potențială în anumite tumori. Această formă de rezistență poate fi depășită prin înțelegerea controlului transcripției / translației acestei gene. Se investighează manipularea farmacologică pentru controlul expresiei ASS și prevenirea rezistenței la medicament în laboratorul nostru.
PMC3096551
Curr Pharm Des .Manuscris de autor;disponibil în PMC 2011 17 mai.
Această lucrare este susținută de un grant (R01CA109578) de la NIH și un grant de cercetare de la VA. Dorim să mulțumim companiei Polaris Inc. pentru furnizarea ADI-PEG20 și analiza argininei și citrulinei.
14. wheatley DN, Campbell e, Lai PBS, Cheng PNM. Terapia genică și biologia moleculară.2005;9 : 33-40.[ Google Scholar ]
15. Ensor CM, Holtsberg FW, Bomalaski JS, Clark MA.Cancer Res.2002;62 : 5443-50.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
16. Yoon CY, Shim YJ, Kim EH, Lee JH, Won NH, Kim JH, și colab.Int J Cancer.2007;120 : 897-905.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
17. Szlosarek PW, Klabatsa A, Pallaska A, Sheaff M, Smith P, Crook T, și colab.Clin Cancer Res.2006;12 : 7126-31.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
18. Savaraj N, Wu C, Kuo M, You M, Wangpaichitr M, Robles C, și colab. Datele despre obiectivele de droguri.2007;2 : 119-128.[ Articolul gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
44. Izzo F, Montella M, Orlando AP, Nasti G, Beneduce G, Castello G, și colab. J Gastroenterol Hepatol.2007;22 : 86-91.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
45. Sarbassov DD, Ali SM, Sabatini DM. Curr Opin Cell Biol.2005;17 : 596-603.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
46. Tokunaga C, Yoshino K, Yonezawa K. Biochem Biophys Res Commun.2004;313 : 443-6.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
47. Guertin DA, Sabatini DM.Cancer Cell.2007;12 : 9-22.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
48. Kimura N, Tokunaga C, Dalal S, Richardson C, Yoshino K, Hara K și colab. Genele Celule.2003;8 : 65-79.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
49. Smith EM, Finn SG, Tee AR, Browne GJ, Proud CG.J Biol Chem.2005;280 : 18717-27.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
50. Nobukuni T, Joaquin M, Roccio M, Dann SG, Kim SY, Gulati P, și colab. Proc Natl Acad Sci SUA A.2005; 102 : 14238-43.[ Articolul gratuit PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
51. Pattingre S, Espert L, Biard-Piechaczyk M, Codogno P. Biochimie. 2007. [ Google Scholar ]
52. Lenaerts K, Renes J, Bouwman FG, Noben JP, Robben J, Smit E, și colab. Proteomica.2007;7 : 565-77.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
53. Grabon W. Postepy Hig Med Dosw (online) 2006; 60 : 483-9.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
54. Carritt B, Povey S. Cytogenet Cell Genet.1979;23 : 171-81.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
55. Su TS, Bock HG, O’Brien WE, Beaudet AL.J Biol Chem.1981;256 : 11826-31.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
56. Jinno Y, Matuo S, Nomiyama H, Shimada K, Matsuda I. J Biochem (Tokyo) 1985; 98 : 1395-403.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
Enzimele proteolitice au demonstrat eficacitate în tratamentul cancerului.Prezentăm o combinație a celor două pro-enzime Trypsinogen și Chymotrypsinogen A cu eficacitate antitumorală in vitro și in vivo .A fost determinat un efect sinergic anti-tumoral pentru Trypsinogen și Chimotripsinogenul A la un raport 1: 6 (denumit PRP) utilizând 24 de linii celulare de cancer uman.Efectul antiangiogen al PRP a fost analizat prin formarea de tuburi bazate pe matrigel și prin teste de formare a capsulelor fibroase.Mai mult, au fost efectuate teste de invazie celulară și de vindecare a rănilor împreună cu determinarea qRT-PCR a markerilor de tranziție epitelial-mezenchimică (EMT) pe celule canceroase umane tratate cu PRP.În plus, au fost puse în aplicare studii farmacocinetice in vivo , iar eficacitatea antitumorală a PRP a fost studiată împotriva tumorilor ortotopice de cancer pancreatic și ovarian.Formularea PRP s-a dovedit a inhiba angiogeneza in vitro , creșterea tumorii, migrația celulelor canceroase și invazivitatea;și să fie un tratament anti-tumoral in vivo eficient și bine tolerat.În cele din urmă, eficacitatea clinică a unei formulări de supozitoare care conține atât pro-enzime pancreatice în contextul unei scheme speciale farmaceutice britanice a fost evaluată la pacienții cu cancer avansat.În consecință, PRP ar putea avea aplicații clinice oncologice relevante pentru tratamentul adenocarcinomului pancreatic avansat sau metastatic și a cancerului ovarian epitelial avansat.
Introducere
Cancerul este a doua cauză de deces în SUA.Potrivit Societății Americane de Cancer, 42% dintre bărbați și 37% dintre femei sunt expuși riscului de a dezvolta cancer în timpul vieții lor.Cancerul pancreatic reprezintă aproximativ 3% din toate cazurile de cancer din SUA și aproximativ 7% din decesele provocate de cancer, în timp ce cancerul ovarian se află pe locul cinci în decesele cauzate de cancer în rândul femeilor, ceea ce reprezintă mai multe decese decât orice alt cancer al sistemului reproducător feminin.Deoarece numai 10% din decesele provocate de cancer sunt cauzate de tumora primară, provocarea terapeutică este tumora metastatică sau secundară, care este generată de răspândirea celulelor canceroase inițiată de pierderea moleculelor de adeziune care țin tumora în țesutul inițial 1 .În anii următori, procesul de tranziție epitelial până la mezenchimie (EMT) a fost propus ca eveniment inițial pentru metastazarea tumorii 2 .De fapt, atunci când o celulă cancerică își pierde proprietățile epiteliale pentru a dobândi un fenotip mezenchimic, dobândește o șansă crescută de a migra către alte țesuturi 3 .Astfel, dezvoltarea de noi strategii terapeutice care modulează progresia EMT în celulele canceroase a devenit, în ultimii ani, o prioritate cu aplicabilitate clinică largă.
Deși aplicarea terapeutică a enzimelor pancreatice a fost propusă cu mai mult de 100 de ani în urmă 4 și combinația de enzime proteolitice a demonstrat eficacitate în tratamentul cancerului 5,6 , cele mai multe abordări se bazează pe combinația mai multor enzime proteolitice, ceea ce ar putea crește probabilitatea de nedorite și evenimente neprevăzute.Recent, am demonstrat că tratamentul celulelor canceroase umane cu Trypsinogen (T) și Chimotripsinogenul A (C) are ca rezultat o creștere a adeziunii celulare, o atenuare a câtorva markeri asociate cu EMT și o creștere a expresiei mai multor asocieri asociate diferențierii markeri, sugerând obținerea unui fenotip mai puțin malign 7 .În plus, studiile retrospective de cohortă clinică la pacienții cu cancer au demonstrat că terapia cu enzime pe cale orală a redus în mod semnificativ efectele secundare și simptome induse de tumori și terapie, cum ar fi greața, tulburările gastrointestinale, oboseala, pierderea în greutate și agitația și, (QoL) de pacienți cu cancer 8 – 10 .
Aici, prezentăm studii aprofundate in vitro și in vivo pentru a investiga eficacitatea antitumorală a unei formulări pro-enzime constând dintr-o combinație de Trypsinogen și Chymotrypsinogen A într-un raport sinergie.În primul rând, am testat efectul antiproliferativ pentru combinarea T și C în 24 de linii de celule canceroase și am determinat un raport sinergie pentru T și C (1: 6), care a fost definit ca PRP.În al doilea rând, am evaluat efectul antiangiogenic in vitro al acestei formulări, prin testul de formare a tubului cu agar moale și in vivo utilizând testul AngioChamber ™, care se bazează pe procesul fiziologic normal de vindecare a rănilor, pentru a promova formarea capsulelor fibroase în jurul o cameră de teflon care eliberează factorul de creștere 11 .În al treilea rând, pentru a analiza efectul anti-metastatic al tratamentului pro-enzimatic, am studiat efectul PRP în invazia celulară, migrarea celulelor și în modularea genelor legate de EMT în celulele cancerului pancreatic și ovarian.Mai mult, efectuăm un studiu farmacocinetic PRP in vivo și am evaluat eficacitatea anti-tumorală a PRP în modelele de cancer murinic.În acest scop, am tratat șoareci inoculați ortotopic cu celule de cancer ovarian uman A2780 sau cu celule tumorale pancreatice pancreatice de tip Pan02 cu PRP.În cele din urmă, raportăm aici eficacitatea clinică la 46 de pacienți cu boală malignă avansată de origine diferită, tratați cu o formulare rectală de pro-enzime pancreatice.
În acest studiu, am determinat mai întâi concentrațiile inhibitorii jumătate maxime (IC50) ale tripsinogenului și chitomicroscopic A ca efect unic al unui articol de testare, într-un grup extins de 24 de linii celulare de cancer uman.Valorile IC50 ale tripsinogenului au constituit baza pentru calculul raporturilor de concentrație pentru combinația între Trypsinogen și Chymotrypsinogen A la 1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 6, 1: 8 și 1:10.La aceste rapoarte, proprietățile de inhibare a creșterii combinației au fost evaluate în 24 de linii de celule canceroase.Pe baza coeficienților de interacțiune medicamentoasă (CDI), combinația Trypsinogen plus Chymotrypsinogen A a demonstrat o inhibare mai mare a creșterii la raporturi de 1: 4, 1: 6 și 1: 8, comparativ cu raportul 1: 1 în toate liniile celulare testate, 786-O, G-361, BT-474 și celulele tumorale HL-60 (figura 1 , tabelul suplimentar S4 ).În final, s-a constatat că un raport T: C = 1: 6 al ambelor pro-enzime este optim și a fost utilizat pentru următoarele experimente.Tabelul suplimentar S5 rezumă valorile IC50 ale liniilor celulare utilizate pentru experimentele in vitro .
Determinarea coeficienței interacțiunii medicamentoase.Testele combinate de Trypsinogen și Chymotrypsinogen au fost realizate în rapoarte de 1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 6, 1: 8 și 1:10.Graficele reprezentative arată un raport optim sinergic pro-enzimatic al tripsinogenului cu chitomoplasinogenul ca 1: 6.
Eficacitatea antiangiogenă a formulării proenzimelor pancreatice
Pentru a determina dacă terapia enzimatică afectează angiogeneza, s-a utilizat un test de formare a tubului cu agar moale.Celulele endoteliale de control ale celulelor venei ombilicale de control (HUVEC) au fost organizate în clustere după 3 ore și au început să formeze structuri asemănătoare tubului după 5 ore, care au fost clar evidente după 24 de ore ( Fig.2A ).Dimpotrivă, HUVEC-urile tratate cu PRP au prezentat o reducere semnificativă a numărului și lungimii tuburilor capilare închise într-o manieră dependentă de concentrație, cu o dispariție totală a structurilor după tratamentul cu T / C 0,07 / 0,42 mg / ml (Figura 2A ) .Pentru a evalua dacă inhibarea formării structurilor tubulare asemănătoare ar putea fi determinată de moartea celulelor cauzată de tratamentul cu PRP, Kitul de Viabilitate / Citotoxicitate LIVE / DEAD a fost utilizat pentru a identifica celulele viabile.Așa cum s-a apreciat în figura 2B , atât celulele de control, cât și cele tratate cu PRP au prezentat o colorare verde, ceea ce indică faptul că inhibarea cordoanelor celulare a fost independentă de viabilitatea celulară.
Testarea formării tubului de angiogeneză.( A ) Imagini reprezentative de microscopie ușoară a HUVEC în analizele Matrigel ™.Celulele HUVEC au fost crescute pe Matrigel și după 5 ore și după 24 de ore de tratament cu T / C 0,035 / 0,21 (mg / ml) sau T / C 0,07 / 0,42 (mg / ml) a fost evaluată formarea structurilor capilare.( B ) Testul de viabilitate celulară a fost efectuat prin măsurarea celulelor metabolice active colorate cu Calcein AM.Imaginile reprezentative fluorescente ale celulelor de control HUVEC (CTR) și celulelor tratate (T / C 0,07 / 0,42 mg / ml) după 24 h sunt arătate, unde celulele vii apar verde și apar celule moarte colorate cu homodimer-1 (EthD-1) roșu.Mărire originală 10x pentru toate panourile.( C ) Numărul de structuri capilare asemănătoare măsurate după 24 de ore de cultură.Datele din 3 experimente independente efectuate în duplicat sunt exprimate ca medie ± SD (** P <0,01 vs. Control).( D ) Greutatea medie a capsulei (g) de la șoareci cu AngioChambers ™ implantată fără βFGF1 și tratată cu Controlul vehiculului (Grupul 1), conținând βFGF1 și tratată cu Controlul vehiculului (Grupul 2) și conținând βFGF1 și tratată cu T / C (0,13 / 0,78 mg / kg administrate ip, într-un volum de dozare de 10 ml / kg) (Grupa 3) (** P <0,05).
Mai mult, cuantificarea numărului de structuri asemănătoare capilarului în diferite zone ale puțului a evidențiat o diferență dramatică și semnificativă între numărul de structuri formate de celulele netratate în comparație cu celulele tratate cu PRP (figura 2C ).
Efectul anti-angiogen al PRP a fost investigat suplimentar in vivo utilizând testul AngioChamber ™, un model utilizat pentru a evalua eficacitatea tratamentelor antiangiogene prin măsurarea formării capsulelor fibroase la șoareci.În această analiză, includerea bFGF în cameră susține inducerea dezvoltării vaselor de sânge și formarea unei capsule fibroase.AngioChambers ™ au fost excluse de la toți șoarecii post-mortem în ziua terminării, 24 de ore după tratamentul final (Ziua 5).Figura 2D arată că formarea capsulelor fibroase a fost semnificativ mai mare în grupul de control al vehiculului cu bFGF captat în cameră (Grupul 2, Controlul Inducției) decât în grupul de control al vehiculului fără bFGF încărcat în cameră (grupul 1, Controlul de bază) (p < 0,05) indicând faptul că bFGF a stimulat în mod adecvat și semnificativ formarea capsulelor.Tratamentul cu PRP (Grupa 3) a determinat o reducere semnificativă a angiogenezei comparativ cu controlul de inducție (grupul 2), așa cum este indicat de diferența în greutatea capsulei (p <0,05) cu o inhibare a formării capsulelor fibroase de 57%.Astfel, PRP inhibă formarea capsulelor fibroase care prezintă efecte anti-angiogenice in vivo semnificative.
Efectul anti-invazie, anti-migrare și anti-EMT al PRP
Pentru a analiza efectul anti-metastatic in vitro al tratamentului pro-enzimatic, am studiat efectul PRP în invazia celulară, migrarea celulară și în modularea genelor legate de EMT în celulele canceroase.În primul rând, pentru a evalua efectul PRP asupra migrării celulare, un eveniment cheie în carcinogeneză, am efectuat un test de vindecare a rănilor pe cinci linii de celule canceroase diferite: BxPC3 și Mia Paca-2 pancreatice umane, celule A2780 ovariene umane, melanomul uman A375 și colon uman (HCT 116).Migrarea este definită ca mișcarea direcționată a celulelor pe un substrat, cum ar fi plăcile de plastic care apar pe suprafețe 2D.Aici arătăm că celulele netratate au migrat mai repede pentru a închide decalajul unei zgârieturi în monostratul celular decât celulele tratate cu PRP.PRP a redus semnificativ migrarea celulelor celulelor BxPC3 pancreatice și a comparat cu celulele martor chiar a lărgit lățimea plăgii, un model de migrare care a fost diferit în comparație cu celelalte linii celulare și că părea să fie specific celular ( Fig.3A) .Deși linia celulară tumorală ovariană A2780 nu crește, formând un monostrat omogen ca BxPC3, se poate observa că tratamentul PRP reduce semnificativ capacitatea celulelor ovariene de a migra (Figura 3B).Datele au arătat o inhibare semnificativă a migrării celulare, cu numai 23% din celulele migrate după 48 de ore de tratament cu PRP în comparație cu celulele martor care au atins 88% ( fig.3A și B ).Rezultate similare au fost obținute cu celule MIA PaCa-2, A375 și HCT 116, celulele tratate au prezentat valori ale migrării celulare de ordinul a 25-30% după 48 ore de tratament cu PRP, în timp ce celulele netratate treptat s-au mutat în celulă – regiune zero de zgâriere (figura 3C-E ).
Experimentul de vindecare a rănilor pentru a determina migrarea celulelor.Testele de vindecare a rănilor au fost efectuate la 0, 24 și 48 de ore în celule BxPC3, A2780, MIA PaCa-2, A375 și HCT 116 în celule tratate cu IC50 și celule netratate utilizate ca martori.( A ) Imagini reprezentative cu microscop de contrast în fază care prezintă zona acoperită de celule la 0, 24 și 48 de ore după rănire.Mărire originală 10 ×.( B ) Mărire originală 10 ×.( B ) Migrarea celulelor a fost determinată de viteza celulelor care se deplasează spre zona zgâriată în timp utilizând software-ul ImageJ ™ ( * P <0,05 și ** P <0,01).
În al doilea rând, am testat efectul inhibitor al formulării pro-enzimatice asupra invaziei celulare a celulelor tumorale de colon și de pancreas.Invazia este definită ca o mișcare a celulelor printr-o matrice 3D extracelulară.Principiul acestui test se bazează pe două camere conținând medii separate printr-o membrană poroasă prin care celulele se transmigrează.Aici, am testat diferite concentrații de PRP (tabelul suplimentar S2 ) pe liniile celulare de cancer uman pancreatic MIA PaCa-2 și HCT-15.Interesant, PRP a prezentat o inhibare marcată și semnificativ dependentă de doză a invaziei în ambele linii celulare.Inhibarea totală a migrării celulare a fost obținută din concentrațiile de PRP de 0,015 / 0,093 mg / ml T / C și așa mai departe, cu celelalte concentrații crescătoare testate (Figura 4A ).
Invazia celulară și analiza genelor legate de EMT.( A ) testul de migrare 3D.Graficele reprezintă numărul de celule care transmigrează prin membrana poroasă după expunerea la concentrații crescătoare de PRP.Se utilizează PBS ca martor negativ și combretastatin ca control pozitiv.( B ) expresia genelor legate de EMT.Analiza qRT-PCR a evidențiat creșterea expresiei E-cadherinei cu reducerea concomitentă semnificativă a expresiei N-cadherinei, Slug și vimentinei în celulele BxPC3.PRP nu a afectat în mod semnificativ vimentinul, dar a redus în mod semnificativ exprimarea N-cadherin și Slug și a crescut expresia E-cadherin în celule A2780.( * P <0,05 și ** P <0,01).( C ) Imagini confocale reprezentative ale expresiei E-cadherin și β-catenin în celulele tratate și controlate cu BxPC3 și A2780.Expresia E-cadherin și expresia β-catenină a fost detectată (în roșu), iar nucleele au fost contracarate cu DAPI (albastru).Mărire originală 40 ×.
Pentru a investiga dacă expunerea PRP are o posibilă reglementare în mecanismele transcripționale care conduc EMT în celulele canceroase, expresia genelor EMT a fost studiată în celulele cancerigene umane pancreatice BxPC3 și A2780 ( Fig.4B ).Indicatorii EMT în ambele celule BxPC3 și A2780 au fost afectați de tratamentul PRP la T / C 0,07 / 0,42 mg / ml.Figura 4B arată că tratamentul PRP a crescut expresia E-cadherinei (0,4 ori) (* P <0,05), în timp ce a redus expresiile de N-cadherin, Slug și vimentin (0,9, 0,5 și 0,6 ori, 0,01) în celule BxPC3.În adiție, PRP a modificat în mod semnificativ expresia E caderinei (0,9 ori) (** P <0,01) și a redus în mod semnificativ expresia N-cadherinei și Slug (0,4 și respectiv 0,6 ori) (** P < 0,01) și a indus o scădere ușoară, dar nu semnificativă, a expresiei vimentinei în celulele A2780.În cele din urmă, au fost efectuate analize de imunofluorescență pentru a confirma modificările expresiei genice.Imaginile confocale ale celulelor BxPC3 și A2780 imunostainate pentru a detecta expresia markerilor epiteliali E-cadherină și β-catenină au arătat o creștere a expresiei ambelor markeri în membrana celulară a celulelor tratate cu PRP în comparație cu celulele de control netratate ( Fig.4C ).
Studiu farmacocinetic PRP
Pentru a evalua farmacocinetica și distribuția de organe a Trypsinogen și Chymotrypsinogen A, șoarecii Nymph-Foxn nu femelă purtători de tumori au fost tratați cu Trypsinogen marcat cu IRDye® 800CW (5 mg / kg) plus tripsinogen (50 mg / kg) sau IRDye® 800 mg Chymotripsinogen A marcat cu CW (7 mg / kg), plus Chimotripsinogenul A neimologat (300 mg / kg).Animalele au fost eutanasiate la punctele de timp specificate post-doză, iar plasmă împreună cu omogenatele de organe a fost preparată, apoi imaginate prin intermediul sistemului de imagistică IVIS.
Fluorescența a fost măsurată în omogenatele de organe.Șoarecii tratați cu T marcat au prezentat un vârf de fluorescență în toate organele între 15 minute și 2 ore după doză.În timp ce șoarecii tratați cu C marcat au prezentat emisia maximă de fluorescență între 15 minute și 6 ore după doză.Pentru ambele valori cele mai ridicate au fost observate în rinichi și ficat ( fig.5A și B ).Nivelurile maxime ale ambelor tripsinogene marcate cu IRDye®800CW și ale chitomicroscopic A în plasmă de șoarece au apărut la 15 minute după administrarea dozei (7,5 și respectiv 72,2 μg / ml).Nivelurile atât ale proenzimelor marcate cu IRDye® 800CW au scăzut rapid după acest timp ( fig.5C și D ).
Studiu farmacocinetic.S-au citit fluorescență în omogenatele de organe de la șoareci tratați cu ( A ) IRGye® 800CW marcat cu tripsinogen (5 mg / kg) și tripsinogen (50 mg / kg) sau B cu chimotrispsinogen A marcat cu IRDye® 800CW și chitomizinogen A (300 mg / kg).( C ) Nivele de trypsinogen marcat cu IRDye®800CW și ( D ) chitomicrosinogen A în plasmă de șoarece.
Eficacitatea antitumorală a PRP în modelele de șoareci orthotopici
Efectul formulării PRO-enzime PRP în doze diferite asupra greutății tumorale în tumorile pancreatice și ovare implantate ortotopic este reprezentat în fig.6.În grupul de control al tumorii pancreatice, un animal a fost eutanasiat în ziua a 6-a datorită unor semne clinice adverse care nu au legătură cu tratamentul și un alt animal a fost găsit mort datorită unor cauze necunoscute în ziua 23. Nu a existat o reducere semnificativă (* P <0,05) animale tratate timp de 26 zile cu Trypsinogen / Chimotripsinogen A la 83,3 / 500 mg / kg (30,2 mg, inhibare 85,9%) comparativ cu martor (PBS 214,8 mg), dar nu între Trypsinogen / Chimotripsinogen A la 27,5 / 165 mg / kg 196,5 mg, inhibare de 8,5%) și controlul (figura 6A ).
Activitatea antitumorală in vivo a PRP.( A ) Imagini ale tumorilor excizate la terminarea studiului tumorilor pancreatice ortotropice.Greutatea medie a tumorii în ziua terminării după injectarea intravenoasă iv a PBS, T / C 27,5 / 165 (mg / kg) sau T / C 83,3 / 500 (mg / kg) ( * P <0,05).( B ) Imagini ale tumorilor excizate la terminarea studiului tumorilor ovariene ortotropice.Greutatea medie a tumorii în ziua terminării după injectarea intravenoasă iv a PBS, T / C 9,1 / 54 (mg / kg) sau T / C 27,5 / 165 (mg / kg) ( * P <0,05).
Mai mult, șoarecii purtători de tumori ovariene ( Fig.6B ) au prezentat o reducere semnificativă (* P <0,05) a greutății medii a tumorii la animalele tratate timp de 21 de zile cu două doze diferite de Trypsinogen / Chimotripsinogen A, 9,1 / 54 mg / kg și 27,5 / 165 mg / kg, comparativ cu martor (PBS).Greutatea medie a tumorilor din grupul de control a fost de 2062,2 mg, în timp ce grupurile tratate au prezentat o greutate medie a tumorii de 1074,2 mg și, respectiv, 957,3, variind într-o inhibare a tumorii de 50% (52-46%).
Prezentare generală a studiilor clinice
Eficacitatea clinică a unei formulări de supozitoare care conține pro-enzime pancreatice bovine Trypsinogen și Chymotrypsinogen A a fost evaluată în contextul unei scheme speciale farmaceutice britanice.Efectele clinice au fost studiate la 46 de pacienți cu cancer metastatic avansat de origine diferită (prostată, mamar, ovarian, pancreatic, colorectal, stomac, pulmonar nemetal celular, cancer intestinal și melanom) după tratamentul cu o formulare rectală a ambelor enzime pancreatice .Nu s-au observat evenimente adverse grave sau grave legate de administrarea rectală.Pacienții nu au prezentat efecte secundare hematologice, așa cum se observă de obicei în regimurile chimioterapice clasice.Nu au fost observate reacții alergice după administrarea rectală de supozitoare.Pentru a evalua activitatea terapeutică a administrării rectale, supraviețuirea globală a pacienților aflați sub tratament a fost comparată cu speranța de viață atribuită unui pacient înainte de începerea tratamentului.Tabelul 1 prezintă lista pacienților tratați cu formularea pro-enzimatică pancreatică.Nouăsprezece dintre cei 46 de pacienți (41,3%) cu boli maligne avansate, majoritatea suferind de metastaze, au avut o durată de supraviețuire semnificativ mai mare decât durata de viață estimată, de fapt, pentru întregul set de tipuri de cancer, supraviețuirea medie (9,0 luni) semnificativ mai mare decât speranța medie de viață (5,6 luni).
tabelul 1
Prezentare generală a studiilor clinice.Pacienții care au prezentat prognoza speranței de viață (*).Pentru întregul set de tipuri de cancer, supraviețuirea medie (9,0 luni) a fost statistic semnificativ mai mare decât speranța medie de viață (5,6 luni).ANOVA cu o singură cale (α = 0,05, P <0,05).
Deși numărul pacienților pe indicație de cancer este în mod natural destul de scăzut, 3 din 8 pacienți cu cancer de prostată și 5 din 11 pacienți cu cancer gastro-intestinal par să beneficieze în special de tratamentul cu supozitoarele pro-enzimatice.
Datele prezentate au fost relevante pentru adoptarea unei noi strategii în formularea unui preparat compus din prozime enzimele pancreatice (PRP) care s-au dovedit a reduce principalele caracteristici ale răspândirii cancerului.În acest context, angiogeneza, capacitatea de a forma noi vase de sânge reprezintă un pas critic în dezvoltarea tumorii prin care tumorile își stabilesc propria sânge 12 .Prin urmare, inhibarea angiogenezei va bloca una dintre cerințele fundamentale pentru creșterea tumorii, precum și răspândirea metastazelor tumorale în situsurile tumorale secundare.Am investigat activitatea anti-angiogenică in vitroa PRP utilizând testul de formare a tubului și testul de formare a tubului cu agar moale și in vivo cu analiza AngioChambers ™.Rezultatele au arătat că PRP inhibă formarea structurilor capilare asemănătoare HUVEC și suprimă formarea capsulelor fibroase conduse de bFGF capturat în AngioChambers TMimplantat subcutanat și ulterior prin stimularea VEGF endogenă.Factorii angiogenici, cum ar fi bFGF și VEGF, secretați de multe celule, inclusiv macrofage și celule canceroase, au demonstrat că joacă un rol important în progresia carcinomului pancreatic 13 și a altor tipuri tumorale 14-16 .Într-adevăr, bFGF stimulează toate etapele majore în cascada angiogenezei, așa cum se știe că este implicată în proliferarea, migrarea și diferențierea celulelor endoteliale 17 .
Un alt factor cheie în progresia cancerului este pierderea adeziunii celulelor celulare, care se corelează cu o capacitate crescută de migrare a celulelor și cu dobândirea proprietăților invazive de către celulele maligne, care suferă o schimbare morfologică care adaptează un aspect asemănător cu axul 18 .În plus, un test in vitro de vindecare a rănilor a arătat că capacitatea de migrație a celulelor cancerigene ovariene, de melanom și cancer de colon a fost suprimată după incubarea cu PRP.Mai mult, inhibarea potențialului de invazie celulară posedă cel mai probabil un potențial semnificativ de inhibare a metastazelor in vivo .
Pentru a înțelege mecanismele moleculare posibile care inhibă migrarea și invazia celulelor tratate cu PRP, a fost efectuată analiza qRT-PCR pentru a studia expresia genelor legate de EMT, un proces în care celulele epiteliale își pierd caracteristicile și se supun transdiferențierii celulelor mezenchimale motile.Dovezile sugerează că EMT este asociat cu metastaze și cu dobândirea de proprietăți chemorezistente în multe tipuri de cancer 19, inclusiv ovarian 20 și cancer pancreatic 21 .Într-adevăr, studiile anterioare au arătat că în timpul progresiei cancerului ovarian, EMT joacă un rol important în creșterea invaziei celulare, ceea ce duce la un rezultat slab al pacienților cu cancer ovarian 22 , 23 .În plus, studiile au constatat că EMT contribuie la rezistența la medicamente chimioterapeutice în cancerul pancreatic 24 și că mai mulți markeri EMT au fost, de asemenea, recunoscuți în cancerul pancreatic 25 , 26 .În acest studiu, demonstrăm că tratamentul cu PRP a promovat expresia genică a markerului epitelial E-cadherin și a scăzut expresia ambelor markeri mezenchimali, N-cadherin și vimentin.O trăsătură cheie a EMT este trecerea de la markeri epiteliali, cum ar fi E-cadherin și citokeratin la markeri mezenchimali cum ar fi N-cadherin, vitronectin 75 sau vimentin 27 , 28 .Aici arătăm că liniile celulare de cancer ovarian și pancreatic au prezentat o scădere semnificativă a expresiei N-cadherinei ca răspuns la tratamentul PRP.Aceasta este o observație foarte relevantă, deoarece reglarea în sus a N-caderinei este asociată cu un potențial crescut de migrație și invazie a celulelor cancerigene ovariene și pancreatice 29-31 .În plus, mai multe studii au evidențiat importanța semnalizării N-caderinei în progresia cancerului pancreatic 32 , 33 .S-a raportat că distrugerea N-cadherinei în celulele BxPC3 conduce la o exprimare crescută a E-cadherinei și a determinat, de asemenea, o reducere semnificativă a motilității liniei celulare BxPC3, sugerând că N-cadherina este un mediator cheie al procesului EMT în celulele pancreatice 28 .
În plus, expresia proteică a markerilor epitelii E-cadherin și β-catenin a fost mărită după tratamentul PRP și a apărut limitată la membrana celulară atunci când a fost analizată prin imunofluorescență.E-cadherina este o moleculă importantă de semnalizare în EMT în parte prin interacțiunea sa cu β-catenină 18 , de fapt, reducerea expresiei E-cadherin și β-catenin a fost asociată cu o diminuare a adeziunii celulare7.Mai mult decât atât, translocarea β-cateninei la nucleu și scăderea expresiei E-cadherinei sunt observate în diferite malignități umane asociate cu metastazarea 20 .
Mai mult, unul dintre genele puternic inhibat prin tratamentul cu PRP în ambele linii celulare BxPC3 și A2780 a fost Slug, un factor de transcripție care s-a dovedit a reprima E-cadherina și a reglat alte markeri EMT.Mai mult, s-a raportat că Slug este un inductor puternic al VEGF și prezintă efecte pro-angiogenice puternice 34 .De asemenea, Slug este asociat îndeaproape cu metastazele tumorale și angiogeneza în cancerul ovarian 35 și cu reglarea expresiei fascinei de proteină asociată cu actina, adesea foarte ridicată în tumorile maligne și recent sugerată ca o țintă marker sau terapeutică pentru cancerul pancreatic 36 .Prin urmare, datele noastre sugerează că PRP revine EMT în celulele canceroase.
Injecția intravenoasă a pro-enzimelor a determinat niveluri maxime detectabile în plasmă la 15-30 minute care au scăzut în prima oră și au fost încă prezente la niveluri scăzute după trei ore după administrarea dozei.Aceste observații sunt similare cu profilurile concentrației de timp găsite în studiile farmacocinetice anterioare cu potențiali agenți terapeutici pentru cancerele umane, incluzând pancreasul 37 , 38 și, de asemenea, în chimioterapeutica actuală utilizată în clinică, cum ar fi gemcitabina 39 .Mai mult, examinarea distribuției țesuturilor a demonstrat că proenzimele perfuzate în organe, incluzând inima, ficatul, splina, plămânul, rinichii și întregul tract gastrointestinal, au indicat o distribuție largă a țesuturilor pro-enzimelor 40 .
Am investigat în continuare modele de tumori ortotopice pentru a testa eficacitatea anti-tumorală a PRP utilizând celule tumorale umane (A2780) sau celule tumorale murine (Pan 02).Observațiile clinice au sugerat că mediul de organe poate influența răspunsul tumorilor la chimioterapie.De asemenea, implantarea ortotopică a celulelor tumorale umane în șoareci nudi oferă avantaje pentru studiul creșterii tumorale și a metastazelor 41 .În plus, Panc 02 s-a dovedit a fi o linie celulară de cancer pancreatic syngenetic adecvată pentru dezvoltarea tumorilor ortotopice în model murin imunocompetent, care imită îndeaproape cancerul pancreatic uman 42 .Unul dintre avantajele raportate ale modelelor ortotopice este acela că procesele de țintire care implică invazia locală (de exemplu, angiogeneza) pot fi efectuate la un loc mai relevant din punct de vedere clinic.Prin urmare, eficacitatea antitumorală a tratamentului zilnic cu Trypsinogen și Chimotripsinogenul A administrată în combinație ca o injecție iv singulară în două doze a fost evaluată împotriva celulelor cancerigene ovariene și pancreatice umane inoculate ortodic la șoareci femelici numi / nu șoareci C57BL / 6 femele, respectiv.În timp ce cele două doze testate au fost eficiente împotriva tumorilor ovariene ortotopice, numai doza mai mare testată a fost eficace în tumorile pancreatice.De remarcat, răspunsul slab al tumorilor pancreatice la terapiile disponibile este bine cunoscut 43 .
PRP nu numai că a demonstrat dimensiunea tumorii dicreazite, dar, de asemenea, s-a dovedit a fi un agent anti-cancer non-toxic deoarece nu au fost identificate evenimente adverse clinice legate de tratament.Luate împreună, formularea pro-enzimatică prezentată (PRP) inhibă în mod semnificativ tumori pancreatice și ovariene umane, atât entități tumorale bine vascularizate, cât și relativ rapide.Pentru ambele indicații, cancer pancreatic și ovarian, terapia clinică disponibilă este limitată și, prin urmare, prezintă indicații atractive pentru dezvoltarea clinică suplimentară a PRP.
În cele din urmă, în contextul unei scheme speciale britanice privind medicamentele, am evaluat eficacitatea clinică a unei formulări supozitoare, care conține tripsinogen, chimiotrypsinogen A și urme de α-amilază, la pacienți cu mai multe malignități diferite.A-amilaza a fost inclusă deoarece a făcut parte din extractele pancreatice brute care au fost utilizate în primele zile de terapie cu enzime, dar după evaluarea interacțiunii sinergice dintre tripsinogen, chitomoplasmogen și α-amilază s-a concluzionat că a-amilaza nu a contribuit la activitatea antitumorală a formulării.
Prin administrare rectală, tratamentul a fost bine tolerat de către pacienți și are avantajul că formularea este absorbită de către vasele de sânge ale rectului în circulație, evitând digestia enzimelor din duoden.Prin urmare, o formulare rectală conduce la o eficacitate îmbunătățită față de terapiile cu enzime orale actuale și ar reduce dozele mari utilizate în mod curent pentru aplicațiile orale44 .Există unele controverse în literatura de specialitate cu privire la cantitatea de pro-enzime intacte care ajunge efectiv în fluxul sanguin atunci când se administrează pe cale orală, dar și rectal.În timp ce unii autori susțin că numai o mică fracțiune (0,002%) 45 sau chiar niciuna 46 nu este absorbită, o teorie alternativă sugerează că aceste enzime sunt stabile la nivel acid și sunt absorbite prin mucoasa gastrointestinală în fluxul sanguin ca parte a unui proces de reciclare enteropancreatică47 .Mai mult, eficacitatea clinică a enzimei pancreatice rectale, după cum este evaluată prin timpul de supraviețuire prelungit în comparație cu speranța de viață estimată la începutul tratamentului, a fost evidentă la un număr de pacienți.
Rezumând, PRP se dovedește a fi un tratament anti-tumoral eficace și netoxic in vivo , capabil să inhibe angiogeneza și creșterea tumorii, migrarea celulelor canceroase și invazivitatea.Mai departe, o formulare de supozitoare conținând atât pro-enzime pancreatice a arătat o creștere a speranței de viață a pacienților cu cancer avansat.În consecință, PRP ar putea avea aplicații clinice oncologice relevante pentru tratamentul tumorilor solide cum ar fi adenocarcinomul pancreatic avansat și cancerul ovarian epitelial avansat.
Liniile de celule de cancer au fost obținute de la Colecția Americană de Cultură de Tip (ATCC) (Rockville, MD, USA).Tabelul suplimentar S1 prezintă liniile celulare utilizate și condițiile de creștere a culturii pentru fiecare dintre acestea.Toate celulele au fost cultivate la 37 ° C într-un incubator de cultură de celule umidificat furnizat cu 95% aer / 5% CO2.
Asigurarea îngrijirii animalelor
Procedurile care implică îngrijirea și utilizarea animalelor în studiu au fost revizuite și aprobate de către Comitetul de Stat pentru Medicină și Farmacie (IACUC) din Pennsylvania State College of Medicine.În timpul studiului, îngrijirea și utilizarea animalelor au fost efectuate în conformitate cu principiile enunțate în Ghidul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator, ediția a 8- a , 2010 (Consiliul Național de Cercetare).
Teste de citotoxicitate in vitro și determinări ale interacțiunilor medicamentoase
Trypsinogenul (T) și Chitopripsinogenul A (C) s-au dizolvat în PBS, soluțiile stoc au fost sterilizate prin filtrare (0,22 pm) și pentru fiecare formula enzimatică stocurile au fost amestecate în combinațiile corespunzătoare.Pentru a determina citotoxicitatea in vitro (jumătate din concentrațiile inhibitorii maxime, IC50) și CDI, plăcile cu 96 de godeuri au fost însămânțate pentru fiecare linie celulară, s-au adăugat combinații pro-enzime la celule 24 ore după însămânțare și testate triplicat pentru fiecare linie celulară .La 72 de ore după adăugare, testul CellTiter-Blue® a fost efectuat pe toate plăcile conform instrucțiunilor producătorului.Pe scurt, 10 pl de CellTiter-Blue® s-au adăugat la fiecare godeu și s-au incubat cu celule timp de până la 4 ore. Fluorescența a fost măsurată utilizând un Fluorometru Spectramax Gemini XPS. Toate datele au fost înregistrate și introduse în foi de calcul Microsoft® Excel pentru interpretare. Datele colectate de la testele CelITiter-Blue® au fost reprezentate grafic ca curbele de răspuns la doză pentru IC 50 determinare și ca isobolograms pentru a evalua CDI.
Testul de formare a tubului Matrigel
Venă derivate ombilical celule endoteliale umane (HUVEC) au fost cultivate în mediu complet de creștere-2 AGE (Lonza, Basel, Elveția) , în condiții standard de cultură celulară de 37 ° C și 5% CO 2 . Celulele au fost utilizate între trecerile 4 și 5. Plăcile cu multiple godeuri (plăci cu 12 godeuri) au fost acoperite cu 300 pL Matrigel (Collaborative BD PharMingen, San Diego, CA) la 4 ° C și incubate timp de 30 de minute la 37 ° C. HUVEC (1,2 × 10 5celule / godeu) au fost adăugate la godeurile acoperite cu Matrigel în mediu de cultură complet. Formularea pro-enzimatică a fost adăugată după 20 de minute de însămânțare pe Matrigel la 2 concentrații, T / C: 0,035 / 0,21 mg / ml și T / C: 0,07 / 0,42 mg / ml. După 5 și 24 de ore de incubare, celulele au fost fotografiate în microscopie cu contrast de fază (Leica DM 5500B, Solms, Germania). Capacitatea celulelor de a forma capilare a fost examinată și a fost măsurat numărul de structuri capilare asemănătoare. Fiecare porțiune de cord dintre ramificații a fost considerată ca fiind o unitate capilară. Valorile medii ± deviația standard (SD) s-au obținut prin evaluarea a patru zone reprezentative din fiecare cultură din trei experimente independente.
Celuloza de viabilitate a culturii a fost realizată prin Kitul de Viabilitate / Citotoxicitate LIVE / DEAD (Molecular Probes), conform instrucțiunilor producătorului. Pe scurt, HUVEC (3 x 105 celule / godeu) au fost cultura în godeurile acoperite cu Matrigel în mediu de cultură complet. Formularea pro-enzimatică a fost adăugată după 20 de minute de însămânțare pe Matrigel la T / C: 0,07 / 0,42 mg / ml și viabilitatea celulară a fost testată după 24 de ore de cultură cu Calcein AM, o probă pentru activitatea de esterază intracelulară, , și homodimer-1 de etidiu, o sondă pentru pierderea integrității membranei plasmatice, care a marcat celule moarte. Celulele tratate cu metanol 70% au servit ca martori pentru celulele moarte (datele nu sunt prezentate). Imaginile au fost preluate prin microscopie confocală (Nikon Eclipse Ti-E A1, SUA) și analizate utilizând software-ul NIS-Elements.
Implantul și tratamentul AngioChamber ™
Camere de țesut poros Teflon (AngioChambers ™) 48 , 49au fost umplute în condiții sterile cu 0,8% agaroză conținând 20 UI / ml heparină, cu sau fără 4 ug / ml factor de creștere fibroblast bazic (bFGF). 30 de șoareci FvB de sex feminin au primit câte un AngioChamber ™ implantat subcutanat, cu sau fără factor de creștere fibroblastic bazic (bFGF). 30 de șoareci au fost implantate cu camere fără bFGF (grupa 1) și 20 de șoareci, implantate cu camere care conțin bFGF (grupurile 2 și 3), au fost randomizați prin masa corporală în 3 grupe de câte 10 șoareci (grupa 1, 2 și 3). Grupurile de control (grupurile 1 și 2) au primit o doză orală de NMP: PEG300 ca un vehicul de control și șoareci tratați (Grupa 3) au primit injecție intraperitoneală zilnică (ip) cu T / C: 0,13 / 0,78 mg / mL într-un volum de dozare 10 ml / kg. Animalele au fost tratate la 2 ore după ce șoarecii s-au recuperat din chirurgie pentru a implanta AngioChamber ™ în Ziua de studiu 0.AngioChambers ™ au fost excluse de la toți șoarecii post-mortem în ziua terminării, 24 de ore după tratamentul final (Ziua 5). Capsula fibroasă vascularizată care a fost formată în jurul fiecărei camere a fost îndepărtată cu grijă și greutatea umedă a fost înregistrată imediat. Inhibarea angiogenezei prin pro-enzime (%) a fost calculată folosind
% Inhibare = [( A – B ) / ( A – C ) x 100];
1
unde A este greutatea medie a capsulei de la șoareci cu factor de creștere implantat AngioChambers ™ și tratată cu Controlul vehiculului (Grupa 2), B este greutatea medie a capsulei de la șoareci cu agent de creștere implantat AngioChambers ™ și tratată cu proenzima (Grupa 3) și C este greutatea medie a capsulei de la șoareci cu AngioChambers ™ implantată fără factor de creștere și tratată cu Controlul vehiculului (Grupul 1).
Testul de vindecare a rănilor in vitro
Pancreatice (BxPC3 și Mia Paca-2), celule ovariene (A2780), melanom (A375) și colon (HCT 116) au fost însămânțate în plăci cu 6 godeuri și crescute până la confluență de 80%. Plăgile au fost create prin răzuirea celulelor monostrat cu un vârf de pipetă de 200 pl, iar celulele neaderente au fost spălate cu mediu. Celulele canceroase BxPC3 și A2780 au fost tratate cu T / C: 0,07 / 0,42, mg / ml, celulele canceroase Mia Paca-2 și HCT 116 au fost tratate cu T / C: 0,025 / 0,15 mg / ml și celulele canceroase A375 au fost tratate cu T / C: 0,035 / 0,21 mg / ml ,. La 0, 24 și 48 de ore după crearea rănilor, s-au observat celule tratate și de control ne-tratate, iar imaginile de migrare au fost captate cu un obiectiv de 10x într-o microscopie cu contrast de fază. Migrarea celulelor a fost determinată de viteza celulelor care se deplasează spre zona zgâriată. Software-ul ImageJ ™ a fost folosit pentru a cuantifica zona zgâriată.Toate experimentele au fost placate în godeuri triplicate și au fost efectuate de cel puțin trei ori.
Testul de invazie a celulelor Matrigel
Inserțiile de cultură celulară (mărimea porilor de 8 pm) au fost spălate de două ori cu mediu RPMI sau DMEM fără ser și introduse în godeurile unei plăci de cultură de celule cu 24 de godeuri. Utilizând vârfuri de pipetă reci, la fiecare inserție s-au adăugat 40 pl de Matrigel diluat 1:10 în mediu RPMI, balansând cu ușurință plăcuța pentru a distribui Matrigel uniform pe suprafața membranei. Matrigel a fost lăsat să se solidifice prin incubare peste noapte la 37 ° C. A doua zi, 7,5 x 10 4 MIA PaCa-2 celule în 200 pl de mediu DMEM suplimentat cu 0,1% BSA, sau 7,5 x 10 4 HCT 15 celule în 200 pl de mediu RPMI suplimentat cu 0,1% BSA, au fost adăugate la camera superioară a fiecărei inserții. Suspensiile celulare au conținut combinație pro-enzimă la opt concentrații (tabelul suplimentar S2) sau PBS (control netratat). Combretastatina A4 a fost utilizată ca un control al inhibării migrării celulare 50 la o concentrație finală de 250 nM. Fiecare probă a fost analizată în două exemplare. Mediul condiționat din celule U87-MG (500 pl) a fost utilizat ca chemoattractant în camera inferioară 51 , 52 . Celulele au fost lăsate să migreze prin matricea extracelulară timp de 24 de ore la 37 ° C. Celulele care nu migrează au fost îndepărtate din camera superioară cu un vârf de bumbac. Celulele de pe partea de jos a membranei au fost fixate în etanol 70% timp de 15 minute și colorate cu 10% colorare Giemsa filtrată timp de 1 oră la temperatura camerei. Migrarea a fost cuantificată prin numărarea celulelor în trei câmpuri de vedere la mărirea de 40x utilizând un microscop cu lumină inversă (Olympus).
Izolarea ARN și analiza cantitativă RT-PCR în timp real
A2780 și BxPC3 au fost crescute în plăci cu 6 godeuri și tratate de două ori cu PRP (T / C 0,07 / 0,42 mg / ml) în ziua 2 și în ziua 4. În ziua 5, ARN celular total a fost izolat folosind TriReagent (Sigma) utilizând setul pentru sistemul de transcriere inversă (Promega). PCR în timp real a fost realizat utilizând amestecul principal SYBR-Green PCR (Promega) conform recomandărilor producătorului. Reacțiile PCR s-au efectuat după cum urmează: o denaturare inițială la 95 ° C timp de 2 min, 40 cicluri de 95 ° C timp de 5 s și 60 ° C timp de 30 s și ciclu final de disociere de 60-95 ° C. Nivelurile de exprimare a genei au fost normalizate la valorile corespunzătoare GAPDH și sunt prezentate ca schimbare ori în raport cu valoarea probei de control. Celulele netratate au fost utilizate ca martor. Toate probele au fost efectuate în triplicat pentru fiecare genă. Grundurile utilizate sunt prezentate în tabelul suplimentarS3 .
Analiza imunohistochimică
A2780 și BxPC3 au fost crescute pe capace de sticlă și tratate de două ori cu PRP (T / C 0,07 / 0,42 mg / ml) în ziua 2 și în ziua 4. Pentru colorarea cu imunofluorescență probele au fost fixate cu 4% paraformaldehidă (PFA) min la RT. Celulele au fost blocate timp de 1 oră la temperatura camerei (RT) cu 5% BSA, 5% ser fetal bovin în PBS și apoi incubate cu E-Cadherin (SC-21791, St. Cruz) și β-catenină (SC-7963, , Cruz) peste noapte la 4 ° C. A doua zi, probele au fost spălate de trei ori cu PBS și incubate cu anticorpi secundari corespunzători (Santa Cruz) timp de 1 oră la RT, spălate de trei ori cu PBS și apoi montate cu mediu de montare și DAPI. Imaginile au fost preluate prin microscopie confocală (Nikon Eclipse Ti-E A1, SUA) și analizate utilizând software-ul NIS-Elements.
Studiu farmacocinetic
Conjugarea tripsinogenului și a chitomicroscopului A cu eticheta IRDye® 800CW a fost făcută în conformitate cu protocolul producătorului (biotehnologia LI-COR). Pe scurt, tripsinogenul și chitomicrosinogenul A s-au dizolvat la o soluție 1 mg / ml (greutate / volum) și s-a utilizat fosfat de potasiu 50 mM pentru a ajusta pH-ul la 8,5. Amestecul proteic și IRDye® 800CW a fost incubat timp de 2 ore la temperatura ambiantă. După filtrarea pe coloană pentru a îndepărta colorantul neconjugat și tamponul de schimb pentru soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), pH 7,2, concentrația finală de proteină și gradul de etichetare (raportul colorant până la pro-enzimă) au fost determinate prin măsurarea absorbției la 280 și 780 nm. Produsul marcat a fost păstrat la 4 ° C până la utilizare.
Studiile de biodistribuție au fost efectuate pe șoareci nude-Foxnlnu femelă athymic non-tumorală (n = 3 per punct de timp). Se administrează (intravenos) combinația de pro-enzime etichetate și neetichetate IRDye® 800CW (la fiecare șoarece) la Trypsinogen marcat cu IRDye® 800CW (5 mg / kg) cu tripsinogen marcat cu 50 mg / kg IRDye® 800 CW 7 mg / kg) cu Chitomoprinogen A neimologat (300 mg / kg). Șoarecii au fost eutanasiați la punctele de timp predeterminate (0 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 hr, 6 ore, 12 ore, 24 ore și 48 ore după injectare) și organele pertinente (sânge prelucrate în plasmă, ficat, plămân, inimă, splină, tract gastrointestinal întreg și ambii rinichi) au fost excizate, omogenizate și înregistrate prin intermediul IVIS Lumina XR de la Perkin Elmer.Concentrațiile de proteine marcate IRDye® 800CW (intensitatea fluorescenței / mg de proteină) au fost analizate la fiecare punct de timp pentru probele de plasmă și de omogenitate de organe.
Modele tumorale ortotopice in vivo
40 femele atimici nuzi-Foxn1 NU șoarecii au fost inoculați ortotopic (ovar dreapta) cu 1 x 10 6 A2780 celulele de cancer ovarian uman; și 40 femele / 6 șoareci C57BL au fost inoculați ortotopic (coada pancreasului) cu 1 x 10 6 celule tumorale pancreatice Pan02 șoarece. 10 animale din fiecare grupă au rămas netratate pentru evaluarea ratei de absorbție a tumorii. După 7 zile după inoculare (Ziua 0), animalele au fost randomizate în 3 seturi de 10 (grupul de tumori ovariene) și 3 seturi de 10 (grupul tumoral pancreatic).
A fost administrată o singură injecție de venei de coadă într-un volum de dozare de 10 ml / kg o dată pe zi pentru fiecare animal. Volumul de soluție de dozare administrat fiecărui animal a fost calculat și ajustat în funcție de greutatea corporală individuală măsurată imediat înainte de administrare. Tratamentele au început în ziua 0 și au fost administrate timp de 21 de zile consecutive. Animalele tumorale ovariene ortotrope au fost injectate cu PBS (Grupul 1) sau T / C la doze de 27,5 / 165 mg / kg (Grupa 2) și 83,3 / 500 mg / kg (Grupa 3). Animalele tumorale din pancreasul ortotropic au fost injectate cu PBS (Grupa 1) sau T / C la doze de 9,1 / 54 mg / kg (Grupa 2) și 27,5 / 165 mg / kg (Grupuri 3). La terminare, ovarul și pancreasul au fost excluse de la toate animalele cu tumoare intactă. Tumoarea a fost izolată, cântărită și apoi fotografiată.Modificarea procentuală a greutății medii a tumorii pentru grupurile tratate comparativ cu grupul martor a fost calculată utilizând:
Modificarea procentuală = ((Control mediu – Tratament mediu) / Control mediu) × 100.
2
„Special” tratament cu licența – formularea proenzimelor pancreatice
46 de pacienți cu boală malignă avansată de origine diferită au fost tratați zilnic cu o formulare rectală conținând 8,92 mg din fiecare dintre cele două enzime pancreatice și 1,78 mg α-amilază (A) pe supozitor. Studiul a fost efectuat în baza unei licențe britanice „Specials” la Clinica Dove, Hampshire, Marea Britanie pentru perioade de până la 14 luni. Specialități Regulamentul privind licența oferă un cadru legal pentru utilizarea unui medicament fără autorizație de introducere pe piață sau licență de produs de către un medic în vederea satisfacerii nevoilor speciale ale unui pacient pentru care este direct responsabil. Prin urmare, tratamentul în baza unei licențe speciale nu poate fi considerat un studiu clinic formal. Preocuparea informată a fost obținută de la toți pacienții înainte de tratament. Datele raportate au fost generate din notele pacientului deținute de Clinica Dove.
Fără criterii formale de includere și excludere, grupul de pacienți al acestui program de utilizare compasională a fost foarte eterogen. Majoritatea pacienților au fost diagnosticați cu cancere metastatice de diferite origini, inclusiv prostată (n = 8), sân (n = 6), ovarian (n = 7), pancreatice (n = 4), colo-rectale (n = 2), cancerul intestinal (n = 2), cancerul de colon (n = 2), melanomul (n = 2) limfom non-Hodgkin, mezoteliom, tumora neuro-endocrină, carcinom cu celule mici, cancer renal și abdomen necunoscut primar (toate n = 1). Pentru a evalua beneficiul tratamentului, supraviețuirea sub tratament a fost comparată cu speranța de viață individuală alocată înainte de începerea tratamentului.Aceasta speranta de viata a fost determinata pentru fiecare pacient avand in vedere i) data diagnosticului clinic, ii) varsta pacientului si comorbiditatile, iii) tratamente anterioare si modul in care acestea au fost tolerate, iv) sange standard si biomarkeri relevanti, v) scanari istorice , deoarece nu au fost oferite alte scanări în timpul perioadei de tratament și vi) starea clinică generală a pacientului. Aceste date împreună cu informațiile publicate privind tumoarea specifică au fost luate în considerare atunci când a fost estimată supraviețuirea preconizată pentru pacienții individuali pancreatici. Speranța de viață a pacientului, conform previziunilor oncologiste, a variat între câteva zile și aproximativ 12 luni.deoarece nu au fost oferite alte scanări în timpul perioadei de tratament și vi) starea clinică generală a pacientului. Aceste date împreună cu informațiile publicate privind tumoarea specifică au fost luate în considerare atunci când a fost estimată supraviețuirea preconizată pentru pacienții individuali pancreatici. Speranța de viață a pacientului, conform previziunilor oncologiste, a variat între câteva zile și aproximativ 12 luni.deoarece nu au fost oferite alte scanări în timpul perioadei de tratament și vi) starea clinică generală a pacientului. Aceste date împreună cu informațiile publicate privind tumoarea specifică au fost luate în considerare atunci când a fost estimată supraviețuirea preconizată pentru pacienții individuali pancreatici. Speranța de viață a pacientului, conform previziunilor oncologiste, a variat între câteva zile și aproximativ 12 luni.
Calcule statistice
Diferențe semnificative au fost testate de One Way ANOVA. Ipotezele de analiză a varianței (homocedesență și normalitate) au fost testate și asigurate prin utilizarea seturilor de date transformate atunci când este necesar. Semnificația a fost acceptată la P <0,05 în toate cazurile.
Declarație privind disponibilitatea datelor
Seturile de date generate în timpul și / sau analizate în timpul studiului actual sunt disponibile de la autorul corespunzător, la cerere rezonabilă.
MP conceperea și proiectarea studiului, analiza și interpretarea datelor, redactarea articolului și aprobarea finală a manuscrisului depus. Concepția JK și proiectarea studiului, furnizarea datelor pacientului și aprobarea finală a manuscrisului depus. Colectarea, analiza și interpretarea datelor ELR, SNH și MAG. RB și JAM proiectarea studiului, analiza datelor și revizuirea articolului. Toți autori: aprobarea finală a manuscrisului depus.
Dr. Julian Kenyon este fondatorul și directorul științific al companiei Propanc Pty Ltd și deține acțiuni în cadrul companiei. Propanc Pty Ltd a finanțat Universitatea din Jaen și vivoPharm LLC pentru a efectua această cercetare.
3. Kalluri R, Weinberg RA. Elementele de bază ale tranziției epitelio-mezenchimale. Journal of Clinical Investigation.2009;119 : 1420-1428. doi: 10.1172 / JCI39104.[ Articolul gratuit PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
4. Jordão BP, Terra WR, Ribeiro AF, Lehane MJ, Ferreira C. Secreția de tripsină în midgutul midian Musca domestica: Un studiu biochimic și imunocitochimic. Insect Biochem.Mol.Biol.1996;26 : 337-346. doi: 10.1016 / 0965-1748 (95) 00084-4.[ CrossRef ] [ Google Scholar ]
5. Wald M, și colab. Amestecul de tripsină, chymotrypsin și papain reduce formarea metastazelor și extinde timpul de supraviețuire a șoarecilor C57Bl6 cu melanomul syngeneic B16. Cancer Chemother.Pharmacol.2001;47 (Suppl): S16-S22. doi: 10.1007 / s002800170004.[ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
6. Saruc M, și colab. Extractul de enzime pancreatice îmbunătățește supraviețuirea în cancerul pancreatic murin. Pancreas.2004;28 : 401-412. doi: 10.1097 / 00006676-200405000-00009.[ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
7. Perán M, Marchal JA, García MA, Kenyon J, Tosh D. Tratamentul in vitro al liniilor celulare de carcinom cu enzimele (pro) pancreatice suprimă programul EMT și promovează diferențierea celulelor.Cell.Oncol.2013;36 : 289-301. doi: 10.1007 / s13402-013-0134-8.[ PubMed ] [ CrossRef ] [ Google Scholar ]
8. Sakalová A, et al. Studiu de cohortă retrografică a unei terapii aditive cu un preparat enzimatic oral la pacienți cu mielom multiplu. Cancer Chemother.Pharmacol.2001;47 (Suppl): S38-S44.[ PubMed ] [ Google Scholar ]
9. Beuth J, și colab. Impactul aplicării enzimelor orale complementare asupra rezultatelor tratamentului postoperator al pacienților cu cancer de sân – rezultate ale unui studiu de cohortă epidemiologic multicentric retroreflexiv. Cancer Chemother.Pharmacol.2001;47 (Suppl): S45-S54. doi: 10.1007 / s002800170009.[ PubMed ] [
03675-8&id=gr1.jpg){kind=link}
03675-8&id=gr2.jpg){kind=link}
